人参皂苷Rg1人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的 合成人参皂苷Rg1的人工免疫原和包被原,为后续制备人参皂苷Rg1的单克隆抗体及建立相应的免疫分析方法奠定基础.方法 采用NaIO4氧化法分别合成人参皂苷Rg1免疫抗原(Rg1-BSA)和包被抗原(Rg1-PLL);紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原偶联是否成功;用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价,用间接竞争ELISA检测抗体特异性.结果 经紫外光谱和薄层色谱法检测,人参皂苷Rg1与BSA/PLL偶联成功;免疫小鼠后Rg1-BSA可以使小鼠体内产生抗Rg1抗体;利用合成的偶联物成功建立间接ELISA和间接竞争ELISA方法,测得小鼠血清抗体效价在1∶80 000以上,并且所得抗体能特异性结合人参皂苷Rg1.结论 成功合成了人参皂苷Rg1人工免疫原和包被原,可用于下一步的人参皂苷Rg1单克隆抗体制备及建立相应免疫分析方法.     

重楼皂苷Ⅲ人工抗原的合成、鉴定及抗血清的制备

采用高碘酸钠氧化法分别合成重楼皂苷Ⅲ的免疫抗原(POLⅢ-BSA)和包被抗原(POLⅢ-OVA)。通过薄层色谱法和紫外光谱鉴定人工抗原偶联成功,并用POLⅢ-BSA免疫小鼠,使小鼠体内产生抗重楼皂苷Ⅲ(polyphylinⅢ,POLⅢ)的抗体,效价1∶16 000以上,线性范围为1 ng·L-1~100μg·L-1,并测定了POLⅢ与重楼皂苷Ⅰ(POLⅠ)、重楼皂苷Ⅱ(POLⅡ)、重楼皂苷Ⅶ(POLⅦ)的交叉反应。实验成功合成了POLⅢ的人工抗原,为制备POLⅢ的单克隆抗体以及建立快速、便捷的免疫分析方法奠定基础。     

牡荆素人工抗原的合成与免疫原性的鉴定

目的合成牡荆素的人工抗原,并对其免疫原性进行了鉴定。方法利用高碘酸钠氧化法偶联牡荆素制备牡荆素-牛血清白蛋白的免疫抗原和牡荆素-卵清蛋白的包被原;用紫外分光光度法和薄层色谱法鉴定小分子与载体蛋白偶联反应,并用间接ELISA测定免疫抗原免疫小鼠抗体效价,间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测抗体特异性。结果紫外扫描和薄层色谱结果表明牡荆素与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联成功,小鼠经牡荆素-牛血清白蛋白免疫后,体内产生了抗牡荆素抗体,效价在1∶16 000以上,线性检测范围为0.028 8~18μg/m L。结论合成的牡荆素人工抗原和专属酶联免疫分析法可用于后续的单克隆抗体的制备。     

猪去氧胆酸人工抗原的合成及鉴定

目的 合成并鉴定猪去氧胆酸(hyodeoxycholic acid,HDCA)人工抗原,为进一步制备其特异性抗体,建立相应的免疫分析方法,并为其应用到药理药效的研究中奠定基础.方法 采用混合酸酐法合成HDCA人工抗原(HDCA-牛血清白蛋白),包被原(HDCA-鸡卵清白蛋白);应用硅胶薄层色谱法鉴定人工抗原、包被原合成是否成功;应用人工抗原与弗氏佐剂的乳化液背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠4次后,尾尖取血,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定免疫小鼠抗血清的效价和特异性.结果 薄层色谱法检测结果表明,HDCA与牛血清白蛋白(BSA)偶联成功;小鼠抗血清效价大于1:8 000,竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与HDCA产生特异性结合.抗血清和甘草酸、黄芩苷、栀子苷等与其常配伍应用的中药化合物均无交叉反应,但与胆酸交叉反应率为90%.结论 成功合成了HDCA-BSA,并可诱发小鼠产生相应特异性抗体.为进一步制备抗HDCA单克隆抗体及HDCA药理作用靶点的研究奠定了基础.     

