外周血T淋巴细胞亚群与不同分子分型乳腺癌患者无病生存的相关性研究

  目的  观察不同分子分型浸润性乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的表达情况, 分析乳腺癌患者免疫状态与不同分子分型乳腺癌的相关性。  方法  选取2008年1月至2009年8月初诊于天津医科大学肿瘤医院乳腺中心的患者372例。均对入组患者采血, 采用流式细胞术分析外周血的T淋巴细胞的亚群CD4+T细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞(Treg细胞)及自然杀伤(NK)细胞水平。分析CD4+/CD8+比值的大小、调节性T细胞、自然杀伤细胞的免疫相关指标与乳腺癌不同分子分型Luminal A、Luminal B、HER-2过表达型以及三阴性乳腺癌患者临床病理特征之间的相关性。  结果  372例乳腺癌患者中, Luminal A型为133例(35.8%)、Luminal B型为124例(33.3%)、HER-2过表达型为48例(12.9%)、三阴性为67例(18.0%)。在三阴性乳腺癌中外周血CD4+/CD8+比值越高, 患者的无病生存时间越长(P < 0.05), Treg细胞含量越低, 患者的无病生存时间也越长(P < 0.05), 但CD4+/ CD8+比值与Treg细胞含量并非三阴性乳腺癌无病生存的独立预后因素。而其他三种类型的乳腺癌中, CD4+/CD8+比值、Treg细胞含量与患者无病生存率无关(P>0.05)。NK细胞含量与以上4种分子分型乳腺癌患者的无病生存率并无明显的相关性(P>0.05)。  结论  外周血CD4+/CD8+比值、Treg细胞含量可有效预测三阴性乳腺癌的无病生存率, 但并非其独立的预后因素。      

肾细胞癌PBRM1表达缺失抑制CD8+ T细胞浸润

摘 要：［目的］ 探讨PBRM1调控CD8+T在肾透明细胞癌组织中细胞浸润的分子机制。［方法］ 以肾透明细胞癌患者肿瘤临床标本为研究对象,探讨CD8+T细胞在人肾癌中的浸润及其与临床病理特征的关系,以免疫印迹、荧光免疫、ELISA等分子生物学方法明确PBRM1调控CD8+T细胞浸润的分子机制。免疫荧光检测CD63、EZH2及PHK26在细胞中的分布。免疫印迹检测IFN-γ,IL-6和TNF-α不同因子处理对肾癌细胞EZH2的诱导表达。实验结果经GraphPad Prism软件, t检验对两组间差异进行统计学分析。［结果］ 肾透明细胞癌组织免疫组化结果显示,在肿瘤组织中CD8+T细胞浸润数量显著性下降(P<0.001),CD8+T细胞浸润与患者总生存期呈正相关(P<0.001)。患者肿瘤组织PBRM1着色和CD8+T细胞浸润数量结果显示：PBRM1表达与CD8+T细胞浸润数量呈正相关(P<0.001)。IFN-γ,IL-6和TNF-α细胞因子促进EZH2在细胞表达升高,同时被外泌体包载被运输到受体细胞,外泌体EZH2进入受体细胞抑制CXCL9和CXCL10细胞因子分泌。［结论］ PBRM1缺失激活exo-EZH2/CXCL9(10)信号轴抑制CD8+T细胞肿瘤组织浸润。     

负性共刺激分子B7-H1和B7-H4在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:检测结直肠癌组织中负性共刺激分子B7-H1和B7-H4的表达、T细胞亚群的浸润情况,探讨其临床意义。方法:收集苏州大学附属第四医院2003年1月至2003年12月50例结直肠癌患者的癌组织标本以及5例患者的癌旁组织标本,免疫组织化学法检测结直肠癌组织中B7-H1和B7-H4的表达以及T细胞亚群的浸润,分析B7-H1、B7-H4的表达与结直肠癌患者临床病理特征及T细胞浸润的相关性,分析B7-H1、B7-H4的表达和CD3+T、CD8+T淋巴细胞浸润程度与患者预后的相关性。结果:结直肠癌组织高表达B7-H1(44%)和B7-H4(56%),而癌旁组织不表达(P<0.01)。B7-H1在结肠癌组织中的表达较直肠癌显著升高(P<0.05);随着Duke’s分期的升高,B7-H4的表达水平也呈上升趋势(P<0.05)。结直肠癌组织中B7-H1的表达与CD3+T细胞浸润呈负相关(P<0.05),但与B7-H4的表达无关。B7-H1的表达水平与患者预后呈负相关(P<0.05),且B7-H1和B7-H4同时高表达的患者总体生存率显著降低(P<0.05)。结论:负性共刺激分子B7-H1和B7-H4在人结直肠癌组织中高表达,并与患者总体生存率相关,两者的共同检测对结直肠癌诊断和预后判断具有一定的临床价值。     

