环孢素 A 对大鼠牙槽骨内 DMP1 C 末端和 OPN 表达的影响

目的：观察环孢素A（cyclosporinA,CsA）对大鼠牙槽骨内牙本质基质蛋白1（dentinmatrixprotein,DMP1）C末端和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）表达的影响。方法：30只7周龄健康雄性Wistar大鼠,随机等分为对照组和实验组,每组再随机等分为20d、30d和40d3个亚组,实验组大鼠喂饲CsA（30mg／k·d）。免疫组化法染色下颌第一磨牙颊舌向石蜡切片,光镜下观察DMP1C末端和OPN在牙槽骨内的表达情况。结果：与对照组大鼠比较,实验组大鼠牙槽骨内DMP1C末端表达明显下调,OPN表达明显上调;在本实验周期内,上述变化随实验时间的延长而加重。结论：CsA影响大鼠牙槽骨内矿化相关非胶原蛋白DMP1C末端和OPN的表达,推测CsA可能抑制大鼠牙槽骨的矿化。     

尼古丁对大鼠牙槽骨内ALP和DMP1 C末端表达的影响

目的:观察尼古丁对大鼠牙槽骨内碱性磷酸酶(ALP)和牙本质基质蛋白1(DMP1)C末端表达的影响. 方法:将20只5周龄健康雄性Wistar大鼠随机等分为实验组和对照组,每组再随机等分为30天和60天两个亚组,实验组每天腹腔注射尼古丁0.73 mg·kg-1. 分别使用钙钴法和免疫组化法检测ALP和DMP1 C末端在大鼠牙槽骨内的表达. 结果: 对照组:ALP和DMP1 C末端都为深棕色线形表达于牙槽骨的钙化前缘, 形成明显的矿化条带;ALP和DMP1 C末端分别为棕色沉淀和棕黄色颗粒状密布于骨细胞周围.实验组:ALP和DMP1 C末端表达部位同对照组,表达强度减弱;相对于30天组,60天组变化更明显. 结论:尼古丁可能通过抑制大鼠牙槽骨内ALP和DMP1 C末端的表达,抑制大鼠牙槽骨的矿化.     

大鼠牙齿发育过程中骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达

目的：探讨骨涎蛋白（bone sialoprotein BSP)和骨折蛋白（osteopontin,OPN)在大鼠牙齿发育中的时间和空间分布特点，及两者在矿化中的作用。方法：用免疫组化方法检测了SD大鼠出生后1d及1，2，3 ，5，8周的牙胚和颌骨中BSP及OPN的表达特点。结果：成熟的成釉细胞，成牙本质细胞，成牙骨质细胞和成骨细胞及基质中均表达BSP和OPN，牙骨质和牙槽骨中SBP和OPN的表达高于牙釉质的牙本质，在牙骨质和牙槽骨中，BSP在未矿化的基质和已矿化的基质中均有高表达，而OPN仅在矿化的前沿和新生线处有高表达。结论：BSP和OPN在大鼠牙齿及颌骨的形成和矿化中具有重要作用。尤其是OPN与牙釉质的形成也有重要关系。BSP和OPN的表达特点不同，提示二者在矿化组织的形成和矿化中的作用不同。     

被动吸烟对鼠牙槽骨钙、磷含量及碱性磷酸酶活性的影响

目的 分析被动吸烟鼠牙槽骨钙、磷含量和碱性磷酸酶（AKP）的活性。方法 40只6周龄健康雄性Wistar鼠被随机等量分为实验组和对照组,每组再被随机等量分为15、30、45和60 d 4个亚组,烟熏法建立被动吸烟的大鼠模型,浓酸消化法提取牙槽骨内钙和磷,光谱分析法和改良Reddi法分别测定钙、磷含量和AKP的活性,行析因设计的方差分析。结果 与各对照组牙槽骨相比,被动吸烟鼠的钙、磷含量在15 d组略有升高,30 d组略有下降,差异无统计学意义（P〉0.05）,45、60 d组显著下降（P〈0.01）;AKP活性在15、30 d组略升高,45、60 d组略下降,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 本实验周期内,鼠牙槽骨钙、磷含量和AKP活性在被动吸烟初期略有升高,随被动吸烟时间的延长,钙、磷含量呈时间依赖性减少,AKP活性也呈时间依赖性减少的趋势。     

