针对p27Kip1基因的小发夹RNA对牛角膜内皮细胞增殖的影响

目的 探讨针对p27Kip1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒对牛角膜内皮细胞(bCEC)增殖能力的影响.方法 实验研究.设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照.构建并鉴定重组质粒Pgenesil-P1、Pgenesil-P2、Pgenesil-P3及Pgenesil-HK.以脂质体法将以上4种质粒分别转染bCEC,并设立空白组.稳定转染后采用RT-PCR和Western免疫印迹法榆测bCEC内p27Kip1的mRNA及其蛋白水平,筛选出抑制效果最好的阳性siRNA质粒.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测该质粒组、Pgenesil-HK组及空白组的细胞生长情况.流式细胞术检测各组细胞周期的分布.以上数据结果均采用单因素方差分析.结果酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功.与空白组比较,Pgenesil-P1、Pgenesil-P2、Pgenesil-P3各组mRNA的抑制效率分别为32.71%、67.76%及80.28%(F=453.102,P=0.000),蛋白表达水平降低为29.27%、64.73%及76.13%(F=75.385,P=0.000),以Pgenesil-P3抑制效果最明显.空白组与Pgenesil-HK组比较蛋白水平(P=0.356)和mRNA水平(P=0.246)均差异无统计学意义.与空白对照和阴性siRNA相比,Pgenesil-P3组bCEC增殖能力提高,G1期细胞比例下降(F=134.224,P=0.000),s期比例增加(F=334.957,P=0.000).结论针对p27Kip1的shRNA可有效降低p27Kip1基因及其蛋白的表达水平,并可提高bCEC增殖能力.RNA干扰介导的p27Kip1基因沉默可能是促进角膜内皮细胞再生的有效手段.(中华眼科杂志,2009,45:254-259)     

TGF-β2体外抑制牛角膜内皮细胞增殖的研究

目的:观察体外不同浓度的转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)对牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cells,bCECs)的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法:培养新生小牛的角膜内皮细胞,将第3代内皮细胞转移至96孔培养板,实验分6组,每组设定4个复孔。1,2组分别为只含有培养液不含细胞和TGF-β2的空白对照组,和只含细胞和培养液不含TGF-β2的阴性对照组,3～6组分别加入含0.1,1,10,100ng/LTGF-β2的培养液。作用24,48,72h后用MTT检测法测定各孔吸光度A值。作用48h后,用流式细胞检测仪对各组细胞周期进行检测。RT-PCR法测定不同浓度的TGF-β2组p27Kip1基因的表达情况。结果:TGF-β2浓度为0.1～1ng/L,作用24～72h,能明显的使bCECs的吸光度发生改变,作用48h抑制效果最明显。0.1和1ng/L浓度组吸光度与阴性对照组相比有显著差异性,作用48h可使bCECs的G0/G1周期细胞所占比例与阴性组对比有显著差异,其p27Kip1表达较其他组明显增强。结论:0.1～1ng/L TGF-β2作用48h对bCECs具有显著增殖抑制作用,其抑制作用可能是通过上调细胞周期蛋白p27来实现的。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞外基质合成的影响

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对体外培养的牛角膜内皮细胞细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)合成的影响。方法将体外培养的牛角膜内皮细胞分为实验组和对照组,经0μg·L-1(对照)、0.1μg·L-1、1.0μg·L-1、10.0μg·L-1、100.0μg·L-1浓度的TGF-β1处理48h后,用SABC免疫组化法分别检测角膜内皮细胞纤维连接蛋白和层粘连蛋白的合成情况。结果与对照组相比,一定浓度(1.0μg·L-1及10.0μg·L-1)的TGF-β1能明显促进体外培养的角膜内皮细胞纤维连接蛋白及层粘连蛋白的合成,且呈剂量依赖性。但浓度为0.1μg·L-1及100.0μg·L-1的TGF-β1组OD值与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论一定浓度(1·0μg·L-1及10.0μg·L-1)TGF-β1能促进牛角膜内皮细胞ECM的合成,提示TGF-β1可能在角膜内皮细胞损伤修复中扮演重要角色。     

