L-精氨酸对液体保存血小板的保护作用研究

目的研究在血小板4℃液体低温保存体系中添加L-精氨酸对血小板保存效果的影响。方法制备新鲜富含血小板血浆(PRP)5份,每份PRP分为7份平行样品。一份为对照组22℃保存,另一份为4℃保存,其余5份加入不同浓度L-精氨酸溶液,保存第1天到第5天检测血小板膜CD62P表达率的变化,CD62P表达率最低的L-精氨酸浓度为最佳介入浓度。所有数据经配对资料采用t检验分析。结果血小板4℃保存并加入L-精氨酸4mmol/L时每天CD62P表达率与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论血小板4℃液体低温保存时L-精氨酸的最佳介入终浓度为4mmol/L,在这一浓度下L-精氨酸能有效抑制血小板膜CD62P表达,提高血小板的保存质量。     

血小板4℃保存能改善其功能吗?

1969年,Murphy与Gardner报道,4℃条件下保存的血小板输人人体后会迅速地被血液循环清除.他们以及其他人也证明了室温(22C)保存的血小板具有更好的恢复功能和生存的特点,低温保存的血小板生存时间为2天～3天,室温保存的生存时间长达7天～9天.低温保存的血小板在人体内会迅速被清除,这对血液的保存产生了深刻的影响.数十年来,所有的血小板制品均在室温下保存,为防止细菌生长,将血小板保存期限制到5天.     

血小板4℃保存能改善其功能吗?

1969年，Murphy与Gardner报道，4℃条件下保存的血小板输入人体后会迅速地被血液循环清除。他们以及其他人也证明了室温（22℃）保存的血小板具有更好的恢复功能和生存的特点，低温保存的血小板生存时间为2天～3天，室温保存的生存时间长达7天～9天。     

血小板冷冻保存的研究

用终浓度4％二甲基亚砜(DMSO)作为防冻剂,于—30℃和—80℃冷冻保存血小板以开展低温保存血小板的输注。体内外研究结果表明:DMSO对血小板粘附和单一诱聚剂所致的聚集有可逆性抑制作用;洗涤去除DMSO后,粘附、聚集可以恢复。联合诱聚剂所致的聚集不受DMSO影响。冻存后的血小板粘附、聚集和低渗休克反应较冻前有所降低,与保存时间(1和3个月)无关。—80℃保存的血小板质量优于—30℃保存者。输注—80℃保存的血小板可提高患者的血小板数,因而能有效地预防和控制因血小板减少导致的出血。     

深低温保存增强血小板促凝血功能的研究

为了探索血小板冰冻保存后膜表面促凝血活性相关分子变化与冰冻血小板体内即刻止凝血功能增强之间的可能联系，用流式细胞术检测了新鲜血小板冰冻保存前后V因子结合能力、血小板膜表面GPIb—Ⅸ-V分子（CD42a）密度，用血凝仪测定激活血小板诱导血浆凝固时间（aPACT）变化，用血细胞计数仪测定血小板计数、NIPV和PDW。研究结果表明，与新鲜血小板比较，深低温保存后血小板激活血小板诱导血浆凝固时间缩短43．9％；结合V因子的荧光强度平均增加117％；结合膜表面GPIb—Ⅸ—V分子的荧光强度增加32％。结论：冰冻血小板体内即可止凝血功能增强，可能与血小板冰冻保存后膜表面促凝血活性分子表达增加或功能增强，促凝血功能明显增强，发挥快速止血功能有关。     

改良血小板添加液低温(10℃)保存血小板的动物实验研究

目的对添加海藻糖的血小板添加液替代70%血浆冷藏的血小板进行动物体内输注效果评价。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板,将浓缩血小板分3组保存。血浆常温组:添加100%血浆,22℃保存;添加液低温组:添加70%PAS-ⅢM/30%血浆,10℃保存;冰冻保存组:添加100%血浆,-85℃保存。以新鲜血小板为对照,常温血浆保存组在d 3,添加液低温保存组在d 3、7、9,冰冻保存组在d 20复苏后分别检测血小板缺乏兔模型的血小板24 h回收率和生存率。结果除保存9 d的添加液低温组血小板存活率明显低于新鲜血小板存活率(P<0.05)外,血浆常温组、添加液低温组以及新鲜血小板的24 h回收率和存活率相互比较差异均无显著统计学意义(P>0.05)。冰冻保存组血小板24 h回收率和存活率均低于其他各组(P<0.05)。结论改良的PAS-ⅢM能够替代血浆在低温条件下用于血小板的保存,能维持血小板的体内功能。     