化疗对乳腺癌患者外周血中Treg细胞数目的影响及意义

目的: 研究化疗药物对乳腺癌患者根治术后外周血中Treg(CD₄⁺CD₂₅⁺调节性T细胞)的影响及意义。 方法: 采集52例乳腺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺T细胞占T淋巴细胞百分比,采用ELLSA法检测外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ的表达水平。 结果: 化疗后乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞百分比(4.75±1.60)%较化疗前(5.59±1.81)%减少(Plt;0.05),且与淋巴结有无转移、转移数量以及绝经状态无关(P>0.05)。化疗前后CD3⁺细胞占T淋巴细胞比例分别为(64.690±7.469)%,(64.357±9.356)%(<0.05)。化疗前后CD4+T细胞占T淋巴细胞比例分别为(38.048±10.671)%,(36.536±9.664)%(Pgt;0.05)。化疗后CD8⁺T细胞占T淋巴细胞比例(28.129±10.900)%较化疗前(24.876±6.631)%升高(Plt;0.05)。化疗后CD₄⁺/CD₈⁺(1.506±0.691)较化疗前(1.680±0.704)降低(Plt;0.05)。化疗后乳腺癌患者外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1浓度较化疗前降低,而IFN-γ浓度增高(P<0.05)。化疗前后Treg细胞比例变化与细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ浓度变化无关(P>0.05)。 结论: 化疗可使乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞比例降低,从而达到治疗肿瘤的效果。     

共刺激分子B7-H3在人食管鳞癌中的表达及临床意义

目的 分析人食管鳞癌组织中B7-H3分子的表达与患者临床病理因素以及术后生存时间之间的关系。方法 采用免疫组织化学法检测82例人食管癌组织、对应癌旁正常食管组织及食管鳞状上皮不典型增生组织中B7-H3分子的表达以及CD8+T淋巴细胞的浸润程度。结果 食管癌组织中B7-H3蛋白的阳性表达率为98.8%(81/82),而B7-H3在癌旁及鳞状上皮不典型增生组织中几乎不表达。B7-H3的表达与患者年龄、肿瘤浸润深度及TNM分期相关,差异有统计学意义（P<0.05）,与肿瘤组织中CD8+T淋巴细胞浸润程度呈负相关(P<0.05),与患者预后呈负相关（P<0.05）。结论 B7-H3在食管癌中过表达,和肿瘤的进展密切相关。食管癌中B7-H3分子的表达可能参与了抑制食管癌组织内CD8+T细胞功能,促使肿瘤细胞逃避免疫监视,提示B7-H3在食管癌诊断、判断预后及靶向治疗中具有潜在的临床应用价值。     

初诊肺癌患者多次化疗外周血免疫相关指标动态变化的研究

  目的  探索免疫治疗与化疗相结合的有利切入点,为临床免疫治疗介入提供试验依据。  方法  收集2015年11月至2016年12月新乡医学院第一附属医院初诊的23例肺癌患者,全部患者均完成连续5个周期的化疗,采用流式细胞术方法检测化疗过程中患者外周血免疫相关指标如CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD19+B细胞和CD16+、CD56+、NK细胞比率,T细胞表面共信号分子PD-1、PD-L1、CD137、CTLA-4、CCR-4、LAG-3以及细胞因子表达情况。分析多周期过程中,上述指标动态变化趋势。  结果  在肺癌患者多个周期的化疗过程中,机体CD8+T淋巴细胞、CD19+B淋巴细胞和CD16+、CD56+、NK细胞水平下调,CD4+T淋巴细胞数量增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）;T细胞表面共抑制分子PD-1、CTLA-4和CCR-4随治疗进行表达下调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。  结论  肺癌患者在多个周期的化疗中,实施淋巴细胞亚群数量及T细胞表面共抑制分子监测具有重要意义,化疗中后期针对免疫检查点高表达患者,联合应用PD-1抗体、PD-L1抗体、CTLA-4抗体或CCR-4抗体可能具有更优的治疗效果。      