转化生长因子-β2体外抑制人角膜内皮细胞增殖的作用

目的:研究转化生长因子TGF-β2对体外培养人角膜内皮细胞(HCEC)增殖的影响机制。方法:体外培养经血清饥饿法获得同步化的HCEC,用不同浓度TGF-β2对HCEC进行不同时间的处理,采用细胞计数、MTT染色以及流式细胞仪(FCM)和RealtimePCR检测TGF-β2对HCEC的增殖、细胞周期及细胞中p27kip1和p21cip1表达的影响。结果:TGF-β21～15μg/L对HCEC有显著的增殖抑制作用,具有浓度和时间依赖性,9μg/L是TGF-β2抑制HCEC细胞增殖的峰浓度。9μg/LTGF-β2处理后,处于G1/G0期HCEC数量显著增加,并具有时间依赖性。9μg/LTGF-β2处理24h后,p27kip1表达量显著增加,48h后p27kip1和p21cip1的表达量均显著增加,也具有时间依赖性。结论:TGF-β2对HCEC具有显著的浓度和时间依赖性增殖抑制作用,可能通过先后诱导p27kip1和p21cip1表达量的增加将细胞拘留在G1/G0期来实现的。     

TGF-β2局部应用对大鼠角膜碱烧伤后CD44和E-selectin表达的影响

目的研究TGFβ2局部应用对大鼠角膜碱烧伤后CD44和Eselectin的mRNA合成的影响,探求其对角膜碱烧伤的治疗作用。方法制备Wistar大鼠角膜碱烧伤模型,一组给予TGFβ2(浓度为1mg·L-1)局部滴眼,每日3次,一组未给予TGFβ2治疗。于角膜碱烧伤后3d和2周应用RTPCR方法检测TGFβ2治疗组与未治疗组角膜CD44和Eselectin的mRNA合成情况。结果角膜碱烧伤3d时CD44mRNA表达无显著变化,碱烧伤2周时CD44表达量增加,同正常对照组相比差异显著(P<0.01)。TGFβ2治疗组3d和2周时CD44的mRNA合成同未治疗组相比均有增加,2组差异显著。角膜碱烧伤3d时EselectinmRNA的表达量低于正常对照组,碱烧伤2周时Eselectin表达量高于正常对照组,有显著差异(P<0.01)。TGFβ2治疗组3d和2周时Eselectin的mRNA合成同未治疗组相比均有增加,3d时增加明显,差异极显著。结论TGFβ2能促进急性期和营养紊乱期CD44和EselectinmRNA的合成,减轻碱烧伤后的炎症反应。TGFβ2能够通过影响角膜局部粘附分子的合成和表达来减轻病理损伤,促进创伤愈合。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞DNA合成的影响

目的：研究外源性转化生长因子β1(transforming growth factor，TGF-β1)对牛角膜内皮细胞(bovine corneal emdothelial cells，BCECs)增殖过程的影响。方法：在体外培养的牛角膜内皮细胞经不同浓度(0．10、1．00、10．00、100．00μg／L)TGF-β1处理后，用流式细胞术测量分析细胞周期，用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测TGF-β1对角膜内皮细胞增殖功能以及DNA合成的影响。结果：一定浓度(0．10、1．00、10．00μg／L)的TGF-β1对角膜内皮细胞有明显的促增殖作用，并呈剂量依赖性。但在较高浓度(100．00μg／L)时对内皮细胞表现出一定的抑制作用。结论：一定浓度外源性的TGF-β1与其受体结合后可以促进牛角膜内皮细胞DNA的合成，可以参与角膜内皮细胞的损伤修复再生过程。     

TGF-β1诱导体外培养角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对体外培养的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的诱导表达作用。方法体外培养的角膜成纤维细胞分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的TGFβ1(0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1)处理24h,用RTPCR方法检测角膜成纤维细胞CTGFmRNA的表达情况。结果1μg·L-1和10μg·L-1TGFβ1处理组CTGF/GAPDH像素比值分别为0.35±0.05和1.25±0.10,均较对照组高(0.13±0.02),差异具有统计学意义,同时CTGF/GAPDH比值随TGFβ1浓度增加而增加。结论TGFβ1可以诱导角膜成纤维细胞CTGF的表达,在角膜成纤维细胞中CTGF也可能是TGFβ1对细胞起作用的下游信号分子。     