糖基化修饰血小板冷藏稳定性研究

本研究旨在观察尿苷二磷酸半乳糖（UDP-6ai）糖基化修饰人血小板的稳定性、理化指标及体外功能变化。实验分为室温对照组、冷藏对照组以及修饰组（U＋4组和4＋U组）。机采人浓缩血小板悬液，4℃保存前或后添加适量UDP—Gal，进行糖基化修饰，分别于0、1、3、5、7、14天，通过荧光标记识别血小板膜糖蛋白末端半乳糖残基的凝集素（FITC—RCAⅠ）检测糖基化修饰效果；pH计检测血小板悬液pH值；血细胞计数仪检测血小板平均体积；比浊法测定血小板聚集率；流式细胞术检测血小板活化标志CD62P、血小板膜蛋白CD42b及Ps的表达。结果表明：保存14天时，修饰组血小板RCAⅠ结合率是室温组的5—6倍；修饰组血小板悬液pH低于室温组，但二者之间无显著性差异（P〉0．05）；保存14天时室温组和修饰组血小板平均体积分别为10．6±1．9fL和11．14±1．1fL，二者之间无显著性差异（p〉0．05）；各组体外聚集活性在保存过程中均逐渐下降，但修饰组优于室温组（p〈0．05）；流式检测结果显示，保存1—5天修饰组CD62P、CD42b和Ps表达的阳性率与新鲜血小板无显著性差异（P〉0．05），但保存14天时，CD62P和Ps表达的阳性率升高，CD42b表达的阳性率降低，与新鲜血小板相比差异极显著（p〈0．01）。结论：在修饰血小板保存过程中，糖基化修饰的效果稳定，修饰血小板的pH和平均体积均处于正常值范围之内，聚集活性良好，优于室温保存组，但在保存5天后表现出不同程度的活化。     

机采血小板保存期内血小板聚集功能和可溶性P-选择蛋白的变化

本研究探讨保存期内的机采血小板的聚集功能和可溶性P-选择蛋白含量的改变。收集20份机采血小板样品，分别在保存期第1天（0—24小时）、第2天（24—48小时）、第3天（48—72小时）、第4天（72—96小时）和第5天（96—120小时）检测血小板的聚集功能和可溶性P-选择蛋白含量。结果表明：以ADP作为诱导剂，保存期内机采血小板的血小板聚集功能降低明显，与第1天组比，组间差异均有统计学意义（P均〈0．01），第4天组的血小板最大聚集率≤3％；血浆可溶性P-选择素含量则随着保存时间的延长逐渐升高，与第1天组比，组间差异均有统计学意义（p均〈0．05）。结论：机采血小板在保存期内存在持续活化，且聚集功能下降明显，从第4天开始几乎已完全丧失对ADP的致聚反应，提示机采血小板的体外保存损伤应该引起高度重视。     

AS-3红细胞4℃保存42天后复壮和低温保存的影响

背景 FDA已批准NUTRICEL(AS-3)4℃保存红细胞浓缩物(RBC)42天。在RBC保存末期,携氧功能降低和ATP水平下降。作者研究了低温保存后复壮对AS-3红细胞的存活能力及功能的影响。方法 研究在两个血液中心进行。每个中心22个健康的无偿献血者每人捐献1单位血液。RBC浓缩物在4℃在AS-3中保存42天。10单位用Rejuvesol~R(enCyte systems,     

