各基因亚型乳腺癌间基因组拷贝数变异的比较

目的 比较各基因亚型乳腺癌间全基因组拷贝数变异(CNV)差异,分析各亚型中特异的基因CNV.方法 在肿瘤基因组图谱(TCGA)的乳腺癌数据库中,利用AIMS软件进行基因分型(BasL型、Her2型、LumA型和LumB型),GISTIC2.0软件分析肿瘤组织中全基因组拷贝数变异情况.收集整理江门市中心医院(JMCH)3...     

人类输卵管上皮永生化细胞系的建立及鉴定

背景与目的:最近研究表明卵巢高级别浆液性癌可能起源于输卵管上皮。本课题通过基因沉默和端粒酶导入技术将原代输卵管上皮细胞永生化,为以后建立恶性转化细胞系和卵巢癌动物模型奠定基础。方法:分离并培养输卵管上皮细胞,导入p53和pRb shRNA结合hTERTcDNA,建立p53和pRb基因同时沉默并过表达hTERT的永生化细胞系,并对永生化细胞系进行连续传代、沉默基因的蛋白质印迹法(Western blot)测定、SA-β-gal染色和非停泊生长实验及体内致瘤活性鉴定。结果:我们建立了稳定表达p53、pRbshRNA和hTERT的永生化输卵管上皮细胞系:FTE248116/p53i+pRbi+hTERT及FTE312249/p53i+pRbi+hTERT。结论:可以通过导入端粒酶基因及敲除抑癌基因p53和pRb来建立永生化细胞系,并有望于构建恶性转化细胞系和人类高级别浆液性卵巢癌动物模型。     

云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化

背景与目的研究云锡矿粉对人支气管上皮细胞的致癌转化效应,以探讨云锡矿工肺癌病因及其机制。材料与方法采用永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞,设200μg/ml及50μg/ml剂量的2个氧化矿染毒组和1个溶剂对照组,细胞染毒72h后,隔代染毒直至第9代。系统观察转化过程中细胞的生物学特性及血清抗性、锚着独立性生长能力等转化表型特征。结果第20代时各组细胞均未表现出血清抗性,第25代200μg/ml组细胞出现血清抗性和倍增时间增长、染色体畸变率增高;第30代时200μg/ml组细胞在软琼脂上可形成小的细胞集落,至第40代时,200μg/ml及50μg/ml剂量组细胞均能在软琼脂上形成克隆。结论云锡矿粉能体外诱发人支气管上皮细胞恶性转化。     

全基因组拷贝数变异评分在肺腺癌诊断及预后预测中的价值

目的探讨全基因组拷贝数变异(WGCNV)检测和评分系统在肺腺癌诊断和预后预测中的价值。方法应用显微微切割技术获取76例肺腺癌患者肿瘤组织标本91份和癌旁正常对照组织样本20份, 通过全基因组扩增(WGA)富集DNA并构建测序文库, 进行二代测序。评估肺腺癌手术和恶性胸水细胞学标本的肿瘤细胞核级别改变, 在肿瘤核细胞大小、核分裂象计数、细胞核不典型性和不典型核分裂4个方面进行分级。评价WGCNV评分的预测预后的价值, 根据受试者工作特征(ROC)曲线分析WGCNV评分在肺腺癌中的诊断价值。结果 20例癌旁正常肺组织样品WGCNV改变作为正常对照, 所有肿瘤标本WGCNV评分为0～9.95分, 中位WGCNV评分为2.7分。核级别评分与WGCNV评分之间存在正相关(r=0.780 90, P<0.000 1)。中评分组(1.74～4.23分)相对低评分组(<1.74分)的风险比为4.11(95%CI为0.72～23.57), 高评分组(>4.23分)相对低评分组的风险比为2.07(95%CI为0.30～14.12), 中、高评分组风险呈上升趋势。ROC曲线分析显示, 当临...     

