熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

牛樟芝提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:研究牛樟芝提取物(ANCA-E-D)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其可能机制。方法:取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,以6×104/m L接种于96孔板,每孔100μL,随机分为调零组、空白对照组、溶剂对照组以及20,40,60 mg·L-1ANCA-E-D药物组,每组设5个复孔,分别作用24,48,72 h,采用MTT比色法检测ANCA-E-D对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过瑞氏染色观察以上浓度的ANCA-E-D对肝癌细胞SMMC-7721形态学的影响;通过流式细胞仪检测以上浓度的ANCA-E-D对SMMC-7721细胞周期和早期凋亡的影响。结果:MTT实验结果表明,20,40,60 mg·L-1的ANCA-E-D对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性,其半数致死率(IC50)分别为31.21,24.12,21.48 mg·L-1;形态学观测结果提示,ANCA-E-D药物组的细胞核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪检测发现,不同浓度的ANCA-E-D作用后,SMMC-7721细胞凋亡以晚期凋亡为主,并呈剂量依赖性。结论:ANCA-E-D可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,可能与其诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。     

红花多糖对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的:观察红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度SPS处理体外培养的SMMC-7721细胞株,采用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观测以及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示SPS对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。光镜下可见SPS组贴壁细胞数明显减少,细胞变小、变圆,折光性差,贴壁不牢,悬浮细胞增多。AO染色荧光显微镜下观察,24h部分细胞出现胞质浓缩,体积缩小,核固缩,染色增强,荧光更为明亮,形成致密浓缩的绿色荧光等;48h和72h部分细胞可见细胞核固缩为新月状。流式细胞术结果显示细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势。结论:SPS能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长且呈明显的量效和时效关系。SPS可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,具有一定的剂量依赖性。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:用不同浓度的积雪草酸处理人肝癌SMMC-7721细胞;MTT法检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测积雪草酸对肝癌细胞迁移的影响;Western blot法检测积雪草酸对凋亡相关基因Bcl-2和Bax及上皮间质转化标志基因E-cadherin表达的影响。结果:与对照组比较,25、50、100μmol/L的积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用,差异均有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,50μmol/L的积雪草酸处理后,肝癌细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室法检测结果发现,TGF-β能显著促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。1、10μmol/L的积雪草酸处理能够显著抑制TGF-β诱导的肝癌细胞迁移。积雪草酸处理后,人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白水平显著上调。TGF-β处理24 h后,SMMC-7721细胞E-cadherin表达水平显著降低,而不同浓度的积雪草酸均能抑制TGF-β诱导的E-cadherin表达水平下调。结论:积雪草酸能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

羟基喜树碱纳米晶体抗肿瘤作用及其机制评价

目的:利用体外细胞试验评价羟基喜树碱纳米晶体hydroxycamptothecin nanocrystals,HCPT-NCs)抗肿瘤作用及其机制。方法:以羟基喜树碱注射液(hydroxycamptothecin injection,HCPT-I)对肝癌SMMC-7721细胞的干预作用作为对照,应用MTT法检测羟基喜树碱纳米晶体对肝癌细胞SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,流式细胞术分析细胞凋亡率,RT-PCR方法检测survivin基因表达的变化。结果:与对照制剂HCPT-I相比,HCPT-NCs对SMMC-7721肿瘤细胞生长抑制和杀伤作用,促凋亡能力和对survivin基因靶向作用,有显著性差异(p 0.05)。结论:HCPT-NCs对SMMC-772细胞的生长有较明显的抑制作用,促进SMMC-7721细胞凋亡可能和下调survivin的表达有关,和HCPT-I相比作用明显。     