血管内皮生长因子shRNA表达质粒抑制鼠角膜新生血管与血管内皮细胞中血管内皮生长因子的表达

目的 探讨RNA干扰对大鼠碱烧伤后角膜新生血管(CNV)与血管内皮细胞(EC)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及作用机制.方法 实验研究.采用DNA重组技术设计合成针对VEGF mRNA的3条shRNA寡核苷酸片段,构建真核表达质粒VEGF shRNA1、2、3,然后将质粒通过脂质体介导分别转染EC,逆转录聚合酶链反应和Western blot免疫印迹法分别检测EC中VEGF mRNA和蛋白的表达及干扰效率,并筛选出干扰效率最高的质粒(VEGF shRNA3质粒)进行体内实验.将20只SD大鼠按完全随机设计方法分为两组,分别为实验组10只和对照组10只,建立大鼠碱烧伤后CNV模型.实验组于结膜下注射VEGF shRNA3质粒后,显微镜下观察CNV生长情况,7 d后利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法分别检测实验组和对照组角膜组织VEGF mRNA和蛋白的表达.多组间差异显著性检验用单因素方差分析,两组CNV面积比较采用重复测量的方差分析.结果 经酶切及测序证实重组质粒构建成功.VEGF shRNA1、2、3质粒均可下调VEGF mRNA和蛋白的表达,其中VEGF shRNA3质粒的抑制作用较强,VEGF mRNA和蛋白的抑制率分别为68.92%和66.22%.体内实验中碱烧伤后3、5、7 d,实验组CNV长度较对照组明显降低,差异有统计学意义(F=355.744,P=0.000);实验组CNV面积较对照组明显降低,差异有统计学意义(F=402.700,P=0.000);实验组VEGF mRNA和蛋白在角膜组织中的表达较对照组明显降低,抑制率分别为41.84%和41.86%.结论 构建的VEGF shRNA质粒能右效抑制EC中VEGF mRNA和蛋白的表达.结膜下注射VEGF shRNA3质粒能显著抑制碱烧伤后CNV的形成与VEGF的表达.     

p21在氧诱导视网膜新生血管模型小鼠视网膜中的表达

视网膜新生血管(RNV)生成主要依赖于血管内皮细胞的不断分裂、增生[1].p21是细胞周期中重要的负性调控因子,能够广泛结合并抑制各种细胞周期蛋白依赣性激酶(CDK)复合物的磷酸化活性,主要参与细胞周期中G1/S期的调控,使细胞阻滞于G1期进而抑制细胞增生[2].有研究发现,p21在细胞异常增生性疾病中处于低表达[3].为探讨p21在RNV形成过程中的作用及机制,我们观察了p21和CDK2在氧诱导RNV小鼠视网膜中的表达.现将结果报道如下.     

洛伐他汀对大鼠角膜新生血管VEGF和TGF-β1表达的影响

目的:探讨洛伐他汀(lovastatin)对大鼠角膜新生血管(cor-neal neovascularization,CNV)血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和转化生长因子-β1(trans-forming growth factor-beta1,TGF-β1)表达的影响。方法:建立碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的动物模型,治疗组和对照组分别给予10-5mol/L洛伐他汀溶液和生理盐水点眼,采用裂隙灯观察新生血管的生长情况,用免疫组织化学方法检测VEGF及TGF-β1的表达,并在基因水平下采用RT-PCR方法检测大鼠角膜VEGF mRNA的表达水平。结果:各时间点角膜新生血管的面积,治疗组均低于对照组,差异有显著性(P<0.05),免疫组化染色显示,治疗组VEGF及TGF-β1的表达量较对照组明显减少,在造模后4d角膜组织中VEGF mRNA的相对表达量,治疗组低于对照组(0.422±0.083vs0.786±0.126,P<0.05)。结论:洛伐他汀通过下调VEGF及TGF-β1的表达,抑制血管内皮细胞增殖,最终可有效抑制碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管形成。     

