改良多重聚合酶链反应检测Y染色体AZF微缺失

目的:对多重聚合酶链反应(PCR)优化改良,检测Y染色体无精子因子(AZF)区域微缺失。方法:实验组选择160例精子发生障碍患者,对照组90例为合格捐精者。按照欧洲男科协会和欧洲分子遗传实验质控网检测指南进行多重PCR,对Y染色体序列标签点引物序列和PCR反应条件优化改良,筛查AZFa、b、c区域的微缺失。结果:采用改良多重PCR,160例生精障碍患者中发现AZF微缺失14例(8.75%),其中AZFc12例,AZFa+b+c1例,AZFb+c1例;对照组90例未发现微缺失;两组比较,差异有极显著性(P<0.001)。所有PCR产物电泳条带清晰,时间缩短至1h。结论:对欧洲男科协会和欧洲分子遗传实验质控网推荐的多重PCR技术优化改良,用于精子发生障碍患者的YqAZF区域筛查,结果可靠、快捷、重复性好。     

多重聚合酶链反应技术检测严重少精及无精子症患者无精子因子的研究

遗传缺陷引起男性精子发生障碍是男性无精子症、严重少精子症的原因之一。业已证明 ,位于 Y染色体长臂的无精子因子 (azoospermiafactor,AZF)的基因缺失或突变引起精子发生异常 ,为调控精子发生的候选基因之一。本研究采用多重聚合酶链反应技术检测 5 0名正常男性及 36例严重少精及无精子症患者 AZF因子。一、材料与方法1 .对象 :5 0名正常生育男性 ,36例不明原因的严重少精、无精子症患者 (按照 WHO的标准 )。所有患者染色体核型分析正常 ,并排除克氏征及其他因素引起的无精、少精症 ,以及先天性输精管缺如、炎症性输精管梗阻及病毒性…     

特发性无精子症和严重少精子症患者Y染色体基因微缺失分析

目的：研究Y染色体基因微缺失与特发性无精子症和严重少精子症的关系，并建立一个灵敏、操作简便的分子检测方法。方法：应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对65例特发性无精子症患者、27例严重少精子症患者进行Y染色体YRRM1、DAZ、DYS1基因微缺失的检测。结果：65例特发性无精子症患者中，3例发生YRRM1基因微缺失，发生率为4．6％；5例发生DAZ基因微缺失，发生率为7．7％。27例严重少精子症患者中，1例发生YRRM1基因微缺失，发生率为3．7％；2例发生DAZ基因微缺失，发生率为7．4％。92例患者中均未发现DYS1基因微缺失。结论：YRRM1和DAZ基因位点的微缺失与特发性无精子症和严重少精子症有一定的相关性，DYS1基因缺失与男性生精障碍的相关性仍需进一步研究明确。应用荧光定量PCR法检测Y染色体微缺失具有灵敏、快速、操作简便的特点。     

54例无精子症、少精子症患者Y染色体AZF微缺失的检测

目的 探讨Y染色体上AZF微缺失与男性无精子症及少精子症之间的关系。方法 采用多重PCR技术，对54例无精子症及少精子症患者AZF4个区的15个序列标签位点(STS)进行了微缺失检测，并同时做了细胞遗传学检查。结果 54例患者中共有4例发现微缺失(7．4％)，其中有2例在17例无精子症患者中发现(11．8％)，另2例在37例少精子症患者中发现(5．4％)。结论 AZF微缺失是导致男性无精子及少精子的重要原因之一，细胞遗传学检查与AZF微缺失无相关性。     

Y染色体上无精子因子检测的临床意义及相关实验技术

Y染色体微缺失是导致男性不育的一个重要遗传因素。Yql1．23上含有与精子发生相关的基因，称为无精子因子（AZF）。AZF进一步分为AZFa、AZFb和AZFc3个区域。由于AZF区域有大量的回文序列，这些序列在减数分裂期不同的重组导致了AZF缺失区域的不同，而不同区域的微缺失引起不同程度的精子发生障碍。现就其临床意义和相关实验室检测技术作一综述。     