CH-296和IFN-γ共同培养的CIK细胞治疗晚期恶性实体瘤临床观察

  目的  CIK细胞具有异质性的抗肿瘤作用, 其中IFN-γ在增强CD3+CD56+细胞作用中起到关键作用。在TCR刺激信号存在的情况下, CH-296被发现能够刺激T细胞的增殖。本研究探讨CH-296和IFN-γ是否有相互促进CIK细胞表达的作用。  方法  CIK细胞在CH-296包被培养板或不包括的IFN-γ中培养14 d。将CIK细胞增殖、代谢、表型、细胞毒性同传统的CIK细胞相比较。20例(其中18例为Ⅳ期)患者接受了3个周期的RN-CIKs治疗。临床反应通过KPS评分和CT检查进行评价。  结果  CH-296通过减缓代谢和提高增殖以时间依赖的方式促进CIK细胞的表达。CH-296和IFN-γ共同培养带有T细胞表型的CIK细胞, 有更强的细胞毒性和细胞因子分泌功能。临床试验中未发生不良事件。16例患者临床症状有所缓解。总体临床反应率(PR+SD)为65%(13/20), 中位OS(16.95±6.10)个月。  结论  CH-296能够促进IFN-γ提高CIK细胞的抗肿瘤作用, 使CIK细胞有更强的增殖能力, 细胞毒作用并减缓代谢。      

乳腺癌髓系来源抑制细胞中IDO对T淋巴细胞免疫抑制作用初探

  目的   检测乳腺癌患者肿瘤原位组织的一群髓系来源抑制细胞（MDSCs）中吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO）的表达情况,探讨IDO对MDSCs介导T淋巴细胞免疫抑制作用的影响。   方法   收集30例乳腺癌患者的肿瘤组织和外周血及30例健康供者外周血,将肿瘤组织制成单细胞悬液,采用免疫磁珠技术分选肿瘤单细胞悬液中CD33+ MDSCs和健康供者外周血中的CD33+细胞,应用Western blot和PCR方法检测MDSCs中IDO的表达情况。将肿瘤组织来源MDSCs和异体T淋巴细胞按照1:1比例混合培养3天,在加用和不加IDO特异性抑制剂1-MT条件下,利用Annexin-V凋亡试剂盒检测各组T淋巴细胞凋亡率,利用ELISA法检测各组T淋巴细胞分泌的细胞因子量。   结果   Western blot和PCR检测发现MDSCs中IDO过表达。T细胞单独培养时凋亡率为（2.40±0.66）%,MDSCs和T细胞共孵育组中T细胞凋亡率为（12.30±0.80）%,比T细胞单独培养时显著升高（P < 0.05）,在共孵育过程中加用1-MT组的T细胞凋亡率为（3.30±0.58）%,与不加1-MT组比较差异具有统计学意义（P < 0.05）。细胞因子检测的结果发现MDSCs促进T淋巴细胞TGF-β、IL-10的释放,抑制IFN-γ的分泌,而对IL-4和IL-12的分泌影响并不明显,而加用1-MT后MDSCs和T淋巴细胞共孵育组中TGF-β、IL-10的分泌水平与未加1-MT组相比显著降低,IFN-γ的分泌显著增加（P < 0.05）。   结论   在乳腺癌患者中,原位肿瘤组织来源的MDSCs对T细胞具有明显的免疫抑制作用;IDO在此群细胞中有过表达,MDSCs发挥免疫抑制作用与IDO密切相关。      

