胃癌组织中Sox7、Sox17基因甲基化及临床意义

摘 要：［目的］ 检测胃癌组织及相应癌旁组织中Sox7、Sox17基因的甲基化状态,探讨其与胃癌发生的关系及对预后的影响。［方法］应用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）、RT-PCR方法检测96例胃癌及相应癌旁组织中Sox7、Sox17基因的甲基化状态及mRNA表达情况。［结果］ 在96例胃癌组织标本中,Sox7、Sox17基因的甲基化率分别为49.0%(47/96)、78.1%(75/96),均明显高于癌旁非肿瘤组织（P<0.01）;癌组织中Sox7、Sox17mRNA阳性表达率分别为30.2%（29/96）、14.6%（14/96）,均明显低于癌旁非肿瘤组织（P<0.01）。Sox7、Sox17基因的甲基化率均与该基因的mRNA表达密切相关（P<0.01）;癌组织中Sox7、Sox17基因的甲基化状态与胃癌患者的病理分级、临床分期及淋巴结转移均无关,但两基因共同甲基化率与淋巴结转移相关。对96例胃癌患者进行随访,失访率为10.4%。Sox7基因甲基化组与非甲基化组的5年累积生存率分别为23.4%和46.9%,Sox17基因甲基化组与非甲基化组的5年累积生存率分别为30.6%和52.4%,而Sox7、Sox17基因共同甲基化组与非共同甲基化组的5年累积生存率分别为13.9%和48.3%。［结论］ 胃癌患者中Sox7、Sox17基因甲基化状态与胃癌患者的生存相关。     

乳腺癌患者血浆循环DNA中Sox17基因甲基化检测的临床意义

背景与目的：在乳腺癌发生、发展过程中,甲基化异常是导致抑癌基因失活的重要机制,是一种可用于肿瘤诊断及预后判断、有价值的生物标志物。本研究旨在通过检测乳腺癌组织及其相应的血浆循环DNA中Sox17基因的甲基化状况,探讨其在乳腺癌早期诊断和预后判断方面的应用价值。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific-PCR,MSP)法,对86例乳腺癌组织、36例乳腺良性肿瘤的癌旁正常组织及其配对的血浆循环DNA中Sox17基因启动子甲基化进行检测,并结合乳腺癌的主要临床病理特性进行分析。结果：86例乳腺癌组织中Sox17基因启动子的甲基化率为77.9%(67/86),与其相应血浆循环DNA中Sox17基因启动子的甲基化率为61.6%(53/86),36例癌旁正常乳腺组织及血浆中均未检测到Sox17基因异常甲基化。患者血浆循环DNA中Sox17基因启动子的甲基化与肿瘤组织中该基因的甲基化显著相关(r=0.502,P=0.000)。在乳腺癌组织标本中Sox17基因甲基化率与患者肿瘤分期(χ2=6.18,P=0.041)、淋巴结转移(χ2=13.54,P=0.001)显著相关,在血浆标本中,Sox17基因甲基化率与患者肿瘤分期(χ2=27.06,P=0.000)、肿瘤大小(χ2=9.65,P=0.007)及淋巴结转移(χ2=20.80,P=0.000)显著相关,与患者年龄、组织学分级及ER、PR、HER-2/neu等指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论：Sox17基因启动子甲基化在乳腺癌的发生、发展中起着重要作用,可能与乳腺癌的预后相关。血浆中Sox17基因甲基化,是一个有潜在应用价值的生物标志物。     