酸枣仁皂苷A人工抗原的制备及鉴定

采用高碘酸钠氧化法首次合成酸枣仁皂苷A(jujuboside A)人工抗原,利用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)鉴定酸枣仁皂苷A人工抗原偶联成功,通过酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫小鼠血清中抗酸枣仁皂苷A抗体效价及其特异性。竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与酸枣仁皂苷A产生特异性结合,血清抗体效价在1∶4 000。成功合成的酸枣仁皂苷A人工抗原,为酸枣仁皂苷A单克隆抗体的制备及研究酸枣仁皂苷A在机体内的药物代谢过程奠定了基础。     

马钱苷人工抗原的合成、鉴定及免疫原性的初步研究

目的首次合成并鉴定马钱苷(loganin)人工抗原,为进一步制备马钱苷单克隆抗体,建立相关免疫分析方法奠定基础。方法采用高碘酸钠氧化法合成马钱苷免疫原(loganin-BSA)和包被原(loganin-OVA);应用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法鉴定马钱苷人工抗原是否偶联成功;通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测免疫小鼠血清中抗马钱苷抗体效价及其特异性。结果经MALDI-TOF-MS检测,马钱苷与BSA偶联成功。竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与马钱苷产生特异性结合,血清抗体效价在1∶40 000。结论成功合成了马钱苷人工抗原,为马钱苷单克隆抗体的制备及其在中药质量评价和动物体内药动学方面的应用奠定了基础。     

连翘苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定

基于高特异性,高灵敏度的小分子单克隆抗体的免疫分析方法的建立,对中药小分子化合物的的研究具有重要的意义,其中,小分子人工抗原的合成是中药小分子抗体制备的关键步骤。采用高碘酸钠氧化法分别合成连翘苷免疫抗原（FRn-BSA）和包被抗原（FRn-OVA）,通过紫外光谱和薄层色谱法检测到连翘苷成功与BSA/OVA偶联,小鼠经FRn-BSA免疫后,体内可产生抗连翘苷抗体,效价在1：8 000左右,线性范围为1~100 mg·L^-1。成功合成的连翘苷人工抗原,可为下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础。     

梓醇人工抗原的合成、鉴定及免疫原性的初步研究

基于单克隆抗体的免疫分析方法具有高特异性、高灵敏性等特点,在中药的质量控制和动物体内微量成分的检测等方面均具有重要的意义,该方法建立的前提条件就是成功制备中药活性小分子化合物的人工抗原.该研究采用高碘酸钠氧化法,首次制备了梓醇的人工抗原,通过基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)和分子排阻色潽法鉴定梓醇与牛血清白蛋白(BSA)偶联成功,用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗梓醇抗体效价在1∶8000以上,成功制备梓醇的人工抗原,为下一步单克隆抗体的制备和相关免疫方法的建立奠定基础.     

龙胆苦苷人工抗原的合成与鉴定

目的为建立龙胆苦苷免疫检测方法,需合成龙胆苦苷(GTP)的免疫抗原和包被抗原。方法将琥珀酸酐与龙胆苦苷中的羟基进行反应,再利用混合酸酐法将龙胆苦苷半抗原与载体蛋白(BSA和OVA)偶联形成龙胆苦苷-载体蛋白人工抗原,进而利用紫外分光光度计法(UV)、红外光谱法(IR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)鉴定人工抗原,结合三硝基苯磺酸法(TNBS)测定人工抗原的偶联比率,并免疫小鼠,最后用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价。结果 IR、UV和SDS-PAGE法检测结果均表明龙胆苦苷与载体蛋白偶联成功,TNBS结果表明GTP-BSA(免疫抗原)和GTP-OVA(包被抗原)偶联比分别为9∶1和6∶1,间接ELISA结果表明免疫小鼠血清中抗龙胆苦苷抗体效价均达到1∶12800以上。结论本实验成功合成并鉴定了龙胆苦苷人工抗原,为龙胆苦苷免疫分析提供了实践基础。     

芒果苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的:合成芒果苷人工抗原并进行免疫原性鉴定。方法:采用经典高碘酸钠法,将芒果苷(mangiferin,MRn)分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)相耦联合成MRn的人工抗原和包被原。用紫外扫描的方法测定其耦联比,并免疫动物,通过间接ELISA方法测定芒果苷抗体的效价,采用间接竞争ELISA(ic ELISA)法鉴定芒果苷人工抗原(MRn-BSA)的免疫原性。结果:MRn-BSA的耦联比为6∶1,ic ELISA实验结果表明,4只人工抗原MRn-BSA免疫的小鼠均有特异性抗体产生,抗体效价:1∶4 000以上,线性检测范围为1~100μg/m L。结论:该方法成功合成了MRn的人工抗原,并且在免疫小鼠的血清中产生了针对MRn的抗体,为下一步芒果苷的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础。     

