逆转录病毒载体介导的反义白介素1β转换酶（ICE）部分？…

激活了细胞在机体清除肿瘤细胞起主要作用。然后激活Ｔ细胞在杀灭肿瘤细胞的同时也伴有自身凋亡，在肿瘤治疗中难以达到足够数量激活的Ｔ细胞来杀灭肿瘤细胞，因此，阻断激活Ｔ细胞凋亡，增加激活Ｔ细胞数量，有望提高肿瘤免疫治疗的疗效。本研究应用ＣＤ３诱导Ｊｕｒｋａｔ细胞系凋亡作为激活Ｔ细胞凋亡模型。应用逆转录病毒载体将反义ＩＣＥ转染Ｊｕｒｋａｔ，观察反义ＩＣＥ对ＣＤ３及抗Ｆａｓ单抗诱发Ｊｕｒｋａｔ细胞的凋亡影响     

Fas系统与肿瘤免疫逃逸的研究进展

Fas，又名ＣＤ９５或ＡＰＯ１，是细胞凋亡信号受体，通过与ＦasL结合诱导细胞凋亡。肿瘤细胞既可通过表达FasL的Ｔ细胞凋亡而逃逸免疫监视；又可通过cFLIP调控ＤＩＳＣ水平，上调凋亡抑制基因及诱导Ｆas基因突变等抑制Ｆas介导的细胞凋亡。基于上述机制，可从免疫细胞层面和肿瘤细胞层面两方面调节肿瘤免疫治疗。免疫细胞抗肿瘤凋亡作用可采用激动性抗体阻断其Fas表达、FasL基因或Fas反义寡核苷酸或抗凋亡基因的转入、利用细胞因子保护作用及Caspase蛋白酶抑制剂阻断其凋亡。在肿瘤细胞方面，应用抗Fas抗体、FasL反义寡核苷酸、Fas或Ｂax基因转入肿瘤细胞及某些化疗药物与细胞因子等作用，增加肿瘤细胞Fas敏感性，使之容易被免疫细胞诱导凋亡。     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞凋亡的双重阻断研究

目的通过阻断Fas/FasL介导的T细胞凋亡,建立快速制备大量激活的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的方法。方法选择FasL表达阳性的肝癌标本,分离肝癌细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),然后在体外将两者混合,并在CD28单抗共刺激下,激活制备特异性CTL。应用可溶性Fas受体阻断肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发激活T细胞凋亡,与对照组比较用流式细胞仪和DNA ladder Test同时检测阻断凋亡作用,通过3H掺入法和51Cr释放法了解T细胞增殖力及杀伤活性。结果流式细胞术仪检测未阻断组较阻断组和未阻断对照组凋亡率明显升高,未阻断组凋亡率达47．82％±0．13％,对照组静息性T淋巴细胞组为3．76%±0．25％,阻断组为8．22％±0．26％(P<0．01),DNA ladder显示未阻断组T淋巴细胞出现明显梯状条带,阻断组为阴性。51Cr释放法表明阻断后T淋巴细胞杀伤活性增加,较未阻断组及未阻断对照组差异有显著性(P<0．01)。3H掺入法检测证实可溶性Fas受体阻断激活T细胞凋亡后,细胞增殖明显升高,较未阻断组差异有显著性(P<0．01)。结论体外实验可获得大量激活T细胞,并可杀伤肿瘤细胞。     

FasL在激活骨髓细胞的表达研究

目的　探讨 Fasl(Fas- L igand)在 ABM(activated bone marrow)杀伤肿瘤细胞效应中的作用。方法　应用抗 CD3 单克隆抗体体外激活骨髓细胞 ,采用免疫荧光标记、流式细胞仪检测 ,观察了不同条件下 ABM细胞表面 Fas L 的表达。结果　未激活的骨髓细胞不表达 Fas L,r IL- 2激活后可见 Fas L 的表达 (7.0 4 %± 3 .4 4% ) ,抗 CD3单抗可促进其表达 (11.84 %± 4 .80 % ) ,三组比较具有显著性差异 (P<0 .0 0 5 )。结论　 ABM杀伤肿瘤细胞的机制与 Fas/ Fas L 介导的肿瘤细胞凋亡有关。     