皮肤黑色素瘤基因突变类型及基因拷贝数变异分析

  目的  对比肢端黑色素瘤（acral melanoma, AM）与非肢端黑色素瘤（non-acral melanoma, NAM）的基因突变类型及基因拷贝数变异（copy number variation, CNV）的差异,讨论并分析其基因突变类型及拷贝数变异的意义。  方法  收集2018年1月至2021年1月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的73例皮肤黑色素瘤患者的资料,所有患者均采用二代测序技术对46个癌症相关基因进行了全面的基因组检测。根据解剖部位分为肢端组（AMs）和非肢端组（NAMs）,比较并讨论两组患者的临床病理特征、基因突变类型及CNV的差异。  结果  两组患者在性别、年龄、肿瘤厚度、溃疡、淋巴结状态和分期等方面无显著性差异（P>0.05）。73例患者最常见的基因突变类型为BRAF突变（20.5%）、KRAS/NRAS突变（17.8%）、KIT突变（13.7%）。与AMs相比,NAMs的BRAF突变频率呈显著性差异（P<0.05）。年龄≤65岁的患者BRAF突变率与年龄>65岁的患者相比呈显著性差异（P<0.05）。此外,无溃疡的黑色素瘤比有溃疡的黑色素瘤更易出现BRAF突变（P<0.05）。两组患者中KRAS/NRAS和KIT突变率无显著性差异（P>0.05）。影响细胞周期畸变基因（CDK4/6、CCND1/2、CDKN2A）、受体酪氨酸激酶基因（EGFR、MET、ERBB2、ERBB3、PDGFRA）及抗细胞凋亡基因（BIRC2/3/5）的CNV在AMs和NAMs之间呈显著性差异（P=0.019、0.002、0.027）。  结论  通过对AMs和NAMs基因突变类型及CNV的分析,能为深入了解皮肤恶性黑色素瘤致癌模式和临床病理特征提供帮助。      

生长因子对人支气管上皮细胞和肺癌细胞生长的影响

MCDB151加多种生长因子的无血清培养基已成功用于培养成人和胎儿支气管上皮细胞及肺癌细胞(腺癌和鳞癌)。用该无血清培养基进行集落形成试验的结果表明,牛垂体提取物、胰岛素和氢化可的松可以促进人支气管上皮细胞及肺癌细胞的增殖,表皮生长因子和转铁蛋白却只刺激正常支气管上皮细胞的生长,而对本实验所检测的肺癌细胞无生长刺激作用。本研究所培养的大部分肺癌标本,在MCDB151完全培养基中加2％胎牛血清时,比不加血清时生长更快、更好。在MCDB151无血清培养基中,低浓度的钙有利于人支气管上皮细胞和肺癌细胞的生长。     

DNA拷贝数变异与HBV相关肝细胞癌术后肝内复发的相关性研究

目的 探讨利用DNA拷贝数变异（CNA）预测HBV相关肝细胞癌（HCC）术后肝内复发的可行性。方法 采用高分辨率微阵列比较基因组杂交技术（aCGH）,对47例HBV相关HCC肿瘤细胞基因组DNA的CNA情况进行检测;通过Kaplan Meier生存分析和Cox风险比例模型,评估CNAs对HCC术后复发的影响。结果单因素生存分析结果显示,16q11.2-22.1是否丢失对HCC术后复发有显著影响（P=0.001）,而基因组内其他CNAs均与复发无关。与16q11.2-22.1未丢失者相比,16q11.2-22.1丢失HCC患者的术后复发危险比（HR）为4.59（95％ CI=1.64～12.84,P=0.004）。多因素Cox回归分析显示,16q11.2-221是否丢失是HCC术后复发的独立预测因素（HR=4.64,95％CI=1.65～13.06,P=0.004）。结论 染色体片段16q11.2-22.1是否丢失是预测HBV相关HCC术后肝内复发的有效指标。     

永生化人食管鳞状上皮细胞系的建立及其染色体不稳定性的研究

[目的]建立永生化人食管鳞状上皮细胞系，并研究细胞永生化过程中以及食管肿瘤细胞染色体的不稳定性。[方法]用人乳头状瘤病毒16型E6／E7（HPV16E6／E7）转染正常人食管鳞状上皮细胞，连续传代培养，检测HPV16E6／E7基因的整合情况及其表达，并对不同代次永生化细胞及食管肿瘤细胞进行端粒荧光原位杂交（FISH）检测和分裂后期细胞形态分析。[结果]HPV16E6／E7基因转染至人食管鳞状上皮细胞后，增殖旺盛，已传至第75代。在细胞危机期（第13和第17代），TTAGGG端粒缺失数为6．0±1．2和4．7±1．5（缺失率分别为6．7％和5.3％）．细胞间桥的出现率为28．0％～30．9％。细胞永生化以后（第47代），端粒缺失数减至2．6±0．7（缺失率3％），细胞间桥出现率降至3．6％，与危机期的比较差异有统计学意义，而与肿瘤细胞的分裂异常相一致。在细胞永生化过程中，细胞间桥的出现率与端粒的缺失率呈正相关性。[结论]HPV16E6／E7基因可以导致人食管鳞状上皮细胞永生化，在此过程中存在较多端粒缺失和细胞间桥，表明染色体的不稳定性在细胞永生化和恶性转变过程中起到重要作用。     

