N-乙酰半胱氨酸对纳米二氧化钛诱发细胞遗传损伤的保护作用

目的：探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对纳米二氧化钛(TiO₂-NPs)诱发人正常肝细胞L-02和肺细胞HBE遗传损伤的保护作用。方法：分别将对数生长期的L-02和HBE细胞分为3组,即正常培养的对照组、TiO₂-NPs(80μg/mL)暴露组、TiO₂-NPs(80μg/mL)与NAC(20μmol/L)联合暴露组;各组细胞处理72 h后,采用H₂O₂试剂盒检测细胞内H₂O₂浓度;实时荧光定量(qPCR)法检测L-02、HBE细胞端粒长度(TL)的改变;胞质分裂阻断微核细胞组试验(CBMN-Cyt)评估受试细胞的染色体不稳定性(CIN)及细胞死亡率。结果：与对照组相比,TiO₂-NPs暴露72 h后,可诱导L-02和HBE细胞内H₂O₂浓度显著升高(P<0.05),致使L-02和HBE细胞TL缩短、CIN增加、细胞死亡率增加(P<0.05);当TiO...     

线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥诱导BEAS-2B细胞损伤的影响

目的: 探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO对氮芥(HN2)诱导人支气管上皮细胞系BEAS-2B的影响。方法: BEAS-2B细胞分为正常对照组、Mito-TEMPO对照组、HN2染毒组和Mito-TEMPO干预组,其中正常对照组和Mito-TEMPO对照组分别给予含DMSO(体积分数为0.1%)和Mito-TEMPO(100μmol/L)的无血清培养基处理26 h,HN2染毒组给予含DMSO的无血清培养基预处理2 h,然后给予HN2(8μmol/L)染毒24 h,Mito-TEMPO干预组给予Mito-TEMPO(100μmol/L)预处理2 h,然后HN2(8μmol/L)和Mito-TEMPO(100μmol/L)共处理24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活性,速率法检测细胞培养基上清乳酸脱氢酶(LDH)活性,倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI探针法流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1探针法检测线粒体膜电位,紫外分光光度法检测细胞匀浆ATP含量,MitoSOX、DCFH-DA、DHE探针法分别检测细胞内线粒体ROS、H2O2及总ROS水平,实时荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。结果: 与HN2染毒组相比,Mito-TEMPO干预组细胞活性降低了约42.6%(P<0.05),细胞上清LDH水平显著增加(P<0.05),同时伴有异常形态细胞增多,Mito-TEMPO干预组细胞线粒体ROS水平降低了53.6%(P<0.05),细胞内H2O2水平及总ROS水平分别升高了171%和43.4%(均为P<0.05)。Mito-TEMPO干预对HN2染毒导致的细胞凋亡比例、线粒体膜电位、ATP含量、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平等指标改变均无显著影响(P>0.05)。结论: 100μmol/L的Mito-TEMPO干预在HN2染毒BEAS-2B细胞模型中促进了细胞损伤,其机制可能与提高细胞内H₂O₂水平及总ROS水平有关。     

丹参酚酸B调控ROS抑制大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡

目的 验证丹参酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)抑制人大肠癌细胞HCT-116增殖并促进其凋亡,进一步通过活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)阐述其可能机制。方法 体外培养大肠癌细胞HCF-116,分成HCT-116组、HCT-116+H₂O₂组、HCT-116+SalB组、HCT-116+SalB+N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)组。分组干预后,采用MTT法检测细胞存活率、平板克隆实验检测细胞增殖、流式细胞术检测ROS含量、细胞周期及细胞凋亡率。结果 SalB对HCT-116细胞具有抑制作用,且在一定浓度范围内呈正相关(P＜0.01);SalB、H₂O₂促进HCT-116细胞内ROS生成(P＜0.01),ROS清除剂NAC预处理可清除由SalB产生的ROS(P＜0.01);SalB抑制HCT-116细胞增殖(P＜0.01)并促进其凋亡(P＜0.01),该作用可被NAC部分逆转(P＜0.05);SalB引起HCT-116细胞G0/G1周期阻滞(P＜0.01),NAC预处理完全逆转SalB导致的周期阻滞(P＜0.05)。结论 SalB可通过增加HCT-116细胞内ROS水平引起细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,并促进其凋亡。     