贲门腺癌中Sox17蛋白表达及其与β-catenin、cyclin D1蛋白相关性研究

目的：检测贲门腺癌中Sox17蛋白表达及其与β-catenin和cyclin D1蛋白的相关性,探讨三者的表达状态与贲门腺癌发生发展的关系。方法：应用免疫组织化学法检测78例贲门腺癌及相应癌旁非肿瘤组织中Sox17、β-catenin及cyclin D1蛋白的表达情况及其与临床病理指标的关系。结果：在贲门腺癌组织中,Sox17、β-catenin和cyclin D1的阳性表达率分别为47.4% （37/78）、83.3% （65/78）和70.5%（55/78）;在癌旁非肿瘤组织中,三者的阳性表达率分别为69.2%（54/78）、62.8%（49/78）和44.9% （35/78）,差异均有统计学意义（P < 0.01）。Sox17蛋白的阳性表达率与β-catenin和cyclin D1的阳性表达率均呈负相关（r=-0.264,P < 0.05;r=-0.287,P < 0.05）;β-catenin与cyclin D1的阳性表达率呈显著正相关（r=0.913,P < 0.05）。Sox17在I、II期的阳性表达率明显高于III、IV期,二者比较差异有统计学意义（P < 0.05）。β-catenin、cyclin D1的阳性表达率与淋巴结转移状态有关（P < 0.05）。结论：Sox17蛋白在贲门腺癌中低表达,其可能通过异常活化Wnt/β-catenin信号转导通路,上调β-catenin蛋白及其下游靶蛋白cyclin D1的表达水平参与了贲门腺癌的发生发展。     

转录因子 SOX7 基因在贲门腺癌中的异常表达及其甲基化状态

目的：检测贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）组织及相应癌旁非肿瘤组织中Y性别决定区基因7（sex determining region Y-box 7, SOX7 ）的甲基化状态及其对 SOX7 mRNA表达、Wnt通路中心因子β-catenin异质表达的影响及与临床病理特征之间的相关性。方法：选择河北医科大学第四医院胸外科2006-2012年手术切除的GCA及癌旁组织各130例,应用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR, MSP）、RT-PCR分别检测130例GCA及癌旁组织中 SOX7 基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学方法检测标本中β-catenin蛋白的表达。分析 SOX7 的甲基化状态与临床病理特征、 SOX7 mRNA表达、β-catenin蛋白的异质表达及上消化道肿瘤家族史（upper gastrointestinal cancers,UGIC）的关系。 结果 ：GCA组织中 SOX7 的甲基化率显著高于癌旁组织为\[57.7%（75/130） vs 30.8%（40/130）, P <0.01\],其高甲基化仅与肿瘤患者的淋巴结转移情况有关（ P <0.05）,与肿瘤组织的病理分级及临床分期均无关（ P >0.05）。GCA组织中 SOX7 mRNA的表达量明显低于癌旁非肿瘤组织\[(0.414±0.054) vs (0.695±0.034), P <0.01]\],其β-catenin蛋白的异质表达率显著高于癌旁组织（85.4% vs 43.1%, P <0.01）;GCA组织中 SOX7 基因mRNA表达情况及β-catenin蛋白的异质表达率均与该基因的甲基化状态有关（ P <0.05）,并且 SOX7 基因的甲基化状态与贲门癌患者的上消化道家族史密切相关（ P <0.01）。结论： CpG岛甲基化是 SOX7 基因表达下调的机制之一,并可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路的激活在贲门腺癌的发生中扮演着重要的角色。     

河北省食管癌高发区贲门腺癌Syk基因甲基化状态研究

目的:研究胃贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk) 基因启动子甲基化及其蛋白表达情况.方法:采用改进的甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)和免疫组织化学SP法检测GCA组织及相应癌旁正常组织中Syk基因的DNA甲基化和蛋白表达情况. 结果:47例GCA组织中Syk基因启动子的甲基化发生率为31.9%(15/47),显著高于癌旁正常组织(0/47)(P<0.001);Ⅲ、Ⅳ期贲门癌患者中Syk基因甲基化发生率(35.7%)高于Ⅰ、Ⅱ期 (26.3%),低分化腺癌组的甲基化发生率(37.0%)高于高、中分化组 (25.0%),但差异均无统计学意义.47例GCA组织中Syk蛋白的表达率为17.0%(8/47),与相应癌旁正常组织的Syk蛋白表达率(74.4%,35/47)相比差异有统计学意义(P<0.001);Ⅲ、Ⅳ期患者的Sky蛋白表达率(10.7%)低于Ⅰ、Ⅱ期患者的蛋白表达率(26.3%),低分化腺癌组的蛋白表达率(11.1%)低于高、中分化腺癌组的蛋白表达率(25.0%),但差异均无统计学意义.结论:Syk基因启动子区甲基化导致的基因沉默可能是GCA发生的机制之一,可作为反映GCA生物学行为的检测指标.     