肺泡上皮细胞间质转化对肺癌细胞转移影响的研究

目的:通过以TGF-β1诱导肺腺癌细胞系A549细胞出现上皮细胞-间质细胞转化(EMT),并探讨EMT过程的信号转导途径及肺EMT与肺癌转移之间的关系。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,用荧光实时定量PCR检测上皮及间质细胞标志的mRNA表达,蛋白质印迹法检测上皮及间质细胞标志的蛋白表达、信号转导蛋白P-Smad2/3、Snail1和Snail2的表达及基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,通过倒置相差显微镜观察肺EMT过程中细胞形态学的变化。结果:TGF-β1干预后,A549细胞上皮细胞标志(E-cad、CK19)的mRNA和蛋白表达下调(P<0.01),间质细胞标志(Vimentin、α-SMA)的mRNA和蛋白表达上调,P<0.05;信号转导蛋白P-Smad 2/3和Snail1上调(P<0.05),Snail2弱表达,P>0.05;基质金属蛋白酶MMP-2上调(P<0.05),MMP-9弱表达,P>0.05;倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。结论:在TGF-β1的诱导下,肺腺癌细胞从上皮细胞向间质细胞转化,其与Smad 2/3和Snail1信号转导途径相关,同时伴随了MMP-2的表达增强,因此肺泡上皮细胞向间质细胞的转化可能通过改变细胞形态学和增加基质金属蛋白酶的表达,增强了癌细胞的侵袭性,促进肺癌的转移。而通过阻断肺癌细胞的EMT过程及其信号转导途径有可能抑制肺癌的转移。     

食管鳞癌组织中线粒体DNA拷贝数量的变化及意义

目的：比较线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）拷贝数量在食管鳞癌、癌旁粘膜和正常食管粘膜组织间的差异,探讨mtDNA与食管鳞癌发生、发展的关系。方法：应用荧光定量PCR（real-time PCR）技术,定量检测42例食管鳞癌、癌旁粘膜和正常食管粘膜组织中mtDNA拷贝数;并采用凝胶电泳对mtDNA进行定性检测。结果：食管鳞癌组织中mtDNA检测率为100%（42/42）,平均拷贝数为27.1894×106μgDNA;正常食管粘膜组织mtDNA检测率100%（42/42）,平均拷贝数为5.9347×106μgDNA;癌旁粘膜组织mtDNA检测率100%（42/42）,平均拷贝数为9.4102×106μgDNA,三者之间有显著差异（F=27.83,P〈0.05）。PCR产物经凝胶电泳后,在403bp处显示阳性条带,且食管鳞癌组织所在的泳道较亮,与real-timePCR检测结果一致。结论：mtDNA拷贝数量的增加与食管鳞癌的发生、发展有关。     

Comparison of DNA Copy Numbers in Original Oral Squamous Cell Carcinomas and Corresponding Cell Lines by Comparative Genomic Hybridization

We analyzed regional DNA copy numbers in 4 oral squamous cell carcinomas (SCCs) by using comparative genomic hybridization, and compared them with those in cell lines derived from the SCCs. In the original tumors, DNA copy number increases were observed on chromosomes 5p (4/4 cases), 8q (4/4), 20p (3/4), 3q (2/4), 5q (2/4), 7p (2/4), 7q (2/4), 1ip (2/4), 11q (2/4) and 13q (2/ 4). Although most of these changes have been described previously for SCC tumors in the head and neck, the incidence of increases in 8q and 20p was much higher in the present study; this may be important in relation to cell line establishment, since 8q contains c- myc , which is involved in immortalization. No common chromosomal region with DNA copy number decreases was observed, except for 18q (2/4). When the original tumors and the cell lines were compared, their profiles were essentially similar with one exception. Further, there was no region that commonly changed in the cell lines, but not in the original tumors, suggesting that the DNA copy number changes observed in the cell lines mostly represent those of the original tumors.     

大鼠肺鳞癌癌变过程中基因组甲基化水平动态研究

背景与目的:研究大鼠肺鳞癌癌变各阶段基因组DNA甲基化水平动态变化趋势.材料与方法:支气管灌注3-甲基胆蒽(MCA)及二乙基亚硝胺(DEN)碘油溶液诱发Wistar大鼠肺鳞癌模型.采用免疫组化法检测大鼠肺鳞癌癌变各阶段基因组DNA甲基化水平,利用图像分析系统测量其平均光密度值和积分光密度值.结果:经支气管灌注MCA及DEN碘油溶液,诱发Wistar大鼠肺鳞癌模型,共获取癌变各阶段标本154例,其中增生25例,鳞状化生组织27例,不典型增生组织37例,原位癌组织30例,浸润癌组织25例.大鼠肺鳞癌癌变各阶段基因组DNA甲基化水平按上述顺序呈递减的趋势,癌变各阶段甲基化水平与正常对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01),正常和癌变支气管上皮基底层甲基化水平高于腔细胞层,差异亦具有统计学意义(P＜0.01).结论:大鼠肺鳞癌癌变过程中基因组DNA甲基化水平的降低,可能是介导其癌变的重要表遗传学机制.     