增生性玻璃体视网膜病变增生膜中结缔组织生长因子与转化生长因子β受体和细胞外基质相关性的研究

目的 观察结缔组织生长因子（CTGF）在不同级别增生性玻璃体视网膜病变（PVR）增生膜中的表达及其与转化生长因子β受体（TGF-βR）和细胞外基质（ECM）出现的关系，探讨PVR发病过程中CTGF与TGF-βR和ECM产生的相关性。 方法 采用链霉亲和素生物素复合物（SABC）免疫组织化学方法，检测玻璃体切除手术获得的43例PVR增生膜中CTGF、TGF-βRⅡ、纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的表达，应用Spearman相关分析判断两样本之间有无相关性。 结果 PVR增生膜中CTGF、TGF-βRⅡ蛋白高表达，阳性表达的细胞主要是上皮样细胞。免疫组织化学显示C级膜中二者阳性表达率分别为70.6%和76.5%，D级膜中分别为73.9%和69.6%。统计学分析结果显示，CTGF、TGF-βRⅡ各级阳性表达率与膜分级间无相关性（P＞0.05）。PVR膜中FN、Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色在实质细胞和细胞外间质均有表达;统计学分析结果显示，CTGF与TGF-βRⅡ、FN、Ⅰ型及Ⅲ型胶原的表达呈正相关(P＜0.01)。 结论 PVR增生膜中CTGF、TGF-βRⅡ蛋白表达上调，推测CTGF的产生与TGF-βR的激活有关，CTGF加重增生膜中RPE细胞合成FN和胶原等ECM，参与了PVR增生膜的形成和发展。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 192-195)     

羊膜对角膜成纤维细胞CTGF表达及凋亡的影响

目的观察羊膜对在其基质面生长的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达以及凋亡的影响。方法将传代的家兔角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面，培养5d后，用RT-PCR检测角膜成纤维细胞CTGF mRNA表达的变化；用流式细胞仪观察羊膜对IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡的影响。结果在羊膜基质面培养的角膜成纤维细胞，其CTGF／GAPDH像素比值较对照组低，与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．05）；羊膜能降低IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡率，与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．01）。结论羊膜不仅抑制体外培养的角膜成纤维细胞CTGF mRNA的表达，而且能抑制角膜成纤维细胞的凋亡，可能部分解释羊膜减轻角膜基质损伤修复反应和抗眼表瘢痕形成的机制。     