维生素C联合三氧化二砷对膀胱癌T-24细胞株的作用

 目的 探讨维生素C联合三氧化二砷（As2O3）对膀胱癌T-24细胞的影响及其机制。方法 体外培养T-24细胞,分为6组,对照组不做处理,实验组分别加入不同浓度的As₂O₃ （0.4、4、40 μg/ml）组,维生素C（400 μg/ml）组、维生素C（400 μg/ml）+ As₂O₃ （0.4 μg/ml）组（联合组）,采用细胞增殖曲线检测T-24细胞生长差异情况,用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化,RT-PCR、Western blot技术检测分析caspase-3、survivin mRNA及蛋白的表达情况。结果 联合组、维生素C（400 μg/ml）组、As₂O₃ （4 μg/ml）组及As₂O₃ （40 μg/ml）组均对膀胱癌T-24细胞增殖有显著抑制作用;联合组将细胞阻止在G₀/G₁期,且凋亡率显著高于其他五组（P<0.05）;RT-PCR及Western blot结果显示,维生素C（400 μg/ml）组、联合组的caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,survivin mRNA和蛋白表达降低。结论 维生素C联合As₂O₃ 可抑制膀胱癌T-24细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与上调caspase-3 mRNA、蛋白,下调survivin mRNA、蛋白表达有关。     

上海中医药大学附属普陀医院实验中心，上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所，上海200062

背景与目的：细胞凋亡受阻是肿瘤细胞产生耐药的重要因素,从细胞凋亡的研究入手,将为肿瘤的治疗和耐药性的逆转开辟新的途径。本研究观察一种新型萘酰亚胺类衍生物8c对结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞的作用,探讨诱导HCT116/L-OHP耐药细胞凋亡的分子机制。方法：采用CCK-8法检测8c对HCT116/L-OHP细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察8c对HCT116/L-OHP细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR(realtime PCR)检测p53 mRNA、Bax mRNA及Bcl-2 mRNA水平变化;蛋白［质］印迹法(Western blot)检测p-p53、Bax、Bcl-2及细胞色素c(Cyt-c)的蛋白表达水平。结果：8c抑制HCT116/L-OHP细胞增殖的半数抑制浓度(IC₅₀=8.16 μmol/L)低于阳性对照氨奈菲特(IC₅₀=28.37 μmol/L);药物作用后,8c诱导耐药细胞产生凋亡,凋亡通路中p53(Ser15)磷酸化水平上升,但p53 mRNA水平不受影响;Bax蛋白水平及mRNA水平明显上升,Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,使得Bax/Bcl-2比例增加,同时8c又引起细胞色素c的释放。结论：8c通过磷酸化p53 Ser-15位点激活p53,随即激活细胞凋亡通路相关蛋白的表达,这可能是8c抑制结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞增殖的重要机制之一。8c具有良好的抗肿瘤及抗耐药潜力和开发应用前景。     

牡荆苷通过NF-κB/MMP-9通路调控肺腺癌A549细胞增殖与迁移的实验研究

目的 研究牡荆苷对肺腺癌A549细胞增殖和迁移等生物学行为的影响及可能作用机制。方法 采用不同浓度牡荆苷(0、10、20、40、60、80、100μmol/L)处理A549细胞,另设置0.1%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC₅₀)。根据IC₅₀将牡荆苷分为低、中、高浓度组,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Western blotting法检测各组核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。萤光素酶检测牡荆苷对A549细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)转录活性的影响。结果 与空白对照组比较,不同浓度牡荆苷(10、20、40、60、80、100μmol/L)处理细胞24 h后,A549细胞活力随牡荆苷浓度的升高而降低(P<0.05),呈浓度依赖性,IC₅₀为(38.93±2.15)μmol/L;牡荆苷低浓度组(20μmol/L)、中浓度组(40μmol/L)、高浓度组(60μmol/L)24 h细胞迁移率分别为(19.30±1.25)%、(15.48...     

缬沙坦对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用的初步研究

目的 研究缬沙坦（valsartan,VAT）对阿霉素（doxorubicin,DOX）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法 采用不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX处理H9C2心肌细胞建立DOX心肌细胞损伤模型。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果 与对照组比较,不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX作用H9C2心肌细胞12 h和24 h,细胞存活率均随药物浓度增加而降低（P＜0.01）。其中1 μmol/L DOX作用24 h即可明显引起H9C2心肌细胞损伤,细胞存活率为（75.5±5.6）%,细胞凋亡率为（11.94±2.07）%,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;10 μmol/L的 VAT预处理H9C2心肌细胞24 h后可明显抑制1 μmol/L DOX引起的心肌毒性作用,与单用 DOX组比较,细胞存活率升高［（74.2±3.0）% vs （89.3±4.0）%,P＜0.01］、细胞凋亡率下降［（13.15±6.07）% vs （11.01±3.17）%,P＜0.01］、G₀/G₁期细胞所占比例明显减少［（69.21±2.03）%  vs （50.28±1.21）%,P＜0.05］。结论 VAT能抑制DOX所致的心肌细胞损伤,保护作用可能与其调控细胞凋亡有关。     

