2010年湖南省郴州市手足口病病原学和人肠道病毒71型基因特征研究

目的:了解2010年湖南省郴州市手足口病的病原学特征,为手足口病的防控工作提供依据。方法:采集2010年郴州市手足口病患者的咽拭子、肛拭子或粪便标本,采用Real time-RT-PCR方法检测HEV71、CVA16和HEV的核酸,选择HEV71阳性的标本使用RD、Vero细胞进行病毒分离,使用RT-PCR法扩增HEV71分离株的VP1区片段,进行VP1区核苷酸序列测定和分析。结果:2010年共检测手足口病患者临床标本665份,HEV阳性率72.78%,其中HEV71占55.17%、CVA16占18.59%、其它HEV占26.24%。不同月份、年龄、地区以及不同类型病例HEV型别构成比差异有统计学意义。分离出4株HEV71,其VP1区核苷酸序列分析表明为C4基因亚型。结论:HEV71为郴州市2010年手足口病流行的主要病原体,属于C4基因亚型。HEV71和CVA16的分布在病例发病时间,发病年龄和地域上有所不同。     

2010年致白城市手足口病流行的肠道病毒71型基因特征

目的分析2010年致白城市手足口病流行的肠道病毒71型基因特征。方法对2010年白城市6株EV71分离株VP1编码区基因全长逆转录-聚合酶链反应扩增后进行序列测定,使用Bioedit软件和MEGA 4.0软件进行同源性、基因亲缘关系分析。结果白城市2010年的6株EV71分离株均属于C4a基因亚型,6株白城分离株间的核苷酸同源性为98.6%～100.0%,并形成2个传播链,传播链1的白城4株病毒与吉林省2010年流行株代表株JL-HFM-10-5病毒亲缘关系最近,核苷酸同源性99.7%～100.0%,传播链2的2株白城流行株与2008年的阜阳流行株和2009年的2株吉林省流行株亲缘关系最近,核苷酸同源性99.3%～99.4%。结论 2010年白城市至少有两个EV71传播链致手足口病流行,传播链1的病毒在吉林省内和白城部分县区循环传播导致手足口病的流行;传播链2的病毒已经在国内传播较长时间,提示EV71病毒跨地域迅速而广泛传播特点。     

北京市儿童手足口病与肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染有关

目的了解2007年5-6月北京市儿童中流行的手足口病的病原。方法于2007年5、6月间采集来首都儿科研究所附属儿童医院门诊就诊的手足口病患儿咽拭子标本6份和1份病情危重的手足口病并发神经系统症状而急诊收住院患儿（编号F4243，年龄9岁8个月，女性）的经气管插管呼吸道抽吸液、脑脊液及血清标本。将咽拭子和气管插管抽吸液标本接种Hep-2、MDCK和Vero细胞进行病毒分离。同时设计位于肠道病毒5^＋非编码区（UTR）的通用引物2对（巢式PCR）、肠道病毒71型（EV71）VPl基因不同位置的特异性引物2对半（PCR和半巢式PCR）和柯萨奇病毒A组16型（CAl6）的特异性引物1对检测标本中的病毒核酸。首先用随机引物将标本中的RNA逆转录成cDNA，然后分别用上述引物进行PCR扩增肠道病毒5^＋UTR和EV71／CAl6的VPl基因片段；对EV71阳性的标本还扩增了VPl全基因，扩增产物直接进行序列测定和分析。结果6例门诊就诊的普通手足口病患儿和F4243的呼吸道标本中均扩增到肠道病毒5^＋UTR基因片段，有2例门诊患儿和F4243的标本中还扩增到EV71的VPl基因片段，提示该组手足口病患儿均为肠道病毒感染，其中3例为EV71感染。序列测定和分析表明有1例普通手足口病患儿（F4211）和F4243标本确定为EV71。所有标本接种Hep-2和MDCK细胞均未出现病变，说明常见的呼吸道病毒为阴性。除1份咽拭子标本（F4283）外，其余6份接种Vero细胞的标本均出现细胞病变。用肠道病毒通用引物和EV71特异性引物对分离到的病毒株核酸的扩增结果显示这6株病毒均为肠道病毒，其中F4211和F4243为EV71，与直接从呼吸道标本中扩增的结果相符；其余4株为CAl6。结论北京市儿童中流行的手足口病与肠道病毒EV71和CAl6感染有关；EV71可以在5岁以上儿童中引起严重的神经系统并发症，应引起注意。     