卵巢癌腹水CD4+ CD25+调节性T细胞免疫抑制功能及机制的研究

  目的  研究卵巢癌患者腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）免疫抑制功能与患者临床病理特点的关系及其与患者初治及复发状态是否相关,并进一步探讨卵巢癌腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）发挥免疫调节性作用的具体机制。  方法  应用免疫磁珠分选法分选28例卵巢癌患者腹水内CD4+ CD25+调节性T细胞及CD4+ CD25- T细胞,采用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein succinimidylester,CFSE）标记CD4+ CD25- T细胞,CD4+ CD25+ Treg与自体CFSE标记CD4+ CD25- T细胞以1:1比例共培养,经流式检测CFSE表达及Modfit软件分析CD4+ CD25- T增殖指数（PI）,计算各标本内Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率。应用中合性抗IL-10抗体及中合性抗TGF-β1抗体探究腹水内CD4+ CD25+ Treg介导免疫逃逸作用是否通过抑制性细胞因子IL-10或TGF-β1发挥作用。  结果  Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌腹水内CD4+ CD25+ Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率为（75.72±17.04）%,较Ⅰ~Ⅱ期Treg抑制率（59.61±16.97）%显著增强（P < 0.05）。复发卵巢癌患者腹水内Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率为（85.89±7.07）%,较初治卵巢癌患者腹水Treg抑制率（52.82±8.18）%显著增强（P=0.000 1）。共培养体系内加入中合性抗IL-10抗体或/及中和性抗TGF-β1抗体,Treg对自体CD4+ CD25- T细胞增殖抑制率较对照组均显著降低（P < 0.05）。  结论  卵巢癌腹水内CD4+ CD25+ Treg介导免疫逃逸能力与肿瘤分期及复发、初治状态相关,且发挥免疫逃逸作用可能是与分泌抑制性细胞因子IL-10及TGF-β1有关。      

负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨负性协同刺激分子B7-H1、B7-H3在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理参数、预后及CD3+T淋巴细胞浸润程度的相关性.方法:选取2003年3月至2004年1月在苏州大学附属第三医院乳腺外科接受手术治疗的女性乳腺癌患者49例(均经病理诊断确认为浸润性导管癌)的乳腺癌组织标本,免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中协同刺激分子B7-H1、B7-H3的表达以及CD3+T淋巴细胞浸润程度.结果:(1)乳腺癌组织中B7-H1阳性表达率为53.06%(26/49),其表达水平与肿瘤大小呈正相关(P<0.05)、与Her2/neu表达水平呈正相关(P<0.05)、与CD3+T淋巴细胞浸润程度呈负相关(P<0.05);(2)乳腺癌组织中B7-H3阳性表达率为59.18%(29/49),其表达水平与病理分期呈正相关(P<0.05)、与患者预后呈负相关(P<0.05);(3)乳腺癌组织中B7-H1和B7-H3的表达水平呈正相关(r=0.3316,P<0.05).结论:负性协同刺激分子B7-H1和B7-H3在乳腺癌中的表达水平与临床病理因素及预后密切相关,对该两分子的检测在乳腺癌诊断和预后判断中具有潜在的临床应用价值.     

5氮杂胞苷联合干扰素-γ上调神经母细胞瘤细胞Caspase 8表达的研究

  目的  探讨半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)和死亡受体(DR)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导神经母细胞瘤(NB)细胞凋亡中的作用。  方法  应用RT-PCR方法检测γ干扰素(IFN-γ)作用前后NB细胞Caspase 8 mRNA的表达; 应用Western blot方法检测Caspase 8、DR4和DR5蛋白表达; 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞术检测IFN-γ, TRAIL, IFN-γ+TRAIL, Caspase 8抑制剂+TRAIL及IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL对NB细胞株生长及凋亡的影响。  结果  IFN-γ在NB细胞株SKNDZ中诱导了Caspase 8mRNA及蛋白表达。SY5Y细胞对TRAIL不敏感, 而IFN-γ与TRAIL或阿霉素, 依托泊苷联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。IFN-γ+TRAIL组SY5Y细胞早期凋亡率(23.09+2.35)%高于TRAIL组[(6.15±0.54)%(P< 0.01)], 但低于IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组[(43.41±6.46)%/(38.86±7.29)%, P< 0.01]。阿霉素或依托泊苷可以诱导NB细胞株DR5蛋白表达, 但未诱导DR4蛋白表达。IFNγ诱导后表达Caspase 8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感, 而阿霉素或依托泊苷处理后同时表达DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用相对敏感。IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组SKNDZ细胞早期凋亡率(11.54±2.49)%/(13.38±1.65)%高于IFN-γ+TRAIL组(P< 0.01)。  结论  IFN-γ上调Caspase 8表达及化疗药阿霉素或依托泊苷诱导DR5表达可以恢复NB细胞对TRAIL的敏感性, Caspase 8和DR5在TRAIL诱导NB细胞凋亡中起着十分关键的作用。     