原花青素对淀粉样蛋白Aβ 25-35诱导的 SH-SY5Y细胞 毒性的影响

目的：探讨原花青素对淀粉样蛋白片段Aβ_25-35染毒的SH-SY5Y细胞存活、氧化应激及其分泌淀粉样蛋白Aβ_1-42和可溶性淀粉样蛋白sAPPα水平的影响。方法：分别以不同浓度（0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL）原花青素和不同浓度（0.1、1.0、10.0、20.0 μmol/L）的Aβ_25-35作用SH-SY5Y细胞24 h后用MTT法检测细胞活力,进一步以1.0 μmol/L Aβ_25-35染毒细胞,建立细胞损伤模型,不同浓度（0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL）原花青素干预24 h,用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞分泌Aβ_1-42水平及sAPPα水平,TBA法测定细胞内丙二醛（MDA）含量,WST-8法测定细胞内总超氧化物歧化酶（SOD）活力。结果：与对照组相比,不同浓度原花青素作用24 h后,细胞存活率差异均无统计学意义（P均>0.05）,而不同浓度Aβ_25-35均使SH-SY5Y细胞活力降低（P < 0.01）,其中1.0 μmol/L Aβ_25-35 对细胞活力的抑制作用最强（P < 0.01）。以1.0 μmol/L Aβ_25-35染毒细胞,Aβ_1-42分泌水平升高（P < 0.01）,sAPPα水平降低（P < 0.01）,细胞内MDA含量升高（P < 0.01）,总SOD活力降低（P < 0.01）。与1.0 μmol/L Aβ_25-35染毒组比较,0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL原花青素干预可提高各组细胞活力（P < 0.05）,降低Aβ_1-42分泌水平（P < 0.01）;0.5、1.0、5.0 μg/mL原花青素干预可提高细胞分泌sAPPα水平（P < 0.05）,降低细胞内MDA含量（P < 0.05）,增强总SOD活力（P < 0.05）。结论：原花青素可减轻Aβ_25-35诱导的SH-SY5Y细胞Aβ负荷,并减轻细胞氧化损伤。     

粉防己碱诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：粉防己碱(tetrandrine,Tet)是一种天然化合物,其抗视网膜母细胞瘤作用尚不清楚。该研究拟检测Tet对人视网膜母细胞瘤细胞的抗肿瘤作用,并进一步阐明其作用机制。方法：采用CCK-8法检测Tet对视网膜母细胞瘤细胞活力的抑制作用;应用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况;在2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)染色后,采用流式细胞术检测细胞内反应性活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测细胞Akt、p-Akt蛋白表达量。结果：Tet显著抑制视网膜母细胞瘤细胞活力,Tet浓度为4、8、10和20 μmol/L处理细胞24 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为5.7%、25.0%、55.1%和84.9%,Y79细胞抑制率分别为2.4%、2.9%、23.8%和54.2% (P<0.01);10 μmol/L Tet处理细胞12、24和48 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为6.0%、45.5%和74.7%,Y79细胞抑制率分别为2.9%、19.4%和43.3%(P<0.01)。Tet诱导细胞凋亡,以10 μmol/L Tet处理细胞24和48 h时,WERI-Rb-1细胞凋亡率分别为(23.70±1.75)%和(34.83±3.15)%,Y79细胞凋亡率分别为(9.62±2.69)%和(14.97±1.50)%(P<0.01),凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能够显著抑制Tet对视网膜母细胞瘤细胞的凋亡诱导作用(P<0.05)。10 μmol/L Tet作用细胞6及12 h后,细胞的ROS产生量较对照组明显上升(P<0.01),N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)能够抑制Tet诱导产生的ROS(P<0.01),NAC抑制ROS后,细胞的凋亡率较单独Tet作用组明显下降(P<0.01)。Tet能够抑制视网膜母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号通路。结论：Tet诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡,该作用机制与细胞内ROS升高、PI3K/Akt信号通路抑制有关。     

