人精子2种扫描电镜样品制备方法的比较

目的:比较人精子2种扫描电镜样品制备方法的效果。方法:10例精液标本,同一例标本分别采用扫描电镜一般样品制备程序(方法A,A组)和本实验室方法(方法B,B组)处理。方法:B组减少了固定后洗涤精子、脱水和醋酸异戊脂置换的时间,增加了多级乙醇浓度梯度。观察2组开裂精子率的差别。结果:应用2种标本制备程序处理的各例标本,均可观察到开裂或断裂的精子。裂开部位可发生在精子头部、颈部或尾部,以发生在头部为多见,其次为颈部。A组的开裂精子率为28.9±16.2%,B组的为14.1±7.7%,B组的显著少于A组(P<0.01)。结论:方法B的程序更适合于人精子标本的制备,可减少精子表面的开裂或结构断裂,有利于人精子超微形态学观察。     

人工皱缩后玻璃化冷冻小鼠扩张囊胚的效果观察

目的:观察冷冻前人工皱缩小鼠扩张期囊胚的囊胚腔,冻融后小鼠扩张期囊胚的存活率及体外和体内继续发育能力。方法:冻前先应用自制的玻璃微细管人工皱缩小鼠囊胚腔后,再应用冷冻环进行玻璃化冷冻小鼠扩张期囊胚150个。冻融后培养3h观察胚胎存活情况,以新鲜扩张囊胚为对照,并将存活胚胎及新鲜未冻囊胚移植受体孕鼠子宫内,观察胚胎的妊娠率和产仔率。结果:人工皱缩后小鼠扩张囊胚的存活率及孵出率均显著高于未皱缩组(P<0.05),皱缩组与对照组无显著差异(P>0.05)。移植后皱缩组的妊娠率及产仔率均显著高于未皱缩组(P<0.05),皱缩组与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:冻前人工皱缩小鼠扩张期囊胚的囊胚腔后,再应用冷冻环进行玻璃化冷冻是个行之有效的方法,能明显提高囊胚的玻璃化冷冻效率。     

不同冷冻法对小鼠未成熟与成熟卵母细胞的成熟及胚胎发育的影响

本研究观察应用慢速冷冻．快速复温(常规冷冻法)与玻璃化冷冻法，对小鼠生殖泡期未成熟及第二次减数分裂中期(metaphageⅡ，MⅡ)成熟卵母细胞冷冻后的解冻、体外成熟、受精及早期胚胎发育的影响。     

玻璃化冷冻法对小鼠MⅡ卵纺缍体及染色体的影响

目的:探讨玻璃化冷冻法对小鼠MⅡ卵纺缍体及染色体的毒性。方法:收集小鼠MⅡ卵,分A组(新鲜对照组)、B组、C组和D组(玻璃化冷冻法冻融后分别培养0h、1h和3h固定)及E组、F组和G组(MⅡ卵经玻璃化冷冻液处理后分别培养0h、1h和3h固定),共7组,固定后免疫荧光标记纺锤体和染色体。结果:各组纺锤体正常率无显著差异(P>0.05),染色体正常率:B组显著低于A组(50%vs 87.5%,P<0.01),E组(47.62%)和F组(45%)显著低于A组和G组(75%)(P<0.05)。纺锤体和染色体均正常率:B组显著低于A组(41.67%vs 75%,P<0.05),E组(47.62%)和F组(45%)显著低于A组和G组(75%)(P<0.05)。B、C、D及E、F、G组的细胞骨架正常率依次提高,且玻璃化冷冻组(B组、C组和D组)和冷冻液暴露组(E组、F组和G组)相应时段(0h、1h及3h)比较(即B组与E组、C组与F组及D组与G组比较)均无显著差异(P>0.05)。结论:冷冻保护剂的细胞毒性在玻璃化冷冻损伤中起主要作用,但它对纺缍体的损伤是可逆的。     