烟草烟雾对大鼠牙槽骨内牙本质基质蛋白1C 末端表达的影响

目的 观察烟草烟雾对大鼠牙槽骨内牙本质基质蛋白（DMP）1 C末端表达的影响。方法 建立试验大鼠吸入烟草烟雾模型,免疫组织化学法检测DMP1 C 末端在大鼠牙槽骨内的表达。结果 阳性对照组：DMP1 C末端深棕黄色连续线形表达于固有牙槽骨的钙化前缘,形成明显的矿化条带;棕黄色颗粒状密布于骨细胞周围,浅棕黄色颗粒状散布于矿化区域;上述表达由牙槽嵴顶至根尖方向逐渐上调。试验组：DMP1 C 末端表达部位同对照组,表达强度下调且随试验时间的延长下调加重。结论 吸入烟草烟雾可下调大鼠牙槽骨内DMP1C 末端的表达;在试验周期内,DMP1 C 末端的表达下调呈时间依赖性。     

正畸力作用下大鼠牙周组织中骨桥蛋白的表达

目的：观察SD大鼠正畸牙齿移动过程中牙周组织内骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的表达,探讨OPN在正畸牙齿移动过程及成骨方面的作用和机制。方法：选用6～8周龄雄性SD大鼠40只,以左侧上颌第一磨牙为实验组,右侧上颌第一磨牙不加力为对照组,通过自制的加力装置牵引移动大鼠的磨牙,分别在加力后8h、24h、3d、7d处死实验动物,即刻取上颌骨制备组织标本,通过免疫组织化学方法检测SD大鼠牙周组织中OPN的表达。结果：实验组大鼠牙周膜中张力侧OPN表达明显高于对照组,3d、7d组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：在正畸治疗牙齿移动过程中,OPN参与牙周组织的改建并与新骨的形成相关。     

β-catenin在大鼠前腭缝牵张成骨中的表达

目的:β-catenin作为一种胞质内的糖蛋白,参与调节成骨细胞形成和骨骼发育.本实验观察β-catenin在大鼠前腭缝牵张成骨过程中的表达并探讨其作用.方法:将32只35天龄雌性SD大鼠随机分为实验组(n=20)和对照组(n=12).实验组大鼠在上颌切牙上安放扩大簧,牵张前腭缝,对照组动物不加力,2组动物均在牵张骨缝1、3、5、7d的相同时间取前腭缝标本.采用甲苯胺蓝染色观察前腭缝成骨细胞的形态和分布,免疫组织化学染色检测β-catenin 和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达.结果:在未牵张的前腭缝,成骨细胞沿着骨缝两侧稀疏排列,β-catenin主要在成骨细胞的细胞膜上表达.牵张1d后,前腭缝扩大,成骨细胞在骨缝两侧聚集分布,大部分细胞呈β-catenin和OPN阳性,β-catenin在成骨细胞的细胞膜和细胞质中均有表达,其表达量高于对照组;牵张3d后,骨缝边缘有明显类骨质沉积,大量细胞质呈β-catenin强阳性的成骨细胞积聚成树突状指向骨缝中央,而OPN在这些成骨细胞中表达较弱;牵张5d后,新骨呈树突状大量形成,β-catenin表达减弱,OPN则在新骨基质及埋在期间的成骨细胞内大量表达;7d后大片新骨形成,骨缝变窄.结论:上颌骨缝牵张成骨过程中,β-catenin在成骨细胞中表达,其表达量与表达部位和成骨细胞的成熟相关,提示β-catenin参与了成骨细胞分化的调节.     

正畸力对幼鼠牙本质中DSP表达的影响

目的:探讨正畸力对牙齿发育过程的牙本质中DSP表达的影响.方法:选取5周龄雄性SD大鼠,建立正畸牙齿移动模型.分别于加力后1、3、7、14、21 d处死动物,取含双侧上颌第一磨牙的上颌标本,制作石蜡切片,进行HE染色和DSP免疫组化染色.结果:牙冠部牙本质小管、前期牙本质、成牙本质细胞和牙根部成牙本质细胞DSP染色阳性.其中,牙尖部位的牙本质小管和前期牙本质呈强阳性染色,14 d时达到高峰,21 d时阳性染色有所减弱;根部成牙本质细胞在实验初期呈弱阳性染色,随时间的延长阳性染色逐渐增强.正常对照组DSP的表达明显弱于实验组.结论:对处于发育晚期的年轻恒牙施加适当的正畸力会促使成牙本质细胞进入活跃状态,牙本质中DSP表达上调,从而在一定程度上加速牙本质的形成及矿化.     

骨涎蛋白、骨桥蛋白在小鼠骨组织和牙胚组织发育中的表达

目的:探讨骨涎蛋(bone sialoprotein,BSP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在小鼠骨组织和牙胚组织发育过程中的分布特点及两者在骨组织形成和牙矿化过程中的作用.方法:取E16d胎鼠及出生后第10、30天的BALB/c小鼠共9只,拉颈处死,分离解剖下颌骨及其他骨组织,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,常规石蜡包埋,近、远中向5μm连续切片,采用免疫组化法检测E16d胎鼠不同骨组织及10d、30d小鼠牙胚组织中BSP、OPN的表达及分布情况.结果:BSP、OPN在牙胚及骨组织发育中的分布模式存在差异.BSP在已经矿化成熟的矿化组织基质中呈阳性表达,而OPN主要在矿化的前沿及矿化活性强的矿化组织中强阳性表达.结论:BSP、OPN参与骨组织的发育和牙胚组织的矿化成熟,并在小鼠牙及骨组织的形成和矿化中具有重要作用.     