4种化学物质对HaCaT细胞氧化应激相关基因表达的影响

目的: 探讨过氧化氢、姜黄素、槲皮素及叔丁基对苯二酚对84种氧化应激相关基因表达的影响。方法: 取对数生长期的HaCaT细胞,采用不同浓度的过氧化氢、姜黄素、槲皮素及叔丁基对苯二酚,用四甲基噻唑蓝(MTT)法评价受试物的细胞毒性。将不同浓度的过氧化氢(0.5和1.25 mmol/L)、姜黄素(5和20μmol/L)、槲皮素(200和500μmol/L)及叔丁基对苯二酚(10和50μmol/L)分别处理HaCaT细胞4 h及24 h后,提取RNA,对RNA质量进行评价,然后采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测HaCaT细胞中84种氧化应激相关基因的表达水平。结果: MTT试验显示,过氧化氢、姜黄素和叔丁基对苯二酚浓度分别在>1 mmol/L、>10μmol/L和>50μmol/L时,HaCaT细胞的存活率在80%以下;而槲皮素在浓度为1 000μmol/L仍未显示出明显的细胞毒性。qPCR结果显示,上述4种化学物质在不同浓度不同时间对HaCaT细胞氧化应激相关基因的表达有一定的影响。过氧化氢1.25 mmol/L作用4 h能引起HMOX1、SPINK1等基因表达上调而1.25 mmol/L作用24 h时CCL5表达下调;姜黄素20μmol/L作用4 h能引起HMOX1、ALB等基因表达上调以及GSR等基因表达下调;槲皮素500μmol/L作用4 h能引起ALB、HMOX1等基因表达上调以及SEPP1等基因表达下调;叔丁基对苯二酚10μmol/L作用4 h能引起基因EPX、HMOX1等基因表达上调,而10μmol/L作用24 h时AOX1等基因表达下调。结论: 过氧化氢、槲皮素、姜黄素及叔丁基对苯二酚,这4种化学物质均可引起氧化应激相关基因发生改变,均能引起基因HMOX1表达上调,而且高浓度的化学物质引起的基因表达变化高于低剂量,为抗氧化剂的添加提供了一定的理论依据。     

1,25-二羟基维生素D3对PM2.5所致HBE细胞氧化损伤的保护作用

目的： 探讨1，25-二羟基维生素D₃[1，25-（OH）₂D₃]对细颗粒物（PM_2.5）致人支气管上皮细胞（HBE）氧化损伤的保护作用。方法： 根据处理因素不同将细胞分为4组，溶剂（乙醇）对照组、1，25-（OH）₂D₃干预组、乙醇+PM_2.5染毒组、PM_2.5染毒+1，25-（OH）₂D₃干预组。溶剂对照组细胞用0.1%乙醇处理48 h，1，25-（OH）₂D₃干预组用1×10^-9 mol/L 1，25-（OH）₂D₃处理48 h，乙醇+PM_2.5染毒组用0.1%乙醇溶剂处理24 h后更换为含乙醇的PM_2.5（200 μg/mL）染毒液继续处理24 h，PM_2.5染毒+1，25-（OH）₂D₃干预组用1×10^-9 mol/L 1，25-（OH）₂D₃预处理24 h后更换为含1，25-（OH）₂D₃的PM_2.5（200 μg/mL）染毒液继续处理24 h。染毒结束后，用CCK-8试剂盒测定细胞存活率、丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）-Glo^TM试剂盒分别测定MDA浓度和GSH/GSSG比值，Western blot实验测定维生素D受体（VDR）、转录因子NF-E2相关因子2（Nrf-2）与血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白的表达水平。结果： PM_2.5染毒处理后，HBE细胞的存活率降至80.8%，1，25-（OH）₂D₃预处理24 h后再进行PM_2.5染毒的细胞存活率降低至75.8%。与对照相比，PM_2.5染毒后，HBE细胞MDA浓度显著增加（P < 0.05），而GSH/GSSG的比值却明显降低（P < 0.01）。1，25-（OH）₂D₃处理48 h后可显著改善PM_2.5染毒细胞的抗氧化水平（P < 0.05），主要表现为MDA浓度的降低和GSH/GSSG比值的增加。蛋白分析结果发现，PM_2.5可诱导细胞Nrf-2和HO-1蛋白表达的增加。1，25-（OH）₂D₃干预48 h后可上调HBE细胞内VDR水平，并可增加PM_2.5染毒组细胞内Nrf-2和HO-1蛋白的表达水平。结论： PM_2.5可诱导HBE细胞氧化损伤，主要表现为脂质过氧化水平升高、GSH/GSSG比值下降和抗氧化蛋白Nrf-2与HO-1表达水平的增加。在PM_2.5所致细胞氧化应激效应中，1，25-（OH）₂D₃可起到一定的保护作用，这可能与VDR及Nrf-2/HO-1信号通路有关。而1，25-（OH）₂D₃所致细胞存活率的降低可能与其诱导细胞周期阻滞及促进PM_2.5所诱导损伤细胞的凋亡有关。     

