解偶联蛋白2基因表达对游离脂肪酸升高所致β细胞功能障碍的影响

目的观察血浆游离脂肪酸（FFA）水平短期升高对β细胞胰岛素分泌功能的影响,探讨线粒体氧化应激在其中的作用及机制。方法将24只8周龄体重160-170g雄性SD大鼠采用随机数字表法分为脂肪乳输注组（FFA组,12只）和生理盐水输注组（NS组,12只）。分别输注48h,检测以下指标：（1）采静脉血检测胰岛素和FFA水平;（2）静脉葡萄糖耐量实验,评价活体胰岛β细胞分泌功能;（3）胰岛细胞表面灌注实验,评价离体胰岛β细胞动态分泌功能;（4）实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测胰岛细胞胰岛素受体底物1和2（IRS-1、IRS-2）和解偶联蛋白-2（UCP-2）mRNA表达的变化。两组间差异比较采用独立样本t检验。结果FFA组血胰岛素水平较NS组增高[（25．2±2．3）比（18．6±1．7）mU／L,t=7．9,P〈0．05],FFA水平也显著高于Ns组[（1．39±0．18）比（0．64±0．10）mmol／L,t=12．8,P〈0．05]。FFA刺激后,FFA组活体和离体的胰岛β细胞分泌功能均较NS组增强[活体分别为（137±24）、（80±16）mU／L,t=6．8,P〈0．05;离体分别为（272±4）、（227±4）mU／L,t=28．6,P〈0．05]。与NS组相比,FFA组胰岛细胞IRS-1mRNA表达增加了29．3％4-2．6％（t=2．2,P〈0．05）,IRS-2mRNA及UCP-2mRNA表达分别增加了345．1％±4．7％、228．4％±4．2％（t=3．4、3．0,均P〈0．05）。结论血浆FFA水平短期升高对β细胞胰岛素分泌有刺激作用,但同时激活线粒体氧化应激,使UCP-2表达相应增加。     

消瘀化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏解偶联蛋白2 mRNA表达的影响

目的 观察消瘀化痰方对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝脏解偶联蛋白2 mRNA(UCP2 mRNA)表达的影响,探讨其防治NAFLD的部分作用机制.方法采用喂饲高脂饲料的方法复制NAFLD大鼠模型,实验分为正常对照组、模型组、东宝肝泰对照组和消瘀化痰方高、低剂量组.提取肝脏总RNA,运用半定量RT-PCR技术观察各组大鼠肝脏UCP2 mRNA的表达情况,同时测定各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和肝组织匀浆TC、TG的含量,并做病理组织切片.结果模型组大鼠UCP2 mRNA的表达增强,血脂和肝脏脂质含量明显升高,肝脏呈明显脂肪变性.经药物治疗后,各治疗组大鼠肝脏UCP2 mRNA的表达减弱,血脂和肝脏脂质含量显著降低,肝脂变程度明显减轻.结论消瘀化痰方通过调控NAFLD大鼠肝脏UCP2 mRNA的适度表达,可能是其治疗NAFLD的分子机制之一.     

心力衰竭大鼠解偶联蛋白2表达及其对线粒体功能的影响

目的观察心力衰竭大鼠心肌线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)表达及其对线粒体功能的影响。方法45只雄性SD大鼠随机分为腹主动脉缩窄组(实验组)、假手术组和正常对照组,实验组行腹主动脉缩窄术。术后20周心脏超声检测心功能,测定血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)浓度,免疫印迹法分析心肌线粒体UCP2蛋白表达,密度梯度法提取大鼠心肌线粒体,氧电极法测定线粒体的呼吸活性,罗丹明123法测定线粒体膜电位。结果实验组术后20周左心室射血分数比假手术组和正常对照组降低[(41.0±6.7)%vs.(84.0±2.5)%,P<0.01;(41.0±6.7)%vs.(84.0±2.3)%,P<0.01]、舒张末期内径比假手术组和正常对照组增加[(6.80±0.58)mm vs.(5.20±0.78)mm,P<0.01;(6.80±0.58)mm vs.(5.00±0.67)mm,P<0.01],大鼠心力衰竭建模成功。与正常对照组和假手术组比较,实验组血清FFA浓度明显增高[(372±14)μmol/L vs.(218±16)μmol l/L,P<0.01;(372±14...     