2008年人肠道病毒71型的多个传播链在甘肃省流行

目的研究2008年中国甘肃省手足口病（Hand,Footand Mouth Disease,HFMD）患者中,人肠道病毒71型（Human Enterovirus71,HEV71）的分子进化特征。方法采集甘肃省门诊就诊的HFMD患者粪便、疱疹液、咽拭子标本进行病毒分离,然后对阳性病毒分离物进行HEV71特异性逆转录一聚合酶链反应鉴定,随机选取20株HEV71阳性分离株进行VP1编码区基因扩增和核苷酸序列测定和分析,与其它38株各基因型和基因亚型的HEV72代表株构建基因亲缘性关系树。结果20株甘肃省HEV72分离株,与1998年以来在中国（未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区,下同）分离的HEV71在核苷酸和氨基酸水平上的同源性都较高,尤其与2008年中国流行的HEV71同源性最高,与C4亚型代表株聚为一支,属于C4基因亚型C4b进化分支。但20株HEV71之间在VP1区核苷酸和氨基酸水平上有一定差异,同源性分别为92．5％～100．0％和96．9％～100．0％。在亲缘进化树中显示,这些HEV71分离株处在不同的簇中,表现为20株HEV71分离株至少属于7条病毒传播链。结论2008年甘肃省流行的HEV71属于Ct基因亚型C4b进化分支,并且存在多个传播链。它们与2008年中国其它省流行的HEV71在基因亲缘关系和流行时间关系上都很接近,说明甘肃省HEV71不是独立进化的,而是与中国流行的HEV71在共同进化。     

敦化市2009-2011年致手足口病流行肠道病毒71型基因特征分析

目的分析吉林省敦化市流行的肠道病毒71型分离株的基因特征。方法对2009-2011年敦化市手足口病来源的3株EV71分离株进行逆转录-聚合酶链反应扩增VP1基因编码区后进行序列测定,并使用Bioedit和Maga4生物信息学软件进行基因特征分析。结果敦化市3株EV71流行株均为C4a基因亚型,3株EV71分离株之间核苷酸同源性为98.6%~98.8%;与吉林省和龙市的流行株核苷酸同源性为98.8%~99.8%,与吉林省其他地区的2株EV71代表株的核苷酸同源性为97.6%~99.3%,与安徽省阜阳市2008年代表株的核苷酸同源性为98.3%~99.3%。敦化市3株EV71分离株之间、与2008年阜阳株以及吉林省2009-2011年3株代表株的氨基酸同源性均达到100%。结论敦化市3株EV71分离株与同为延边州的和龙市的流行株核苷酸同源性最高,与安徽省阜阳市2008年流行株的核苷酸也具有较近的同源性。敦化市3株EV71分离株之间以及与中国C4a基因型代表株之间都具有较高的氨基酸同源性。     

2010年济南地区人肠道病毒71型VP1区基因特征的分析

[目的]研究济南地区肠道病毒71型（EV71）的基因特征。[方法]对2010年济南地区手足口病病人的粪便、咽拭子等标本,通过RT—PCR扩增EV71VP1基因片段;选取EV71阳性的18株进行VP1全基因序列测定,用DNAS—TAR、Mega．4．0软件进行同源性分析,并构建系统进化树。[结果]与EV71A型和B型代表株亲缘性较远,核苷酸（氨基酸）同源性分别为81．8％～82．7％（83．7％～85．ooA）和94．3％～94．9％（97．3％～97．6％）;与C型代表株亲缘性较近,核苷酸（氨基酸）同源性为87．5％～99．1％（98．3％～100．0％）;18株EV71之间在VP1区核苷酸和氨基酸水平上有一定差异,同源性分别为97．1％～100．0％和99．3％～100．0％。构建系统进化树表明,18株EV71与C4亚型处于同一簇,属EV71型C4基因亚型。[结论]20LO年济南地区流行的EV71属肠道病毒71型属C4基因亚型。     

2013年克拉玛依市手足口病EV71型VP1基因特征分析

目的掌握2013年克拉玛依市手足口病EV71 VP1基因特征。方法 real-time PCR方法筛选手足口病患者中EV71阳性病例,RT-PCR方法扩增VP1基因片段,结合已知亚型利用Mega软件分析测序结果。结果 59例样本中由肠道病毒引起53例,阳性率为89.8%,其中EV71 36例(67.9%)、CA16 10例(18.9%)、非EV71非CA16的其他肠道病毒7例(13.2%)。男性、女性中各病原阳性率差异无统计学意义(χ2=3.1504,P=0.207)。12株测序毒株全部为C4亚型,与C4亚型相比较基因距离为0.031~0.046,部分氨基酸序列存在变异,12例EV71至少可以划分为2个传播链,lineage 2较lineage 1序列差异较大。结论各病原对于不同性别人群侵袭力无差异,2013年克拉玛依市手足口病主要病原为EV71。克拉玛依市EV71全部是C4亚型,属于中国大陆广泛流行的基因亚型;lineage 1为2013年克拉玛依市流行的优势分支,分支内同源性较大。lineage 1将来是否继续成为克拉玛依市流行分支,需要对EV71进行连续性监测。     