海藻糖对低温保存胸骨中bcl-2和bax基因表达的影响（英文）

背景：研究已经证实海藻糖对低温保存中的胸骨具有保护作用,但作用途径尚不清楚。目的：观察海藻糖对低温保存胸骨bcl-2和bax基因表达的影响。方法：新鲜配置4组保存液：低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组、低钾右旋糖酐＋海藻糖组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组＋海藻糖组。切取SD大鼠胸骨后立即分别放入含上述4种溶液的冻存管中低温保存。抽取新鲜大鼠胸骨组织和低温保存120d的4组标本,采用RT-PCR方法检测不同保存液保存的胸骨及新鲜胸骨bcl-2和bax基因mRNA表达量。结果与结论：低钾右旋糖酐＋海藻糖组bcl-2表达量高于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组（P〈0.01）,但bax表达量低于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组（P〈0.01）;低钾右旋糖酐＋二甲基亚砜组＋海藻糖组bcl-2表达量最高,bax表达量最低,基本接近新鲜骨组织（P〉0.05）。结果提示海藻糖可能通过增强bcl-2基因、抑制bax基因的表达保护低温保存中的胸骨细胞活性,其与二甲基亚砜合用保护作用更好。     

海藻糖对低温保存胸骨中bcl-2和bax基因表达的影响

背景:研究已经证实海藻糖对低温保存中的胸骨具有保护作用,但作用途径尚不清楚.目的:观察海藻糖对低温保存胸骨bcl-2和bax基因表达的影响.方法:新鲜配置4组保存液:低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组、低钾右旋糖酐+海藻糖组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组+海藻糖组.切取SD大鼠胸骨后立即分别放入含上述4 种溶液的冻存管中低温保存.抽取新鲜大鼠胸骨组织和低温保存120 d的4组标本,采用RT-PCR方法检测不同保存液保存的胸骨及新鲜胸骨bcl-2和bax基因mRNA表达量.结果与结论:低钾右旋糖酐+海藻糖组bcl-2表达量高于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组(P < 0.01),但bax表达量低于低钾右旋糖酐组、低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组(P < 0.01);低钾右旋糖酐+二甲基亚砜组+海藻糖组bcl-2表达量最高,bax表达量最低,基本接近新鲜骨组织(P > 0.05).结果提示海藻糖可能通过增强bcl-2基因、抑制bax基因的表达保护低温保存中的胸骨细胞活性,其与二甲基亚砜合用保护作用更好.     

冰冻血小板制备研究

[目的]探讨冰冻单采血小板制备的可行性,为其临床应用提供可靠依据.[方法]通过认真选择献血员,单采血小板,并对40袋新鲜血小板进行计数等质控,用二甲基亚砜（DMSO）作冰冻保护剂,-80℃深低温保存1年内,解冻后观察外观,分别进行计数、计算回收率、测定PH值、粘附率、无菌试验,并且与新鲜血小板进行比较.[结果]-80℃保存冰冻单采血小板1年内血小板计数、pH值、粘附率与冻前新鲜血小板进行比较差异无显著性（P〉0.05）;血小板平均体积、血小板体积分布宽度冰冻前后差异有显著性（P〈0.01）,保存1年内平均回收率为90.49% , 无菌实验无细菌生长.[结论]-80℃深低温保存冰冻血小板质量达到标准要求,可以应用于临床.     

生物素-X—N-氢氧化琥珀酰亚胺和^ⅢIn—oxine-标记的狒狒的自体新鲜及冻干重建血小板的存活

背景及目的 按照食品及药品管理局（FDA）的规程，血小板在液态-22℃下可以保存5天；在6％的二甲基亚砜（DMSO）-80℃冰冻条件下可以保存2年，5％的二甲基亚砜-150℃条件下可以保存3年。了解冻干对血小板的影响的研究已有不少。在本研究中，作者测定了狒狒的自体冻干重建血小板的存活情况。材料及方法作者研究了新鲜狒狒血小板和分别用多聚甲醛、冰冻、冻干、解冻和重建处理的狒狒血小板。     