AFP-producing Squamous Cell Carcinoma of the Lung in an Adolescent

We report a case of primary lung cancer in a 16-year-old boy.A histologic diagnosis of squamous cell carcinoma was made bybronchoscopic biopsy before surgery. The serum alpha-fetoprotein(AFP) level was markedly elevated at 193 ng/dl. Preoperativeand postoperative evaluation revealed no evidence of scrotalmass. We performed right pneumonectomy with combined resectionof the invaded portion of the left atrium under extracorporealcirculation. Despite the rapid improvement in the patient'sgeneral condition after surgery, the AFP level continued toincrease without a transient decrease and reached 3160 ng/mlon the 23rd postoperative day. When the patient was readmittedbecause of dyspnea and headache on the 36th postoperative day,hypercalcemia of 13.9 mg/dl was noted, and this was resistantto subsequent treatment. The patient died on the 46th postoperativeday.     

Targeting FGFR in Squamous Cell Carcinoma of the Lung

Unlike for adenocarcinomas of the lung, no molecular targeted therapies have yet been developed for squamous cell lung cancers, because targetable oncogenic aberrations are scarce in this tumor type. Recent discoveries have established that the fibroblast growth factor (FGF) signaling pathway plays a fundamental role in cancer development by supporting tumor angiogenesis and cancer cell proliferation via different mechanisms. Through comprehensive genomic studies, aberrations in the FGF pathway have been identified in various tumor types, including squamous cell lung cancer, making FGF receptor (FGFR) a potentially druggable target in this malignancy. Several multi-targeted tyrosine kinase inhibitors include FGFR in their target spectrum and a number of these compounds have been approved for clinical use in different cancers. Novel agents selectively targeting FGFRs have been developed and are currently under investigation in clinical trials, showing promising results. This article reviews FGFR aberrations and the clinical data involving selective and multikinase FGFR inhibitors in squamous cell lung cancer.

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人鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系与其亲代细胞系比较基因组杂交研究

目的：比较基因组杂交（comparative genomic hybridization, CGH）是一种在荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridiza?tion,FISH）技术上发展起来的用于检测两个基因组间相对DNA拷贝数的改变（缺失或扩增）, 并将这些变化在染色体上进行定位的分子细胞遗传学方法。为了解鼻咽癌紫杉醇耐药细胞 （CNE1/Taxol, HNE2/Taxol, 5-8F/Taxol）与亲代细胞（CNE1, HNE2, 5-8F）在基因组DNA水平上可能存在的差异, 以及这种差异在肿瘤获得性耐药产生中的意义, 采用CGH技术对鼻咽癌紫杉醇耐药细胞与亲本细胞的基因组DNA进行检测和分析。方法：三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞采用大剂量冲击与剂量逐渐递加相结合的方法诱导而成。采用集落形成实验测定药物的敏感性,利用比较基因组杂交技术 （CGH） 对耐药细胞和其亲本细胞的基因组DNA进行检测和分析, 比较耐药细胞与亲本细胞在染色体扩增与缺失上的共同点和差异。结果：三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞耐药指数分别为8.43、 8.27和5.26。鼻咽癌亲本细胞存在广泛的染色体改变,主要表现在3q21-qter, 5p13-pter, 12和20q11-qter的共同扩增以及10q11-qter, 18和X染色体的共同缺失,从亲本细胞系诱导的三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系表现为3q21-qter, 5p13-pter, 12,20q11-qter和8q21-qter的共同扩增, 无明显共同缺失区域。与亲本细胞共同扩增区域相比, 其中最有意义的是8q21-qter区域在三株耐药细胞中出现了新的共同扩增。结论： 3q21-qter, 5p13-pter, 12和20q11-qter的共同扩增以及10q11-qter,18和X染色体的共同缺失可能与鼻咽癌的发生有关, 而8q21-qter染色体扩增可能与鼻咽癌获得性紫杉醇耐药相关,对这些区域的进一步研究, 有可能为肿瘤发生及耐药机制研究提供新的线索。