3.5代树枝状聚合物-2-氨基乙基β-D-吡喃半乳糖苷耦联物的制备及其肝实质细胞靶向性的研究

目的：制备一种对肝实质细胞具有靶向性的纳米给药载体用以提高药物对乙肝和肝癌的治疗效果。方法：将3.5代树枝状聚合物（G3.5 PAMAM）与异硫氰酸荧光素（fluoresceine isothiocyanate, FITC）耦联,得到G3.5 PAMAM-FITC,再将耦联物G3.5 PAMAM-FITC连上不同摩尔比（1∶5,1∶10,1∶15,1∶20）的2-氨基乙基β-D-吡喃半乳糖苷（2-aminoethyl β-D-galactopyranoside, Dgal）,得到不同的Dgal_n -G3.5 PAMAM- FITC,然后用流式细胞仪检测不同的Dgal_n-G3.5 PAMAM-FITC对肝实质细胞的靶向性。结果：G3.5 PAMAM与FITC成功耦联,G3.5 PAMAM-FITC与半乳糖苷可以通过活泼酯反应在二甲基亚砜（dimothyl suhoxide, DMSO）,中成功耦联,耦联率达到95%,经流式细胞仪检测,在1∶5,1∶10,1∶15和1∶20这4种比例中,PAMAM G3.5-FITC与Dgal肝靶向性的最佳配比（摩尔比）为1∶20。结论：Dgal₂₀-G3.5 PAMAM FITC具有一定的肝靶向性,可以作为肝靶向药物载体。     

金黄色葡萄球菌对U937细胞HSP90蛋白表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡以及热休克蛋白90（HSP90）在这一过程中的作用。方法当U937：金葡菌分别为0,1∶5,1∶10,1∶20,1∶50和1∶100时,培养30min;当U937：金葡菌为1∶20时,分别培养0,15,30,60和90min。采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡率;采用Western blot方法检测HSP90蛋白的表达。结果U937细胞凋亡率随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐增高;HSP90的表达随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐升高。结论金葡菌诱导的U937的凋亡可能与HSP90蛋白表达的改变有关,并且具有感染时间及细菌浓度依赖性。     

α-干扰素联合脂多糖对白血病细胞株U937细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨α-干扰素联合脂多糖在体外对髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞U937细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting检测cyclinA2和cyclinD1蛋白质表达。结果α-干扰素和(或)脂多糖组较对照组能显著地抑制U937细胞的增殖、增加细胞的凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05);α-干扰素联合脂多糖组较单用α-干扰素、脂多糖组能显著抑制U937细胞增殖、增加细胞凋亡率和G1期细胞比例(P<0.05),能够显著下调CyclinA2蛋白质表达、上调CyclinD1蛋白质表达(P<0.05)。结论α-干扰素与脂多糖对U937细胞的增殖抑制、细胞凋亡和G1期细胞的比例有协同增强作用,其机制可能与细胞周期素Cy-clinA2、CyclinD1蛋白的调节有关。     

大鼠β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞的体外分选及鉴定

目的尝试从骨髓干细胞(BMSC)中分选出具备干细胞和肝细胞双重特性的β2m-/Thy-1 骨髓源性肝干细胞(BDLSC)亚群,为细胞移植治疗肝病提供合适的供体细胞。方法利用免疫磁珠细胞分选(MACS)方法体外分选淤胆型大鼠模型的β2m-/Thy-1 BDLSC,流式细胞仪检测其纯度,RT-PCR法和免疫荧光染色法鉴定其肝相关性表型的表达。结果MACS法能成功分选纯化BDLSC,其在基因和蛋白水平均表达肝细胞样表型。结论β2m-/Thy-1 BDLSC是BMSC中较特异的肝干细胞亚群,具有可能益于肝病治疗的巨大潜力。     