深低温保存新鲜富含血小板血浆质量分析

为了评价批量制备的深低温保存富含血小板血浆(cryo-FPRP)的效率和效果,在优化建立的无偿献血者血小板的批量分离和制备cryo-FPRP过程中测定了ACD抗凝的200ml全血、FPRP、含5%DMSO的FPRP(DM-SO-PRP)和-80℃冰箱然冰冻保存后复温的FPRP(Cryo-FPRP)的血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血浆内pH、血浆乳酸(LA)浓度和乳酸脱氢酶(LDH)浓度、细菌培养、血小板CD62p阳性率、PAC-1阳性率及抗GPIb-Ⅸ-Ⅴ荧光强度,也测定了FPRP和cryo-FPRP的促凝血活性.结果表明①血小板的总平均得率为70%;FPRP中残余的红细胞≤1×109/袋;白细胞≤1×107/袋.②血浆pH、LA浓度和PAC-1阳性率在整个制备和保存过程中没有明显变化.③血浆内LDH、血小板CD62p阳性率和血小板抗GPIb-Ⅸ-Ⅴ荧光强度在血小板冰冻保存后出现明显升高.④与FPRP比较,cryo-FPRP诱导的血浆凝固时间明显缩短.结论①本研究选择的离心分离制备FPRP条件可高效分离无偿献血者的血小板,同时不会导致血小板激活率增加.②深低温保存无偿献血者的新鲜富含血小板血浆可有效防止代谢产物的积累和pH下降,并且可以高效预防血小板GPⅡb/Ⅲa的激活.③冰冻保存后部分血小板胞膜受到明显损害.④血小板胞膜表面GpIb-Ⅸ-Ⅴ复合物的数量增加,促凝血活性明显增强.     

输全血或输血浆的选择

全血有两种 :一种为新鲜全血 ,即采集后 3天内的全血 ,至多不超过 5天 ;另一种为陈旧全血 ,即采集后贮存超过 5天的全血。新鲜全血中含有各种血细胞(包括红细胞、白细胞、血小板 )及血浆 (主要包括白蛋白、球蛋白、凝血因子等 )。血液在 4℃以下保存 ,血小板在 2 4小时内开始减少 ,至第 5天全部破坏 ;白细胞最多能保存 5天 ;红细胞寿命相对较长 ,保存 2 1天仍有 70 %成活。所以 ,对于保存 5天以上的库存血来说 ,其主要成分仅为红细胞。新鲜血浆含有正常量的全部凝血因子 ,如果在采集数小时内于 -30℃冰冻 ,可贮存 1 2个月 ,其中凝血因子很少…     

改良血小板添加液低温液态保存血小板的形态及功能研究

本研究探讨使用改良的血小板添加液替代70％自体血浆在低温（10℃）液态条件下对血小板的保存效果。采集6名供者单采血小板,每一名供者单采血小板平均分为3组,A组（常规保存组）加入100％血浆、22℃保存：B组（添加液10℃保存组）加入70％PAS—ⅢM／30％血浆、10℃保存;C组（冰冻保存组）加入100％血浆和海藻糖、-85℃保存;另设D组（血浆4℃保存组）加入100％血浆、4℃保存,作为扫描电子显微镜对照组。A、B组在第1、5、7、9天取样,C组在20天后复苏取样,分别检测CD62p、HSR、PAgT、LDH的变化。血浆常温组、添加液低温组于保存后第3、9天取样扫描电镜观察,血浆低温组于保存后第3天取样观察．冰冻组在20天后复苏取样观察,同时使用新鲜血小板作为对照。结果表明,保存期内随保存时间延长,A组和B组CD62p表达增加,HSR和最大聚集率降低;A组的LDH释放、CD62p表达、HSR、血小板最大聚集率与B组比较有显著统计学差异（P〈0．05）。C组LDH释放明显较其他两组增多,但CD62p表达较少（P〈0．05）。A、B组血小板形态保持较好,C组血小板形态保持差。结论：改良的PAS—ⅢM保存液能够替代血浆用于血小板的保存,在低温条件下能够很好地保护血小板的功能,保存效果优于血浆常温保存。     

