大鼠胚胎卵巢移植的实验研究

目的探讨大鼠胚胎卵巢异体异位移植后的生长发育及功能。方法将大鼠胚胎的卵巢移植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下,移植40d后取材进行组织学研究,观察移植效果;同时测定血清雌、孕激素等水平。结果移植后第40天,组织学观察,移植物内可见大量发育卵泡及黄体与间质腺,移植卵巢中有丰富的血管。血清雌、孕激素与正常成年大鼠间无显著性差异(P>0.05)。结论大鼠胚胎卵巢移植后能继续生长发育并具有内分泌功能。     

成年大鼠卵巢异体异位移植的实验研究

目的 :探讨大鼠卵巢组织异体异位移植后的生长发育及功能情况。方法 :将成年大鼠卵巢组织植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下 ,观察动情周期的恢复及维持 ,通过组织学和组织化学研究移植效果和测定血清雌激素水平观察卵巢内分泌功能。结果 :移植后 13 55± 2 81d出现动情周期 ,对移植卵巢的组织学观察可见不同发育阶段的各级卵泡及间质腺 ;3- β -羟甾脱氢酶组织化学显示它们呈不同程度阳性反应 ;血清学研究显示移植卵巢具有与正常卵巢相近的分泌雌激素的能力。结论 :大鼠卵巢异体异位移植能存活、发育并具有内分泌功能     

大鼠胚胎卵巢异体异位移植的探讨

为了研究胚胎卵巢移植后的存活和生长发育情况 ,以及不同移植部位对胚胎卵巢的影响 ,将大鼠胚胎卵巢分别移入去势雌鼠的颈部皮下及肾被膜下 ,HE观察颈部移植物移植后 5d处于坏死状态 ,含有大量红细胞 ;1 0d周围有结缔组织包裹 ,内有原始卵泡 ;2 5d及以后移植物内存在大量发育卵泡并可见间质腺及黄体。肾被膜移植物移植后 5d呈结缔组织样 ;1 0d出现大量原始卵泡结构 ;2 5d及以后可见发育卵泡、间质腺和黄体。细胞化学显示发育卵泡的 3 β羟甾脱氢酶呈阳性反应。移植后 2 5d左右阴道涂片出现动情周期。结果说明胚胎卵巢能在异体异位存活并可发育成具有内分泌功能的腺体。     

大鼠卵巢经培养前后异体移植的实验研究

目的：为恢复失去卵巢功能妇女体内性激素的作用,本实验将大鼠卵巢异体皮下移植,观察移植效果。方法：分别将SD大鼠新鲜卵巢及培养后卵巢异体皮下移植。通过观察阴道脱落细胞、子宫重量的变化,移植物的组织形态学及测定血清雌二醇(E2)水平了解卵巢移植鼠体内激素分泌状况。结果：新鲜移植组,3／10只受体鼠阴道脱落细胞显示有雌激素作用,子宫重量及血清E2显著高于去势组,移植物表面无明显血管网形成,组织切片可见大量原始卵泡和及少量发育卵泡。培养后移植组,6／10只受体鼠阴道脱落细胞显示有雌激素作用,子宫重量及血清B水平显著高于去势组,与新鲜移植组无显著差别。移植物表面可见少量微血管分布,组织切片可见较多的发育卵泡。结论：异体皮下移植可降低组织的免疫源性,而经体外培养后可进一步降低免疫源性,利于移植物存活,为临床组织器官同种异体移植提供实验依据。     

大鼠胚胎性腺异体异位埋植的研究

为探讨胚胎性腺(睾丸与卵巢)异体异位埋植后的生长发育和内分泌功能,将大鼠胚胎睾丸和卵巢分别移入摘除性腺的成年雄性和雌性大鼠颈部皮下和肾被膜下.埋植后分不同时间取出埋植物,常规染色观察埋植物在异体异位的生长发育.细胞化学和免疫组织化学法观察埋植物的功能状态.放射免疫法测定血清性激素浓度.结果显示埋植的胚胎性腺在异体可生长发育至成年状,3-β羟甾脱氢酶、性激素与性激素受体在睾丸与卵巢的内分泌细胞中呈阳性反应,血清促性腺激素和性激素在埋植后均有明显增加.     