Fas siRNA真核表达载体构建及其抑制Jurkat细胞凋亡的作用

 目的 构建Fas（CD95）特异性siRNA真核表达载体psilencircle-FasSi,转染Fas-FasL凋亡敏感细胞株Jurkat,研究其抗凋亡作用。方法 通过聚合酶链式反应（PCR）制备siRNA表达框架(SECs),转染Jurkat细胞,实时荧光定量PCR检测Fas mRNA抑制率,筛选出高效抑制Fas mRNA表达的siRNA;把筛选出的siRNA序列插入siRNA真核表达质粒psilencircle,构建psilencircle-FasSi;psilecircle FasSi转染Jurkat细胞,实时荧光定量PCR检测Fas mRNA、Western blot检测Fas蛋白;anti-Fas mAb刺激Jurkat细胞凋亡,流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡率。结果 酶切、测序证明成功构建了psilecircle-FasSi,实时荧光定量PCR及Western blot表明psilencircle-FasSi可抑制Fas mRNA和蛋白表达,流式细胞术检测证实psilencircle-FasSi可抑制Jurkat凋亡率。结论 我们成功构建了Fas特异性siRNA真核表达载体psilencircle-FasSi,它不仅可以下调Jurkat细胞的Fas表达而且可以显著抑制Fas-FasL途径诱导的凋亡。     

淋巴细胞凋亡的研究进展

近年来,人们对淋巴细胞的凋亡有了较深入的认识:在免疫反应过程中,淋巴细胞,包括激活的T细胞、B细胞以及未成熟的淋巴细胞表现为对细胞凋亡敏感.在细胞凋亡过程中,CD95(Fas)/CD95L(Fas配体,FasL)以及CD40/CD40L(CD40配体)之间的相互作用起了很重要的作用.它们通过激活T细胞的自我毁灭或杀伤激活的B细胞而调节免疫反应的强弱.T细胞的凋亡包括Fas:FasL的相互作用,Fas和FasL正调节T细胞杂交瘤的T细胞受体配体,然后以自分泌方式相互作用而引起细胞凋亡过程,即T细胞可以通过Fas-依赖途径杀伤自己本身;但B细胞进行激活诱导的细胞死亡过程(AICD)却不依赖于Fas,而是对T细胞介导的、FasL-诱导的细胞死亡敏感,表现为Fas非依赖性.     

中高度恶性淋巴瘤在化疗的基础上应用CD3AK生物细胞治疗的疗效研究

CD3AK细胞是由抗CD3单克隆抗体和IL-2共同激活诱导的肿瘤细胞,具有高效激活与扩增、长期存活、低IL-2依赖性、体内外抗肿瘤活性高及低毒副反应的特点.其抗肿瘤机理:(1)直接杀伤肿瘤细胞;(2)CD3非特异性激活的淋巴细胞介导的MHL非限制性溶瘤作用;(3)CD3单抗通过识别T细胞表面的CD3/TCR复合体,促使其产生TNF和IFN等多种细胞因子而杀伤肿瘤细胞;(4)CD3诱导癌细胞程序性死亡[1,2].     

转染嵌合性T细胞受体基因小鼠T淋巴细胞的体外抗肿瘤作用

目的:研究小鼠T淋巴细胞在转染嵌合性T细胞受体基因后的体外抗肿瘤作用.方法:应用重组DNA技术,将HER2特异性嵌合性T-细胞受体构建入逆转录病毒载体;转入包装细胞后,收集病毒上清,转染小鼠T淋巴细胞,转基因后的小鼠T淋巴细胞分别与HER2阳性(SK-OV-3)或阴性(MCF-7)的肿瘤细胞系共培养,检测其细胞因子γ干扰素释放,51Cr释放法检测CTL评价其抗肿瘤效应.结果:所构建载体经酶切鉴定符合要求,乒乓法转染包装细胞系GP E86,检测病毒滴度为1.2×106,Retronectin结合离心法转染经抗CD3/CD28单抗活化的小鼠T淋巴细胞,转染效率可达50%以上;转染嵌合性T细胞受体基因的T淋巴细胞与HER2阳性或阴性的肿瘤细胞系共培养后可检测到HER2特异性的细胞因子γ干扰素释放,51Cr释放法测CTL可见转染嵌合性T细胞受体基因T淋巴细胞对HER2阳性的肿瘤细胞具显著杀伤效应.结论:转染嵌合性T细胞受体基因的小鼠T淋巴细胞在体外可通过细胞因子释放和CTL效应发挥显著的抗肿瘤作用.     

人淋巴瘤细胞Jurkat通过Fas/FasL途径抑制人肺癌细胞A549的免疫逃逸

背景与目的 当机体发生肿瘤时,肿瘤细胞可以多种方式逃避免疫系统的监控而分裂生长,这就是肿瘤的免疫逃逸.研究表明,肿瘤细胞自身凋亡减少以及机体免疫细胞凋亡增加是肿瘤免疫逃逸的重要机制.Fas/FasL系统是介导凋亡的重要分子体系,本研究旨在通过观察人淋巴瘤细胞株Jurkat诱导人肺癌细胞株A549凋亡过程中凋亡信号分子Fas、FasL及casPase-8表达的改变,从而探讨Fas/FasL途径在肺癌细胞免疫逃逸中的作用.方法 人肺癌细胞株A549与人淋巴瘤细胞株Jurkat以不同比例分别进行共同培养,采用台盼蓝拒染法检测两种细胞存活率;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测两种细胞的凋亡率;Western blot技术检测A549细胞中Fas、FasL及caspase-8蛋白表达水平.结果 随着Jurkat/A549细胞比例逐渐增大,A549细胞的凋亡率明显增加,Jurkat细胞凋亡率显著减少;同时A549细胞中Fas及casPase-8蛋白的表达水平明显上调,而对FasL蛋白的表达水平无明显影响.结论 Jurkat细胞可能通过Fas/FasL途径介导了人肺癌细胞株A549的凋亡,从而抑制了A549细胞的免疫逃逸.     

