供血者和血制品中一种新DNA病毒(TTV)的检测

背景:一种新发现的DNA病毒,即输血传播病毒(TTV),被认为能导致输血后肝炎。作者调查了英国供血者TTV病毒血症的发病率及其污染如凝血因子Ⅷ和Ⅸ之类的血制品的程度,也调查了在原因不明的爆发型肝衰(FHF)TTV可能的病原作用。疗法:作者从供者和FHF患者的血浆或血液以及从血制品(凝血因子Ⅷ和Ⅸ浓缩物,免疫球蛋白制品)中提取DNA。通过PCR检测TTV,所用引物来自TTV染色体组的保守区。发现:在1000位无报酬常规献血者里有19位(1.9％)被检测患者TTV病毒血症。与感染肝炎病毒和其它肠道传染病毒的供血者     

外周血单个核细胞DNA提取方法的研究进展

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件.外周血作为一种常用的临床检测材料,如何从外周血单个核细胞中快速、高效的分离提取基因组DNA,对于临床血液检验与分析非常重要.目前,DNA的抽提方法有很多,如酚-氯仿法、盐析法、离心吸附柱法等人工方法,以及磁珠法等半自动方法及试剂盒法.本文就从外周血血液中提取DNA方法的原理、具体操作步骤及方法评估等给予简要的综述.     

介绍一种外周血单个核细胞RNA提取方法

分子生物学实验中RNA提取纯化影响因素较多 ,由于RNA核糖残基 2 / 和 3/ 位上的羟基存在 ,使其更易受自然界中广泛存在的RNA酶降解。目前常用的RNA提取方法有酸性酚 硫氰酸胍 氯仿提取法、oligo 纤维素层析法等[1] 。组织和细胞单相裂解液也有商品化供应 ,如Trizol、Isogen、RN     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒核酸定量检测

目的　探讨乙肝患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中HBVDNA定量检测及其临床意义。方法　用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 ,细胞计数并提取单个核细胞及相应血浆中HBVDNA ,用荧光实时定量PCR法检测单个核细胞和血浆中HBVDNA含量。结果　对 188例乙型肝炎患者的外周血单个核细胞和相应血浆中HBVDNA定量检测 ,结果发现 :①外周血单个核细胞HBVDNA检出率为 80 3% ,血浆中HBVDNA检出率为 72 9% ,两者检出率无差异 (χ2 =3 13,P >0 0 5 ) ,检出结果具有一致性 (χ2 =8 2 5 2 ,P <0 0 1)。②在HBV血清学标志为HBsAg( )HBeAg( )到HBsAg( )HBcAb( )各组中 ,其血浆和PBMCs中HBVDNA检出率和含量均逐渐降低 ,各组中血浆和PBMCs中HB VDNA含量间具有相关性 (P <0 0 5 )。③在不同类型乙型肝炎患者中 ,除 18例急性肝炎患者的血浆和PBMCs中均检出HBVDNA并含量较高外 ,在其余的病例中 ,随着病情严重 ,PBMCs中的检出率明显升高而血浆中的检出率明显降低 ;而除急性肝炎组PBMCs和血浆中HBVDNA含量不具有相关性外 (P >0 0 5 ) ,其它各组间均具有相关性 (P <0 0 5 )。结论　PBMC中的HBVDNA持续存在在乙肝患者的发病机制起着重要作用 ,PBMCs中的HBVDNA检测在发病机制和治疗监测中可能有重要意义     

外周血单个核细胞中检出丙型肝炎病毒

约80％的丙型肝炎病毒(HCV)慢性携带者可查出其血清中的抗C_100抗体循环抗体,而大多数急性感染的病人要经过数月才有血清学改变。但一些非感染的HCV-RNA阴性的供血员也存在这一抗体。因而要求有一种敏感的检查HCV的方法。该文作者自血浆和外周血单个核细胞(PBM)中提取RNA为模板,采用逆转录聚合酶链反应(RT-     

外周血单个核细胞分离方法探讨

目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)的不同分离方法对分离效果、贴壁能力以及淋巴细胞的增殖活性的影响。方法 取肝素抗凝血，分别用羟乙基淀粉(hydrixyethylstarch，HES)自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficoll密度梯度离心法三种方法分离单个核细胞，直接进行贴壁计数及多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer，CIK)培养。结果 HES自然沉降法、HES离心沉淀法、Ficou密度梯度离心法分离的PBMC回收率分别为86．4％、86．0％、85．1％。结论 羟乙基淀粉离心沉淀法可有效地分离PBMC。     