贲门腺癌中Wif-1基因甲基化状态与VEGF-C/VEGF-D表达的关系

目的 研究贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma, GCA）中Wnt抑制因子-1（Wnt inhibitory factor-1, Wif-1）基因启动子区甲基化状态及VEGF-C、VEGF-D蛋白表达情况,探讨其相互关系及其在贲门腺癌发生发展中的作用。方法 应用巢式甲基化特异性PCR（MSP）方法检测贲门腺癌组织及相应正常黏膜组织中Wif-1基因甲基化状态;应用免疫组织化学SP法检测VEGF-C/VEGF-D蛋白表达情况。结果 Wif-1基因在贲门腺癌及相应正常黏膜组织中的甲基化率分别为61.7%和34.0%,癌组织中Wif-1基因的甲基化率明显高于正常黏膜组织（P=0.000）;癌组织中VEGF-C、VEGF-D蛋白的阳性表达率分别为63.8%和76.6%,显著高于正常黏膜组织（P=0.000）;发生甲基化的贲门腺癌组织中VEGF-C、VEGF-D蛋白的阳性表达率明显高于未发生甲基化的贲门腺癌组织（P_VEGF-C=0.008;P_VEGF-D=0.022）;癌组织中Wif-1基因的甲基化与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移相关（P<0.05）,而与肿瘤的病理分级无关。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化及VEGF-C、VEGF-D蛋白的过表达可能与贲门腺癌的发生有关。     

贲门腺癌中RASSF1A基因的甲基化状态及表达

 目的 研究贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma,GCA）中RASSF1A基因的甲基化状态及其蛋白表达情况。 方法 分别应用甲基化特异性PCR（MSP）、RT-PCR及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的RASSF1A甲基化情况和mRNA水平及蛋白表达情况。 结果 92例贲门癌组织中有54例发生了甲基化,甲基化率为58.7%,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中RASSF1A基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。92例贲门癌组织中有43例RASSF1A基因蛋白表达阴性,与相应癌旁正常组织相比有显著性差异（P<0.01）。Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌RASSF1A基因蛋白表达显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P<0.05）。发生甲基化的贲门癌组织中RASSF1A的mRNA水平的表达显著低于未发生甲基化的贲门癌组织（P<0.01）。 结论 RASSF1A基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一。     

贲门腺癌中 DACT-1 基因的甲基化状态及其临床意义

目的:检测贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)及相应癌旁非肿瘤组织中β-环连蛋白抑制基因1(dishevelled-binding antagonist of beta-catenin 1,DACT-1)的甲基化状态,并探讨其临床意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)、定量RT-PCR的方法分别检测112例贲门腺癌(河北医科大学第四医院外科和磁县肿瘤医院胸外科于2006-2014年收治)及相应癌旁非肿瘤组织中DACT-1基因的甲基化状态及其mRNA表达情况.结果:在贲门腺癌组织中,DACT-1基因的甲基化率为51.8％(58/112),癌旁非肿瘤组织中该基因的甲基化率为17.6％ (20/112),癌组织中DACT-1基因发生甲基化的频率明显高于癌旁非肿瘤组织(P＜0.01);癌组织中DACT-1基因mRNA的表达量为0.580±0.143,明显低于癌旁非肿瘤组织(0.654 ±0.110,P＜0.01);在DACT-1基因甲基化的贲门癌组织中该基因mRNA的表达量为0.488±0.097,明显低于该基因未甲基化的贲门癌组织(0.675 ±0.120),且该基因甲基化状态与其mRNA表达量相关(P＜0.01).癌组织中DACT-1基因的高甲基化状态与肿瘤患者的淋巴结转移情况及上消化道肿瘤家族史有关(P＜0.05),而与肿瘤患者的年龄、性别及肿瘤组织的病理分级、临床分期均无关(P＞0.05).结论:贲门腺癌中基因CpG岛的高甲基化可能是DACT-1基因表达下调的机制之一;DA CT-1基因启动子区的甲基化状态有望为贲门腺癌临床辅助诊断和预后评估提供新的指标.     