新生大鼠卵巢异体异位移植的实验研究

目的 :探讨新生大鼠卵巢异体异位移植后的生长发育及功能。方法 :将新生大鼠的卵巢移植入去势成年雌性大鼠的肾被膜下 ,移植 5 0d后取材进行组织学及组织化学研究 ,观察移植效果 ;同时测定血清雌激素水平。结果 :受体在移植后第 16 6 0± 7 4 1d出现动情周期 ,移植物内可见不同阶段的发育卵泡和间质腺 ;3- β -羟甾脱氢酶组织化学染色显示它们呈不同程度的阳性反应 ;血清E2 水平与正常成年大鼠间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :新生大鼠卵巢异体异位移植后能继续生长发育并具有内分泌功能。     

玻璃化冷冻兔卵巢组织自体移植后卵巢功能观察

目的 观察玻璃化冷冻兔卵巢组织经子宫系膜内种植后卵泡的发育情况。方法 15只新西兰白兔随机分为两组：1组（10只）,玻璃化冷冻兔卵巢组织子宫系膜内种植;2组（5只）,对照组。通过卵巢组织光镜、阴道脱落细胞学检查,观察种植后卵巢组织长期存活、卵泡生长发育及内分泌功能恢复及维持情况,观察存活的卵巢组织对促性腺激素的反应性,采集MⅡ期成熟卵进行卵泡浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）,进一步观察移植后发育成熟的卵母细胞的受精情况。结果 移植2个月和6个月后卵巢组织中各级卵泡所占的比例与正常卵巢组织相比差异无统计学意义﹙P＞0.05）;移植半年后对卵巢组织应用卵泡刺激素,与未用卵泡刺激素的卵巢组织相比,近成熟卵泡所占的比例明显增多﹙P＜0.05）;成熟卵母细胞ICSI受精后,能够得到正常的胚胎。结论 玻璃化冷冻兔卵巢组织自体子宫系膜内种植能够很好地恢复卵巢功能,其功能可维持较长时间,结合体外受精技术可以产生正常的胚胎。     

改良完整卵巢冷冻移植对去势大鼠内分泌功能的影响

目的 探讨改良灌注后完整卵巢冷冻移植对卵巢去势大鼠内分泌功能的影响。方法 选择8～10周龄的健康、雌性清洁级Lewis大鼠30只。10只成熟雌性Lewis大鼠作为供体,获取带蒂完整卵巢进行改良连续导入的精准灌注后冷冻。将20只Lewis大鼠随机分为正常对照组和去势移植组,去势移植组于卵巢去势后1周进行完整卵巢异体原位移植,并于移植前、移植后2周、移植后4周观察大鼠的一般情况、动情周期、血清激素水平改变,于移植后4周检测卵巢组织形态学改变,评估大鼠卵巢内分泌功能。结果 去势移植组在大鼠完整卵巢异体原位移植术后3d体重显著低于正常对照组[(197.1±0.8) g比(201.4±0.6) g,P<0.05];移植第4天后,体重增长显著高于正常对照组[(1.56±0.44) g/d比(1.51±0.52) g/d,P>0.05]。去势移植组大鼠完整卵巢冷冻移植术后(11±2) d恢复正常动情周期。移植前,去势移植组大鼠的卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)水平显著高于正常对照组,黄体生成素(luteinizing hormone, LH...     