浓缩外周血单个核细胞查肿瘤细胞

浓缩外周血单个核细胞查肿瘤细胞廖军鲜马一盖王银平王质彬蒋玉玲钟明华（中日友好医院血液科，北京１０００２９）关键词外周血单个核细胞浓缩肿瘤细胞在实体瘤病人的外周血中可存在微量的循环肿瘤细胞〔１〕，尽早发现这些肿瘤细胞不仅能为诊断和分期提供线索，而且有利...     

外周血单个核细胞前凝血质活性测定及应用

外周血单个核细胞前凝血质活性（ＰＣＡ）是监测排异反应的敏感指标。通过淋巴细胞分离液将外周血的单个核细胞分离出，经液氮冻融及超声处理成匀浆，和乏血小板血浆，ＣａＣｌ＿２溶液按比例混合后，检测凝固时间（ｓ）。用ｓｉｍｐｌａｓｔｉｎ作标准制备标准曲线、将凝固时间换成Ｕ／Ｌ，提高了结果的可比性。研究了各种影响因素，发现血小板的存在可明显缩短凝固时间，红细胞也有影响，但比血小板小得多，同时研究了去除血小板及红细胞的方法。用于猪同种异体节段性小肠移植中监测排异反应，结果满意。     

外周血单个核细胞的凝血质活性测定及应用

外周血单个核细胞前血质活性是监测排异反应的敏感指标。通过淋巴细胞分离液将外周血的单个核细胞分离出，经液氮冻融及超声处理成匀浆，和乏血小板血浆，ＣａＣｌ２溶液按比例混合后，检测凝固时间（ｓ）。     

获得性免疫缺陷综合征儿童抗病毒治疗后外周血单个核细胞线粒体DNA基因D环区序列研究

目的研究我国人类免疫缺陷病毒（HIV）感染儿童长期抗反转录病毒治疗（ART）后对外周血单个核细胞（PBMC）线粒体DNA基因D环（D-loop）区序列的影响。方法选择34例ART的HIV感染儿童与21例正常对照儿童,提取两组儿童PBMC内DNA,普通聚合酶链反应（PCR）法扩增线粒体DNA D-loop区序列并测序。结果 ART组儿童PBMC内线粒体DNA D-loop区碱基变异数（6.29±2.25）bp高于对照组儿童（4.71±2.53）bp（P〈0.05）,ART组患儿PBMC线粒体DNA D-loop区共有50个位点出现碱基改变,其中有3个位点的变异频率在两组儿童间差异有统计学意义,即16362T→C、131T→C、489T→C。结论 ART可能导致儿童PBMC线粒体DNA Dloop区基因变异增加。     

分离外周血单个核细胞的条件优化

目的比较不同抗凝剂、离心力及离心时间对葡聚糖-泛影葡胺(Ficoll)密度梯度离心法分离单个核细胞的影响,优化实验方案。方法取肝素、EDTA及2种抗凝剂混合后的3种不同抗凝血,采用Ficoll法进行分离,用血细胞分析仪进行分类和计数,计算回收率和纯度;同时对EDTA抗凝血进行不同离心力及离心时间的处理,优化分离效果。结果 EDTA组获得PBMC回收率为(51.32±50.21)%,纯度为(45.38±22.14)%;肝素组获得PBMC回收率为(24.52±19.10)%,纯度为(78.46±11.91)%;EDTA+肝素组获得PBMC回收率为(56.32±24.30)%,纯度为(80.27±12.44)%。经单因素方差分析,PBMC回收率方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P0.05),EDTA组回收率较高,而肝素+EDTA组与EDTA组回收率比较,差异无统计学意义(P0.05);PBMC纯度方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P0.05),肝素组PBMC纯度较高,而肝素+EDTA组与肝素组比较,纯度则差异无统计学意义(P0.05);PBMC存活率方面,肝素+EDTA组与肝素组、EDTA组比较,均差异无统计学意义(P0.05)。对EDTA抗凝血进行单个核细胞分离实验表明,在离心力为600×g(1 800r/min),离心时间为25min时分离效果最佳。结论肝素+EDTA组回收率、纯度与单种抗凝剂实验组相比,结果差异无统计学意义(P0.05),故在实验过程中可以混合两种抗凝全血进行细胞分离。EDTA抗凝血在离心力为600g(1 800r/min)、离心时间为25min时,分离单个核细胞效果最佳。     