Reactive oxygen species production by blood neutrophils of patients with laryngeal carcinoma and antioxidative enzyme activity in their blood

Squamous cell carcinoma of the head and neck is a devastating illness with a severe impact on affected individuals. Several mechanisms may lead to oxidative stress in tumor-bearing patients, among others chronic inflammation. Inflammatory cells, especially macrophages and neutrophil leukocytes, may produce reactive oxygen species (ROS) which participate in carcinogenesis and tumor-associated immunosuppression. The aim of the study presented in this paper was to compare the production of reactive oxygen species (ROS)—superoxide anion (O₂^-) and hydrogen peroxide (H₂O₂)—by neutrophils isolated from the blood of 16 patients with larynx carcinoma and 15 healthy controls. The serum activity of superoxide dismutase and catalase as well as the total peroxidase activity in serum have also been estimated. The production of ROS, especially spontaneous and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)-induced O₂^-, was relatively higher in the patients with larynx carcinoma than in the healthy controls and increased parallel with the tumor stage (tumor, node, metastasis—TNM staging). The serum activity of catalase and peroxidase was also highest in the patients with stage T3 and T4 larynx carcinoma. After partial or total laryngectomy, a significant decrease in ROS production and the serum activity of catalase and peroxidase was observed. In contrast, the serum level of superoxide dismutase, which had been low prior to surgery, especially in the patients with advanced tumor stages (T3-T4), increased significantly afterwards. The results indicate the existence of oxidative stress in the blood of patients with larynx carcinoma and its significant decrease after partial or total laryngectomy.     

sCLU干预吉西他滨致MIA PaCa-2氧化损伤与吉西他滨化疗耐药相关性研究

背景与目的：吉西他滨(gemcitabine,GEM)作为治疗胰腺癌的一线化疗药物,随着其临床耐药性的出现,化疗疗效显著降低,而分泌型聚集素(secretory clusterin,sCLU)的表达与多种肿瘤细胞耐药密切相关。研究sCLU干预GEM致MIA PaCa-2氧化应激指标的改变,以期探讨GEM耐药机制。方法：将MIAPaCa-2细胞暴露于质量浓度分别为0、0.63、1.25、2.50、5.00和10.00 μg/mL 的GEM培养液和sCLU(5.4 μmol/L)干预的0.63、1.25、2.50、5.00和10.0 μg/mL培养液中作用24 h,测定细胞增殖抑制情况,计算细胞的半数抑制浓度(50% inhibitory concentration,IC₅₀);将MIA PaCa-2细胞暴露于IC₅₀的GEM培养液和sCLU干预培养6、12、24、48和72 h,计算并观察细胞抑制率随时间变化趋势;将MIA PaCa-2细胞置于质量浓度分别为0、1.25、2.50、5.00 μg/mL的GEM培养液和sCLU(5.4 μmol/L)干预培养24 h,测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活力变化。结果：细胞抑制率随GEM浓度的升高而升高,且具有明显的剂量-反应关系(P<0.05);细胞抑制率在低质量浓度(0.63 μg/mL)时,sCLU干预组高于GEM组,随着处理浓度增加,GEM组抑制率高于sCLU干预组(P<0.05);GEM致MIA PaCa-2细胞IC₅₀为2.50 μg/mL。与对照组比较,GEM、sCLU干预组ROS表达水平和SOD、CAT活力水平均升高(P<0.05),且随着浓度的升高,ROS呈现明显剂量-反应关系,SOD、CAT呈先升高后降低趋势;相同剂量不同组间比较,sCLU干预组的ROS表达水平小于同剂量GEM药物组(P<0.05);在GEM质量浓度为2.50和5.00 μg/mL时,sCLU干预组SOD活力水平小于同剂量GEM药物组(P<0.05),CAT活力水平大于同剂量GEM药物组(P<0.05)。结论：GEM可抑制MIA PaCa-2细胞增殖,在一定药物浓度范围内,sCLU可干预GEM引起MIAPaCa-2细胞内ROS表达水平和SOD、CAT酶活力表达水平的明显变化,sCLU在一定程度可能通过调节GEM氧化损伤而产生耐药。     

A diacetylenic spiroketal enol ether epoxide, AL-1, from Artemisia lactiflora inhibits 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced tumor promotion possibly by suppression of oxidative stress.