兔冷冻卵巢组织自体多点种植后的组织形态和功能

目的：观察兔冷冻卵巢组织子宫系膜、卵巢囊和卵巢内多点种植后组织形态及功能,探讨移植部位和移植方法。方法：15只新西兰白兔随机分为3组,每组5只：1组,新鲜卵巢组织子宫系膜及卵巢囊种植;2组：冷冻卵巢组织子宫系膜及卵巢囊种植;3组：冷冻卵巢组织卵巢内种植。通过卵巢组织光镜和电镜观察、子宫内膜组织光镜观察、阴道脱落细胞学检查,反映种植后卵巢组织存活、卵泡生长发育及内分泌功能等情况。结果： 冷冻复苏组织和新鲜组织相比, 2组、3组移植后组织与冷冻复苏组织相比, 3个移植组间相比,正常卵泡和形态改变卵泡所占比率差异均无统计学意义(P＞0.05）;3个移植组的正常卵泡比率均低于新鲜组织(P＜0.05）;3个移植组卵巢组织中存在正常比例的各级卵泡,并且近成熟卵泡的比率与新鲜卵巢组织相比差异无统计学意义(P＞0.05）,2组、3组移植后组织与冷冻复苏组织比较,近成熟卵泡所占比率增加(P＜0.05）;冷冻后和移植后卵巢组织形态和超微结构无明显改变。结论： 小块卵巢组织冷冻可以获得良好的冷冻保存效果;冷冻卵巢组织自体多点种植后,卵巢组织光镜形态学和超微结构无明显改变,卵泡存活并正常发育;卵巢组织种植于子宫系膜、卵巢囊和卵巢内均可以得到良好的效果。     

胚胎卵巢移植的研究进展

卵巢自体或异体移植可以恢复卵巢功能缺如或早衰患者的内分泌功能并有望获得生育能力。人类胚胎卵巢免疫原性低,其内含有数百万的始基卵泡,这些始基卵泡离体后可生长发育并分泌激素。来源于引产胎儿的卵巢是卵巢功能缺如或早衰患者异体卵巢移植的理想供体,胚胎卵巢来源的不随意性使其冷冻保存至关重要。本文就胚胎卵巢移植的一些相关研究和冷冻进行综述。     

小鼠卵巢组织的深低温保存和移植研究

①目的 采用深低温保存方法冷冻保存小鼠的卵巢组织，观察移植后卵巢功能和组织学的恢复情况。②方法 36只昆明种小鼠随机分为3组：假手术组、对照组(新鲜移植组)和深低温保存组。假手术组不切除卵巢，对照组切除卵巢后即行自体原位移植，深低温保存组则将双侧卵巢完全摘除后，行二期手术自体原位移植深低温保存的卵巢。观察所有小鼠的动情周期的变化，并对卵巢的卵泡发育情况进行组织学检查。③结果 假手术组小鼠的动情周期没有任何变化，对照组小鼠的动情周期也在手术后的不同时间内恢复正常，深低温保存组小鼠在完全切除卵巢后，完全失去了动情周期的变化；冷冻复温卵巢自体移植后，多数小鼠的动情周期恢复正常。组织学分析显示，深低温保存卵巢在自体移植后，卵巢可以存活，并有各级卵泡发育。④结论 采用深低温保存方法保存后的小鼠卵巢复温后保持组织活性，自体移植后小鼠的动情周期恢复，卵巢中有正常卵泡发育。     

人胎儿卵巢组织异种移植后卵母细胞的发育及成熟能力

目的探讨人胎儿卵巢组织冷冻复苏、体外培养和异种移植后卵母细胞的发育和成熟情况。方法取5例胎龄20周引产的胎儿卵巢,采用丙二醇慢速冷冻保存,复苏后在组织培养条件下进行体外培养,6d后移植到免疫缺陷小鼠的肾被膜下,应用卵泡刺激激素作用23周后取出卵巢组织,机械法取出窦卵泡内的卵母细胞,结合体外成熟培养,观察卵子成熟情况,并通过移植前后组织学和增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化观察卵泡发育情况。结果冷冻复苏组织和新鲜卵巢组织中各期卵泡的构成比之间差异无显著性(P>0.05);培养组织与新鲜组织和冻融组织相比,增殖期卵泡的比例显著增加(P<0.05);移植组织与新鲜组织、冻融组织和培养组织相比,增殖期卵泡比例亦显著增加(P<0.05)。各组织中原始卵泡均未见PCNA阳性表达,其表达最早出现于初级卵泡,新鲜组织和冻融组织中偶可见PCNA阳性表达,而培养组织和移植组织中可见明显的PCNA阳性表达。从移植卵巢的窦卵泡中获得未成熟卵子42个,经体外成熟培养有21.43%的卵子可发育到MII期。结论人胎儿卵巢组织能耐受冻融、组织培养和移植过程,其卵泡能够重新生长发育,恢复内分泌功能,且不影响卵母细胞的发育及成熟能力。     