贲门腺癌中E-钙黏蛋白基因甲基化状态研究

目的：研究贲门腺癌（gastric cardiac adenocarcinoma，GCA）中E-钙黏蛋白（E—cadherin）的基因甲基化状态及其蛋白表达情况。方法：分别应用巢式甲基化特异性PCR（methylation specific PCR，MSP）方法及免疫组织化学SP法检测贲门癌组织及相应癌旁组织的甲基化和蛋白表达情况。结果：92例贲门癌组织中有63例E—cadherin发生了甲基化，甲基化率为68．5％，显著高于癌旁正常组织（P〈0．001）；Ⅲ期和Ⅳ期的发生率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P=0．01）；低分化腺癌组发生甲基化的比率显著高于中、高分化腺癌组（P〈0．01）。92例贲门癌组织中有51例蛋白表达呈明显的异质性．贲门癌组织的E-cadherin蛋白表达率为44．6％，与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义（P〈0．001）。Ⅲ期和Ⅳ期患者的蛋白表达明显低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（P〈0．01）；低分化腺癌组的蛋白表达率也低于中、高分化腺癌组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：E—cadherin基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一，可作为反映贲门腺癌生物学行为的指标。     

长链非编码RNA XLOC_002319在贲门腺癌中的表达及其甲基化状态

[目的]检测贲门腺癌(GCA)中长链非编码RNA XLOC_002319(lncRNA XLOC_002319)的表达及其甲基化状态,探讨XLOC _002319在贲门腺癌发生发展中的作用.[方法]分别应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)以及甲基化特异性PCR(MSP)检测贲门腺癌组织、癌旁不典型增生组织及癌旁正常组织中XLOC_ 002319的表达和甲基化状态.[结果]XLOC_002319在贲门腺癌组织和癌旁不典型增生组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P＜0.01),并且在贲门腺癌组织中XLOC_ 002319的表达与组织学分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P＜0.05).贲门腺癌组织中XLOC _002319的启动子区甲基化率(61.54％)和癌旁不典型增生组织甲基化率(54.84％)显著高于癌旁正常组织(17.95％)(P＜0.01),并且贲门腺癌组织中XLOC_002319的启动子区甲基化率与组织学分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P＜0.05).发生XLOC_002319甲基化的贲门腺癌组织中XLOC_002319的表达显著低于未发生甲基化的贲门腺癌组织(0.217±0.074 vs 0.253±0.060,P＜0.05).[结论]XLOC_002319在贲门腺癌中的异常低表达可能与贲门腺癌的发生密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一.     

β-环连蛋白抑制基因2甲基化状态对贲门腺癌发生发展的影响及机制

[目的]检测贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)及相应癌旁组织中β-环连蛋白抑制基因2 (dishevelled-binding antagonist of beta-catenin 2,DACT2)的表达情况及其临床意义,探讨引起基因表达异常的可能机制及对Wnt通路活化的影响.[方法]应用甲基化特异性PCR (methylation specific PCR,MSP)、RT-PCR分别检测河北省上消化道肿瘤高发区104例贲门腺癌及相应癌旁非肿瘤组织中DACT2基因的甲基化状态及mRNA的表达情况.应用免疫组织化学(IHC)检测β-catenin蛋白的表达.[结果]在104例贲门腺癌组织标本中,DA CT2基因的甲基化发生率为60.6％(63/104),明显高于癌旁非肿瘤组织(P＜0.01);且在发生该基因的甲基化的贲门腺癌标本中其mRNA表达及Wnt通路中心因子β-catenin的异常表达率均明显高于未发生该基因甲基化的贲门癌组织(P＜0.01);且该基因的甲基化状态与肿瘤患者的病理分级、临床分期、淋巴结转移和上消化道肿瘤家族史相关(P＜0.05),而与肿瘤患者的年龄、性别无关(P＞0.05).[结论]基因启动子区的高甲基化状态是DACT2基因表达下调的机制之一,其低表达可引起Wnt/β-catenin信号传导通路的异常活化并在贲门腺癌的发生发展中发挥一定的作用.     

Villin蛋白的表达及其与贲门腺癌的关系

目的 探讨Villin蛋白在贲门肠化中的作用及其与贲门腺癌(GCA)发生、发展的关系.方法 采用免疫组织化学S-P法检测128例胃镜活检及手术切除的GCA及癌旁肠化组织中Villin蛋白的表达,其中贲门肠化组织25例、肠化伴不典型增生组织48例,GCA组织55例,并选取15例胃镜普查正常贲门组织作为对照.结果 Villin蛋白在正常贲门组织中无阳性表达,在贲门肠化组织中的阳性表达率为76.0%(19/25),肠化伴不典型增生组织中的阳性表达率为60.4%(29/48),GCA组织中的阳性表达率为36.4%(20/55),比较差异有统计学意义(P<0.05).Villin蛋白的表达与GCA的分化程度有关(P<0.05).结论 Villin蛋白参与了贲门组织早期肠化和GCA的发生,并在GCA的细胞分化中起重要作用.     