浙江省杭州地区手足口病病原谱分析和肠道病毒71型VP1基因分析

[目的]分析杭州地区手足口病的病原谱构成,并对肠道病毒(EV)71型的VP1基因进行核苷酸和氨基酸的序列的比对分析,了解杭州地区EV71的基因特征。[方法]采集98份手足口病确诊病例的粪便标本,用EV71和柯萨奇病毒A组(CoxA)16型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定,并选择6例EV71检测结果阳性的标本进行病毒分离并进行VP1基因的特异性扩增并进行测序,结合EV71各亚型的代表株构建系统进化树,并对VP1蛋白的氨基酸序列进行分析。[结果]通过RT-PCR特异性检测,发现EV71阳性结果22份,阳性率为22.4%;CoxA16阳性结果27份,阳性率为27.6%。测序结果表明6株EV71之间的VP1基因核苷酸同源性为92.2%～98.5%,氨基酸同源性为99.0%～100%。通过与各代表亚型进行核苷酸同源性比较后发现此次分离得到的EV71病毒都属于C4亚型。6株EV71与部分亚型代表株间在BCloop区域的氨基酸序列存在着差别,而SP70区域的氨基酸序列则完全一致。[结论]在手足口病患者中,由EV71感染引起的比例越来越大;此外,此次在杭州地区分离的EV71病毒都属于C基因型的C4亚型,尚没有证据说明此次在杭州地区分离的6株EV71毒株的毒力有增强。     

肠道病毒71型手足口病研究进展

手足口病重症和死亡病例多由肠道病毒71型引起,为降低手足口病重症和死亡的发生率,科学防控手足口病,本文就肠道病毒71型手足口病的流行病学、诊断、临床治疗、快速诊断试剂开发进展、疫苗研发进展及手足口病防控亟待解决的问题等方面内容进行综述。     

肠道病毒71型所致手足口病的神经系统临床特征

目的 探讨肠道病毒(EV)71型所致手足口病的神经系统临床特征.方法 对56例EV71型所致手足口病并发神经系统损害患儿的临床表现、辅助检查、临床治疗及转归进行回顾性分析.结果 56例患儿均有发热,病程3～5d出现惊跳样动作38例(67.9％),瘫痪24例(42.9％),呕吐23例(41.1％),意识障碍19例(33.9％),抽搐13例(23.2％),共济失调10例(17.9％),头痛7例(12.5％).40例(71.4％)并发中枢神经系统感染,其中脑干脑炎21例,脑膜脑炎14例,脑脊髓炎5例.并发急性弛缓性瘫痪(AFP)24例,以单侧肢体瘫痪居多,其中一侧下肢瘫痪9例,一侧上肢瘫痪5例,双下肢瘫痪6例,四肢瘫痪4例.除1例死亡外,其余均治愈或好转出院.随访1年,仅有1例合并AFP的患儿肌力未完全恢复,未遗留其他后遗症.结论 EV71型所致手足口病易合并中枢神经系统感染及AFP,早期诊断及治疗有助于提高治愈率.     

2009年龙岩市人肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 分析2009年龙岩市流行的人肠道病毒71(EV 71)分离株的分子生物学特征.方法 从手足口病例的153份咽拭标本中分离EV 71病毒株,选取其中3株,用RT-PCR扩增VPl基因片段,并进行测序和病毒种系进化等分析.结果 3株EV 71均为C4基因亚型,与其他省份C4亚型分离株的同源性为94.8%-99.0%;...     