实验性糖尿病大鼠视网膜细胞凋亡和微血管改变及结缔组织生长因子的表达

目的 研究糖尿病大鼠视网膜凋亡细胞和结缔组织生长因子(CTGF)表达情况及其在微循环改变中的作用.方法 实验研究.55只成年雄性Wistar大鼠,以随机数字表法,随机分为正常对照(CON)组(10只鼠)和糖尿病(DM)组(45只鼠).根据病程不同,将存活的30只DM组大鼠再分为2个月组(DM2)、4个月组(DM4)及6个月组(DM6),每组各10只鼠.用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜凋亡细胞,用免疫组织化学法测定CTGF表达水平,以视网膜消化铺片过碘酸雪夫(PAS)染色法观察视网膜血管改变情况.观察并比较不同病程的DM大鼠视网膜凋亡细胞及CTGF表达情况、视网膜微血管形态变化及周细胞数量变化.对各组大鼠视网膜的细胞凋亡指数、CTGF表达阳性率及血管周细胞数量进行比较采用LSD-t检验法,两变量间的相关性分析采用线性相关法.结果 CON组大鼠视网膜细胞凋亡和CTGF表达均阴性.DM2组、DM4组、DM6组大鼠视网膜细胞凋亡指数分别为0.05±0.01、0.25±0.03及0.52±0.02;组间两两比较,差异均有统计学意义(DM2与DM4组比较t=21.432,DM2与DM6组比较t=50.843,DM4与DM6组比较t=29.410;P<0.05),表明随DM病程延长,视网膜凋亡指数逐渐增加.DM2组、DM4组、DM6组大鼠视网膜CTGF表达阳性率分别为(22.79±2.99)%、(41.73±2.59)%、(55.27±2.68)%,组间两两比较,差异均有统计学意义(DM2与DM4组比较t=15.345,DM2与DM6组比较t=26.316,DM4与DM6组比较t=10.971;P<0.05),表明随DM病程延长,视网膜CTGF表达水平逐渐增高.CON及DM2组大鼠视网膜血管走形良好,DM4组大鼠视网膜部分血管渐变僵硬、狭窄;DM6组大鼠视网膜血管主干僵硬,部分微血管狭窄明显.与CON组视网膜血管周细胞数量对比,DM2组未见明显变化;随病程延长,DM4组和DM6组大鼠视网膜血管周细胞数量较CON组逐渐减少,差异均有统计学意义(t=3.367,6.667;P<0.05).DM大鼠视网膜细胞凋亡指数与CTGF阳性表达水平呈显著正相关(r=0.958,P<0.05),凋亡指数和CTGF阳性表达水平与视网膜血管周细胞数量均呈显著负相关(r=-0.540,-0.595;P<0.05).结论 在DM大鼠视网膜组织中,凋亡细胞和致纤维化因子CTGF的产生均早于微循环血管走形及周细胞的改变.(中华眼科杂志,2011,47:521-526)

Abstract：

Objective To study the cell apoptosis and the expression of connective tissue growth factor (CTGF) in the retina of diabetic rats and to explore their contributions to the changes of microcirculation. Methods It was a experiment study. Fifty-five adult male Wistar rats were divided into two groups, normal control group (CON,10 rats) and diabetes mellitus group (DM, 45 rats). The 30 surviving rats in the DM group were further divided into 3 groups based on the time of observation, 2 month (DM2), 4 month (DM4) and 6 month (DM6) groups, with 10 rats in each group. Cell apoptosis was detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL). Expression of CTGF was determined by immunohistochemical study. Retinal vessels were observed by retinal digest stretched periodic acid Schiff (PAS) staining. Results Immunohistochemical staining and TUNEL staining revealed negative results in normal control group. Retinal cell apoptosis index increased gradually from DM2 to DM6, the differences between any two groups were statistically significant (t2-4,2-6,4-6=21.432, 50.843, 29.410;P<0.05). Expression of CTGF in the retina increased from DM2-DM6, the differences between any two groups were statistically significant (t2-4,2-6,4-6=15.345, 26.316, 10.971;P<0.05). PAS staining of retinal blood vessels obtained negative results in the CON and DM2 groups. Part of retinal capillaries were slightly stiff and narrow in DM4 group. Retinal capillaries in DM6 group were trunk stiff and were narrowed obviously. The number of pericytes was reduced in DM4, and progressed following the course of diabetes. The number of pericytes in the DM2 group did not different from that in the CON group (t=0.875,P=0.387). The number of pericytes in the DM4 and DM6 group were significantly decreased as compared to the CON group (t=3.367,6.667;P<0.05). Retinal cellular apoptosis index had a significant positive correlation to the expression of CTGF (r=0.958,P<0.05). Number of pericytes was significantly correlated (negative correlation) with retinal cellular apoptosis index and the expression of CTGF (r=-0.540, -0.595; P<0.05). Conclusions The appearances of cellular apoptosis and fibrosing factor CTGF in the retina of diabetic rats occurred earlier than the changes of microcirculation and the number of capillary pericytes.     

CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和合成细胞外基质的影响.方法体外培养兔角膜成纤维细胞,经0.5、5、50和500 ng/mL CTGF处理24 h后,分别进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色、银染核仁组成区染色(AgNOR)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色以及Ⅲ型胶原(CA-Ⅲ)、纤维连接蛋白(FN)和层黏蛋白(LM)免疫组化染色,检测CTGF对角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和细胞外基质合成的影响.结果与对照组相比,0.5、5、50和500 ng/mL的CTGF能剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞PCNA表达,增加核仁银染颗粒数,促进α-SMA的表达,同时能促进角膜成纤维细胞CA-Ⅲ、FN和LM的合成(P＜0.01).结论一定质量浓度的CTGF可能在角膜损伤修复过程中发挥重要作用.     

氯化锂对人眼Tenon囊成纤维细胞TGF-β及CTGF的影响

目的:研究氯化锂(lithium chloride,LiCl)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响并探讨其作用机制.方法:体外培养HTFs并通过vimentin免疫荧光染色技术及细胞形态特征观察鉴定细胞;将HTFs分为实验组(80mmol/L LiCl处理48h)和对照组(未用药).用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, Real time-qPCR)检测两组细胞内TGF-β及CTGF基因的表达,Western blot检测两组细胞内TGF-β及CTGF蛋白的表达.结果:体外培养的HTFs能够表达TGF-β及CTGF.与对照组比较,实验组中TGF-β、CTGF基因表达下降,差异均具有统计学意义(t=20.042、14.995,P<0.05);与对照组比较,实验组中TGF-β、CTGF蛋白表达下降,差异均具有统计学意义(t=46.058、12.452, P<0.05).结论:体外培养的HTFs在基因和蛋白水平表达TGF-β及CTGF,LiCl能够抑制该过程,其可能通过该机制抑制HTFs增殖,此研究为LiCl用于青光眼滤过术后瘢痕化调控提供了实验依据.     

不同类型和病程视网膜前膜中结缔组织生长因子和纤维连接蛋白的差异表达

背景 视网膜前膜的形成和发展过程有多种细胞、细胞因子和细胞外基质等的调控和参与,结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)等参与其中,研究视网膜前膜的形态结构和病理学特征对于防治相关的视网膜病变具有重要意义. 目的 分析不同类型和病程眼底病变所致视网膜前膜的病理特点,研究CTGF和FN在视网膜前膜中的表达.方法 收集玻璃体切割术或硅油取出术中获得的视网膜前膜标本,其中孔源性视网膜脱离(RRD)组24例24眼,包括病程＜90 d者14眼及≥90 d者10眼;伴有玻璃体积血或牵拉性视网膜脱离(RD)的糖尿病视网膜病变(DR)组20例20眼,硅油填充眼组7眼,病程均≥90 d.各眼增生性玻璃体视网膜病变(PVR)分级均为C2级以上.对获取的视网膜标本进行常规组织病理学检查,采用免疫组织化学法检测视网膜前膜标本中CTGF和FN的表达,应用Fisher确切概率法对病程≥90 d不同组间和RRD组不同病程间视网膜前膜标本中CTGF和FN表达阳性率的差异进行比较. 结果 RRD组病程＜90 d的标本中以视网膜色素上皮(RPE)细胞和炎性细胞增多为主,而病程≥90 d的标本中以神经胶质细胞和成纤维细胞增多为主.RRD组和伴有玻璃体积血或牵拉性RD的DR组以炎性细胞浸润为主要表现,而硅油填充眼组以纤维增生为主要表现.病程≥90 d的3个组视网膜前膜中,RRD组CTGF阳性表达者7眼,占70.0％,伴有玻璃体积血或牵拉性RD的DR组18眼,占90.0％,硅油填充眼组2眼,占28.6％,3个组间视网膜前膜中CTGF表达阳性率的总体比较差异有统计学意义(P=0.037);RRD组FN阳性表达者9眼,占90.0％,伴有玻璃体积血或牵拉性RD的DR组18眼,占90.0％,硅油填充眼组7眼,占100.0％,3个组间FN表达阳性率的总体比较差异无统计学意义(P=0.379).RRD组中,病程≥90 d者视网膜前膜中CTGF阳性表达者7眼,占70.0％,病程＜90 d者13眼,占92.9％,差异有统计学意义(P=0.032);病程≥90 d者视网膜前膜中FN阳性者9眼,占90.0％,病程＜90 d者7眼,占50.0％,差异有统计学意义(P=0.019). 结论 CTGF和FN在不同眼底病所致的视网膜前膜中及不同阶段的视网膜前膜中均呈差异性表达.CTGF的表达变化与病程和疾病类型有关,而FN的表达变化仅与病程有关.     