原卟啉钠体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用

目的:研究原卟啉钠(NAPP)体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用。方法:通过对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的药物毒性实验筛选出NAPP对人正常肝细胞无明显毒性的最大无毒浓度(TC0)。以TC0为起始浓度,10倍梯度稀释成5个不同的NAPP浓度,作用于体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,通过MTT比色法测定NAPP对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;经倒置光学显微镜和Hoechst33258染色倒置荧光显微镜进行形态学观察,计数凋亡细胞,并计算凋亡指数(AI);采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标流式凋亡检测试剂盒经流式细胞仪检测SMMC-7721细胞凋亡和坏死率。结果:不同浓度NAPP作用后,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制,A值明显降低(P<0.05或P<0.01),且抑制率呈一定的浓度-时间依赖性;光学显微镜下见细胞个数明显减少,细胞密度明显变稀,细胞形态发生了明显变化,很多细胞间的连接消失,细胞变圆、皱缩或见细胞外形变长呈长梭形;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变,AI显著升高(P<0.05或P<0.01);经流式细胞仪检测,可见SMMC-7721细胞凋亡和坏死率不同程度升高。结论:NAPP在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有一定的抑制增殖、促进凋亡和坏死的作用。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

白藜芦醇致敏TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡及其相关机制的研究

目的研究白藜芦醇对TRAIL诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制。方法培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照组、TRAIL干预组、Res+TRAIL干预组,进行DNA末端原位标记(TUNEL)染色法作凋亡分析;Western Blot检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞Survivn表达的影响。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡指数为(1.78±0.49)%,TRAIL干预组凋亡指数为(9.86±0.53)%,Res+TRAIL干预组中25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度Ros凋亡指数分别为(11.30±0.80)%,(20.89±0.69)%和(27.78±1.88)%。除Res+TRAIL干预组(25μmol/L)与TRAIL干预组比较无显著性差异(P0.05),其余各组之间比较差异均有统计学意义(P均0.05)。Western Blot测定结果显示:25μmol/L Ros处理组Survivin/β-actin的值与对照组相比无统计学差异(P0.05);50μmol/L和100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较对照组显著降低(P0.01);100μmol/L Res处理组Survivin/β-actin的值较50μmol/L显著降低(P0.01)。结论 TRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;Res对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,并且这种作用呈剂量依赖关系;其分子机制可能与下调凋亡抑制因子Survivin的表达有关。     

MTT法检测没食子酸对两种细胞的体外毒性

目的:探讨抗肿瘤单体没食子酸(GA)对体外培养的正常人肝细胞株LO2和肝癌细胞株SMMC-7721的毒性。方法:采用MTT实验分析GA对LO2和SMMC-7721的增殖抑制作用。结果:GA作用24h、48h、72h后,用药组均出现了不同程度的增殖抑制。结论:抗肿瘤单体GA对LO2和SMMC-7721细胞均有一定的毒性,表现为增殖抑制作用,作用早期(24h)对LO2的抑制大于对SMMC-7721的抑制,连续作用后(48h、72h),对SMMC-7721细胞的损伤明显超过对LO2的抑制。     

裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用研究

目的：探讨裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物在体外的抗肝癌活性。方法：采用磺酰罗丹明染色法（SRB法）,对人肝癌细胞SMMC-7721进行体外抗肿瘤实验。结果：裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721表现出比较明显的高浓度杀死和中低浓度抑制的效果,且抑制率随萃取物浓度的升高而增大,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度（IC50）为21.5μg.mL-1。结论：裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721具有比较明显的抑制作用。     

不同中药体外不同给药对人肝癌细胞恶性增殖的影响实验

目的：观察肝癌治疗清热解毒方、行气活血方水提取物及大鼠含药血清细胞给药对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖的影响与差异。方法：常规方法制备清热解毒方和行气活血方水提取物（2.0 g生药/mL）,及其大鼠含药血清;采用MTT法观察不同中药体外不同给药对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖的影响。结果：与正常细胞（3 d）相比,清热解毒方或行气活血方水提取物对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖均具有抑制作用（P〈0.01）,存在量效关系。与正常细胞（3 d）相比,清热解毒方或行气活血方含药血清对人肝癌SMMC7721细胞恶性增殖亦均具有抑制作用（P〈0.01）,存在量效关系的趋势。行气活血方直接给药的药效较其含药血清更显著。结论：清热解毒方与行气活血方对人肝癌SMMC7721细胞的恶性增殖均具有抑制作用;行气活血方含药血清的药效较直接给药有下降趋势。     