酒精性肝病大鼠肝组织解偶联蛋白2的表达

解偶联蛋白(UCP)是线粒体内膜上可以调节质子跨膜转运的载体蛋白,具有解偶联活性,目前共发现5个亚型[1-2].其中U CP2通过调节质子跨膜转运参与能量消耗和脂质代谢,可能参与酒精性肝病(ALD)发病过程中的氧化应激与脂质过氧化.本研究旨在应用酒精灌胃建立大鼠ALD模型,动态观察UCP2蛋白及mRNA的表达情况,以探讨UCP2在ALD发病过程中的作用及其机制,为有效防治ALD提供新的理论依据.     

替米沙坦对代谢综合征大鼠血管反应性及解偶联蛋白-2表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦(Telm)对代谢综合征(MS)大鼠血管功能和解偶联蛋白-2(UCP-2)表达的影响。方法:将45只2月龄的雄性Wistar大鼠,随机分为普食对照组、MS组和MS+Telm组,每组15只,喂养6月,测定鼠尾的血压。硝酸还原酶法检测血浆一氧化氮(NO)浓度,羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)浓度,硫代硫酸巴比妥法(TBA法)测定丙二醛(MDA)水平,检测采用相应的试剂盒。取大鼠胸主动脉,利用体外血管环张力测定技术,检测其对苯肾上腺素(PE)、乙酰胆碱(Ach)和硝普钠(SNP)的反应。应用Westernblot法检测胸主动脉UCP-2和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果:MS+Telm组体外胸主动脉对PE诱导的收缩反应明显低于MS组(P0.05),对Ach诱导的舒张反应明显高于MS组(P0.05)。MS+Telm组血浆SOD、NO的水平高于MS组,MDA的水平低于MS组(P0.05),其胸主动脉UCP-2、eNOS的表达明显高于MS组(P0.05)。结论:Telm能促进主动脉中UCP-2和eNOS的表达,有效改善MS大鼠血管的反应性。     

解偶联蛋白3与2型糖尿病

解偶联蛋白3(UCP3)是线粒体内膜上的质子载体,近年来的研究表明UCP3除与能量代谢有关,更与减少氧化损伤、脂肪酸代谢以及2型糖尿病密切相关,本文对此进行综述.     

虫草菌丝对实验性大鼠非酒精性脂肪肝解偶联蛋白2的影响

解偶联蛋白2(UCP2)一方面可以防止非酒精性脂肪肝(NAFLD)发生，另一方面，可能对机体造成不良后果。本实验观察了虫草菌丝对UCP2在脂肪肝形成过程中表达的影响。     

解偶联蛋白2与2型糖尿病

解偶联蛋白 2 (UCP2 )是UCPs家族成员之一 ,组织分布十分广泛 ,包括脂肪组织及胰岛 β细胞 ,UCP2除具有调节能量平衡的作用外 ,近年来研究表明与胰岛 β细胞胰岛素分泌有关 ,认为UCP2是体内胰岛素分泌的负性调节因子 ,UCP2基因可能是将肥胖、胰岛 β细胞功能障碍和 2型糖尿病联系起来的关键基因。环境因素、肥胖及高血糖可能通过超氧化物 UCP2途径损害胰岛β细胞功能。     

解偶联蛋白2基因多态性与2型糖尿病的相关性

天津地区汉族人群中,解偶联蛋白(UCP)2启动子-866G/A基因多态性与2型糖尿病发病无明显相关性,但与葡萄糖刺激胰岛素分泌功能相关。     

解偶联蛋白-2基因过表达慢病毒载体的构建

目的构建解偶联蛋白-2（UCP-2）基因慢病毒表达载体。方法用RT-PCR技术从转基因肥胖小鼠肝脏组织中获得UCP-2基因编码区片段,用In-Fusio技术将PCR产物连接入Age I单酶切后的慢病毒转移质粒体pGC-FU,进行鉴定及序列测定。将构建成功的转移质粒和两种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0、Helper2.0（VS-VG元件）共转染293T细胞,包装成慢病毒,浓缩纯化后检测滴度。结果RT-PCR产物经电泳证实成功获取UCP-2基因cDNA克隆,鉴定证实慢病毒转移质粒连接构建正确,病毒包装滴度为2×108TU/ml。结论成功构建了UCP-2基因慢病毒表达载体。     

