阿霉素诱导人肝癌细胞株HCC－9204肝癌细胞凋亡的形态学观察

应用抗癌药阿霉素成功地诱导培养的人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡。用２０μｍｏｌ·Ｌ~（－１）阿霉素作用肝癌细胞３ｈ，换培养液继续培养１２ｈ后，肝癌细胞ＤＮＡ结构发生断裂，电泳呈梯状。肝癌细胞形态改变出现细胞膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征。经透射电镜和扫描电镜观察显示，在体积缩小胞膜皱缩的肝癌细胞表面产生一种球形小体，有的肝癌细胞崩解为碎片状。形态学观察结构提示，肝癌细胞产生的球形小体可能是一种与细胞凋亡有关的功能性结构。细胞崩解可能是肝癌凋亡细胞灭亡的形式之一，可能与细胞骨架破坏有关。     

大蒜素联合阿霉素诱导人肝癌细胞株QGY-7701凋亡

目的： 观察大蒜素与阿霉素联合应用对人肝癌细胞QGY-7701的作用效果,并探讨其机制。方法: 不同浓度大蒜素与阿霉素单独及联合作用于人肝癌QGY-7701细胞后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测QGY-7701细胞凋亡率,吖啶橙(AO)荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果: 单独应用时大蒜素与阿霉素的中效浓度分别是56.0 mg/L和4.9 mg/L,联合用药时下降为23和2.3 mg/L,CI=0.887,为协同效应。大蒜素与阿霉素单独及联合应用均可导致QGY-7701细胞出现凋亡的形态学变化。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。结论: 大蒜素与阿霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡,协同抑制人肝癌细胞生长。     

恒定磁场协同阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨恒定磁场联合阿霉素对诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法：采用流式细胞仪碘化丙啶染色法和活细胞荧光染色法（Ｈｏｅｃｈｓｔ染色法），观察不同处理因素对细胞凋亡率的影响。结果：两种实验方法均显示０５ｍｇ／Ｌ的阿霉素与对照组比较没有显著差异（Ｐ＞００５），而单独用恒定磁场或１０ｍｇ／Ｌ的阿霉素与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜００５）。应用恒定磁场后发现，０５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／Ｌ浓度的阿霉素诱导ＨｅｐＧ－２细胞凋亡的结果与对照组相比，均有显著差异（Ｐ＜００５）。结论：恒定磁场具有增强阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的作用     

大蒜素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡

目的　探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。　方法　MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。　结果　 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。　结论　大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740 2细胞可能自细胞周期不同分期多点启动凋亡     

去甲斑蝥素诱导人肝癌BEL—7402细胞凋亡的研究

目的 研究新型抗癌药物去甲斑螯素抑制人肝癌（ＢＥＬ－７４０２）细胞生长的机制。方法 从细胞的形态学观察和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方面考察去甲斑螯素作用人肝癌细胞的特点，并进一步用免疫细胞化学及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ等分析手段研究癌基因蛋白Ｂｃｌ－２在此过程中的表达情况。结果 １０ｍｇ／Ｌ去甲斑螯素作用人肝癌细胞２４ｈ，部分细胞出现固缩、细胞质膜突起、核染色质异常凝集等，并伴有膜包被的凋亡小     

Bcl-2过表达抑制乙醇诱导的HCC-9204肝癌细胞凋亡

目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对乙醇诱导的肝细胞癌(HCC)细胞凋亡的影响.方法将含有人bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染到不表达bcl-2蛋白的人肝癌细胞系HCC-9204细胞中,用免疫组织化学ABC法检测bcl-2蛋白的表达情况.连续克隆化直至获得100%表达bcl-2蛋白的单克隆细胞株,并进行流式细胞术检测.用6%乙醇分别作用于上述细胞6h后,用MTT法和TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡发生程度.结果转染pDOR-SB的细胞大部分为bcl-2蛋白表达阳性,而转染pDOR空载体或未转染的HCC-9204细胞均为bcl-2蛋白阴性.连续3次克隆化后,流式细胞检测表明所获得的单克隆细胞株100%稳定表达bcl-2蛋白,命名为HCC-bcl-2.6%乙醇作用后,HCC-bcl-2细胞和未转染的HCC-9204细胞经MTT法检测的吸光度值分别为0.519±0.053和0.366±0.046,前者明显高于后者(P<0.01);TUNEL指数分别为0.387和0.613,亚二倍体凋亡峰比例分别为3.8%和10.7%,前者均明显低于后者(P<0.05).结论bcl-2蛋白过表达能够抑制乙醇诱导的HCC-9204肝癌细胞凋亡.     

