青霉素G对人类单核细胞吞噬的金黄色葡萄球菌的作用

目前认为治疗细菌性感染,抗生素对吞噬细菌的作用非常重要。抗生素能否渗入细胞内杀伤细菌,不少学者已经用粒细胞作过研究,并证明了青霉素 G 在粒细胞内没有活性。但至今未见青霉素 G 对单核细胞吞噬的金黄色葡萄球菌的作用的报道。为此,作者进行了如下研究。作者从健康自愿者血液中分离单核细胞。用每毫升含0.5单位的肝素洗四次,再用HBSS 把单核细胞稀释成10~7浓度的悬液。金黄色葡萄球菌(42D 型)用含10%的AB 型血清悬液,在37℃孵育30分钟,而后将细菌在1500g 离心10分钟,用冰冷的 HBSS明胶洗两次后,用 HBSS 明胶把金黄色葡萄球菌稀释为每毫升含10~7的菌液。检测青霉素 G 对吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的作用。将每毫升含10~7预先处理的金黄色葡萄球菌和每毫升含10~7的单核细胞一起,37℃孵育3分钟后,在冰浴中冷却迅     

用ABC-ELISA直接测定细胞在悬液中产生的抗体

本文报道利用高度敏感的亲和素-生物素过氧化物酶(ABC)试剂,建立一种测定体外合成抗体的ELISA.将抗原致敏动物的脾脏细胞悬液直接加在包盖过抗原的微量滴定板孔内,置37℃的CO_2培养箱内温育6小时后,洗去细胞,各孔加生物素化第二抗体,温育2小时后洗板,继加ABC,反应30分钟后洗板,加底物显色.若在细胞悬液中加入蛋白合成抑制剂嘌呤霉素,可使光密度读数下降,从而证明参加反应的抗体确系体外合成.此法测定重复样品的     

用酶联免疫吸附法(ELISA)测定麻疹病毒特异的IgG抗体

本文报导一种用固相ELISA测定麻疹病毒IgG抗体的方法,并与血凝抑制(HI)及补体结合(CF)两种试验方法进行比较。作者采集了63份健康成人、11份儿童(包括7个未接种麻疹疫苗及4个无麻疹病史的儿童)和36份麻疹患者血清标本。抗原是粗制品,制备方法如下:将Edmonston株病毒接种于VERO细胞,培养3～5天后,用无钙、镁离子的PBS洗二次,并稀释成1∶20,置-70℃反复冻融,再经超声处理60秒,4℃离心5分钟(1,400g)后的上清液,再用PBS稀释到蛋白浓度为0.3mg/ml。未感染病毒的细胞悬液经同法处理作为对照。用U型孔聚苯乙烯微量滴定板进行ELISA测定,其步骤如下:每孔加0.025ml(75μg)麻疹抗原或对照抗原,室温过夜,干燥(并可贮于-70℃备用)。用含0.05％吐温20的PBS     

用干燥抗原ELISA检测人体百日咳杆菌丝状血凝素抗体

ELISA可定量测定人血清中抗丝状血凝素抗体(抗-FHA)和抗百日咳毒素抗体(抗-PT)。但纯化用于致敏的FHA和PT不仅困难,而且不经济,因此,作者改良了试验方法以减少测定抗体所需要的抗原量。作者参照Voller法进行了间接ELISA。用碳酸氢钠缓冲液(pH9.6)吸附抗原致敏聚苯乙烯微量板,置4℃过夜,用室温下在孔内干燥的抗原致敏另一块聚苯乙烯微量板。每孔中加100μl试剂(除封闭过程以外)。抗原致敏的孔用磷酸盐缓冲液(PBS)洗两次,加百日咳恢复期病人抗-FHA和抗-PT阳性血清[参考血清含650 ELISA单位(EU)/ml抗-FHA和200EU/ml抗-PT活性]于37℃孵育2     

用聚乙二醇和Ⅰ~(125)标记的A蛋白快速测定含IgG的循环免疫复合物

[Stevens WJ et al:Immunol Letters3(1):1,1981(英文)] 本文报告了用市售制剂快速测定含IgG的循环免疫复合物(CIC)的方法。其操作过程主要为:将血清用PBS(pH7.4)1:1稀释,取100μl与等量的5％的PEG(分子量6,000,溶于PBS中)混合,放4℃1小时,3,000g 4℃沉淀1小时,去上清,加0.5ml 2.5％的PEG(溶于0.1％吐温20 PBS中)混悬,再3,000g     

斑点酶免疫试验——一种简便、廉价和稳定的检测人类免疫缺陷症病毒(HIV)抗体的试验

将支持HIV连续生长的H9细胞培养上清液浓缩,用蔗糖密度梯度纯化病毒抗原;抗原以1∶250稀释后取2μl,点于硝酸纤维素膜上,室温干燥15分钟,用含0.5%Tween20和0.5%小牛血清的PBS封闭1小时,然后将膜放于24孔组织培养板的孔中,与1∶100稀释的被检血清1ml室温下培育1小时。用PBS、Tween和小牛血清液洗膜5次后,与过氧化物酶标记的羊抗人IgG反应1小时。膜经PBS洗5次后再与底物液培育5～10分钟,终止反应。在膜的反应位置上呈现棕色斑点为阳性结果。     