瘦素对游离脂肪酸致大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用

目的 探讨瘦素对于游离脂肪酸(FFA)导致的大鼠胰岛β细胞脂毒性的保护作用。方法体外分离Wistar大鼠胰岛进行培养,根据培养液中加入不同物质而分为4组:(1)对照组,(2)瘦素组,(3)FFA组,(4)FFA+瘦素组。培养72h后测定胰岛内甘油三酯(TG)含量,基础状态及葡萄糖刺激下胰岛素分泌情况,并用RT-PCR方法检测胰岛β细胞内脂肪酸氧化酶-肉毒碱软脂酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)、脂肪酸合成酶-乙酰辅酶A羧化酶(ACC)以及过氧化质体增殖物激活受体α(PPARα)和PPARγ的mRNA表达情况 结果 (1)FFA使胰岛内TG含量增加(P<0.01),瘦素使胰岛内TG含量减少(P<0.01)。(2)瘦素抑制基础状态及高糖负荷后胰岛素分泌(均P<0.01);FFA使基础胰岛素分泌增加而高糖负荷后胰岛素分泌的增高幅度明显低于对照组(均P<0.01)。(3)瘦素使CPT-Ⅰ和PPARα表达增加(分别P<0.01和P<0.05),ACC和PPARγ表达减少(均P<0.01);FFA使CPT-Ⅰ和ACC表达增加,PPARα和PPARγ表达减少(均P<0.01)。结论 FFA使胰岛内TC聚集增加,基础状态胰岛素分泌增加而高糖负荷后胰岛素分泌减少,形成高胰岛素血症。而瘦素可以通过PPARα和PPARγ途径使胰岛内脂肪酸氧化酶表达增加,脂肪酸合成酶表达减少,胰岛内TG聚集减少,同时抑制胰岛素分泌,减轻高胰岛素血症,从而起到对于FFA导致的大鼠胰     

Effect of 2-deoxyglucose on islet cell morphology and insulin secretion

Summary The effect of 2-deoxyglucose (2-DG) on islet cell morphology and portal vein insulin levels was studied. The B-cells did not show any alteration in their fine structure, except for an increase in dense bodies. Six hrs after 2-DG administration degranulation was observed in some of these cells. Insulin levels were low 45 min after 2-DG administration, in spite of the marked hyperglycemia, and slightly higher than normal after 6 hrs. The A-cells remained well granulated at all times after 2-DG injection. The D-cells showed signs of functional activity, such as microvilli formation, increased lamellar ergastoplasm and free ribosomes. The significance of these findings is discussed. Traduzione a cura di G.U.     

解偶联蛋白2与非酒精性脂肪性肝病关系研究进展

目前,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发病率逐年攀升,已成为危害人类健康的三大肝病之一。解偶联蛋白-2(UCP-2)是新发现的一种位于线粒体内膜上的载体蛋白,具有刺激产热,减少ATP生成,抑制反应性氧簇的产生,负性调节胰岛素分泌以及抗凋亡作用。在脂肪肝中,UCP-2表达增加。现就UCP-2在NAFLD中的作用进行综述。     

血游离脂肪酸水平对SD大鼠主动脉舒张功能的影响

目的；研究血游离脂肪酸（FFA）水平升高是否可以导致内皮细胞依赖性血管舒张功能异常。方法：FFA组雄性SD大鼠采用脂肪乳＋肝素静脉输注，升高血FFA水平2－4倍。对照组动物仅输入生理盐水。处死大鼠后取出主动脉置于器官浴槽中，通过张力转换器，放大器以及电子计算机记录主动脉环的张力，观察离体主动脉对乙酰胆碱或硝普钠的舒张反应。结果：试验组对乙酰胆碱的舒张反应明显受损，而对硝普钠的舒张反应两组无差别。结论：血FFA水平升高可直接导致内皮细胞依赖性血管舒张反应受损，这可能是胰岛素抵抗患者大血管病变危险性高的因素之一。     

吡格列酮治疗对2型糖尿病患者血清游离脂肪酸成分的影响

采用反相高效液相色谱法测定25例2型糖尿病患者和25例健康对照者空腹血清游离脂肪酸(FFA)的主要成分,并比较吡格列酮治疗前、治疗后3个月和1年FFA各成分水平的改变,发现2型糖尿病患者血清中月桂酸、豆蔻酸和硬脂酸的水平比对照组明显升高,吡格列酮治疗可以降低2型糖尿病患者上述脂肪酸的水平.     