乙醇诱导的肝癌细胞HCC—9204凋亡及其与Bax和Bcl—2蛋白的关系

目的 探讨乙醇对肝癌细胞凋亡的诱导作用及其与凋良心相关基因bax和 bcl-2表达的关系。方法 用噻唑蓝（MTT）法检测浓度分别为20-100mL-L的乙醇对肝癌细胞系HCC-9204的杀伤作用,然后,用60mL/L乙醇作用6h诱导HCC——9204细胞凋亡,以May-Grunwald-Giemsa(MGG)染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法和流式细胞术分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,用免疫细胞化学染色图象分析法,检测诱导凋亡前、后Bax和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果 随着乙醇浓度的增加,其对HCC-9204细胞的杀伤作用逐渐增强,60mL/L乙醇可使HCC-9204细胞发生明显的细胞凋亡的形态学变化,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,诱导凋亡后的HCC-9204细胞Bax蛋白的表达水平明显增高,而Bcl-2在诱导凋亡前、后的HCC——9204细胞中均未见表达,结论 低浓度乙醇对肝癌细胞HCC——9204具有明显的凋亡诱导作用,其凋亡的发生与Bax蛋白表达水平的增高有关。     

顺铂和阿霉素诱导肝细胞肝癌细胞凋亡阈值研究

目的:了解抗癌药物顺铂(CDDP)、阿霉素(ADM)诱导肝细胞肝癌 (HCC)的细胞凋亡阈值。方法:采用肿瘤细胞原代培养技术、活细胞萤光染色法和流式细胞仪定量分析。结果:顺铂或阿霉素与细胞共同培养后,荧光显微镜下见正常细胞核呈弥散均匀荧光,凋亡细胞核内颗粒状荧光。随抗癌药物(ADM、CDDP)剂量的增加,诱导人肝癌细胞的细胞凋亡率也增加,但以ADM 1.0μg/mL和2.0μg/mL及CDDP 1.5μg/mL和3.0μg/mL作用明显。ADM 2.0 μg/mL可导致HCC细胞凋亡75%,CDDP 3.0μg/mL 可致HCC细胞凋亡75%。25例未经治疗的HCC细胞和Hep G-2细胞的ADM、CDDP敏感性检测表明,ADM的凋亡阈值为1.0μg/mL,CDDP的凋亡阈值为1.5μg/mL。临床凋亡敏感剂量分别为ADM 20 mg/m²,CDDP 30mg/m² 。结论:本文获得的ADM和CDDP诱导HCC细胞凋亡的临床阈值对临床肿瘤化疗有一定的指导意义。     

牛蒡子苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的：通过牛蒡子苷对肿瘤细胞的体外实验，探讨牛蒡子苷是否对人肝癌细胞（HepG2）具有生长抑制及诱导凋亡作用。方法：HepG2细胞培养液中加入不同浓度的牛蒡子苷，培养72 h，观查HepG2细胞的增殖率；倒置显微镜及投射电子显微镜观察HepG2细胞的形态变化；流式细胞仪（FCM）检测HepG2细胞周期及凋亡率；TUNEL法检测HepG2细胞凋亡率；免疫细胞化学检测HepG2细胞的增殖凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)表达。结果： 牛蒡子苷抑制HepG2细胞生长；阻滞HepG2细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡(P＜0.05)；通过下调Bcl-2蛋白表达（P＜0.01），上调Bax蛋白表达（P＜0.05）诱导HepG2细胞凋亡。结论： 牛蒡子苷对体外培养的HepG2细胞生长有抑制作用,其作用机制之一是通过诱导细胞凋亡。     

肝癌凋亡细胞相关蛋白的表达分析

目的；分析肝癌凋亡细胞与肝癌细胞所表达的蛋白质在分子量分布上的差异。方法：ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ电泳后薄层扫描。结果：肝癌凋亡细胞所表达蛋白质的分子量普遍较大。在分子量大于６．７×１０＾４ｕ时，凋亡的肝癌细胞有７个较为明显的蛋白扫描峰，与未凋亡的肝癌细胞具有明显的区别。部分大分子量的凋亡相关蛋白在肝癌凋亡细胞表达量很高，其蛋白质扫描峰的面积可占总面积的８％。结论：肝癌凋亡细胞有较大分子量的蛋白质表达，可     

野生型p53基因诱导肝癌细胞凋亡及p21（WAF1／CIP …

目的：研究野生型ｐ５３基因对人肝癌细胞系细胞凋亡的作用。方法：通过脂质体转染方法将野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）导入ｐ５３缺陷的ＨＣＣ－９２０４细胞系中，并获稳定表达。结果：转染ｗｔ－ｐ５３后细胞生长缓慢，Ｇ１期细胞数量由转基因前的４８．５％增加到７８．０％，并有较多细胞逐渐死亡。电镜观察和ＤＮＡ分析证实细胞死亡方式主要是细胞凋亡。免疫组化结果显示细胞转染ｗｔ－ｐ５３后，ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１     