告达庭诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用

目的：观察Caudatin体外对人肝癌细胞SMMC7721的作用。方法：采用MTT法测定不同浓度的Caudatin作用于SMMC7721细胞24，48和72h对其生长的抑制作用。用流式细胞仪以PI单染检测细胞周期、以Annexin V／PI双染检测细胞凋亡，比色法测定Caspase-3酶活力。结果：Caudatin体外能抑制人肝癌细胞SMMC7721的增殖并呈明显的时间和剂量依赖性。Caudatin体外能诱导SMMC7721细胞凋亡，并使细胞周期阻滞于G0／G1期。Caspase-3的酶活力随着Caudatin体外作用时间的延长先升高并于8h达到最大，再随时间的变化而降低。结论：Caudatin体外能显著抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长，其抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞增殖、阻滞细胞周期于G0／G1期，并通过激活Caspase-3诱导肿癌细胞凋亡有关。     

四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及凋亡影响的初步研究

目的:初步探讨不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及凋亡的影响。方法:采用流式细胞仪PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究不同浓度四味肝泰软胶囊作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及对细胞凋亡率的影响。结果:各浓度四味肝泰软胶囊均可以调节G1/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入G2/M期,从而起到抑制肿瘤细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且这种诱导效应具有明显的时间-剂量-效应关系。结论:四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA的合成和诱导细胞凋亡有关。     

波罗蜜属药用植物单体化合物ACR-2 ACR-3抗肿瘤作用的实验研究

目的:采用Alamar blue法及MTT法观察波罗蜜属药用植物单体化合物(ACR-2、ACR-3)对人肝癌细胞(SMMC-7721)和胃腺癌细胞(SGC-7901)增殖的影响。方法:用Alamar blue法和传统MTT法检测ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721、SGC-7901的增殖抑制作用。结果:ACR-2作用于细胞SMMC-7721和细胞SGC-7901的IC50(mmol/L)分别为0.013和0.059;ACR-3作用于细胞SMMC-7721和细胞SGC-7901的IC50(mmol/L)分别为0.029和0.169。其中ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721的增殖抑制作用最强,对细胞SGC-7901也表现出较强的增殖抑制作用。时量曲线检测结果显示:ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721、SGC-7901的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其增殖抑制作用以48h时最强。结论:波罗蜜属药用植物单体化合物ACR-2、ACR-3对人肝癌细胞SMMC-7721、胃腺癌细胞SGC-7901有明显的增殖抑制作用,且有时间和剂量依赖性。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关因子的影响

[目的]观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。[方法]流式细胞术检测透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞caspase-9、-3、-7和x连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。[结果]40．91μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞凋亡率为（26．84±1．23）％,明显高于对照组（P〈0．05）。40．9μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Caspase-9、-3、-7蛋白表达明显低于与对照组（P〈0．05）,而XIAP蛋白表达明显高于对照组（P〈0．05）。瞄论]透骨草提取物能通过XIAP／Caspase信号通路抑制SMMC-7721细胞凋亡。关键词：透骨草提取物;SMMC-7721细胞;凋亡;Caspase-9中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1672—1519（2013）10—0612—03     

红豆杉细胞提取物抑制肿瘤细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的 研究红豆杉细胞提取物对肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用及其机制。方法 运用台盼蓝拒染法测定肿瘤细胞生长曲线，流式细胞仪和Giemsa染色分析肿瘤细胞周期和细胞凋亡。结果 红豆杉细胞二氯甲烷提取物对肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显的抑制作用，流式细胞仪分析发现G2／M期肿瘤细胞数量增多，经Giemsa染色发现肿瘤细胞有凋亡发生。结论 红豆杉细胞提取物可以通过诱导细胞发生凋亡而抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长。