正畸牙牙根吸收过程中骨膜蛋白与Ⅰ型胶原表达的相关性

目的:探讨大鼠正畸牙牙根吸收过程中破骨细胞及牙周组织中骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原(COL-I)的表达。方法:选取30只健康雄性Wistar大鼠(6～8周龄),建立正畸牙牙根吸收模型，对侧不加力作为对照，分别在加力第1、3、5、7、14和21天后，每组各处死5只大鼠。采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和免疫组化染色分别观察TRAP⁺表达细胞数及OPN和COL-I的表达情况。采用Pearson相关系数检验分析OPN与破骨细胞和COL-I之间的相关性。结果:TRAP染色结果显示，与对照组相比，实验组出现破骨细胞，破骨细胞数量随时间延长呈现先增多后减少的趋势。免疫组化染色结果显示，与对照组相比，实验组OPN表达增多，并且随时间延长OPN表达量逐渐增多，7 d时达到峰值，随后其表达逐渐降低(P<0.05);COL-I的表达呈先降低后增多的趋势(P<0.05)。Pearson相关分析显示，OPN表达与COL-I表达呈负相关(P<0.05)。结论:在正畸牙牙根吸收过程中牙周组织中破骨细胞数呈动态变化，OPN蛋白表达水平与COL-I表达趋势有关。     

过量氟对大鼠切牙牙本质涎蛋白mRNA表达的影响

目的研究过量氟对大鼠切牙发育过程中牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)mRNA表达的影响。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组常规饲料喂养,自由饮用蒸馏水;实验组常规饲料喂养,自由饮用氟离子浓度为100 mg/L的氟化水,建立大鼠氟斑牙模型。饲养8周处死动物,提取大鼠切牙组织总RNA,逆转录为cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术观察过量氟对大鼠切牙中DSP mRNA表达的影响。结果实时荧光定量聚合酶链反应结果显示DSP mRNA在实验组表达水平明显高于对照组表达水平(t=2.132,P<0.01)。结论过量氟可能通过增强DSP mRNA的表达,影响牙本质的发育矿化。     

Effect of overdose fluoride on the expression of DSP mRNA in rat incisors

目的 研究过量氟对大鼠切牙发育过程中牙本质涎蛋白( dentin sialoprotein,DSP) mRNA表达的影响.方法 选择6只Wistar大鼠,随机分成两组:对照组常规饲料喂养,自由饮用蒸馏水;实验组常规饲料喂养,自由饮用氟离子浓度为100 mg/L的氟化水,建立大鼠氟斑牙模型.饲养8周处死动物,提取大鼠切牙组织总RNA,逆转录为cDNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术观察过量氟对大鼠切牙中DSP mRNA表达的影响.结果 实时荧光定量聚合酶链反应结果显示DSP mRNA在实验组表达水平明显高于对照组表达水平(t=2.132,P＜0.01).结论 过量氟可能通过增强DSP mRNA的表达,影响牙本质的发育矿化.     

大鼠正畸牙移动过程中牙周组织NGF的表达变化

目的了解大鼠正畸牙移动过程中牙周组织内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的变化,探讨NGF在正畸牙移动过程中的作用。方法将85只雄性SD大鼠随机分为17组,其中空白对照组(0d组)、实验加力和对照不加力组各6h、12h、24h、3d、5d、7d、14d、21d组。选择左上第一磨牙作为实验牙,制备大鼠正畸牙移动不同时间牙周组织切片,进行免疫组织化学研究。结果正畸牙移动过程中,牙周组织内NGF表达发生改变。NGF表达量在正畸模型加载后迅速上调,实验组和对照组分别于5d、1d时表达水平达到最高,所有观察区域牙周膜内NGF表达显著增加,且实验组明显高于对照组。结论NGF在正畸牙移动过程中牙周组织改建的多个阶段起作用,参与了牙周膜早期的炎症反应及修复和晚期的改建。     