乙型肝炎病毒X基因对肝癌细胞Bel-7404细胞周期的影响

目的:构建转基因细胞株Bel-7404/HBx,研究HBx对肝癌细胞周期及凋亡的影响,为探索HBx与原发性肝细胞癌(HCC)之间的关系提供更为完善的理论依据。方法:运用脂质体转染及G418筛选获取Bel-7404/HBx阳性克隆,并分别用聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot鉴定HBxmRNA与蛋白的表达,进一步用四唑兰比色实验(MTT)检测Bel-7404/HBx的增殖,流式细胞仪(FCM)检测Bel-7404/HBx的细胞周期及凋亡。结果:成功构建Bel-7404/HBx,MTT检测结果表明Bel-7404/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测结果显示,与对照组细胞相比,Bel-7404/HBx凋亡率明显降低(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05),S期及G2期细胞所占比例增高(P<0.05)。结论:HBx能加速细胞周期进程,从而促进肝癌细胞的生长并抑制细胞凋亡,可能对肝癌细胞恶性程度具有重要的影响。     

cRGD靶向阿霉素脂质体制备及其对Hela细胞的影响

目的 :制备含有二硫键的环形RGD肽(cyclic RGD peptide,c RGD)修饰长循环阿霉素主动靶向脂质体,对其理化性质、靶向性和对Hela细胞的影响进行评价。方法:用DSPE-PEG-NHS耦联c RGD,插入采用p H法制备的磁性长循环阿霉素脂质体中制备主动靶向脂质体;利用透射电镜、紫外分光光度计和质谱仪进行表征;流式细胞术和免疫荧光验证其靶向性;MTT和流式细胞术验证其对Hela细胞的影响。结果:制备的主动靶向脂质体粒径在100~180 nm之间,包封率达到72%,免疫荧光及流式细胞术均显示其对Hela细胞具有一定靶向性,且能显著诱导Hela细胞凋亡。结论:本研究制备的c RGD靶向阿霉素脂质体具有一定靶向性,能显著提高其杀伤肿瘤细胞的作用。这种具有靶向及穿透功能的脂质体载体可能为肿瘤治疗提供一个新方法。     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

SIRT1基因沉默诱导肝癌细胞老化及其机制

目的探讨慢病毒介导的沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)基因沉默对肝癌细胞老化的影响及机制。方法通过慢病毒介导的shRNA干扰技术靶向沉默SIRT1的表达,并通过Real-time PCR和Westernblot验证SIRT1基因的沉默效果。BrdU标记实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化;β-半乳糖苷酶染色观察肝癌细胞有无老化;Western blot检测衰老相关基因p53和p21蛋白的变化。结果慢病毒介导的shRNA能显著抑制细胞SIRT1的mRNA及蛋白水平。SIRT1沉默能抑制肝癌细胞的增殖,抑制率达70%～80%;同时,SIRT1沉默能显著诱导G1期细胞周期阻滞:感染shCont的细胞处于G1期比例为(44.29±0.36)%,而感染shSIRT1-1的细胞处于G1期细胞为(69.20±1.24)%,感染shSIRT1-2的细胞处于G1期比例为(65.86±1.75)%。SIRT1沉默后肝癌细胞中衰老相关的β-半乳糖苷酶染色显著增高,阳性细胞占40%～50%(P<0.05),并伴随衰老相关基因p53和p21蛋白表达增加。结论 SIRT1基因沉默可能通过p53/p21途径促进细胞衰老。     

G4PAMAM/VEGFASODN抗乳腺癌血管生成的体外实验研究

目的：探讨G4PAMAM／VEGFASODN复合物体外对乳腺癌细胞MDA—MB-231VEGF、VEGF mRNA表达的影响及血管内皮细胞生长的抑制作用。方法：用透射电镜观测G4PAMAM／VEGFASODN的粒径，在不同的酸碱度下观察G4PAMAM／VEGFASODN的稳定性；将G4PAMAM／VEGFASODN进行体外转染，流式细胞仪测定其转染率，激光共聚焦检测转染阳性细胞，MTT法检测转染后细胞的存活率；免疫组化检测VEGF蛋白的表达，RT—PCR检测VEGFmRNA的表达，MTT法测定此复合物对血管内皮细胞生长的抑制作用。结果：G4PAMAM／VEGFASODN的直径约10nm，呈较均匀的网状排列；酸碱度在5到10的范围内具有较高的稳定性，不同电荷比的G4PAMAM／VEGFASODN均没有出现被解离的现象；48h时G4PAMAM／VEGFASODN组在1：40的条件下转染率明显高于脂质体组；各组转染物均对细胞无明显毒性；VEGF蛋白在G4PAMAM／VEGFASODN转染后的MDA—MB-231细胞胞浆中的染色强度明显减弱，阳性表达率显著降低，VEGFmRNA的表达也受到有效的抑制。结论：G4PAMAM／VEGFAsODN复合物稳定性好、转染率高，是一种有良好应用前景的新型纳米载体基因转移系统；G4PAMAM／VEGFASODN复合物能够高效特异地抑制目的基因VEGF的表达，为进一步进行体内动物实验提供了依据。     