小鼠卵母细胞慢速冷冻的初步研究——附人妊娠分娩1例报道

目的:探讨不同浓度蔗糖联合丙二醇(PROH)冷冻保护剂对小鼠卵母细胞冻融的影响。方法:①观察不同蔗糖浓度(0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L)联合应用1.5mol/L的PROH对小鼠卵母细胞复苏率的影响。②对1例采卵日未能取得精子的不孕症患者,应用0.3mol/L蔗糖联合1.5mol/LPROH将其卵母细胞用慢速冷冻方法冷冻保存,随后解冻并移植。结果:①随着蔗糖浓度的提高,卵母细胞复苏率也随之升高,0.3mol/L蔗糖组复苏率达74%。②1例患者卵母细胞复苏后行卵胞浆内ICSI-ET,获临床妊娠,妊娠中期羊水染色体核型分析正常,妊娠35周因妊高征剖宫产1健康男婴。结论:对卵母细胞慢速冷冻中,适当提高蔗糖浓度可获得较满意的复苏率、受精率及卵裂率,胚胎移植后能够出生健康新生儿。     

玻璃化法冻融小鼠桑葚胚期和囊胚期胚胎的效果观察

目的 比较玻璃化法冻融小鼠桑葚胚期、囊胚早期和囊胚期胚胎后,胚胎存活及继续发育的能力。方法应用6 mol/L乙二醇和1 mol/L蔗糖的玻璃化冷冻液,冻融小鼠142个桑葚胚期、135个囊胚早期和148个囊胚期胚胎,观察冻融后胚胎存活及继续发育的情况。结果 小鼠桑葚胚期、囊胚早期和囊胚期胚胎的存活率分别为88.0％、73.3％和60.1％,囊胚孵出率分别为73.9%、61.5％和49.3％。桑葚胚期的胚胎存活率及囊胚孵出率均高于囊胚早期,囊胚早期高于囊胚期,各期胚胎存活率、囊胚孵出率比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论 玻璃化法冻融桑葚胚期的效果好于囊胚早期及囊胚期,桑葚胚期是卵裂期后胚胎玻璃化冻融的最佳阶段。     

用ELISA法检测不孕夫妇抗精子抗体——附137对观察结果

本文应用ELISA检测不明原因不孕夫妇血清抗精子抗体,结果抗体阳性率为35%,其中不孕女方阳性21.9%,不育男方阳性13.1%。而FD法和SIT法抗精子抗体阳性率各为28.5%与21.9%,三法总符合率为90.2%。不孕组抗精子抗体阳性与对照组比较,有显著统计学意义(P<0.01)。显示不孕夫妇抗精子抗体的发生明显高于生育组。本文就抗精子抗体的发生与不孕症的关系、诊断及其临床意义进行了讨论。     

早孕的测定——用放射受体法鉴定人绒毛膜促性腺激素

放射受体鉴定法是测定生物液中激素水平的一种敏感性很高的最新方法,它根据激素和靶子组织上的受体具有亲和性和特异性结合的原理,用放射性同位素标记的激素,和欲测定的体液中的激素,使其与靶子组织上的受体作竞争性结合,从而测定体液中该激素的含量。一般来讲,欲测定的体液中激素含量越多,含放射性的受体的量就越少,反之亦然。也就是说,放射性受体的量与体液中激素的量呈一定的函数关系。放射受体鉴定法已被用来测定人血液中绒毛膜促性腺激素(HCG)或促黄体生成素(LH),其灵敏度大于3毫微克/毫升,最小的可测值在70微微克左右,并与其它激素不发生交叉反应。因此,用放射受体鉴定法在怀孕的第6～8天就可测到血浆中的HCG水平的升高,这要比用目前较新的放射免疫法(在妊娠的第9天时才能测得HCG)     

HCG固相放射免疫法及其临床应用——用抗体包被的血球作固相抗体

用提纯精制的抗人绒毛膜促性腺激素抗体包被醛化血球,经冻干而成固相抗体。用之建立了人绒毛膜促性腺激素(HCG)的固相放射免疫测定方法(SRIA)。本法操作简便,三小时即可出结果;灵敏度、精确度和准确度都与常规的双抗体法相当;所用固相抗体非常稳定、在4—8℃保存了三年,制备方法简单,取材容易,适于大批量生产。