利用外周血单个核细胞生产成熟红细胞

体外制备红细胞的方法大多使用脐血、骨髓或外周动员的CD34＋细胞或胚胎干细胞作为起始材料.本研究利用外周血单个核细胞为原料在体外生产成熟红细胞.以血液滤涂白细胞后剩余的白膜层为原料,从中分离出单个核细胞,然后通过4步培养法制备成熟的红细胞.结果表明：经过不同细胞因子组合的诱导以及小鼠基质细胞系MS-5的支持培养,外周血单个核细胞的扩增倍数达到约1 000倍,其中约90％的细胞是与正常红细胞形态相似的无核成熟红细胞.集落形成能力分析显示,本研究培养体系可使单个核细胞中的祖细胞增殖并且只向红系方向分化.结构和功能分析结果表明,体外培养出的红细胞的平均细胞体积（MCV）为118±4fl,比正常红细胞（80-100 fl）稍大.平均血红蛋白含量（MCH）为36±1.2 pg,比正常的红细胞水平（27-31 pg）稍高.红细胞的最大变形指数（DImax）为0.46,接近正常红细胞水平.葡萄糖6磷酸脱氢酶及丙酮酸激酶的含量与年轻红细胞的特性一致.结论：利用外周血白膜层中含有的造血干祖细胞,通过体外培养能够生产出成熟红细胞,它是一种取材方便、成本低廉的红细胞生产原料,本研究培养体系适于利用单个核细胞生产成熟红细胞.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞NF-κB DNA结合活性测定及其临床意义

目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者NF-κB DNA结合活性变化及其意义.方法:6例SLE患者,5例健康人作为对照.NF-κB DNA结合活性测定采用凝胶滞留电泳.结果:健康对照组5例外周血单个核细胞(PBMC)NF-κB凝胶滞留电泳均为阴性.6例SLE患者中5例阳性,1例阴性.以血清抗dsDNA抗体的滴度为指标,5例显著升高者的NF-κBDNA结合活性也显著升高,1例阴性.NF-κB DNA结合活性与抗dsDNA抗体的滴度呈显著正相关.结论:SLE的NF-κB DNA结合活性显著升高,且与病情活动性有关.     

外周血单个核细胞在精神分裂症中的作用

精神分裂症是一种复杂且病因未明的慢性精神疾病,目前诊断主要依据患者的临床表现、医生对症状的观察及评估,缺乏客观的生物学指标,导致临床诊断存在一定困难。近年来,有研究发现免疫炎症反应在精神分裂症的发病机制中发挥作用,通过抗炎治疗后部分患者的精神分裂症症状可在一定程度上缓解,免疫细胞在精神疾病诊疗中的作用逐渐受到重视。本文主要综述外周血单个核细胞作为探索精神分裂症生物标志物的载体在疾病发病机制中的作用及潜在的诊断意义,以期增加对精神分裂症免疫表型理解。     

乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞及血清内HBV－DNA的检测及其意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测急性和慢性乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为６３．８％。其中，急肝患者阳性率为７８．６％；慢迁肝患者为５６．３％；慢活肝患者为５７．１％。ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－ＤＮＡ和ｅ抗原有一致性，但ＨＢｅＡｇ阴性者中也有部分患者的ＰＢＭＣ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在。本法消除了血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＰＢＭＣ自身ＤＮＡ的干扰，并且与传统分子杂交方法相比，工作量大大减少。     

乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞及血清内HBV—DNA的检测及…

应用聚合酶链反应检测急性和慢性乙肝患者外周血单个核细胞中的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为６３．８％。其中，急肝患者阳性率为７８．６％；慢迁肝患者为５６．３％；慢活肝患者为５７．１％。ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－ＤＮＡ和ｅ抗原有一致性。但ＨＢｅＡｇ阴性者中也有部分患者患者的ＰＢＭＣ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在。