用细胞病变法快速鉴别Ⅰ型和Ⅱ型单纯疱疹病毒

作者用PBS将单纯疱疹病毒(HSV)连续稀释至10~(-1)～10~(-6),分别接种平底微孔塑料滴定板,每个稀释度种4孔,每孔0.025ml,然后加入0.2ml非洲绿猴肾细胞(BS-C-1株)悬液(含8～10×10~4个活细胞/ml),放36.5℃4%CO_2空气中培养4～5天。用光学显微镜     

抗钩端螺旋体马血清中的几种免疫球蛋白的抗体活性

鉴于抗钩端螺旋体马血清(ALHS)对钩体病有一定的疗效,本文作者对 ALHS 中的各种免疫球蛋白的抗体活性进行了定量分析。使用的菌株为有毒力的哥本哈根型芝浦株。攻击菌悬液为用 Mori 法取垂死豚鼠肝作成10%磷酸盐缓冲乳剂,1900g 离心30分钟,上清含菌10~6～10~7/ml,再以 PBS 稀释成规定浓度。     

用于荧光抗体试验的狂犬病病毒的灭活

试验采用狂犬病病毒CVS株及衔毒,用含20％正常灭活兔血清的PBS将感染狂犬病病毒的鼠脑制成20％悬液。乳鼠脑内滴定CVS株的LD_(50)为10~(9.1)/ml,街毒为10~(6.0)/ml。     

反向间接血凝试验检测乙型脑炎疫苗病毒抗原的标准化

反向间接血凝(RIHA)试验经常用于检测病毒抗原及其他抗原。作者为了对乙型脑炎(JE)疫苗进行质量控制,用标化的RIHA试验检测疫苗中病毒抗原滴度。疫苗病毒经福尔马林灭活后以K-Ⅱ区带离心纯化。用于致敏红细胞的抗体是由JE疫苗免疫5～6周龄LACA品系小鼠后所获得的。每只小鼠分别于第0、2、4、7、14和21天腹腔接种0.5ml疫苗。于免疫后7天采血,用硫酸铵沉淀法提取抗体。测定IgG浓度后以1/100的浓度致敏经戊二醛固定的5%羊红细胞或鹅红细胞,最后用pH7.2、含0.5%正常兔血清(NRS)的PBS制成0.5%红细胞悬液。     

由鼠脑制备的纯化的乙型脑炎灭活疫苗生产方法的改进

为提高产量,作者对纯化的乙型脑炎灭活疫苗的常规生产方法作了两点改进。其一是将常规生产后的剩余脑组织进行再处理,匀浆制成50%悬液,离心沉淀后再用硫酸鱼精蛋白(最终浓度0.05%)处理上清(4℃75分钟),再离心,上清通过微孔滤膜制成病毒悬液,其滴度[小鼠半数致死量(LD_(50))]为10~(7.97)/0.03ml,达到世界卫生组织(WHO)     

一种用于人和豚鼠补体C3纯化的快速蛋白质液相色谱法

本文报道了从小量血清中纯化人和豚鼠C3的方法,该方法仅需要两步——聚乙二醇(PEG)沉淀和快速蛋白质液相色谱(FPLC)。主要流程为:取新鲜冻结人/豚鼠血清5ml加入15%/10%PEG,再加入大豆胰酶抑制剂1mg和1:2000稀释的50mM NPGB(p-nitrop'-guanidino benzoate),置冰浴中,搅拌30分钟后,将悬液于45000g离心10分钟,弃去上清,用5ml平衡缓冲液溶解含沉淀的C3,     

鸡蛋参的总生物碱含量测定

鸡蛋参是桔梗科(Codcnopsis Conno-lrulacca Karz)植物的干燥块根,别名牛尾参、补血草。主产于四川甘孜州道孚、甘孜,西藏南部和云南等地。据记载,该药可冶疗感冒咳嗽等。是民问常用的藏药之一。经化学成分预试,主要含生物碱,植物甾醇和醣类。用重量法测得总生物碱的含量约为0.2%。总生物碱含量测定精密称取鸡蛋参干燥粉末10g,置250ml园底烧瓶中,加石油醚(30°～60℃)100ml,在60℃水浴上加热回流1小时,过滤,弃去滤液,残渣挥干石油醚后,加95%乙醇100ml,在60℃水浴上加热回流2小时,过滤,残渣反复用95%乙醇适当提取至无生物碱反应为止。合并滤液,减压浓缩至稠羔状。用2%盐酸液20、15、10ml分次提取,合并盐酸液,置分液漏斗中,加氯仿20ml充分振摇,静置后,弃去氯仿液,盐酸液用氢氧化铵硷化,调pH到8-9。用氯仿20、15、15ml分次提取,合并氯仿液。置60℃干燥至恒重的蒸发皿中。在水浴上蒸去氯仿,残渣在60℃干燥至恒重。按下式计算总生物碱的含量: 总生物硷的含量%=(提取残渣重/取样量结果见表。     

