WHO合作研究验证转基因小鼠替代猴子用于脊髓灰质炎减毒活疫苗的神经毒力试验

神经毒力试验( NVT)是口服脊髓灰质炎疫苗( OPV)生产中的关键试验,按世界卫生组织( WHO)规程每个单价批OPV都要进行该项检测。由于猴子是脊髓灰质炎(脊灰)病毒的天然宿主,故至今NVT仍是在猴体上完成。1 990～1 991年WHO支持的两个实验室建立了携带人脊灰病毒受体的转基因小鼠。1 992年WHO推荐用不同毒力的3型脊灰病毒对转基因小鼠Tg PVR和猴子作敏感性比较试验,结果转基因小鼠可以区别OPV和高神经毒力制备物。1 993年日本实验动物中心研究所( CIEA)成功地将实验室规模的转基因小鼠Tg PVR2 1开发为能大量供应的标准实验动物,…     

风疹病毒减毒活疫苗猴体神经毒力试验

目的 评价风疹病毒减毒活疫苗的潜在神经毒力。方法 普通级恒河猴随机分为2组,风疹病毒减毒活疫苗组10只,对照组2只,采用猴脑定位的方法将风疹病毒减毒活疫苗接种于猴两侧丘脑,对照组接种等体积生理盐水;检测血清抗体效价;并观察动物是否产生抽搐、癫痫、共济失调、震颤等神经毒力症状,以及风疹病毒减毒活疫苗对一般体征、饮食、体温的影响;风疹病毒减毒活疫苗组疫苗接种后20 d、对照组接种后31 d进行脑部及脊髓大体解剖和组织病理学检查,以评价该疫苗的神经毒力。结果 猴丘脑注射疫苗后,风疹病毒减毒活疫苗组动物血清抗体效价呈阳性,免疫应答较好,对照组均呈阴性;动物未出现情绪激怒、呕吐、颈强直、抽风惊厥等神经毒力症状;动物外观、行为活动、饮食情况、体温等各方面均未见明显异常;组织病理学检查未见药物引起脑及脊髓的明显病理学改变。结论 风疹病毒减毒活疫苗在猴体中不具有神经毒力。     

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗引起的脊髓灰质炎相关病例1例调查报告

<正>2012年8月2日,莱阳市疾控中心接到AFP主动监测系统报告的1例AFP病例,2013年1月7日,由烟台市疑似预防接种异常反应调查诊断专家组进行了调查诊断,经过充分讨论得出如下结论:患儿右下肢迟缓性麻痹为疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎,属于预防接种异常反应,现将病例调查处理情况报道如下。1发病及诊治情况患儿男性,2012年5月3日出生,系G2P1,胎龄39+6周,镇疼分娩,产钳助产娩出,属足月顺产,出生阿氏评分10分,父母非近亲结     

口服脊髓灰质炎疫苗神经毒力试验新方法

口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)的猴体神经毒力试验(NT)是检测Sabin株减毒活疫苗各批间生产一致性的重要试验,并对OPV在人体应用的安全性作出了重要贡献。由于使用灵长目动物日益受到反对,发展新的替代试验来检测疫苗的神经毒力显得越来越重要。在世界卫生组织(WHO)全球疫苗和免疫计划(GPVI)及WHO生物制品专家的倡导下,分别进行了应用表达脊髓灰质炎病毒(PV)受体的转基因(TgPVR)小鼠和聚合酶链反应(PCR)及限制性内切酶酶切技术作突变分析(MAPREC)对Ⅲ型OPV质量检测的国际协作研究。在1995年9月26～28日召开会议,回顾了TgPVR小鼠和MAPREC在Ⅲ型PV研究中的结果,讨论了在Ⅰ、Ⅱ型PV上应用的可能性及在OPV质量控制方面的应用前景。本文对此会议内容作一简单介绍。     