超速冷冻法冷冻保存大鼠卵巢组织的实验研究

目的探讨超速冷冻法对SD大鼠卵巢组织的冷冻保存功效。方法采用液氮直投法冷冻大鼠卵巢组织。计数冻融后卵巢组织内形态正常始基卵泡数量。将卵巢组织自体移植，术后35天处死动物，测定血清雌二醇（E2）水平。结果新鲜和冻融后的大鼠卵巢组织中形态正常始基卵泡数量无统计学差异（P〉0.05）。移植术后35天，两移植组血清E2水平无统计学差异（P〉0.05）。结论液氮直投超速冷冻法可以有效的保存卵巢组织，对大鼠卵巢组织学和功能的影响较小。     

去甲二氢愈创木酸对大鼠卵巢功能的影响

目的探讨血管生成抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid, NDGA)对有规律动情周期大鼠卵巢功能的影响.方法将有规律动情周期的雌性大鼠按不同的动情阶段随机分为NDGA组(N)和PBS组(P),隔日皮下注射16 d,观察给药前后血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、FSH和LH水平和给药后的交配情况及子宫和卵巢的形态学变化.结果 NDGA各组大鼠在给药后皆不能成功交配.免疫组化染色显示NDGA能显著抑制子宫内膜基质细胞增殖,减少内膜腺体数目,抑制腺上皮细胞增殖,抑制内膜血管增殖和减少微血管密度(MVD)(P<0.01).卵巢有成熟的黄体,但数目和面积比对照组显著减少,闭锁卵泡明显增多(P<0.01).血清E2显著降低,P在动情期和动情后期呈反向变化(P<0.01),FSH在动情期和动情后期明显升高(P<0.05),LH值与给药前比较没有统计学差异(P>0.05).结论长时间使用NDGA可以引起大鼠的卵巢功能紊乱.     

大鼠胚胎卵巢原位移植的生殖内分泌功能研究

目的建立大鼠胚胎卵巢原位移植模型,探讨大鼠胚胎卵巢原位移植后的生殖内分泌功能恢复情况,为进一步研究其生育和子代健康安全性提供前期基础。方法将90只日龄50~60 d的雌性SD大鼠随机分为移植受体组(研究组)50只、正常对照组(阳性对照组)20只、去势对照组(阴性对照组)20只。研究组行孕17~19 d胎龄胚胎卵巢原位移植(同时切除自身卵巢)、阳性对照组仅行开关腹手术、阴性对照组行自身卵巢切除而不行胚胎卵巢移植。于术后45 d随机取研究组、阳性和阴性对照组大鼠分别10只,共30只(其余60只雌性大鼠继续饲养供后期实验用),采用电发光方法检测各组大鼠血清雌、孕激素水平,并同时剖腹探查卵巢发育情况、切除卵巢行病理切片HE染色观察卵泡发育情况。结果(1)移植术后雌孕激素恢复情况:移植后45 d,研究组、阳性和阴性对照组(每组各10只雌性大鼠)的雌激素分别为(114.65±15.59)、(121.71±14.92)和(56.51±7.82)pmol/L,孕激素分别为(12.79±4.40)、(13.00±1.18)和(3.70±0.68)ng/ml。研究组和阳性对照组间雌孕激素水平比较无显著性差异(P>0.05),而研究组和阴性对照组间雌孕激素水平比较有显著性差异。(P<0.05)。(2)移植后卵巢发育情况:移植后45 d,研究组、阳性和阴性对照组的卵巢体积分别为(0.22±0.07)、(0.24±0.09)和0ml,研究组、阳性对照组间卵巢容积比较无显著性差异(P>0.05)。光镜下研究组和阳性对照组卵巢内均可见不同阶段发育的卵泡和黄体形成。结论大鼠胚胎卵巢原位移植术后的卵巢可以存活,并可生长发育而具有排卵功能,其生殖内分泌功能可以恢复。     