花生四烯酸对饱和脂肪酸的血管内皮细胞毒性的保护作用

目的　探讨各种游离脂肪酸 (FFA) ,包括软脂酸 (PA)、硬脂酸 (SA)、油酸 (OA)、亚油酸 (LA)和花生四烯酸 (AA)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)存活率的影响。方法　 (1)应用MTT比色法测定上述 5种不同浓度的FFA和其它试剂对HUVEC存活率的影响 ;(2 )用绿色荧光蛋白标记的膜联蛋白Ⅴ /碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡和死亡。结果　 (1)PA和SA在 2 0 0 μmol/L浓度的情况下处理细胞 72h ,细胞存活率约为对照组的 45 % ,这种抑制细胞存活率的作用呈剂量和时间依赖性。 10 0 μmol/L的OA处理细胞 48h ,无细胞存活。LA对细胞的存活率几乎无影响。AA在 2 μmol/L浓度时处理细胞 72h ,细胞存活率增加 2 8% ;(2 )PA在低浓度和短时间内引起细胞凋亡 ,而高浓度和长时间处理细胞则引起细胞死亡 ;(3 )多不饱和脂肪酸AA能部分阻断PA诱导的HUVEC死亡。结论　饱和脂肪酸PA和SA以及单不饱和脂肪酸OA对血管内皮细胞有较强的毒性作用 ,而多不饱和脂肪酸中的AA则能部分阻断PA诱导的血管内皮细胞死亡。这些结果说明 ,不仅饱和脂肪酸的浓度 ,而且饱和脂肪酸和AA的浓度比例对血管内皮细胞的存活率均有重要意义     

Genetic variation in UCP2 (uncoupling protein-2) is associated with energy metabolism in Pima Indians

Aims/hypothesis Uncoupling protein-2 (UCP2) is thought to play a role in insulin secretion and the development of obesity. In this study, we investigated the effects of genetic variation in UCP2 on type 2 diabetes and obesity, as well as on metabolic phenotypes related to these diseases, in Pima Indians.Methods The coding and untranslated regions of UCP2, and approximately 1 kb of the 5 upstream region, were sequenced in DNA samples taken from 83 extremely obese Pima Indians who were not first-degree relatives.Results Five variants were identified: (1) a –866G/A in the 5 upstream region; (2) a G/A in exon 2; (3) a C/T resulting in an Ala55Val substitution in exon 4; and (4, 5) two insertion/deletions (ins/del; 45-bp and 3-bp) in the 3 untranslated region. Among the 83 subjects whose DNA was sequenced, the –866G/A was in complete genotypic concordance with the Ala55Val and the 3-bp ins/del polymorphism. The G/A polymorphism in exon 2 was extremely rare. To capture the common variation in this gene for association analyses, the –866G/A variant (as a representative of Ala55Val and the 3-bp ins/del polymorphism) and the 45-bp ins/del were also genotyped for 864 full-blooded Pima Indians. Neither of these variants was associated with type 2 diabetes or body mass index. However, in a subgroup of 185 subjects who had undergone detailed metabolic measurements, these variants were associated with 24-h energy expenditure as measured in a human metabolic chamber (p=0.007 for the 45-bp ins/del and p=0.03 for the –866G/A after adjusting for age, sex, family membership, fat-free mass and fat mass).Conclusions/interpretation Our data indicate that variation in UCP2 may play a role in energy metabolism, but this gene does not contribute significantly to the aetiology of type 2 diabetes and/or obesity in Pima Indians.     

非酒精性脂肪性肝病大鼠解偶联蛋白2的表达及其与胰岛素抵抗的关系

本研究通过高脂饮食喂养大鼠,观察大鼠肝内脂肪沉积情况,同时检测肝细胞解偶联蛋白2(UCP-2)和胰岛素信号分子胰岛素受体底物2(IRS-2)mRNA的表达,以探讨在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病中胰岛素抵抗与肝细胞U CP2表达的关联及其作用机制.     

瘦素对离体大鼠胰岛分泌胰岛素的双向影响

目的 了解不同浓度的瘦素，在不同条件下对离体大鼠胰岛分泌胰岛素的影响。方法 利用细胞培养技术，在不同的葡萄糖浓度（5.6mmol/L或16.7mmol/L）和不同作用时间（10min或2h)下，以0,1,5,10,15,50ak 100μg/L瘦素作用大鼠胰岛，观察其对胰岛素分泌的影响；用放免法检测培养物上清液胰岛素浓度。结果 培养液葡萄糖浓度为5.6mmol/L，培养10min，1μg/L、5μg/L瘦素促进被孵育的胰岛的胰岛素分泌；培养2h,5μg/L瘦素促进基础胰岛素分泌，≥50μg/L瘦素抑制胰岛素分泌。葡萄糖浓度为16.7mmol/L，培养10min，≥50μg/L瘦素抑制胰岛素分泌；培养2h，≥5μg/L瘦素抑制胰岛素分泌。结论 重组瘦素对离体大鼠胰岛分泌胰岛素具有双向作用，并受瘦素浓度、作用时间和环境葡萄糖浓度等因素变化的影响。