腹腔内注射脂多糖对大鼠黑质ROS含量及NADPH酶的影响

目的 观察腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,大鼠黑质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶的表达及活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的产生情况。方法 健康2月龄、1年龄SD大鼠经腹腔注射LPS(1 mg/kg)后,分别于6 h、12 h、24 h、48 h、1周处死,快速取脑黑质,用DCFH-DA探针检测各组大鼠ROS产生,用Western blotting法检测NADPH酶在胞质蛋白和膜蛋白的表达情况。结果 腹腔注射LPS 12 h,大鼠黑质内ROS活性达到高峰,NADPH酶活性增加,达到高峰。结论 无论在老年组与青年组,LPS刺激后(12 h)的氧化应激反应均可能是通过激活NADPH氧化酶途径而发生的。     

低剂量脂多糖脑室注射对大鼠行为黑质小胶质细及多巴胺能神经元的长时程影响

目的 利用大鼠脑室内注射低剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(10μg)诱导全脑炎症,长时间观察大鼠行为学、黑质部位小胶质细胞激活及多巴胺(Dopamine,DA)能神经元的变化,研究小胶质细胞激活与DA能神经元损害的关系,探讨炎症在帕金森病(Parkinson's disease,PD)发病机制中的作用.方法 50只雄性SD大鼠分为生理盐水对照组和10 μg LPS组.大鼠右侧脑室内注射生理盐水或10 μgLPS,术后不同时间观察大鼠行为学改变,免疫组化方法观察大鼠黑质部位小胶质细胞激活情况及酪氨酸羟化酶( tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经元的变化.Fluoro-Jade B(FJB)染色检测大鼠黑质部位神经元变性情况.结果 ①注射后4周至36周两组大鼠平均运动速度相近.注射后40周时10μg LPS组大鼠平均运动速度比生理盐水对照组降低24.6％ (P＞0.05).②注射后24周和40周,10 μg LPS组大鼠黑质部位可见明显激活的OX-42阳性小胶质细胞,生理盐水对照组未见明显激活的OX-42阳性小胶质细胞.两组大鼠黑质部位均未发现OX-6阳性小胶质细胞.③注射后24周和40周,10 μg LPS组大鼠黑质部位TH阳性神经元数目比生理盐水对照组分别减少了24.2％ (t=4.803,P＜0.01)和27.6％ (t=3.212,P＜0.01).④两组大鼠黑质部均未见FJB阳性染色神经元.结论 低剂量LPS脑室内注射可造成大鼠黑质部位小胶质细胞长期慢性激活及DA能神经元慢性损害.LPS诱导的全脑炎症在短时间内不会引起黑质DA能神经元变性坏死.脑室内注射10μg LPS模型能很好模拟DA能神经元慢性变性的特点,是研究PD的较好模型.     

远志皂苷对脂多糖诱导的帕金森病模型大鼠的作用及机制研究

目的 通过模拟中药口服、疗程用药的方式,探究远志皂苷(Tenuigenin,TEN)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的帕金森病(Parkinson's disease, PD)模型大鼠的作用及机制。方法 实验分5个组,通过动物行为学测试、大鼠黑质及血浆中炎性反应因子含量测定、黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元存活率检测和主要脏器组织形态学切片观察,研究TEN对炎症性PD模型大鼠的作用及机制。结果 TEN能够改善炎症性PD模型大鼠的行为学损伤,降低黑质DA能神经元的病死率,抑制黑质炎性反应因子含量,对主要脏器的组织形态学无影响。结论 TEN对PD模型大鼠具有神经保护作用,其机制与抗感染活性密切相关。     

小胶质细胞过表达IL-10改善帕金森病模型小鼠运动障碍

目的：研究黑质致密部(substantia nigra pars compacta, SNc)小胶质细胞过表达白细胞介素(interleukin, IL)-10对帕金森病(Parkinson′s disease, PD)模型小鼠运动障碍的作用。方法：第1天,在成年C57BL/6雄性小鼠双侧SNc微量注射小胶质细胞特异性过表达IL-10的腺相关病毒,第21天腹腔注射1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrapyridine, MPTP)制备PD模型,第28天取小鼠全脑。采用免疫组织化学法检测SNc多巴胺能神经元和小胶质细胞的表达情况,并应用挑战平衡木检测PD模型小鼠的运动障碍。结果：PD模型小鼠病理进程中,SNc多巴胺能神经元的数密度显著降低,小胶质细胞的面积密度显著增加,运动障碍出现;SNc小胶质细胞过表达IL-10可显著增加多巴胺能神经元的数密度,降低小胶质细胞的面积密度并改善PD模型小鼠的运动障碍。结论：SNc小胶质细胞过表达IL-10通过减轻神经元退变及神经炎症而改善PD模型小鼠运动障碍。     