IFN-γ联合阿霉素或依托泊苷增强TRAIL对神经母细胞瘤细胞的诱导凋亡作用

  目的  探讨半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)和死亡受体(DR)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导神经母细胞瘤(NB)细胞凋亡中的作用。  方法  应用RT-PCR方法检测γ干扰素(IFN-γ)作用前后NB细胞Caspase 8 mRNA的表达; 应用Western blot方法检测Caspase 8、DR4和DR5蛋白表达; 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞术检测IFN-γ, TRAIL, IFN-γ+TRAIL, Caspase 8抑制剂+TRAIL及IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL对NB细胞株生长及凋亡的影响。  结果  IFN-γ在NB细胞株SKNDZ中诱导了Caspase 8mRNA及蛋白表达。SY5Y细胞对TRAIL不敏感, 而IFN-γ与TRAIL或阿霉素, 依托泊苷联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。IFN-γ+TRAIL组SY5Y细胞早期凋亡率(23.09+2.35)%高于TRAIL组[(6.15±0.54)%(P< 0.01)], 但低于IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组[(43.41±6.46)%/(38.86±7.29)%, P< 0.01]。阿霉素或依托泊苷可以诱导NB细胞株DR5蛋白表达, 但未诱导DR4蛋白表达。IFNγ诱导后表达Caspase 8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感, 而阿霉素或依托泊苷处理后同时表达DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用相对敏感。IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组SKNDZ细胞早期凋亡率(11.54±2.49)%/(13.38±1.65)%高于IFN-γ+TRAIL组(P< 0.01)。  结论  IFN-γ上调Caspase 8表达及化疗药阿霉素或依托泊苷诱导DR5表达可以恢复NB细胞对TRAIL的敏感性, Caspase 8和DR5在TRAIL诱导NB细胞凋亡中起着十分关键的作用。      

肝细胞性肝癌组织浸润淋巴细胞表型与分布研究

目的:肝细胞性肝癌组织浸润淋巴细胞与外周血T 细胞表型可能与肿瘤进展及预后相关,本研究检测肝癌患者组织及外周血T 细胞表型与分布,分析淋巴细胞表型变化与预后的关系。方法:分析2007年10月至12月中山医院147 例肝癌及癌旁组织浸润淋巴细胞表型（T 细胞或B 细胞表面标志物:CD3、CD8、CD4、CD20、CD19、Foxp 3）,表型与临床病理特征及预后的关系;检测26例肝癌外周血CD3、CD8、CD4 +T细胞数量并其比例变化。结果:癌巢内肿瘤浸润细胞明显少于癌周组织（P < 0.01）,癌周淋巴细胞主要分布于癌旁正常肝组织、汇管区,其与患者肝炎病史及肝硬化相关,表型以CD3 +T细胞为主,其中又以CD8 + 细胞毒性T 细胞为主;CD4 染色在多数病例为阴性,Foxp 3 仅在个别病例（15/ 109）呈阳性。肿瘤浸润淋巴细胞B 细胞标志CD20、CD19均为阴性。肿瘤组织内CD8 +T细胞浸润数量与预后正相关,而癌周浸润淋巴细胞数目与患者转移及复发无显著关系。结论:肝癌肿瘤浸润细胞在癌巢内明显少于癌周组织,肿瘤及癌周浸润细胞以CD8 + 细胞毒性T 细胞为主。肿瘤组织内CD8 +T细胞浸润数量与预后相关,而癌周浸润淋巴细胞数量与患者转移及复发无显著关系。      