一起超量服用脊髓灰质炎减毒活疫苗事故的处理报告

2000年4月25日,我县发生了一起一次性超量服用脊髓灰质炎减毒活疫苗事故,县卫生防疫站接到报告后,立即对此事进行了处理,避免了超量服用脊髓灰质炎活疫苗事故后果的发生。现报告如下。     

两种方法对Ⅰ型Sabin株脊髓灰质炎病毒神经毒力的共同评价

目的 研究PCR和限制性内切酶分析突变（mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage,MAPREC）技术和猴体神经毒力试验（monkey neurovirulence test,MNVT）评价同一批Ⅰ型Sabin株脊灰病毒神经毒力的结果差异。方法 采用MAPREC技术,检测Ⅰ型Sabin株脊灰病毒神经毒力关键位点480和525位点突变率;采用MNVT病理切片分析,评价Ⅰ型Sabin株脊灰病毒神经毒力。结果 MAPREC检测待测样品核酸480和525位点突变率均值为0.460%,低于高突变参考品的1.288%。MNVT切片结果分析表明,有效猴病变分值差合格。结论 对同一批样品,MAPREC与MNVT分析结果一致。     

乙型脑炎病毒E315回复突变对小鼠神经毒力的影响

目的  构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2 囊膜蛋白第315位氨基酸（E315）回复突变株,并分析该位点回复突变后在小鼠体内的神经毒力变化。方法  采用重叠PCR扩增含基因组第1921核苷酸位点回复突变的基因片段,替换SA14-14-2全长克隆的相应区域,获得回复突变株M315。通过测定突变株的蚀斑大小和一步生长曲线并与SA14-14-2进行比较,分析M315的增殖特征;采用小鼠模型测定该突变株的脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力和乳鼠传代返祖,分析疫苗株E315位点回复突变后毒力的变化。结果  成功构建了回复突变株M315,其蚀斑大小和增殖特征与疫苗株相似。M315对17~19日龄小鼠无皮下或腹腔入脑神经毒力,鼠脑病毒有很低但可检测的脑内神经毒力（小于3.0 lg蚀斑形成单位（plaque forming unit,PFU） / 0.03 ml）,皮下注射不发病。3~5日龄乳鼠脑内接种后发病,但脑内病毒毒力低于3.0 lgPFU / 0.03 ml。结论  在分子水平上证明了E315位点是影响乙型脑炎疫苗安全性的关键位点之一,但影响较弱。E315位点的回复突变虽使SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力和乳鼠传代返祖能力增强,但没有超出中国药典规定的毒力范围。     

脊髓灰质炎疫苗WHO神经毒力试验组织病理学判定的协作研究

为了研究不同实验室判定脊髓灰质炎疫     

无小鼠神经毒力的乙型脑炎病毒/登革病毒1型嵌合病毒的筛选与序列分析

目的  采用蚀斑纯化法筛选对小鼠无神经毒力的乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）/登革病毒（dengue virus,DENV）1型嵌合病毒（JD1）纯化株,分析影响JD1小鼠神经毒力的相关位点。方法  将JD1在乳地鼠肾细胞中进行3轮蚀斑纯化,检测JD1纯化株对小鼠的脑内神经毒力。然后提取无神经毒力纯化株的基因组RNA,用逆转录PCR分段扩增全基因组序列并进行序列测定。将测序结果分别与原DENV-1 的前膜-包膜蛋白和JEV骨架病毒株SA-14-14-2的基因序列进行比对。选取2个无神经毒力纯化株进行小鼠免疫保护实验。采用单侧t检验对结果进行比较。结果  经过3轮蚀斑纯化后,获得大、中、小3种蚀斑形态的6个JD1纯化株。3个纯化株对小鼠无神经毒力,小鼠脑内注射后全部存活;1株神经毒力较弱,70%以上小鼠存活;2株具有强神经毒力,小鼠全部死亡。测序结果显示,对小鼠无神经毒力的3个纯化株存在2处相同的氨基酸突变。将其中2个纯化株JD1-PP-61和JD1-PP-31腹腔免疫小鼠后,再用1 000半数致死量DENV-1鼠脑适应株进行脑内攻击。JD1-PP-61能较好地保护小鼠抵抗病毒攻击,仅20.0%小鼠死亡（t=7.237,P<0.001）;JD1-PP-31保护效果稍弱,41.9 %小鼠死亡（t=4.752,P<0.01）。结论  通过蚀斑纯化筛选出对小鼠无神经毒力的JD1纯化株,并发现了可能与神经毒力减弱相关的位点。     