核酸适配体修饰聚酰胺-胺负载5-氟尿嘧啶纳米给药体系的制备表征及体外抗肝癌作用

目的研究核酸适配体(ZY1)修饰聚酰胺-胺(PAMAM)负载5-氟尿嘧啶-1-基乙酸(FUA)纳米给药体系(ZY1-PAMAM-FUA)的制备表征及其体外抗肝癌作用。方法将FUA、聚乙二醇(PEG)与PAMAM通过酰胺反应键合,然后将ZY1通过静电吸附与PEG-PAMAM-FUA缀合得到ZY1-PAMAM-FUA纳米给药体系。核磁共振氢谱仪(¹H-NMR)和傅里叶红外光谱仪(FT-IR)鉴定ZY1-PAMAM-FUA的化学结构,动态光散射技术(DLS)表征其粒径分布以及稳定性,紫外分光光度法检测其载药量和体外释药性能,流式细胞仪和荧光显微镜考察SMMC-7221肝癌细胞对Cy5标记的纳米给药体系的摄取能力;MTT法检测纳米给药体系对SMCC-7721肝癌细胞增殖活性的影响。结果ZY1-PAMAM-FUA粒径分布均匀,粒径为102.3 nm,其载药量为8.70%±0.43%,并具有良好的缓释性能。与PAMAM-FUA比较,ZY1-PAMAM-FUA可以更高效地靶向SMCC-7721细胞。ZY1-PAMAM-FUA具有良好的生物相容性且对SMCC-7721细胞具有良好的抗细胞增殖作用。结论ZY1-PAMAM-FUA制备方法简单稳定,具有良好的生物相容性,可以高效地将药物靶向SMCC-7721细胞发挥抗肝癌细胞增殖的作用。     

siRNA靶向沉默fbxl20基因对肝癌SMMC-7721细胞生物学行为的影响

目的:通过沉默fbxl20基因,以观察基因沉默后对SMMC-7721细胞的增殖、迁移和周期分布的影响。方法:通过脂质体Lipofectamine2000介导转染SMMC-7721细胞,靶向fbxl20基因的siRNA片段阻低肝癌SMMC-7721细胞株fbxl20 mR-NA表达。结果:siRNA能有效沉默SMMC-7721细胞fbxl20 mRNA的表达,沉默效率为71.49%。MTT试验实验显示:siRNA转染SMMC-7721细胞后,细胞增殖能力显著降低。Transwell小室和划痕愈合实验表明,fbxl20基因被沉默后,SMMC-7721细胞在迁移能力明显减弱,迁移抑制率高达62.03%。流式细胞术检测细胞周期结果显示:转染48 h后,SMMC-7721实验组细胞G1/G0期比率(81.21%)显著高于阴性对照组(71.49%)和空白对照组(67.90%)。结论:本实验运用RNA干扰技术成功抑制了SMMC-7721细胞中fbxl20基因的表达,并且发现fbxl20基因可能与肝癌细胞的增值和迁移相关。     

18β-甘草次酸对人胃癌细胞BGC823增殖的抑制

目的:观察18β-甘草次酸(18β-glycyrrhetinic acid,GA)对人胃癌细胞系BGC823细胞增殖的影响,并从细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p16,p21,p27)方面探讨GA可能的作用机制.方法:以不同浓度的GA处理胃癌BGC823细胞后,用MTT法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞周期,采用Western blot方法检测胃癌细胞p16,p21,p27蛋白水平变化.结果:GA能抑制BGC823细胞增殖,且呈浓度依赖性.胃癌细胞经GA处理后,细胞周期发生G0/G1期阻滞.另外发现,胃癌细胞p21,p27的蛋白水平上调,但p16的蛋白水平没有明显变化.结论:GA可抑制人胃癌细胞增殖,其机制与G0/G1期阻滞、p21,p27表达上调有关.     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响