脂多糖对大鼠多巴胺能神经元毒性作用的研究

目的　建立新的帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)动物模型 ,探讨其发病机制。方法　在大鼠脑黑质(substantianigra ,SN)内注射脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)后 ,按大鼠不同存活期用高效液相色谱 (HPLC)来测定脑内多巴胺 (Dopamine,DA)及其代谢产物的含量 ;用免疫组化法观察酪氨酸羟化酶 (Tyrosinehydroxylase ,TH)阳性神经细胞、小胶质细胞的形态及数量变化。结果　DA及其代谢产物的含量在LPS注射侧随时间不同有不同程度下降 ,于第 14天达到最低 (P <0 0 1) ;注射侧黑质TH阳性神经元可以达到全部消失 ,该处可见大量被激活并有形态改变的小胶质细胞。结论　LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元的损害     

多西环素对脂多糖-帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨多西环素对脂多糖(LPS)-帕金森病(PD)模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制.方法 动物随机分为3组:正常对照组、LPS组和多西环素干预组;采用LPS黑质内立体定向注射建立PD模型;免疫组化染色法观察多西环素干预前后黑质多巴胺能神经元和MHCⅡ阳性小胶质细胞的变化;高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺(DA)、DOPAC(二羟苯乙酸)含量的变化;Western 印迹检测黑质小胶质细胞MHCⅡ(主要组织相容性复合物Ⅱ)蛋白的表达.结果 多西环素干预后,黑质残存多巴胺神经元由LPS组的38%±5%上升到79%±4%(P<0.01);纹状体DA及DOPAC含量分别由LPS组的4.89±0.27和0.70±0.07上升到7.00±0.34和1.10±0.10(P<0.01);腹腔注射阿朴吗啡诱导动物旋转的平均圈数由LPS组的(208±14)次/30 min减少到(80±12)次/30 min(P<0.01);而黑质致密部MHCⅡ阳性细胞数量由LPS组的835±82减少到354±59(P<0.01);Western 印迹检测MHCⅡ蛋白的表达也明显减少.结论 多西环素能够抑制LPS诱导的黑质多巴胺能神经元变性,它可以通过下调小胶质细胞MHCⅡ的表达来实现其神经保护作用.     

米诺环素对大鼠神经病理性疼痛模型中小胶质细胞IL-1分泌的影响

目的 评价米诺环素(MI)对慢性压迫性损伤(CCI)诱导大鼠神经病理性疼痛及分离小胶质细胞中IL-1浓度的影响。方法 雄性SD大鼠被随机分为三组:Sham+vehicle、CCI+vehicle和CCI+MI。采用机械刺激反应和冷刺激反应评估大鼠的机械性和冷痛觉增敏。在CCI手术前及CCI手术后1、3、5、7、10和14 d进行行为学检测。CCI手术后14 d处死大鼠,从脊髓腰膨大分离小胶质细胞并进行培养。检测细胞培养24 h后上清液中白细胞介素-1(IL-1)浓度。结果 与CCI+vehicle组比较,MI缓解CCI诱导的神经病理性疼痛,并且降低培养细胞的IL-1浓度。结论 MI缓解CCI诱导的神经病理性疼痛并降低小胶质细胞中IL-1浓度。     

星形胶质细胞参与脑内炎症致大鼠多巴胺能神经元变性

目的 观察脑室内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的脑内炎症对大鼠黑质多巴胺能神经元的慢性毒性作用,探讨星形胶质细胞是否参与脑内炎症致大鼠多巴胺能神经元变性.方法 60只SD大鼠分为LPS实验组和生理盐水(NS)对照组(n=30).大鼠右侧脑室一次性注射LPS 20μl(1.25μg/μl)或同体积的NS.于给药后不同时间检测大鼠行为,免疫组织化学染色法观察黑质内酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,并用Western blot检测大鼠黑质纹状内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 1)LPS给药后大鼠平均运动速度呈进行性下降,与相应NS对照组相比,在16周[(2.12±0.43) cm/s,(1.67±0.36)cm/s,t=2.537,P<0.05]、20周[(2.03±0.31)cm/s,(1.46±0.33) cm/s,t=3.981,P<0.01]和24周[(2.00±0.36)cm/s,(1.46±0.32)cm/s,t=3.545,P<0.01]均差异有显著性.LPS给药后大鼠黑质TH阳性神经元数量减少,在24周时是相应NS对照组的75.4% (P<0.01).2) LPS实验组大鼠给药后2周时,黑质纹状体部位GFAP蛋白表达量比相应NS对照组明显增高,为NS对照组的258%(P<0.01).到给药后24周时,LPS实验组大鼠黑质纹状体内GFAP蛋白表达量又比NS对照组明显增高,为NS对照组的168%(P<0.05).结论 侧脑室注射LPS引发大鼠黑质部位星形胶质细胞激活,参与了黑质多巴胺能神经元的变性过程.     