硝酸镧亚急性暴露对C57-ras转基因小鼠神经行为学及海马细胞形态学的影响

目的 研究硝酸镧亚急性暴露对C57-ras转基因小鼠神经行为和海马细胞形态学的影响,初步探索ras基因在镧对小鼠海马结构与功能毒性效应中的保护作用.方法 40只C57-ras转基因小鼠随机分为4组(雌雄各半),分别灌胃0、12.5、25和50 mg/kg·bw剂量的硝酸镧六水合物(以镧计算,分别为:4.01、8.02和...     

苦参乌梅汤影响乙型肝炎病毒转基因小鼠乙型肝炎表面抗原表达的研究

目的 探讨苦参乌梅汤对HBV转基因小鼠HBsAg表达的影响,确定苦参乌梅汤的最佳组方.方法 采用正交试验设计,以HBV转基因小鼠血清中HBsAg的含量为评定指标,考察苦参乌梅汤中苦参、乌梅不同比例,不同用量以及不同给药时间对HBsAg表达的影响.结果 苦参乌梅汤按照苦参、乌梅1∶1的比例,以9.0 g/(kg·d)给药1周,对HBV转基因小鼠血清中HBsAg表达影响最为显著.其中,影响HBV转基因鼠HBsAg表达最主要的因素是苦参和乌梅的配比,差异具有统计学意义;日处方量和给药时间差异均不具有统计学意义.结论 苦参乌梅汤最佳组方应为苦参、乌梅1∶1的比例,以9.0 g/(kg·d)给药1周.此组方能够明显降低HBV转基因小鼠血清中HBsAg的表达.

Abstract：

Objective To determine the effect of sophora flavescens ebony decoction on HBsAg expression in hepatitis B virus (HBV) transgenic mice. Methods An orthogonal test was adopted in the study and the evaluation index is serum HBsAg expression in HBV transgenic mice. Different dosage and different administration time of The ratio of sophora flavescens and ebony significantly affected the expression of HBsAg,but there was no significant difference between dosage and administration time. Conclusion The sophora flavescens ebony decoction can significantly decrease the HBsAg expression in HBV transgenic mice.     

二苯乙烯苷对APP/PS1/Tau三转基因痴呆小鼠JNK和PP2B的调控作用研究

目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1/Tau三转基因痴呆(3×Tg-AD)小鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)、钙调神经磷酸酶(PP2B)的调控作用,探索该药抗阿尔茨海默病(AD)的可能机制。方法:将45只雄性3×Tg-AD小鼠随机分为模型组、阳性对照组(石杉碱甲,0.15 mg/kg)和TSG低、中、高剂量组(0.033、0.1、0.3 g/kg),每组9只;另取9只正常雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。各给药组小鼠灌胃相应药物,每天给药1次,连续给药60 d;正常对照组和模型组小鼠灌胃等量生理盐水。给药结束后,通过Morris水迷宫实验测定各组小鼠的空间学习记忆能力,采用尼氏染色法观察小鼠大脑皮层和海马部位尼氏小体变化情况,并分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blotting法检测小鼠脑组织中JNK、PP2B的mRNA及蛋白表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01),原平台象限停留时间显著缩短(P<0.01),穿越平台次数显著减少(P<0.01);脑皮层和海马部位尼氏小体数量显著减少、着色浅...