小鼠卵巢玻璃化冻存后异体移植对卵巢衰竭模型鼠卵巢功能的影响

目的研究新鲜与玻璃化冻存幼鼠卵巢异体异位移植对卵巢早衰(POF)小鼠卵巢储备功能的影响。方法以正常小鼠为对照组,使用一次性环磷酰胺150 mg/kg腹腔注射,白消安20 mg/kg皮下注射,建立小鼠卵巢早衰模型,于造模30 d后进行幼鼠新鲜或玻璃化冻存卵巢的肾被膜下移植。通过对移植后30 d各组卵巢组织常规HE染色、血清促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、抑制素B(INHB)、抗苗勒管激素(AMH)变化,观察卵巢玻璃化冻存后异体移植对化学性卵巢功能损伤卵泡储备功能有无挽救作用。结果无论是损伤模型组还是损伤后卵巢移植组,血清FSH、LH浓度明显高于正常对照组(P<0.05),AMH、INHB浓度明显低于正常对照组(P<0.05)。但卵巢移植组与模型对照组比较,各血清激素指标均有所改善,尤其是玻璃化冻存卵巢移植组,血清FSH、LH浓度明显降低(P<0.05),AMH、INHB上升。结论新鲜与玻璃化冻存幼鼠卵巢异体异位移植可以有效改善POF小鼠卵巢功能。     

胎儿与成人卵巢免疫原性的比较

目的 :比较胎儿卵巢、成人卵巢免疫原性的差异 ,并观察培养前后胎儿卵巢免疫原性的变化。方法 :对培养前后胎儿卵巢及成人卵巢的冰冻切片用人白细胞抗原 (HLA DR)单克隆抗体进行免疫组织化学染色 ,观察其阳性细胞形态及分布并计数。结果 :胎儿卵巢内HLA DR抗原含量显著少于成人卵巢 (P <0 .0 0 1) ,且培养后胎儿卵巢HLA DR抗原含量显著低于培养前 (P <0 .0 1) ,随培养天数的增加HLA DR抗原含量逐渐减少 (P <0 .0 1)。结论 :胎儿卵巢的免疫原性低于成人卵巢 ,且培养后进一步降低。以培养一段时间的胎儿卵巢作为移植供体 ,可能提高临床卵巢移植的成功率。     

C57BL/6J小鼠冻融IVF原核胚用于Cas9显微注射探讨

目的探讨小鼠体外受精(IVF)冻融后用于Cas9注射的可行性。方法新鲜C57BL/6J小鼠卵子IVF后采用冻存管法(EFS20/40)冷冻原核胚(单细胞胚)和2细胞胚胎,次日复苏后培养。比较冻融原核胚和2细胞胚胎的回收率及成活率。选取部分冻融原核胚与新鲜原核胚同时进行Cas9和稀释液胞质注射并培养至2细胞,分别比较注射后的存活率及2细胞发育率。结果冻融后的B6小鼠原核胚的回收率为92.5%、成活率为92.8%,2细胞胚的回收率为90.5%、成活率95.8%,两组数据差异无显著性(P0.05)。新鲜原核胚Cas9注射后的存活率为92.7%,空白组注射组为97.5%,冻融原核胚Cas9注射后的存活率为82.6%,空白组为92%,冻融组Cas9注射与各组差异有显著性(P0.05),其它各组差异无显著性(P0.05)。注射后的2细胞胚发育率差异无显著性(P0.05)。结论冻融原核胚可用于Cas9显微注射。