丹酚酸B人工抗原的合成与免疫原性研究

目的制备丹酚酸B（SAB）的人工抗原（SAB-BSA）和包被原（SAB—PLL）并进行鉴定。方法采用碳二亚胺（EDC）法将SAB分别与牛血清白蛋白（BSA）和多聚赖氨酸（PLL）载体偶联合成SAB—BSA和SAB-PLL;采用紫外分光光度（UV）法和薄层色谱（TLC）法对偶联效果进行鉴定,并通过SAB与BSA的吸光值计算出二者的偶联比;利用获得的SAB—BSA免疫小鼠,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠抗血清内多克隆抗体效价并以间接竞争酶联免疫吸附法（ic—ELISA）检测小鼠抗血清内多克隆抗体的灵敏度。结果所合成的SAB—BSA为BSA和SAB的结合物,且SAB-BSA中无游离SAB-SAB与BSA偶联成功,SAB-BSA偶联结合比为18：1;SAB-BSA刺激小鼠产生的针对SAB的多克隆抗体,效价为1：2×10^3,该多克隆抗体IC50为17．7μg／mL。结论SAB—BSA和SAB—PLL合成成功,可用于SAB单克隆抗体的制备以及SAB快速检测试剂盒的研制。     

芍药苷人工抗原的合成与鉴定

利用高碘酸钠法合成芍药苷免疫抗原PF-BSA和包被抗原PF-OVA,并通过紫外光谱检测芍药苷成功与BSA/OVA偶联。小鼠经PF-BSA免疫后,体内可产生抗芍药苷抗体,酶联免疫分析法分析证明其免疫小鼠所得抗体效价达 1：12 800,半数抑制浓度为0.791 mg·L^-1,且与黄芩苷等9种中药小分子交叉反应极低。芍药苷人工抗原的合成及抗体的获得为建立ELISA和研制免疫检测试剂盒奠定了基础。     

剑叶龙血素A间接竞争ELISA检测方法的建立

目的: 建立间接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)用于测定剑叶龙血素A(CA)含量。方法: 合成半抗原剑叶龙血素A-4'-羧甲基醚(CA-4'-CME),再用碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联制备免疫原(CA-BSA)和包被原(CA-OVA),免疫小鼠制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA法并评估其分析性能。结果: 通过紫外扫描分析CA-BSA和CA-OVA的偶联比分别为18:1和24:1。抗血清效价最高达到12 000。用四参数logistic方程拟合CA标准曲线,在分析范围0~0.80 mg·L^-1内,相关系数(R²)≥0.99,IC₅₀ 0.66 mg·L^-1,最低检测限0.045 mg·L^-1,批内CV≤12.5%,批间CV≤14.7%,回收率92.7%~118.7%,对5种CA类似物的交叉反应率<5.38%。此方法检测龙血竭和龙血竭总黄酮中CA含量分别为1.27%,3.08%。结论: 剑叶龙血素A间接竞争ELISA法精密度、准确度和特异性均较好,可方便地用于药物检测和分析。     

葛根素单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法建立

采用过碘酸盐氧化法,将葛根素半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,得到免疫抗原葛根素-BSA和包被抗原葛根素-OVA.葛根素-BSA常规免疫程序免疫BALB/c小鼠,3次免疫后检测小鼠血清的效价和特异性.加强免疫后取小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,采用单克隆抗体筛选技术,筛选得到抗葛根素单克隆...     

防哮饮早期干预对哮喘小鼠血清IL-18含量影响的研究

目的：观察中药防哮饮早期干预对哮喘小鼠血清白细胞介素18（IL-18）含量的影响。方法：采用卵蛋白（OVA）和氢氧化铝腹腔注射致敏加雾化吸入卵蛋白激发的方法复制哮喘小鼠模型。将60只健康昆明小鼠随机分为6组（每组10只）：A正常对照组、B哮喘模型组、C防哮饮小剂量组、D防哮饮中剂量组、E防哮饮大剂量组、F布地奈德组。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血中IL—18的含量,并进行组间比较。结果：B组与A、c、D、E、F组相比,小鼠血清IL-18含量明显降低,差异具有非常显著性意义（P均〈0．01）;C、D、E、F组小鼠血清IL-18的含量均显著高于B组（P均〈0．01）;D组小鼠血清IL-18的含量高于F组（P〈0．01）;E组小鼠血清IL．18的含量明显高于F组（P〈0．05）。结论：中药防哮饮通过上调IL-18表达水平,从而在哮喘的发生发展中起到保护作用,达到防治哮喘的目的。     

妊娠妇女体内IgG抗体效价的检测及临床意义

目的：了解血型抗体效价异常在妊娠妇女中所占比率及临床意义.方法： 用抗人球蛋白法进行IgG抗A或抗B的ABO血型抗体效价检测.结果：613份血清中IgG抗体效价的异常检出率为39.31%（241/613）.不同年龄妊娠妇女血清抗A和抗B抗体阳性率比较有显著性差异（X^2=15.78P〈0.01）.结论：妊娠妇女产前检测IgG抗A（B）抗体的效价对于预防新生儿溶血具有重要意义,并且随着妊娠妇女年龄的增大,其发生新生儿溶血的机率越大.