胰岛素样生长因子-1与胰岛素样生长因子结合蛋白-1在妇产科临床应用的研究进展

1概述 胰岛素样生长因子系统(IGFs)包括IGF多肽(IGF-1、IGF-2)、两种IGF受体、6种胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP1～6)以及一组胰岛素样生长因子结合蛋白酶。IGF通过与其受体结合发挥其生物学效应，与IGFBP结合成无活性复合物存在，IGFBP具有延长循环水平的IGF、半衰期和稳定IGF血浓度的作用。IGFs中的IGF-1及IGFBP-1与妇产科的关系密切。     

胰岛素样生长因子-1与中枢神经系统疾病

胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）由70个氨基酸组成的单链碱性多肽分子,分子量为7649。它来源于体内许多细胞,通过自分泌、旁分泌和内分泌机制并与IGF-1受体（IGF-1R）结合发挥多种生理作用。近年来研究发现,IGF-1是不仅是大脑发育所必需,而且可抑制细胞凋亡,有助于神经细胞受损后的功能恢复,对许多中枢疾病发挥着保护作用,并越来越得到广大国内外学者的重视。     

胰岛素样生长因子-1与冠状动脉斑块形态的关系

目的 探讨冠心病(CHD)患者胰岛素样生长因子-1(IGF-1)与冠状动脉斑块形态的关系.方法 采用ELISA法测定42例CHD患者和16例对照者的IGF-1水平并分析其与冠状动脉斑块形态的关系.结果 急性心肌梗死(AMI)组、不稳定型心绞痛(UAP)组患者的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型斑块构成与稳定型心绞痛(SAP)组间差异均有统计学意义(P<0.01);Ⅱ型斑块组的IGF-1水平与Ⅰ型、Ⅲ型斑块组及对照组间差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Ⅱ型斑块多发生于AMI和UAP患者中,Ⅱ型斑块者的IGF-1水平较高,斑块易损.     

重组人生长激素治疗前后血胰岛素样生长因子-Ⅰ、胰岛素样生长因子结合蛋白水平监测及意义

目的 通过对使用重组人生长激素(rhGH)患儿进行胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)的监测,探讨rhGH使用的安全性.方法 对在本院使用rhGH的患儿30例进行治疗前后血IGF-Ⅰ和IGFBP3浓度监测并计算IGF-Ⅰ和IGFBP3的比值,同时测定T3、T4、TSH,并以年龄、性别匹配20例儿童作为对照组.结果 治疗后平均身高增加(8.77±3.01)cm/y(t=7.773,P<0.001).IGF-Ⅰ治疗前与对照组差异无显著性(t=-0.475,P>0.05),IGFBP,治疗前组高于对照组,差异有显著性(t=3.759,P<0.01),IGF-Ⅰ和IGFBP,治疗后3个月即明显增高,与治疗前相比差异有显著性(t=4.212和7.733,P<0.01).治疗后IGF-Ⅰ各组之间差异无显著性(f=1.629,P>0.05);IGFBP3各组之间差异有显著性,(f=22.964,P<0.001)与治疗时间呈正相关.IGF-Ⅰ/IGFBP3治疗前后各组之间差异无显著性(f=6.081,P>0.05).结论 在使用rhGH中进行IGF-Ⅰ和IGFBP,监测十分必要;血IGF-Ⅰ和IGFBP3检测方便,可作为rhGH治疗期间是否存在诱发肿瘤高危因素的临床评价指标之一.     

人重组胰岛素样生长因子-1对糖尿病大鼠肾脏的影响

目的观察人重组胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对糖尿病大鼠肾脏的影响。方法采用生化法、放射免疫法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术等方法。结果(1)糖尿病治疗组24h尿白蛋白排泄率和尿量低于糖尿病对照组;(2)糖尿病对照组血清IGF-1含量、肾组织IGF-1含量及IGF-1信使核糖核酸(IGF-1mRNA)表达明显低于正常对照组;糖尿病治疗组血清IGF-1含量明显高于糖尿病对照组,肾组织IGF-1含量及IGF-1mRNA表达与糖尿病对照组无明显差异;(3)糖尿病对照组血清生长激素(GH)高于正常对照组,糖尿病治疗组血清GH低于糖尿病对照组;(4)电镜观察大鼠肾脏病理切片发现rhIGF-1对糖尿病大鼠肾脏损害有改善作用。结论小剂量外源性rhIGF-1不会加重糖尿病肾脏的损害     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.     