腺病毒介导反义VEGF降低肿瘤诱导免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果

目的：本研究旨在探讨腺病毒介导的反义VEGF降低肿瘤诱导的免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果。方法：用反义VEGF修饰及反义VEGF与IL-2基因共同修饰MM45T，Li小鼠肝癌细胞，然后观察修饰后的肿瘤细胞的致瘤性；并在体内观察反义VEGF与IL-2基因诱导肝癌模型小鼠肿瘤细胞的凋亡，以及肿瘤组织中CD4^ ,CD8^ 细胞浸润情况。结果：反义VEGF降低了肝癌细胞MM45T.Li的致瘤性；增加了肿瘤组织周围CD4^ ,CD8^ 细胞浸润，改善了模型小鼠的免疫抑制状态，提高了IL-2抗肿瘤效果。结论：反义VEGF不仅可抑制新生血管的生成，而且可降低肿瘤诱导的免疫抑制，从而提高免疫系统对肿瘤细胞的识别，与IL-2免疫基因治疗相结合可明显提高对肿瘤的杀伤效果。     

蛋白质组学研究的主要策略及其在肿瘤研究中的应用

恶性肿瘤无限增殖的主要原因是细胞凋亡调控障碍。Ｓｕｒｖｉｖｉｎ是新近发现的凋亡抑制蛋白家族 (ｉｎ ｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎ ,ＩＡＰ)成员[1] ,特异性表达人类多种常见肿瘤中 ,而不存在于正常成人组织 ,能抑制ｃａｓｐａｓｅ活性而发挥抗凋亡作用[2 ] 。有研究表明[3 4 ] ,应用反义策略阻断ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性 ,诱导凋亡的发生 ,已成为肿瘤治疗的新亮点。本文构建了ｓｕｒｖｉｖｉｎ反义ＲＮＡ真核表达载体 ,为降低肿瘤细胞ｓｕｒｖｉｖｉｎ的表达 ,进一步研究肿瘤细胞…     

膜受体介导的细胞凋亡与细胞增殖

目的:观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞增殖,阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞增殖的关系。方法:用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用SubG1法和Annexin V/PI等方法通过流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡。结果:处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感,凋亡率是6%~8%。Molt-4、Jurkat细胞以及加入PHA刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡,凋亡率是15%~28%。经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后,进入细胞周期增殖的细胞较静止期的细胞凋亡率有明显增加。结论:膜受体介导的细胞凋亡与细胞增殖具有协同作用。     

抗APO-1单克隆抗体诱导HL-60抗药株细胞凋亡

肿瘤细胞对化疗药物的抗性，包括抵制药物诱导的凋亡，是临床肿瘤化疗效果差的主要原因之一。Fas／APO-1(CD95)是一个接收特异细胞凋亡信号(apoptotic signal）的受体分子。位于细胞膜表面。属于TNFR／NGFR家族，国外学者报道Fas／APO-1的天然配体FasL和识别Fas／APO-1的单克隆抗体均可激发表达该分子的正常T、B细胞和多种肿瘤细胞凋亡(apoptosis)，     

肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激研究

[目的]研究肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激的意义.[方法]以BCG和高聚生作为佐剂,用60Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激Balblc小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL-2、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB小鼠单克隆抗体,使之激活并增殖.应用苔盼蓝染色法计算细胞的增殖程度(TDLN T淋巴细胞);应用肿瘤肺转移动物模型观察激活后的TDLN T细胞的抗肿瘤效应;应用流式细胞仪检测TDLN T细胞经激活后胞内表达细胞因子水平的变化.[结果]多种单抗联合刺激TDLN T细胞在肾癌肺转移动物模型体内具有较强免疫活性,并产生明显抑瘤效应,抑瘤率达(68.8±4.3)%(P＜0.05).TDLN T细胞的数目也得到了增殖,其中含有IL-2、高聚生、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB单抗的实验组被激活的T淋巴细胞的数量较不含4-1BB单抗的其它实验组增加快,增殖倍数达229±19(P＜0.01).并且此组细胞内表达IFN-γ的水平也较其他实验组高,表达率达(48.23±5.1)%(P＜0.01).[结论]抗4-1BB单抗对激活后的TDLN T细胞中IFN-γ的表达水平的提高起关键作用.该研究为肾癌的肿瘤疫苗研制和体内治疗奠定了实验基础.     