The inhibitory effects of the diacetylenic spiroketal enol ether epoxide AL-1 from Artemisia lactiflora on a variety of tumor promoter-induced biological responses such as oxidative stress as well as tumor promotion in ICR mouse skin were investigated. AL-1 inhibited TPA-induced intracellular peroxide formation in differentiated HL-60 cells, suggesting that this suppression might be attributable to the inhibition of O₂⁻ generation. In a double TPA application system in mouse skin, double pretreatments of AL-1 (810 nmol) significantly suppressed double TPA application-induced H₂O₂ generation. Pretreatment of AL-1 only before the second TPA treatment was sufficient to inhibit, while only with first treatment was not. From these results we concluded that AL-1 is a specific inhibitor of the activation phase in H₂O₂ production induced by double TPA treatments. In addition, AL-1 strongly inhibited tumor promoter-induced Epstein–Barr virus (EBV) activation in Raji cells (IC₅₀=0.5 μM), which was comparable to or even stronger than that of curcumin, a well-known antioxidative chemopreventer from turmeric. In a two-stage carcinogenesis experiment with TPA (topical application at 1.6 nmol) and 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA, at 0.19 μmol) in ICR mouse skin, topical application of AL-1 (at 160 nmol) significantly reduced tumor incidence, the numbers of tumors per mouse, and edema formation by 58% (P<0.01 in t-test), 20% (P<0.005 in χ²-test) and 42% (P<0.01), respectively. These results together indicate that an inhibitor of O₂⁻ generation is an effective chemopreventer of mouse skin carcinogenesis by their antioxidative property.     

淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧对维生素E琥珀酸脂诱导内质网应激的影响

目的：探讨淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧（ROS）对维生素E琥珀酸脂（VES）诱导内质网应激的影响。方法：将不同浓度（1、5、10和20 mmol/L）N-乙酰半胱氨酸（NAC）作用胃癌SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES处理12 h,经2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠（DCFH-DA）染色后,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS水平。另将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES处理细胞12 h,经DCFH-DA染色后,流式细胞术进一步检测细胞内ROS水平。将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES分别处理15和24 h后,分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting法检测内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达。结果：与单纯VES处理组相比,20 mmol/L NAC预处理组胃癌细胞内ROS下降最为明显（P < 0.05）。与对照组相比,20 μg/mL VES能够诱导胃癌细胞内GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达明显增加（P < 0.05）;而与单纯20 μg/mL VES处理组相比,20 mmol/L NAC对VES诱导GRP78和CHOP mRNA及蛋白表达具有显著的抑制作用（P < 0.05）。结论：在体外,淬灭胃癌细胞内ROS能够抑制VES诱导的内质网应激反应。     

异鼠李素通过减轻氧化应激延缓D-半乳糖诱导的人脐静脉内皮细胞衰老

目的：探讨沙棘中的重要成分异鼠李素（ISO）对细胞衰老的影响及机制。方法：采用D-半乳糖（D-Gal）诱导细胞衰老模型，取20～23代的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为4组：对照组、D-Gal组、D-Gal+ISO组（5 μmol/L）、D-Gal+ISO组（10 μmol/L）。其中D-Gal浓度为10 g/L，干预时间为72 h。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞活力；衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色试剂盒检测细胞衰老状态；各相关试剂盒检测细胞总活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量、总超氧化物歧化酶（SOD）活性和过氧化氢酶（CAT）活性。Western blot法检测衰老标志蛋白p21、p27和核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）及其下游蛋白表达水平。结果：ISO浓度≤10 μmol/L时对HUVEC无明显毒性作用；与对照组比较，D-Gal能够诱导细胞衰老指标SA-β-Gal活性增加（P<0.05）；提高p21、p27表达水平，提高细胞总ROS水平和MDA含量，降低总SOD和CAT活性，降低Nrf2及下游蛋白表达水平（P<0.05）。与D-Gal组比较，ISO能够降低细胞SA-β-Gal活性，抑制p21、p27表达，降低细胞总ROS水平和MDA含量，提高总SOD和CAT活性，增强Nrf2及下游蛋白表达（P<0.05）。结论：ISO可以通过减轻氧化应激，延缓D-Gal诱导的HUVEC细胞衰老，在此过程中激活Nrf2通路可能是其发挥抗衰老作用的重要机制。