重组人胰岛素样生长因子-1纯化及其鉴定的研究

目的：利川亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinant human insulin—like growth factor-1．rhIGF-1)纯化并鉴定，以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF-1生物制品。方法：蚕血淋巴中rhIGF—1初步提纯去除杂质。采用亲和层析法纯化rhIGF-1。以EUSA法测定纯化产物中rhIGF-1含量。用SDS-PAGE和Western—blot分析鉴定rhIGF-1纯度及免疫学活性．4-甲基偶氮唑蓝(tetrazolium salt，MTT)法观察其对MCF-7细胞增殖的影响。结果：纯化后rhIGF-1纯度约为40％，Western blot分析发现，主要纯化产物相对分子质量为7．5ku的成熟hIGF-1．所含非目的产物与hIGF-1无免疫交叉反应。细胞活性刺激实验显示，rhIGF-1纯品对MCF-7细胞有较好的刺激活性．促增殖能力优于来源于大肠杆菌的rhIGF-1产品。结论：蚕血淋巴中的rhIGF-1经亲和层析后初步得到纯化，并显示良好的免疫学活性和生物学活性。     

体外胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞生长的抑制作用

目的 观察胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞的影响及其对胰岛素样生长因子的调节作用。方法 MTT比色法观察IGFBP-1及与IGF-1预混后对脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)生长影响。结果 IGFBP-1对内皮细胞ECV304的生长具有抑制作用且与剂量成正比；预混后各组IGF-1促细胞生长作用明显被抑制。结论 IGFBP-1既可以直接也可以通过调节IGF-1抑制血管内皮细胞生长。     

血清胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3与2型糖尿病肾病的关系

目的:测定血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGF-BP3)水平,探讨其与2型糖尿病肾病的关系。方法:选择2型糖尿病患者86例,根据其尿微量白蛋白排泄率(UAER)结果分为单纯糖尿病组(SDM组)33例、早期糖尿病肾病组(EDN组)28例和临床期肾病组(CDN组)25例。检测IGF-1、IGF-BP3、UAER等指标,分析IGF-1、IGF-BP3与糖尿病肾病的发病和病情轻重的关系。结果:CDN组血清IGF-1、IGF-BP3和UAER均明显高于SDM与EDN组(P <0.01),CDN组血清IGF-1、IGF-BP3和UAER亦均明显高于EDN组(P <0.01)。 IGF-1与肌酐、尿素氮、UAER和IGF-BP3均呈正相关关系(P <0.01),与年龄和糖化血红蛋白均无相关关系(P >0.05),而与空腹血糖呈负相关关系(P <0.01)。结论:血清IGF-1、IGF-BP3水平与2型糖尿病肾病的发生发展有相关性,可作为糖尿病肾病早期的诊断指标之一。     

昆虫细胞表达重组人胰岛素样生长因子1的研究

目的 利用杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ载体在昆虫细胞中表达重组人胰岛素样生长因子１（ｒｈＩＧＦ－１）。方法 含有胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）ｅＤＮＡ的重组ＡｃＭＮＰＶ感染昆虫细胞株Ｓｆ不及Ｓｆ２１后,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测被重组病毒感染的昆虫细胞表达产生的ｒｈＩＧＦ－１,以野生型ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细胞及空白细胞的细胞培养液、细胞裂解物作对照。结果 （１）重组ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细     