小檗碱增强阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡

 目的:研究小檗碱对阿霉素诱导的膀胱癌T24细胞凋亡的影响及机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为对照组、阿霉素组、阿霉素+小檗碱组和小檗碱组。采用CCK-8试剂盒测定膀胱癌T24细胞的增殖抑制率。采用Hoechst 33258染色剂检测细胞凋亡,同时测定caspase-3和caspase-9活性以及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:小檗碱呈剂量和时间依赖性地促进阿霉素诱导的T24细胞凋亡。与阿霉素组比较,小檗碱+阿霉素组caspase-3、caspase-9活性和Bax蛋白的表达水平明显增加,而Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:小檗碱可进一步增强阿霉素对T24细胞增殖的抑制作用,其机制与小檗碱增强阿霉素诱导的T24细胞凋亡有关。     

γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的形态学研究

目的　观察γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞凋亡的形态学变化。　方法　应用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光显微镜及透射电子显微镜进行观察。　结果　γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞死亡的主要方式是凋亡，凋亡细胞具有典型的形态特征，细胞核染色质凝集边聚；发现细胞核经多种形式形成核碎块；并可见具有不同内含物的凋亡小体；内质网增多，参与形成核碎块。　结论　同一因素诱导同一细胞凋亡，细胞核的变化可有多种形式。γ－射线诱导Ｋ５６２和ＣＥＭ 细胞凋亡的形态学变化与ＨＬ－６０ 细胞的不同，反映出同一因素诱导不同细胞凋亡的途径有一定的差异。     

肝癌凋亡细胞cDNA文库构建及其凋亡相关基因的初步筛选

目的：通过肝癌凋亡细胞ＣＤＮＡ文库的构建,进而筛选人肝癌细胞凋亡相关基因。方法：用阿霉素诱导人肝癌ＨＣＣ＿９２０４细胞凋亡,磁珠法提取ｍＲＮＡ,然后将其反转录为ｃＤＮＡ将合成的ｃＤＮＡ加上ＥｃｏＲ１接头,并与λｇｔ１１载体臂连接,构建为表达的ＣＤＮＡ文库,ＰＣＲ法鉴定插入片断长度,Ｔ载体法克隆插入片断。消减杂交和点杂交法相结合筛选ＣＤＮＡ文库。结果：肝癌凋亡细胞ＣＤＮＡ文库容量为１×１０＾６ｐｆｕ     

三氧化二砷诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡的细胞生物学研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3)对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响,方法：选用不同剂量As2O3处理LoVo细胞后,通过光镜,电镜,MTT法,AO／EB荧光染色法和流式细胞术研究AsO3对LoVo细胞生长的影响,结果：As2O3具有抑制Lo-Vo细胞生长和其凋亡的作用,这种作用主要在低浓度（0．5－2．0μmol/L)产生,而在高浓度（5．0－10．0μmol/L)可引起细胞死亡,结论：As2O3有明显抑制LoVo细胞生长的作用,并诱导细胞凋亡,其作用机制尚不清楚。     

细胞凋亡的几种形态学观察方法

细胞凋亡是病理学上新的研究热点。细胞在形态学上的特征性改变是证实其发生凋亡的有力证据。本研究在阿霉素诱导的ＨＣＣ－９２０４细胞系细胞凋亡的模型中，利用病理学中常用的几种技术，观察了细胞凋亡的形态学改变，其中包括细胞爬片的ＨＥ染色，活细胞的ＡＯ染色，以及透射电镜观察。这些方法可从不同角度反映细胞凋亡的形态学变化。结果提示，ＨＥ染色及ＡＯ染色快速、简便，可作为判定有无细胞凋亡的最初手段；电镜结果是判定     

细胞凋亡在化学栓塞治疗肝细胞肝癌中的意义

细胞凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,经肝动脉化疗栓塞(TACE)是治疗中晚期肝癌及术后复发肝癌的主要手段,研究细胞凋亡在TACE治疗肝癌中作用具有重要意义,本文就此作一综述.     

细胞凋亡在化学栓塞治疗肝细胞肝癌中的意义

细胞凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关 ,经肝动脉化疗栓塞 (TACE)是治疗中晚期肝癌及术后复发肝癌的主要手段 ,研究细胞凋亡在TACE治疗肝癌中作用具有重要意义 ,本文就此作一综述 .     

环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。 方法:应用MTT 法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。 结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3mRNA 表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2 表达无明显变化（P>0.05）。 结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、 caspase-3表达,上升Bax／Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。