贲门粘膜癌癌前病变与幽门螺杆菌感染关系的研究

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter.pyloriH.pylori)感染与贲门癌癌前病变发生的关系。方法:对我国食管癌高发区河北省涉县偏店、固新两乡的201例当地居民进行上消化道内镜普查,在贲门区不同位点(贲门脊根部内镜下12点位和对侧内镜下6点位)取活检,活检组织经HE染色进行病理诊断,Giemsa染色找H.pylori。结果:河北省涉县居民H.pylori感染率61.2%;在H.pylori感染者中,贲门脊根部H.pylori阳性率97.3%,对侧6点位H.pylori阳性率64.3%,P<0.05。H.pylori在贲门粘膜慢性活动性胃炎组织中阳性检出率为88%。结论:H.pylori感染与河北省涉县居民贲门癌癌前病变的发生有密切关系。     

Risk Factors for Rising Incidence of Esophageal and Gastric Cardia Adenocarcinoma

Introduction

In the last 30 years, the incidence of esophageal and gastric cardia adenocarcinoma has steadily increased. The increase in incidence is approximately seven-fold, which is a more substantial increase than that of several malignancies, including melanoma, breast cancer, and prostate cancer.

Discussion

The rising incidence has led to a steady increase in mortality from 2 to 15 deaths per 100,000 in the last three decades. The etiologic factors involved in the development of these malignancies include gastroesophageal reflux disease, Barrett’s esophagus, acid-suppressive medication use, obesity, and tobacco use. This article discusses the contribution of these etiologic risk factors to this increase in incidence.     

贲门腺癌雌孕激素受体及PCNA表达相关性初探

目的 :比较贲门腺癌增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)及雌激素受体(ER)、孕激素受体 (PR)检测结果 ,探讨PCNA及ER、PR与贲门癌发生发展和预后的关系。方法 :应用免疫组化法对 66例贲门癌进行PCNA和ER、PR检测。结果 :高分化腺癌PCNA阳性率高 ,ER、PR低 ;低分化腺癌PCNA阳性率低 ,ER、PR高。说明PCNA、ER、PR表达与肿瘤分化程度有相关性 (P <0 0 5 )。结论 :ER、PR、PCNA与贲门癌发生、发展有关 ,可能是反映贲门癌生物学行为和预测预后的重要指标。其检测具有实际临床意义 ,对临床治疗有参考价值     

重视对食管腺癌、贲门腺癌诊断标准及流行病学的研究

自20世纪90年代初以欧美为主的国家报道食管腺癌（EA）和贲门腺癌（GCA）的发病以每年4%～10%的增长,而食管鳞癌发病相对稳定,远端胃癌则轻度下降。同样自90年代以来我国食管癌高发现场,以GCA为主的胃癌发病死亡上升,食管鳞癌则出现大幅度下降。GCA的流行趋势变化,主要原因是ICD编码的规范和内镜的临床广泛应用,提高了食管癌与贲门癌的鉴别诊断。     

血清胃泌素放射免疫测定在贲门癌的临床应用

本文采用放射免疫测定技术对３５例贲门癌病人及３０例正常人空腹进行了血清胃泌素浓度的检测，结果贲门癌病人空腹血清胃泌素水平（１９１．４±４６．３Ｐｇ／ｍｌ）显著高于正常对照组（４８．３±２４．９Ｐｇ／ｍｌ）；有淋巴结转移者（１０７．３±４０．６Ｐｇ／ｍｌ）显著高于无淋巴结转移者（４９．３±３１．６Ｐｇ／ｍｌ）；癌肿浸润粘膜肌层以外者（１１３．７±４１．３Ｐｇ／ｍｌ）显著高于癌肿浸润粘膜肌层以内者（６２．８±３７．１Ｐｇ／ｍｌ）；分化良好的腺癌病人（９２．４±４３．８Ｐｇ／ｍｌ）较低分化腺癌病人（１０９．４±５１．３Ｐｇ／ｍｌ）无显著差异性。研究结果表明：空腹血清胃泌素测定有助于探讨胃泌素与贲门癌的关系、诊断以及预后的判断。