补体调节蛋白CD59与肿瘤

作为补体终末阶段调节蛋白的CD59分子在多种实体瘤细胞表面高表达.高表达的CD59分子能够阻断补体激活途径降低补体系统对肿瘤细胞的溶解杀伤作用,最终导致肿瘤细胞逃避机体免疫监视.研究利用单克降抗体、细胞因子等抑制CD59的抗补体活性可在肿瘤免疫治疗中取得一定的疗效.     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅳ抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的PBL增殖与凋亡共存现象

抗CD3单抗TCR/CD3复合物中的CD3分子相互作用,通过信号传导系统引起T细胞功能的不同变化,如诱导T细胞活化增殖,诱导无反应性(unresponsiveness)和细胞凋亡。但抗CD3单抗这几种性质不同,看似矛盾的作用之间有何内在联系及规律是值得深入探讨的。我们在研究抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK过程中,观察到抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的细胞增殖与凋亡共存的现象。(1)抗CD3单抗和rIL-2共刺激法可诱导人外周血淋巴细胞活化增殖,如细胞数扩增,~3H-TdR掺入和介导细胞毒活性等;(2)形态学检查表明同一培养体系中不仅可检测到活化增殖的细胞、有丝分裂的细胞,也可检测到凋亡的细胞(这些细胞体积小,核缩小甚至断裂,染色质边集,细胞膜及细胞浆向表面突出及崩解形成凋亡小体等),它们都具有淋巴细胞的特征。(3)在抗CD3单抗和rIL-2共刺激后10小时检测不到凋亡的特征性DNA片段,第4     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅳ抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的PBL增殖与凋亡共存现象

抗CD3单抗TCR／CD3复合物中的CD3分子相互作用，通过信号传导系统引起T细胞功能的不同变化，如诱导T细胞活化增殖，诱导无反应性(unresponsiveness)和细胞凋亡。但抗CD3单抗这几种性质不同，看似矛盾的作用之间有何内在联系及规律是值得深入探讨的。     

食管癌中调亡相关蛋白的表达及其与肿瘤免疫的关系

凋亡相关基因如 ICE(IL-1βconverting enzyme),Fas/Apo-1,Fas-L等与细胞毒T细胞(cytotoxic T cell,CTL)效应以及免疫应答的调节包括活化诱导的细胞死亡(Activation inducedcell death,AJCI)等多项免疫功能有关. 为了解凋亡相关蛋白在肿瘤免疫中的作用,对食管癌中ICE,Fas,Fas-L及凋亡细胞进行标记,探讨其在肿瘤免疫中的作用.采用免疫组化LSAB的方法对46例食管癌手术切除标本中促凋亡相关蛋白ICE,FaS,Fas-L蛋白进行标记,并对其中13例进行TdT介导dUTP缺口末端标记(TdT mediated dUTP nick end labeling,     

放射治疗对可溶性Fas配体在肺癌和食管癌中表达影响的初步分析

肿瘤的发生、发展及转归过程中机体的免疫防御起着至关重要的作用.Fas/Apol-1,又名CD95分子,是属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)及神经生长因子(NGFR)家族成员,是一种I型细胞膜蛋白.Fas配体(FasL)是TNF相关的Ⅱ型跨膜蛋白,主要表达于活性T淋巴细胞.Fas是细胞表面的一种凋亡信号受体,具有诱导凋亡的能力.分别表达Fas和FasL的细胞相结合时,可导致表达Fas的细胞凋亡.T淋巴细胞表达的FasL可使表达Fas的肿瘤细胞凋亡.而Fas和FasL均可以产生可溶性分子,即可溶性Fas和FasL(sFas,sFasL).它们在细胞凋亡中发挥调节作用.本文通过肺癌和食管癌患者进行放射治疗前后的sFasL的变化,观察放射治疗导致细胞凋亡的现象,探讨放射治疗的作用和机制.     

抗肿瘤药物诱导细胞凋亡机制研究进展

抗肿瘤药物通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤活性，其作用机制的研究主要有：①激活Fas／FasL(CD95／Apo-1)信号系统，抗Fas／Apo-1抗体则能降低药物诱导凋产的敏感性。通过DR4、DR5／TRAIL途径诱导细胞凋产。②众多基因参与了细胞凋产。野生型p53抑制细胞增殖．突变型p53抑制细胞凋亡。bcl-2基因过表达与肿瘤多药耐药有关，bcl-2发挥其抑制凋亡的效应需要与其家族的其它成员如bax相互协调。⑧Caspase-3的活化诱导凋产：有些细胞毒药物可直接活化Caspase促使细胞凋亡。