反向间接血凝试验应用于乙型脑炎疫苗制备过程中的质量控制

作者将反向间接血凝(RIHA)试验标准化,用来检定生产乙型脑炎(JE)疫苗各阶段的病毒抗原。将JE病毒中山-NIH株脑内接种3～4周龄LACA系小鼠后,收获鼠脑,用PBS配成20%的脑悬液,4600g离心,取上清。然后将沉淀物再配成50%的悬液,重新处理后取上清。两种上清液均用硫酸鱼精蛋白在4℃处理2小时(前者硫酸鱼精蛋白的终浓度     

用间接荧光免疫法检查脑膜炎奈瑟氏菌带菌者

我们于1979年2～12月用间接荧光免疫法(下简称荧光法)对部份健康人群脑膜炎奈瑟氏菌带菌情况作了调查,并同时用EPV 培养法作对照。一、方法:选择健康学龄儿童及成年人,用常规法以无菌棉拭子取鼻咽部分泌物,并均匀涂于载物片中央,成蚕豆大小圆形,并同时涂EPV 平板。用蜡笔在已涂标本处画圈,火焰加热固定,冷却,滴加脑膜炎奈瑟氏菌多价Ⅰ诊断血清(兰州生物制品研究所供给效价1280),盖满标本,把标本置密闭的湿盒内放37℃温箱30分钟,以0.01MpH8.0PBS 轻轻冲洗掉血清,用滤纸吸干,再滴加已稀释的羊抗兔荧光免疫     

马来与班氏丝虫微丝蚴分离方法的实验研究

微丝蚴分离技术,1974年以来国外已陆续报告,八十年代进展甚速。我们参照国外经验做了改进,分离出纯净活的微丝蚴,现将几种分离方法报告如下。材料和方法一、聚蔗糖梯度离心分离法:从长爪沙鼠腹腔液中分离微丝蚴。 (一)聚庶糖[Ficoll,分子量400,000Type400(sigma)]以生理盐水成PBS配制10％浓度的溶液; (二)取5ml10％Ficoll溶液置10ml锥     

厚血膜检查疟原虫法

厚血膜查疟原虫,因原虫集中,容易找到,检出率高,但常法用蒸馏水溶解红细胞后,原虫多变形,在鉴别上造成一定困难。笔者十多年来采用0.6％甲醛PBS液(40％甲醛0.6ml,加pH6.8PBS液至100ml)代替蒸馏水,再用瑞氏—姬姆萨氏(4:1)配成混合染料染色后,获得较满意结果,被疟原虫感染的红细胞内血红蛋白未完全脱去,呈淡红以保留残影,尤其是晚期滋养体及裂殖体感染的红细胞淡影更为     

小儿中毒型痢疾休克型42例扩容纠酸体会

扩容纠酸实施方案一、首批补液:轻型休克18例采用2:1液,每公斤体重20ml,50—70分钟快速静滴;11例先用5％碳酸氢钠5ml/kg 静推后加低分子右旋醣酐10—15ml/kg,30—60分钟内滴入。重型9例用5％碳酸氢钠5—10ml/kg 静推或快滴后加2:1液,每公斤体重     

肾综合征出血热灭活疫苗的研制

作者将汉坦病毒属的B-1病毒在新生小鼠脑内连续传26代,作为疫苗的毒种。接种病毒后7天收获鼠脑,加含5mM乙二胺四乙酸(EDTA)的PBS(2.5ml/脑),超声处理后,经12300g离心30分钟,取上清加硫酸鱼精蛋白,再经12300g离心30分钟,上清液加福尔马林灭活。用1∶1000、1∶4000和1∶8000福尔马林灭活病毒的结果表明,完全灭活病毒的时间分别为3、7和18天。灭活的病毒悬液经1∶10稀释后,加两倍体积的氢氧化铝,即为佐剂吸附疫苗。作者研究了疫苗、1∶4和1∶10稀释疫苗腹腔注射BALB/c小鼠1针或2针的免疫效果。结果表明,注射1针未稀释疫苗后,免疫荧光(IF)抗体效价为1∶16～1∶32,血凝抑     

由转录抑制剂处理的外周血单个核细胞产生的一种新型人体干扰素

外周血单个核细胞(PBMC)在不同的诱生剂作用下能产生两种干扰素(IFN):IFN-α和IFN-γ。作者发现,PBMC经转录抑制剂放线菌素D(ACD)和二呋喃核糖苯并咪唑(DRB)处理后可产生IFN样蛋白(ILP)。用Picoll-Hypaque从正常人外周血中分离出PBMC,用含2%胎牛血清的RPMI1640培养液配成5×10~6/ml悬液,经20μg/ml放线菌酮加5μg/ml ACD或50μg/ml DRB处理1小时,洗去药物后,以1×10~6/ml浓度再悬于预温培养液中,37℃培养过夜。用常规试验检测培养上清液中IFN活性。结果表明,ACD诱生的ILP抗病毒效价