银杏叶提取物对帕金森病模型大鼠脑内神经炎性反应的影响

目的 观察银杏叶提取物对帕金森病（Parkinson's disease,PD）模型大鼠中脑和纹状体神经炎性反应因子及其调控因子核因子-κB （nuclear factor-kappa B,NF-κB）的影响。方法 将32只3月龄雄性SD大鼠采用数字表法随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组8只。背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,低剂量组和高剂量组同时给予银杏叶提取物灌胃共30 d。酶联免疫法检测大鼠脑内纹状体中神经炎性反应因子-肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）含量变化,同时Western blotting检测大鼠脑内星形胶质细胞、小胶质细胞和NF-κB的表达改变。结果 与对照组相比,模型组大鼠纹状体中TNF-α和IL-1β均明显增加（P<0.01）,大鼠脑内GFAP、Iba1和NF-κB表达明显增加（P<0.05）。银杏叶提取物治疗后明显逆转了上述神经炎性反应,与模型组相比,治疗组GFAP、Iba1和NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05）,大鼠纹状体中TNF-α和IL-1β明显减少（P<0.05）。同时上述改变有明显剂量依赖性。结论 银杏叶提取物能改善PD大鼠脑内的慢性神经炎性反应,保护脑内黑质多巴胺能神经元,为PD的临床治疗提供新的靶点。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、IL-10表达的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW 264.7细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及抗炎性细胞因子IL-10的动态变化规律及八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK.-8)对其表达的影响.方法 LPS诱导RAW 264.7细胞不同时间(0、...     

脂多糖活化小鼠大脑小胶质细胞后炎性细胞因子的表达

目的采用细菌脂多糖（LPS）对原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞进行刺激,检测小胶质细胞IL-1bI、L-6和TNF-α等细胞因子的基因表达情况。方法分离纯化小胶质细胞,采用1μg/ml LPS刺激24h,再采用RT-PCR检测IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平。结果体外培养的小胶质细胞经LPS刺激后,细胞因子IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平明显上调。结论 LPS活化的小胶质细胞可产生大量的炎性细胞因子。     

MSCT肝动脉造影在肝移植受体术前评估中的应用

  【摘要】 目的 评估MSCT肝动脉造影诊断肝动脉解剖和变异情况在肝移植受体术前血管评价中的应用价值。方法 选取自2006年7月至2007年1月共75例预行肝移植的晚期肝病患者，均行肝脏动脉期扫描、肝动脉重建。由两位放射科医师对图像进行评估，包括肝动脉解剖和变异类型情况并与手术结果对照，统计分析诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果 75例中接受肝移植手术者共53例，MSCT检查发现肝动脉变异II~X型共15例，与手术结果对照，诊断的灵敏度：92.5％，特异度：100％，假阴性率：7.5％，假阳性率:0％。结论 MSCT是一种快捷、简便、无创、价廉的检查手段，可有效评估肝移植受体术前的肝动脉解剖和变异情况。     

D-β-hydroxybutyrate inhibits microglial activation in a cell activation model in vitro

Microglial activation plays an important role in a panel of neurological disorders such as multiple sclerosis(MS) and Parkinson's disease(PD),and is a key target for developing therapeutic strategies for these diseases.Ketogenic diet (KD),which is able to inhibit microglial activation in substantia nigra pars compacta of mice,has been shown effective in a mouse model of PD,possibly through increasing D-β-hydroxybutyrate(D-β-HB),a major component of ketone bodies.To verify this,we developed an in vitro mo...     

乙酰葛根素对 Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活性的影响

目的：研究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白（ Aβ25-35）诱导的BV-2小胶质细胞活性的影响。方法体外培养BV-2小胶质细胞,用Aβ25-35诱导小胶质细胞建立AD细胞模型,加入不同浓度的乙酰葛根素,显微镜下观察细胞的形态变化;MTT法检测细胞的存活率;ELISA法检测细胞中IL-1β,TNF-α的含量。结果 Aβ诱导后小胶质细胞由分枝状的静息状态转变为阿米巴样的激活状态,而乙酰葛根素可以减轻细胞发生的变化,细胞状态介于空白组与模型组之间;MTT显示乙酰葛根素不会对小胶质细胞的存活率产生影响;ELISA结果显示,与空白组相比,模型组的IL-1β,TNF-α表达水平明显升高,而乙酰葛根素能够降低Aβ诱导IL-1β,TNF-α的表达水平。结论乙酰葛根素能够抑制Aβ25-35诱导的小胶质细胞激活减轻炎性因子的分泌,对阿尔茨海默病具有保护作用。     