结缔组织生长因子对人Tenon囊成纤维细胞中E-cadherin蛋白表达的促进作用

背景 青光眼滤过手术后滤过通道的瘢痕化是手术失败的主要原因,其主要病理机制是成纤维细胞的异常增生、间质-上皮转分化及细胞外基质的重塑.结缔组织生长因子(CTGF)是促进瘢痕形成的关键因子,而CTGF是否能促进人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的间质-上皮转分化尚不清楚.目的 观察CTGF对HTFs间质-上皮转分化的影响.方法 用体积分数10％胎牛血清的DMEM高糖型培养液进行HTFs体外常规培养和传代,取3～6代细胞用于实验.将培养的HTFs分为空白对照组和CTGF处理组,空白对照组用DMEM完全培养液培养细胞,CTGF处理组在培养液中加入CTGF,使终质量浓度为50 ng/ml.细胞培养后48 h,采用细胞免疫荧光染色技术鉴定HTFs中上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白的表达,采用Western blot法对HTFs中E-cadherin蛋白的表达量进行检测.结果 空白对照组及CTGF处理组HTFs均生长良好,呈长梭形,漩涡状排列.细胞免疫荧光染色显示,CTGF处理组HTFs细胞质呈红色荧光,细胞核呈蓝色荧光;空白对照组HTFs仅见DAPI蓝染的细胞核,无E-cadherin表达的红色荧光.Western blot法检测结果显示,空白对照组HTFs中E-cadherin蛋白无表达,而CTGF处理组HTFs中E-cadherin蛋白的相对表达量为0.63±0.08.结论 间叶组织来源的成纤维细胞本身不表达E-cadherin,在CTGF的刺激下成纤维细胞能够表达E-cadherin,CTGF促进HTFs的间质-上皮转分化.     

神经生长因子对准分子激光治疗性角膜切削术后角膜修复的作用

目的探讨神经生长因子（nervegrowth factor，NGF）对准分子激光治疗性角膜切削术（phototherapeutic keratectomy，PTK）后伤口愈合及透明度恢复的影响。方法建立30只新西兰白兔PTK模型，术后右眼滴用自制NGF滴眼液，左眼滴用人工泪液作为对照眼。于术后不同时间分别进行裂隙灯、光学显微镜、722光栅分光光度计及扫描电镜检查。结果2组均于术后3～7d角膜上皮全部愈合，差异无统计学意义（P〉0．05）实验组术后不同波长的角膜透明度高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。HE染色光镜观察发现对照组上皮细胞过度增生较重。扫描电镜显示，术后4周NGF组角膜上皮细胞层基本恢复正常，对照组角膜上皮表面的微绒毛及微皱褶仍然相对较少。结论NGF通过改善伤口愈合的微环境，抑制角膜上皮细胞的过度增生，调节伤口愈合，从而促进PTK后角膜透明度的恢复。[眼科新进展2007；27（2）：110-112]     

TGF-β2对体外培养牛晶状体上皮细胞CTGF蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)对体外培养牛眼晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)结缔组织生长因子(connective tissue growth fac-tor,CTGF)mRNA和蛋白表达的影响。方法:将体外培养2~3代牛LEC分为对照组和实验组,实验组分别经1,5,10μg/LTGF-β2处理24h后,采用半定量RT-PCR和Westernblot技术检测CTGF mRNA以及蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,1μg/LTGF-β2组对牛LECCTGF/β-actin吸光度比值和CTGF/β-actin灰度比值的表达无明显影响(P>0.05),5,10μg/LTGF-β2组可以明显上调RT-PCR和Western blot中CTGF/β-actin比值(P<0.01)。结论:TGF-β2可促进体外培养牛LEC表达CTGF蛋白及mRNA。