泛素特异性蛋白酶4对脂肪干细胞成骨分化的影响

目的:本研究通过使用泛素特异性蛋白酶4(USP4)抑制剂Vialinin A干预大鼠脂肪干细胞(ASCs)的生长分化,探究USP4对ASCs的成骨分化的影响。方法:将分离培养至第3代的ASCs细胞分为6组分别用含0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L Vialinin A的培养基培养10 d,CCK-8检测各组细胞增殖情况。将第3代细胞分为实验组、阳性以及阴性对照组,分别用含0.5μmol/L Vialinin A的成骨诱导液、不含Vialinin A的成骨诱导液及普通的α-MEM培养。检测各组第7天细胞内USP4、β-catenin、碱性磷酸酶(ALP)及骨桥蛋白(OPN)基因的表达。将3组细胞培养至第4、7、10、14天进行ALP染色,检测ALP的活性;培养至21 d时进行茜素红染色,检测细胞矿化结节的形成。采用t检验比较组间数据差异,P<0.05时差异具有统计学意义。结果:0.5μmol/L Vialinin A处理的实验组细胞增殖趋势与对照组的差异无统计学意义,表明该浓度的Vialinin A对细胞增殖无影响,作为后续实验组浓度。ALP与茜素红染色结果显示实验组染色效果均较其他组显著。RT-qPCR结果显示与阴性对照组相比,阳性对照组与实验组细胞内USP4与β-catenin表达量较低,差异具有统计学意义。实验组与阳性对照组相比无显著性差异。与阳性对照组相比,实验组的ALP与OPN表达量显著升高,差异具有统计学意义。结论 :0.5μmol/L的USP4抑制剂Vialinin A可以促进大鼠ASCs内ALP与OPN基因的表达。但USP4可能并非通过β-catenin途径调节其成骨分化。     

矿化期小鼠牙胚中矿化相关因子的表达

目的:研究核心结合因子α1(corebindingfactoralpha1,Cbfα1)、骨桥素(osteopontin,OPN)、骨唾蛋白(bonesialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OC)和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)等调控矿化的相关因子在矿化期小鼠牙胚中的分布特点,探讨其在矿化期牙胚中的作用。方法:取出生后第5、7天的BALB/c小鼠30只,拉颈处死,分离解剖含下颌第一磨牙区的下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,采用免疫组化SABC法检测Cbfα1、OPN、BSP、ALP和OC等矿化相关因子在BALB/c小鼠矿化期牙胚中的表达及特点。结果:牙槽骨中可见Cbfα1、OPN和BSP表达;前期牙本质中有Cbfα1、ALP和OC表达;其余组织如牙囊细胞、牙髓细胞、中间层细胞、星网状层细胞、成牙本质细胞中仅见ALP和OC表达,且ALP在中间层细胞和牙髓细胞中呈强阳性表达;但在牙本质中均无表达。结论:牙发育相关的各硬组织,其形成的调控机制不同,分别由不同的矿化因子调控。Cbfα1、ALP和OC与牙本质的早期形成密切相关;Cbfα1、OPN和BSP参与牙槽骨的早期形成;ALP与中间层细胞的关系密切。这些因子对矿化的启动有重要作用。     

雌激素受体α高表达慢病毒载体对根尖牙乳头干细胞成牙/成骨分化的影响

目的雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)高表达慢病毒载体感染根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs),探讨其在SCAPs体外成牙/成骨分化中的作用。方法 ERα高表达慢病毒载体感染SCAPs,Western blot检测ERα的表达,茜素红染色和Western blot检测其对SCAPs成牙/成骨分化的影响。结果体外实验表明,实验组(ERα)ERα的蛋白表达水平较对照组(GFP)明显升高,实验组成牙/成骨向分化标志蛋白(碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和骨钙素(osteocalcin,OCN))表达水平在3d或7d的表达均有不同程度上调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。在成骨诱导条件下,实验组(ERα)的矿化结节形成量较对照组(GFP)多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的ERα高表达载体成功在体外上调了目的基因的表达,并促进根尖牙乳头干细胞的成牙/成骨分化。     

骨桥蛋白与矿化液诱导牙髓干细胞向成骨细胞分化的对比研究

目的:比较骨桥蛋白(OPN)和矿化液对牙髓干细胞(DPSCs)向成骨细胞分化的作用。方法:矿化液培养DPSCs作为矿化液组,添加适宜浓度OPN作为OPN组,茜素红染色法检测矿化结节的形成;RT-RCR检测骨涎蛋白(BSP)、Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原(Col-1)等骨源性基因表达情况。结果:茜素红染色显示诱导培养28 d后2组出现的矿化结节数量相近(P>0.05)。OPN诱导培养7 d后2组DPSCs骨源性基因表达均成阳性,其中OPN组BSP基因表达水平高于矿化液组(分别为0.864±0.112和0.514±0.068,P<0.05);OPN组Runx-2基因表达水平低于矿化液组(分别为0.186±0.017和0.324±0.058,P<0.05);Col-1及OCN基因表达水平相近(P>0.05)。结论:OPN和矿化液对DPSCs的诱导能力相近。     

胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究

目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT-PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,von kossa染色阴性。RT-PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14d时约为对照组的2.0倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用。