携带人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒的构建和鉴定

[目的] 采用 Cre-LoxP同源重组系统构建并鉴定携带人胰岛素样生长因子-1( human insulin-like growth factor-1, hIGF-1)目的基因的复制缺陷重组腺病毒,为椎间盘退变的 hIGF-1基因治疗奠定基础.[方法] PCR合成 hIGF-1基因,用 pMD18-T载体克隆 hIGF-1目的基因,酶切、测序并进行 NCBI BLAST相似性在线分析.将 pMD18-T-hIGF-1和 pDNR-1r质粒分别行 EcoRⅠ和 BamHⅠ双酶切, DNA 连接酶连接双酶切产物,转化感受态大肠杆菌 DH5α,合成中间载体 pDNR-hIGF-1,酶切鉴定.Cre-loxP系统介导 pDNR-hIGF-1和 pInt.AV1.SpaT同源重组形成 pInt.AV1.SpaT-hIGF-1重组表达质粒,行 EcoRⅠ酶切鉴定.复苏 293细胞,将 pInt.AV1.SpaT-hIGF-1和 pInt.B.B质粒在 293细胞内进行同源重组成含 hIGF-1基因的复制缺陷重组腺病毒.倒置显微镜观察 293细胞病变样效应( cytopathogenic effect, CPE);透射电镜观察 293细胞中的病毒颗粒;提取细胞裂解液中病毒 DNA, PCR鉴定 hIGF-1目的基因的存在; Western blot 检测 hIGF-1蛋白表达.用半数组织培养感染量 (tissue culture infectious dose 50,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.[结果]克隆的 hIGF-1目的基因经 NCBI BLAST相似性在线分析证实与 Homo sapiens IGF-1 (GI:19923111)完全相同.pInt.AV1.SpaT-hIGF-1酶切鉴定,出现 5.4 kb和 1 kb两条片段,与理论值完全相符.转染 293细胞 12～ 14 d后,大部分细胞出现肿胀,脱落等细胞病变样效应.PCR鉴定细胞裂解液中含有 hIGF-1目的基因.Western blot 证实重组腺病毒表达 hIGF-1蛋白.第 2代腺病毒的滴度为 80× 106 PFU/mL.[结论]成功构建出含有 hIGF-1目的基因的复制缺陷重组腺病毒.     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆、表达及生物活性分析

采用RT PCR方法 ,从人扁桃体组织中扩增得到人胰岛素样生长因子 1 (IGF 1 )cDNA ,利用基因重组技术将该基因片段重组于pcDNA3 .1 ( +)真核表达载体上 ,成功构建了 pcDNA/I重组表达载体。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。MTT法检测结果表明 :重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增生。将重组质粒通过脂质体介导 ,体外转染至人肾细胞 2 93细胞系进行表达 ,经G41 8筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆 ,表达产物经鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生成活性。此结果为研究IGF 1对血管内皮细胞作用的分子机制 ,以及利用IGF 1基因治疗肢体及冠状动脉缺血性疾病等的研究奠定了实验基础。     

重组人胰岛素样生长因子 1对坐骨神经损伤的修复作用

目的 在大鼠坐骨神经钳夹损伤模型上,探讨重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)融合蛋白的治疗作用. 方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及hIGF-1融合蛋白高(0.02 mg)、低(0.002 mg)剂量处理组,建立大鼠坐骨神经钳夹损伤模型;以大鼠行为学、坐骨神经功能指数(SFI)、坐骨神经-腓肠肌诱发电位、组织形态学变化为指标,综合考察hIGF-1融合蛋白对损伤坐骨神经的影响. 结果 术后20～32 d,各测定时间点hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠SFI值及SFI恢复率显著高于模型组(P＜0.05),作用呈剂量依赖性.术后35 d,hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠坐骨神经-腓肠肌诱发电位振幅显著高于模型组(P＜0.01),作用随剂量增大而增强.H-E染色显示,hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠坐骨神经损伤区再生神经排列较模型组规则,有髓神经纤维增多,髓鞘较厚且完整. 结论 重组hIGF-1融合蛋白能促进大鼠坐骨神经损伤的修复.     

雄激素致不孕大鼠胰岛素样生长因子-1及其受体的变化

目的　观察雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠胰岛素样生长因子 1/胰岛素样生长因子 1受体(IGF 1/IGF 1R)的变化。方法　建立雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠模型 ,通过阴道涂片筛选各组大鼠 ;血清IGF 1测定采用放免法 ,IGF 1R的检测采用免疫组化法。结果　 (1)血清IGF 1水平 :两组间无统计学差异 ;(2 )胰腺、肝脏、卵巢和肾上腺IGF 1R免疫组化定量分析 :模型组 <正常组。结论　雄激素致不孕大鼠存在着主要靶器官低水平IGF 1R。     

血清IGF-1和IGFBP-3及ALP在重组人生长激素治疗特发性矮小和特纳综合征中变化水平的观察

 目的 用重组人生长激素（rhGH）治疗特发性矮小（ISS）和Turner syndrome（TS）患儿,观察血清胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor -1,IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）及血碱性磷酸酶（ALP）在ISS和TS中的临床应用价值。方法　对rhGH治疗的ISS患儿31例和TS患儿17例进行治疗前后血清IGF-1、IGFBP-3及ALP浓度监测,观察治疗前后的变化。结果　ISS和TS患儿经rhGH治疗后IGF-1与IGFBP-3明显升高,6个月时达高峰,之后基本维持在较高水平;IGF-1与IGFBP-3的比值治疗后显著升高（F=6.739,P＜0.01）,以IGF-1升高更明显;ISS和TS患儿经rhGH治疗后血清ALP也明显上升,3个月时达高峰,之后基本维持在较高水平;血清ALP与IGF-1和IGFBP-3在治疗前后各个时间段不存在显著相关性。结论　ISS和TS患儿经rhGH治疗后,血清IGF-1、IGFBP-3及ALP水平均升高,并基本维持在较高水平,IGF-1较IGFBP-3升高更为明显;治疗起始3个月血清ALP反应敏感,血清ALP尚不能作为替代IGF-1和IGFBP-3监测rhGH治疗疗效的指标。     

对阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者胰岛素样生长因子-1的初步探讨

目的:了解阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(OSAS)患者胰岛素样生长因子1(IGF1)的浓度变化,探讨低氧对IGF1的影响。方法:对OSAS组40例,对照组15例进行多导睡眠仪监测,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IGF1浓度,应用统计学方法处理数据。结果:与对照组比较,OSAS中重度组IGF1浓度降低(P<0.05P<0.01);OSAS各组血清IGF1浓度分别与AHI、呼吸暂停时间比呈负相关,与最低氧饱和度及平均氧饱和度呈正相关。结论:阻塞性睡眠呼吸暂停会导致体内低氧而致血清中IGF1的浓度发生变化。     

助孕胶囊对多囊卵巢综合征大鼠性激素含量及胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的:探讨中药助孕胶囊(ZYJN)对多囊卵巢(PCO)大鼠的治疗作用并分析其可能的作用机制。方法:采用皮下埋植左旋18-甲基炔诺酮硅胶棒的方法制作动物模型,将大鼠随机分为模型组、助孕胶囊组、克罗米酚组、联合用药(助孕胶囊 克罗米酚)组及对照组,运用放免法测定血性激素水平的变化,光镜观察卵巢、卵泡发育情况,免疫组化法检测卵巢组织胰岛素样生长因-1的表达水平。结果:助孕胶囊可使PCO大鼠的颗粒细胞层增厚,卵泡膜细胞层变薄,血清T、LH水平均明显下降,并下调卵巢组织胰岛素样生长因子-1的表达。结论:助孕胶囊能够通过调整内分泌及影响卵巢胰岛素样生长因子-I的表达,在中枢及卵巢局部协调发挥作用,从而调整性腺功能,促进卵泡的发育成熟及排卵。     

胰岛素样生长因子-1基因表达对糖尿病大鼠血糖的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达对糖尿病(DM)大鼠血糖的影响。方法:将含人IGF-1基因的重组转运质粒pCMV/IGF-1 DNA每鼠400μg肌内注射于DM大鼠模型(T组,n=7)体内,对照组(C组,n=7)给予同等剂量pcMV空载质粒DNA,同时设立正常对照组(N组,n=7)和DM对照组(DM组,n=7)。观察大鼠血糖和血IGF-1浓度(ELISA法),用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法比较治疗前后大鼠肝、肾、骨骼肌等组织IGF-1 mRNA表达量变化。结果:ICF-1基因治疗后,T组血糖较治疗前明显下降,由(28.71±1.79)mmol/L至(17.02±1.69)mmol/L,同时血IGF-1较基础水平明显升高,由(109.34±10.90)ng/ml至(135.61±6.15)ng/ml;T组大鼠在接受治疗后,血糖明显低于C组和DM组(P<0.000 1),而血IGF-1明显高于C组和DM组(P<0.000 1);RT-PCR结果显示,T组大鼠肝脏和骨骼肌IGF-1 mRNA表达量明显高于DM组(P<0.000 1,P=0.002),肾组织IGF-1基因含量与DM组比较,无明显统计学差异(P=0.387)。结论:IGF-1基因表达能有效降低DM动物血糖,为开展DM治疗新策略奠定基础。     

胰岛素样生长因子-1受体在非小细胞肺癌含铂化疗中的意义

目的 明确肿瘤组织胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)表达对晚期非小细胞肺癌化疗疗效及生存的影响.方法 采用免疫组织化学的方法对39例初治晚期非小细胞肺癌患者石蜡包埋肿瘤标本进行IGF-1R检测,并分析其与化疗疗效间的关系.结果 53.8%(21/39)的标本检测到IGF-1R的表达.IGF-1R表达与肿瘤病理类型、肿瘤分化程度、吸烟史及吸烟指数均无相关性.IGF-1R不表达者含铂方案化疗效果更好.结论 IGF-1R可能能够预测晚期非小细胞肺癌化疗的疗效.