A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤组织和CD8+T细胞上的表达和预后价值的研究

  目的  探讨A2aR在弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）组织和CD8+T细胞上的表达及与患者临床病理特征和预后的相关性。  方法  回顾性分析2010年1月1日至2015年12月31日就诊于天津医科大学肿瘤医院初治的72例DLBCL患者临床病理资料。采用多重免疫组织化学法检测组织中A2aR、CD8的表达,采用χ2检验分析其与患者临床病理特征的相关性,应用Kaplan-Meier法进行生存资料分析。  结果  DLBCL组织中A2aR总表达阳性率为41.7%（30/72）,与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、B症状相关（P < 0.05）;A2aR+组患者总生存期（overall survival,OS）较A2aR-组差（P < 0.05）。DLBCL组织中CD8+T细胞上A2aR表达阳性率为22.2%（16/58）,与患者分期、IPI评分、Ki-67、β2-MG、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、结外受累数目、B症状相关（P < 0.05）;A2aR+CD8+组患者OS较A2aR-CD8+组显著更差（P < 0.001）。  结论  A2aR总表达及CD8+T细胞上A2aR表达与DLBCL患者临床病理特征及预后密切相关。检测CD8+T细胞上A2aR表达可更好地评价DLBCL患者的预后。      

肺癌患者外周血调节性T细胞和IL-10的检测及其意义

  目的  探讨肺癌患者外周血调节性T细胞和IL-10检测的诊断意义及与临床特征相关性。  方法  采用流式细胞仪检测60例肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞的表达水平, 同时采用ELISA法检测IL-10的表达水平。并随机选30例健康体检者作为对照组。  结果  肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平明显高于健康对照组（P < 0. 05）; CD4+CD25+T细胞与IL-10的检测结果呈正相关; 肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平与临床分期有关（P < 0. 05）, 与病理类型无关（P>0. 05）。  结论  检测肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞和IL-10的表达水平, 有助于肺癌患者病情的评估和治疗。      

共刺激分子B7-H3在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

背景与目的：B7-H3是近年来新发现的协同刺激分子B7家族成员,但目前其在骨肿瘤中的表达及作用机制尚不明确。该研究旨在通过检测人骨肉瘤中B7-H3分子的表达,分析其与患者临床病理因素以及术后生存时间之间的关系。方法：采用免疫组织化学法检测61例人骨肉瘤组织、对应癌旁组织及良性骨肿瘤组织中B7-H3分子的表达以及肿瘤浸润T淋巴细胞的浸润程度。结果：骨肉瘤组织中B7-H3分子表达的阳性率为91.8(56/61),而B7-H3在癌旁及骨纤维结构发育不良组织中几乎不表达。B7-H3分子在骨软骨瘤中表达率为56.8%,但染色强度明显弱于骨肉瘤组织。B7-H3的表达与患者的Ennecking分期、是否发生肺转移之间的差异有统计学意义(P<0.05),与肿瘤组织中CD8⁺T淋巴细胞浸润程度呈负相关(P<0.05),与患者预后呈负相关(P<0.05)。结论：B7-H3在人骨肉瘤中组织异常高表达,并与肿瘤的进展、患者的预后密切相关;B7-H3可能参与了骨肉瘤微环境中的CD8⁺T细胞功能的调节,促使肿瘤细胞逃避免疫监视。     