曲古抑素A预处理对大脑中动脉闭塞模型大鼠脑保护作用及其与IL-1β的关系

目的: 探讨曲古抑素A(TSA)预处理对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠的脑保护作用及其与IL-1β之间的关系,并评价年龄对TSA预处理所产生大鼠脑保护作用的影响。方法: 采用梭性头端线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,将96只SD青年雄性大鼠(3~4月龄)随机分为缺血再灌注对照组、二甲基亚砜(DMSO)预处理组、小剂量TSA预处理组(0.03 mg/kg)和大剂量TSA预处理组(0.1 mg/kg),每组包括缺血再灌注6 h组、12 h组、24 h组、48 h组,每组6只大鼠。另将18只SD雄性大鼠分为老年组(22月龄)、青年组(3~4月龄)、幼年组(1月龄),均采用大剂量TSA预处理。采用方差分析比较不同处理组脑梗死体积比、脑脊液和血液IL-1β含量的差异,Spearman秩相关分析脑梗死体积比与脑脊液、血液IL-1β含量的线性相关。结果: 大剂量TSA组大鼠脑梗死体积比在缺血再灌注各时间点均小于其余3组。大剂量TSA组缺血再灌注各时间点脑脊液中IL-1β 含量与对照组相应时间点相比明显减少。大剂量TSA组血清中IL-1β 含量在缺血再灌注各时间点均低于DMSO组和对照组,小剂量TSA组与DMSO组无差别。脑梗死体积与血液IL-1β、脑脊液IL-1β含量的相关系数分别为0.841和0.618(P<0.05)。不同年龄组大鼠的脑梗死体积比较差异无统计学意义,但老年组大鼠脑梗死体积大于其余两组。不同年龄组大鼠脑脊液中的IL-1β含量差异无统计学意义(P=0.076)。结论: 大剂量TSA预处理可减小脑梗死体积比,并降低脑脊液和血液 IL-1β含量;年龄对大剂量TSA预处理大鼠脑梗死体积比、血液和脑脊液IL-1β没有影响。     

谷氨酰胺下调大鼠肝细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

目的 利用原代培养的大鼠肝细胞,观察谷氨酰胺(Gln)在体外对白细胞介素-1β(IL-1β)刺激下一氧化氮合酶(iNOS)过度表达的影响.方法 原位胶原酶灌注法获取原代大鼠肝细胞,分别用生理盐水、IL-1β(1 nmol/L)以及IL-1β(1 nmol/L)联合不同浓度的Gln(2、5、10 mmol/L)刺激24 h,留取细胞和堵养液,采用生化法测定培养液一氧化氮(NO)的水平,采用实时定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测肝细胞内iNOS信使RNA和蛋白质水平,采用电泳迁移率转变试验检测肝细胞核内核因子κB(NF-κB)的活性.结果 IL-1β刺激后培养液NO的平均浓度为72.7 μmol/L明显高于生理盐水组41.7 μmol/L,肝细胞iNOS蛋白和mRNA水平分别增加了35%和90%,同时给予Gln能够抑制iNOS的过度活化减少NO的产生,并且这种抑制作用随着Gln浓度的增加而增强;IL-1β刺激后肝细胞核内NF-κB的结合活性增强约50%,Gln对NF-κB的活化没有抑制作用,在5、10 mmol/L浓度时反而对NF-κB有进一步的激活.结论 谷氨酰胺能够下调肝细胞在炎症应激诱导下iNOS基因的过度表达,减少NO的产生,这一作用不是通过NF-κB信号通路实现的.     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

改良三甲散含药脑脊液对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症模型相关因子及蛋白表达的影响

目的探讨改良三甲散含药脑脊液对脂多糖(LPS)所诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响。方法将BV2细胞分为空白对照组,模型组,10.0%、5.0%、2.5%改良三甲散组,石杉碱甲组。细胞培养贴壁后,改良三甲散各组及石杉碱甲组分别加入10.0%、5.0%、2.5%、10.0%含药脑脊液,37℃孵育2 h后除空白对照组均加入LPS(终浓度为1 mg/L),继续孵育24 h后收集培养上清,提取蛋白样品。应用硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;ELISA法检测各组细胞培养上清中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;Western blot法检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果模型组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显升高,p-JNK表达上调;10%、5%改良三甲散组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显下降,p-JNK表达下调。结论改良三甲散含药脑脊液对LPS所致的BV2小胶质细胞的炎性反应具有调节作用,其作用机制可能与调控p-JNK的表达、减少炎性介质的产生有关。