深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的差异表达

目的了解单采血小板在深低温保存过程中凋亡相关microRNA(miRNA)的表达改变。方法应用miRNA微孔板芯片技术分析-80℃保存不同时间单采血小板凋亡相关miRNA表达谱的差异,同时利用qRT-PCR技术验证该结果的准确性;采用生物信息学软件预测差异表达miRNA可能的靶基因。结果与新鲜单采血小板相比,凋亡相关miRNA表达谱在血小板-80℃保存5 d时无明显变化、保存7 d时仅有2种明显上调变化的miRNA:miR-216和miR-296。选择表达谱中miR-216 miR-296 miR-7和miR-16共4种miRNA做qRT-PCR验证:以新鲜血小板表达水平为基准值1,-80℃保存5、7 d后miR-216的相对表达量分别为1.81±0.21和2.88±0.23,miR-296的相对表达量分别为2.27±0.20和3.85±0.17,miR-7的相对表达量分别为0.89±0.06和0.76±0.03,miR-16的相对表达量分别为1.12±0.35和1.40±0.32,miR-216和miR-296在7 d保存过程中表达上调(P0.05),miR-7和miR-16的表达未发生明显变化(P0.05)。结论短期(7 d)深低温保存单采血小板凋亡相关miRNA的表达谱接近新鲜单采血小板。     

以尿苷二磷酸半乳糖为添加剂冷藏兔血小板的研究

本研究探讨以尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)为添加剂的血小板冷藏保存方法。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PC),在悬液中添加UDP-Gal,放4℃冰箱储存10天。尔后观察血小板(Plt)数量?血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)?血小板聚集功能(PagT)?血小板促凝活性实验(PF3aT和APCT)和血小板凋亡(apoptosis)的变化。将冷藏兔血小板用Cr51标记后,检测输入兔体内后的血小板生存时间。结果表明加入UDP-Gal冷藏保存10天后的PC的Plt、MPV、PDW、血小板促凝血活性与新鲜PC相比均无显著性变化(P(0.05);而冷藏对照PC的Plt明显减少,MPV、PDW显著增大,血小板促凝血活性减低,与新鲜PC相比差异有显著性(P>0.01);加入UDP-Gal的PC冷藏保存10天后的血小板凋亡率与新鲜PC相比有所增高(P(0.05),但明显低于冷藏对照组(P(0.01),其血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上。添加UDP-Gal时冷藏保存10天的血小板与新鲜的血小板在体内的生存时间相近(P(0.05),输注兔体内72小时时的血小板存活率在新鲜对照组、UDP-Gal冷藏保存组和冷藏对照组分别为57.5%±7.2%、50.3%±6.3%和0.1%±0.5%。结论尿苷二磷酸半乳糖对冷藏保存的兔血小板有保护作用,并能延长冷藏兔血小板在体内的生存时间。     

体外凝集和新鲜、液态保存及冷冻保存人类血小板血栓素A2产生之间的联系，激活剂、pH值、血浆和盐水重悬浮的影响

背景 检测新鲜以及保存的血小板的质量的方法已有不少，包括血小板的数量、形态学、血小板介质的pH值，低渗反应，以及激活剂引起的凝集。本研究的目的在于评估在体外受激活剂刺激后，产生凝集反应和血栓素A2，以评估新鲜的和保存后的血小板的功能。设计和方法经单采制备的血小板于22℃保存5天，然后于6％的二甲基亚砜冷冻保存于-80℃，经解冻、清洗、在保存介质中重新悬浮。测定激活剂、pH值和介质成分对血小板的凝集，以及对刺激后的血小板产生血栓素A2的影响。     

新型血小板制剂的研究现状

近 2 0多年来 ,虽然血小板的分离和保存方法有了较大改进 ,但仍有一些难以克服的缺点 ,尤其是保存期短 ,供应短缺经常发生 ,为此发明了多种新的保存方法 ,也研发了多种代用品。血小板代用品目前多处于实验阶段或临床前研究阶段 ,下面就新型血小板制剂 (表 1)的研究现状做一综述。表 1　新型血小板制剂种类研究现状冰冻血小板已临床应用低温保存液态血小板临床前期研究光化学处理血小板Ⅲ期临床试验血小板源性膜微粒Ⅱ期临床试验冻干血小板临床前期研究去除HLA血小板早期临床试验1　冰冻血小板除了传统液体浓缩血小板 ,冰冻血小板已在国内…