STAT3磷酸化调控乳腺癌髓系来源抑制细胞介导T细胞免疫抑制的机制研究

  目的   检测STAT3在乳腺癌MDSCs中的磷酸化状态及其对MDSCs免疫抑制活性的影响。   方法  收集脐血单个核细胞,免疫磁珠的方法分选其中CD33+细胞,体外与乳腺癌细胞系MDA-MB-231共孵育诱导MDSC生成。Western blot方法分别检测IDO和STATs的表达与磷酸化情况。MDSCs与健康供者外周血T淋巴细胞共孵育,分别加入1-MT和JSI-124来抑制IDO功能和STAT3磷酸化,利用MTT实验和ELISA检测各组T细胞的增殖和细胞因子分泌。   结果  Western blot检测发现体外诱导的MDSCs中IDO表达明显增加,同时伴STAT3磷酸化水平升高。加入JSI-124后pSTAT3和IDO表达明显降低。MTT实验中MDSCs明显抑制T细胞增殖,加用IDO特异性抑制剂1-MT或STAT3抑制剂JSI-124后T细胞增殖抑制明显改善（P < 0.05）,且1-MT组和JSI-124组之间差异无统计学意义。ELISA结果显示MDSCs显著抑制T细胞分泌IFN-γ,促进TGF-β、IL-10释放（P < 0.05）。而加用1-MT或JSI-124后,IFN-γ分泌水平升高,而TGF-β、IL-10分泌水平降低（P < 0.05）,而1-MT组和JSI-124组之间差异无统计学意义。   结论   MDSCs中磷酸化STAT3水平升高导致IDO过表达;STAT3的特异性抑制剂JSI-124可以逆转MDSCs对T细胞增殖和Th1类因子分泌的抑制作用。      

IL-2、IFN-α、IFN-γ对肾透明细胞癌786-0细胞中B7-H4表达的影响

目的：探究IL-2、IFN-α和IFN-γ对人肾透明细胞癌786-0细胞B7-H4表达的影响。方法：IL-2、IFN-α、IFN-γ处理786-0细胞24 h后,RT-PCR法检测 B7-H4 mRNA的表达,ELISA法、免疫细胞化学法、流式细胞术检测B7-H4蛋白的表达。结果：RT-PCR结果显示,IL-2组（0.75±0.06）、IFN-α组（0.68±0.05）、IFN-γ组（0.95±0.08）786-0细胞中B7-H4 mRNA的表达均明显高于未处理组细胞（0.30±0.03）（P<0.05）。免疫细胞化学染色结果显示,于786-0细胞膜与细胞质均可检测到B7-H4蛋白表达,IL-2、IFN-α、IFN-γ处理均可增加786-0细胞B7-H4蛋白的表达。ELISA结果显示,IL-2组\[（44.89±0.97）ng/ml\]、IFN-α组\[（46.74±2.25） ng/ml\]、IFN-γ组\[(47.31±1.12) ng/ml\] 786-0细胞上清液中分泌型B7-H4的表达明显高于未处理组\[（34.42±1.69）ng/ml\]（P<0.05）。流式细胞术检测结果表明,IL-2组\[（44.89±0.94）%\]、IFN-α组\[（46.41±0.55）%\]、IFN-γ组\[（54.18±1.42）%\] 786-0细胞表面B7-H4蛋白的阳性表达率明显高于未处理组\[（30.45±0.96）%\]（P<0.05）。结论：IL-2、IFN-α、IFN-γ在转录与翻译两个环节均可上调786-0细胞B7-H4的表达水平,其中以IFN-γ上调能力最强。     

乳腺癌患者淋巴结CD4＋CD25＋T细胞和相关细胞因子的检测及相关性分析

目的探讨CD4＋CD25＋T细胞在乳腺癌发生、发展中的作用。方法将取自35例乳腺癌患者的105个肿大淋巴结,制备成单细胞悬液,应用流式细胞仪检测CD4＋CD25＋T细胞比例及CD4＋CD25-、CD8＋T细胞、NK细胞的相对水平。采用定量RT-PCR法,检测IL-2、IL-10、TGF-β1和IFN-γ的细胞因子水平。结果乳腺癌患者淋巴结中的CD4＋CD25＋T细胞水平（在CD4＋T细胞中的百分含量）与淋巴结转移相关,转移淋巴结中其水平明显高于未转移淋巴结。乳腺癌患者淋巴结中CD4＋CD25＋T细胞与CD4＋CD25-、CD8＋T细胞和NK细胞的水平呈负相关关系。乳腺癌患者淋巴结中CD4＋CD25＋T细胞水平与TGF-β1呈正相关,与IL-2、IL-10、IFN-γ无相关性。乳腺癌患者淋巴结中TGF-β1、IL-10、IFN-γ水平与淋巴结转移相关,转移淋巴结中TGF-β1、IL-10含量高而IFN-γ含量较低。IL-2与淋巴结转移无相关性。结论乳腺癌患者转移淋巴结中的CD4＋CD25＋T细胞水平高于未转移淋巴结。