目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。     

hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用

目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。     

Trastuzumab修饰四代聚酰胺-胺型枝状聚合物纳米粒靶向结肠癌细胞SW480的研究

目的 该研究旨在探讨Trastuzumab修饰四代聚酰胺-胺型枝状聚合物纳米粒对结肠癌SW480的靶向效果,为构建新型的靶向结肠癌的纳米递送系统提供实验数据.方法 MTT法确定SW480细胞摄取PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs适当的浓度;通过激光共聚焦和荧光显微镜定性观察SW480对罗丹明B标记的PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs的摄取;并采用流式细胞计数仪定量研究SW480细胞对两者的摄取差别;尾静脉注射荷SW480瘤裸鼠研究两者体内分布情况.结果 PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs的浓度在0.2 mg/mL时细胞存活率较高且对SW480细胞的毒性较小.激光共聚焦断层扫描显示SW480细胞可以较好地摄取PAMAM-Trastuzumab NPs,同时流式细胞仪定量显示PAMAM-Trastuzumab NPs在SW480细胞的分布较PAMAM NPs高40％(P ＜0.05).PAMAM NPs和PAMAM-Trastuzumab NPs在移植瘤中的分布明显多于其他脏器,并且随时间的延长PAMAM-Trastuzumab NPs体现了更好的靶向效果.结论 体外与体内实验证明Trastuzumab修饰的PAMAM NPs对结肠癌细胞SW480有很好的靶向效果,可为结肠癌的靶向治疗提供较好的药物载体.     

血管紧张素Ⅱ对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响,以探讨血管钙化发生的机制。方法:体外培养人动脉平滑肌细胞,用β甘油磷酸(βGP)诱导细胞钙化。培养细胞分4组:正常对照组;βGP组:βGP终浓度为10mmol·L-1;AngⅡ组:AngⅡ终浓度为10-7mol·L-1;βGP+AngⅡ组:同时加入相同浓度的βGP和AngⅡ,连续培养10d。采用Vonkossa染色、细胞层钙沉积定量和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断钙化程度,用流式细胞仪测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:βGP组细胞Vonkossa染色见大量黑色颗粒状沉积物弥漫分布于细胞层,βGP+AngⅡ组细胞之间散在分布黑色沉着点;βGP+AngⅡ组细胞钙沉积显著低于βGP组[分别为(1.336±0.096)和(2.056±0.441)μmol·L-1,P<0.01];βGP+AngⅡ组细胞内ALP活性显著低于βGP组[分别为(277.57±87.81)和(691.27±128.06)IU·L-1,P<0.01]。正常对照组与AngⅡ组细胞比较,Vonkossa染色、细胞钙沉积量和ALP活性均无显著性差异。流式细胞仪结果显示,βGP+AngⅡ组细胞凋亡率显著低于βGP组,G0/G1期细胞比例降低,S期的比例升高(P<0.05)。结论:10-7mol·L-1的AngⅡ可抑制钙化血管平滑肌细胞的体外钙化进程。其作用可能与抑制ALP活性和促进细胞增殖、抑制凋亡有关。     

以聚乙烯亚胺-β-环糊精为骨架偶联短肽CY11的转基因载体

目的:以聚乙烯亚胺-β-环糊精(PEI-β-CyD)作为载体骨架,用靶向于肿瘤表面成纤维细胞生长因子受体(FGFR)的短肽CY11(CGMQLPLATWY)偶联于载体材料上,研究该载体材料的基因转染效率.方法:用琥珀酰亚胺-3-(2-嘧啶二硫)丙酸酯[N-succinimidy-3-(2-pyridyldithio) propionate,SPDP]将CY11偶联到PEI-β-CyD上,合成CY11-PEI-β-CyD.核磁共振氢谱(1H-NMR)、热重分析(TGA)对载体材料进行化学表征,凝胶电泳阻滞实验研究载体材料对质粒DNA的浓缩能力,MTT法测定载体材料的细胞毒性,在COS-7、Hela和B16细胞株上进行体外转染实验.结果:成功合成材料CY11-PEI-β-CyD,在N/P为4时能够有效地浓缩质粒DNA.在B16细胞上,材料CY11-PEI-β-CyD达到160 μg/ml时,细胞存活率仍高于80%.在CY11-PEI-β-CyD/DNA复合物在N/P为20∶1时,转染效率是对照组PEI-β-CyD的17倍.结论:CY11-PEI-β-CyD是具有低毒性、高转染且有FGFR靶向性的新型非病毒转基因载体.     

bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I对大鼠巩膜成纤维细胞增殖影响实验研究

目的:该研究拟通过大鼠巩膜成纤维细胞(scleral fibroblasts,SF)体外培养的方法,观察不同浓度bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I 4种细胞GF对体外培养大鼠SF增殖作用,探索大鼠SF在形觉剥夺性近视(FDM)形成过程中的作用。材料与方法:采取体外培养的方法,培养大鼠SF,应用不同浓度的bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I干预SF后,采用MTT法测定各组细胞的增殖活性,采用流式细胞术测定各组SF的细胞周期。结果:(1)MTT检测结果表明,不同浓度4种GF刺激组的细胞增殖活性均显著高于空白健康血清对照组,有统计学意义(P0.05)。(2)流式细胞检测结果表明,与空白组比较,各浓度b-FGF、TGF-β、NGF刺激后,处于G1期细胞显著减少(P0.05),而G2、M期细胞显著增多(P0.05)。IGF-I各浓度刺激后,处于G1期细胞显著减少(P0.05),而S期细胞显著增多(P0.05)。结论:bFGF、TGF-β、NGF能够促进大鼠SF的增殖,并呈量效关系,驱动细胞进入在G2、M期;胰岛素样生长因子能够促进大鼠SF的增殖,并呈量效关系,驱动细胞进入S期。     

188Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞周期阻断

目的　探讨放射性核素 1 88Re- β射线内照射对人肝癌细胞 HCC的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用 .方法　通过 MTT实验、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术对核素诱导的 HCC细胞进行了检测和观察 .结果　 1 88Re导致的 HCC细胞死亡具有典型的细胞凋亡形态学和生化特征 .流式细胞术定量显示各期细胞数发生改变 ,且凋亡率和剂量呈依赖性 .结论　 1 88Re-β射线低剂量和高剂量对 HCC细胞周期的影响不同 ,低剂量主要使 G0 /G1 期阻滞 ,较高剂量则导致 G1 阻滞减轻 ,S期和 G2 /M期细胞数增多~(188)Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞…     

抗ICAM-1液态氟碳纳米微球靶向损伤心肌细胞的体外实验及其细胞毒性作用研究

目的 制备一种耦联细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单抗的液态氟碳(PFOB)纳米微球,检测其基本理化特性与细胞毒性作用并实现其与体外培养损伤心肌细胞的靶向结合.方法 将生物素化ICAM-1单抗与普通(对照组)及生物素化(实验组)PFOB纳米微球耦联,免疫荧光技术检测抗体与微球的耦联情况;MTT法检测微球对心肌细胞的细胞毒性作用;将两组微球分别加入非肿瘤坏死因子-α(TNF-α)损伤和TNF-α损伤后大鼠乳鼠心肌细胞中,观察并半定量计算各组微球与心肌细胞的结合情况.结果 ICAM-1单抗与实验组微球成功耦联,耦联率95％,共聚焦显微镜下微球呈绿色荧光,其粒径、电位、浓度分别为(385.3±88.9)nm,-(60.3±6.11) mV,7.0×108/mL,而对照组微球不见或仅见微弱荧光;不同浓度、不同作用时间下实验组微球对心肌细胞无毒性作用;无论心肌细胞是否暴露于TNF-α,对照组微球均未见附着在心肌细胞膜周,而TNF-α损伤下实验组微球与心肌细胞的附着量是非损伤下的10倍(P＜0.01).结论 成功制备出耦联ICAM-1单抗的PFOB纳米微球,该靶向微球无细胞毒性作用且与体外高表达ICAM-1心肌细胞有较强的结合力.