2010-2013年成都市肠道病毒71型基因进化分析

目的了解成都市2010-2013年肠道病毒71型VP1基因变异情况,为疾病防控提供依据。方法选取2010-2013年(上)荧光PCR检测为EV71阳性标本,扩增测序其VP1全长,构建进化树并进行相关生物信息学分析。结果 25份标本基因亚型均为C4亚型,与阜阳株差异不大,核苷酸同源性82.72%~100%,氨基酸同源性为96.29%~100%,氨基酸变异位点11个。结论成都市2010-2013年(上)肠道病毒71型变异不明显,但需关注关键氨基酸突变位点及其可能带来的防控挑战。     

深圳市龙岗区2017年手足口病病原柯萨奇病毒A16型及肠道病毒71型VP1区基因特征分析

目的 了解2017年深圳市龙岗区柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)及肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)的分子特征,为制定本区手足口病的防控策略提供科学依据。方法 对2017年辖区哨点医院收集的CVA16及EV71核酸阳性样本的病毒VP1区基因进行扩增,产物回收并测序,用DNASTAR软件分析不同序列的核苷酸及氨基酸同源性,应用MEGA 6.0软件,以最大似然法(maximum likelihood method)构建系统进化树,进行分子特征分析。结果 2017年深圳市龙岗区共报告手足口病13 443例,发病率为304.83/10万。测序获得26份EV71及27份CVA16的VP1基因序列,基因特征分析显示龙岗区EV71序列均属C4a亚型,可分为3个进化分支。龙岗区CVA16可分为本地流行主分支B1b基因亚型和东南亚流行次分支B1a基因亚型。结论 2017年间,龙岗区CVA16与EV71病原存在多个进化分支,需及时对病原的基因型数据进行更新。     

济南市轻重症手足口病患儿肠道病毒71型结构蛋白基因特征分析

目的 比较分析济南市轻重症手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)病原肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)结构蛋白基因及氨基酸变异情况。方法 对2017年济南市轻重症手足口病患儿EV71细胞分离株结构蛋白基因序列进行RT-PCR扩增测序,应用EditSeq和MegAlign等软件对结构蛋白基因进行序列拼接及核苷酸、氨基酸同源性比对,应用Mega 5.2软件构建VP1基因系统进化树。结果 轻重症患儿EV71分离株结构蛋白基因核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%～98.8%和99.0%～99.8%,均属于C4a基因亚型。经VP1基因同源性分析,济南市EV71分离株与2017年江苏株（GenBank ID: MG520666,同源性99.3%）、2015年河南株（KU744452,同源性99.2%）、2015年北京株（KU376386,同源性99.2%）及2016年山东潍坊株（MG588036,同源性99.0%）亲缘关系较近。死亡患儿EV71分离株VP1蛋白出现E145Q突变,重症EV71分离株分别出现VP1蛋白A19V、T101I,VP3蛋白M150I突变。结论　济南市轻重症HFMD患儿EV71分离株均属于C4a亚型,与江苏、河南、山东及北京等地的EV71株亲缘关系较近,其VP1蛋白145位氨基酸残基可能是影响病毒毒力的重要位点。     

肠道病毒71型与手足口病

EV71病毒感染率和死亡率较高,是引发手足口病的主要病毒之一。文中对EV71进行了病原学分析,在此基础上对手足口病的临床表现、诊断治疗及预防进行了探讨。     

2011年郴州市手足口病病原学及EV71型分离株基因特性研究

目的了解2011年郴州市手足口病病原学特征及EV71型分离株基因特性,为郴州地区手足口病防治工作提供依据。方法收集郴州市手足口病临床诊断病例的咽拭子或肛拭子、粪便标本,采用实时荧光PCR法检测EV71、CA16和其他肠道病毒核酸。随机挑选55份EV71阳性的标本进行RD细胞分离,10株分离株用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增EV71的VP1片段,并作基因测序和序列分子系统发生树分析。结果 2011年郴州市共报告手足口病例5 128例,发病有两个高峰,分别是5-7月和11-12月。病原学检测提示,2011年检测手足口病标本574例,发病年龄以1～3岁儿童为主,男性是女性的2.04倍,检出阳性标本461份,其中EV71占30.15%,CA16占31.89%,EV71和CA16同时阳性占0.65%,其他肠道病毒占37.31%;三种型别病毒分布在病例发病时间、发病年龄和地域上有所不同(P<0.001);重症病例25例,18例检出EV71病毒核酸,死亡病例6例均为EV71病毒感染;采用实时荧光PCR法随机检测68份其他肠道病毒,其中23份CA6、8份CA10,CA6和CA10占其他EV的45.59%。10株EV71分离株基因测序均为C4a亚型,重症和普通病例EV71的VP1基因序列差异较小。结论手足口病的发病存在明显季节、地区、性别、年龄差异,EV71是2011年郴州市引起手足口病重症和死亡病例的主要毒株类型,要开展对EV71型病毒的深入研究,同时也要关注非EV71和非CA16病毒的流行趋势,以防范其快速传播。