不育男性无精子因子微缺失的检测及评估

目的 探讨原发性无精及少弱精症患者与无精子因子(AZF)微缺失的关系。方法 检测未作特定限制的不育男性102例及10例正常男性的AZF基因，同时了解相关男性学病史、查体、精液特征和血清性激素水平。根据精液特征将患者分为无精症61例、严重少精症18例、少精症11例和弱精症12例4组；根据是否合并其他男科疾病，将其中79例无精或严重少精症患者分为原发性无精或严重少精症和非原发性无精或严重少精症者2组。分别比较各组AZF基因缺失率。结果 102例不育男性中检测出AZF基因缺失8例，其中无精症6例，严重少精症2例；原发性无精或严重少精症者6例，非原发性无精或严重少精症者2例。其余少精、弱精及正常对照等各组均未见AZF缺失。结论 AZF基因缺失检出率与患者分组有关；原发性无精或严重少精症患者是AZF基因异常的高危人群。     

无精子症患者Y染色体基因微缺失研究

研究表明 ,一些无精子症患者伴有Ｙｑ11.2 3 中多个基因位点的丢失。我们采用ＰＣＲ方法对 6 5例原因不明无精子症患者的外周血细胞Ｙｑ11.2 3 上ＹＲＲＭ 1及ＤＹＳ2 4 0基因位点进行检测 ,报告如下。材料与方法　门诊不育患者 6 5例 ,染色体核型分析均为 4 6 ,ＸＹ。取患者抗     

新疆地区汉族维吾尔族不育症患者Y染色体长臂微缺失分析

目的评估新疆地区汉族、维吾尔族不明原因无精子症和严重少精子症男性患者Y染色体长臂微缺失的频率,探讨不同民族间Y染色体长臂微缺失发生率的差异。方法以Y染色体无精子因子(AZF)区STS- AZFa、AZFb、AZFc和AZFd 4个基因8片段设计引物,采用聚合酶链反应(PCR)方法对123例(汉族61例,维吾尔族62例)无精子症和少精予症不育男性患者进行Y染色体微缺失检测,并比较不同民族的患者Y染色体微缺失发生率的差异。结果61例汉族患者中有27例(44.26%)存在Y染色体微缺失,62例维吾尔族患者检出13例(20.97%)存在Y染色体微缺失,在所有被检出有Y染色体长臂微缺失的患者中AZF区联合缺失23例(58%)。汉族患者与维吾尔族患者Y染色体微缺失率及AZF多位点联合缺失发生率差异有统计学意义(P<0.05)。结论无精子症和严重少精子症不育男性患者中Y染色体长臂微缺失发生率及AZF多位点联合缺失发生率存在民族差异,PCR检测AZF基因是诊断Y染色体长臂微缺失的较好的方法。     

陕西地区不明原因无精子症和少精子症患者Y染色体长臂微缺失分析

目的: 评估陕西地区不明原因无精子症和少精子症不育男性患者Y染色体长臂微缺失的频率,探讨精子密度与Y染色体微缺失发生率的相关性。　方法: 以Y染色体特异性无精子症因子区STS AZFa、AZFb、AZFc和SRY4个基因 5个片段设计引物,采用PCR方法对 64例无精子症和少精子症患者以及 20例正常生育男性进行微缺失检测,并比较不同精子密度患者Y染色体微缺失的发生率。　结果: 20例精子密度正常的生育男性未检出Y染色体微缺失,而 64例特发性无精子症 /少精子症患者AZFc区的缺失率为17. 2% (11 /64),AZFc和AZFb联合缺失 1例,未发现AZFa区缺失,SRY基因均为阳性。其中无精子症组缺失率为21. 43% ( 3 /14 );精子密度 <1×106 /ml组,缺失率为 20. 0% (2 /10);精子密度 (1 ~5)×106 /ml组缺失率为17. 9% (5 /28);精子密度 (5 ~10 )×106 /ml组缺失率为8. 3% (1 /12)。各组缺失率经卡方检验差异有显著性 (χ2 =70. 144,P<0. 005 )。　结论: 无精子症和少精子症不育患者Y染色体AZFc缺失率明显较高,PCR扩增AZF基因是诊断Y染色体微缺失的简单方法。     

Y染色体上无精子因子检测的临床意义及相关实验技术

Y染色体微缺失是导致男性不育的一个重要遗传因素。Yq11.23上含有与精子发生相关的基因,称为无精子因子(AZF)。AZF进一步分为AZFa、AZFb和AZFc3个区域。由于AZF区域有大量的回文序列,这些序列在减数分裂期不同的重组导致了AZF缺失区域的不同,而不同区域的微缺失引起不同程度的精子发生障碍。现就其临床意义和相关实验室检测技术作一综述。     

精子发生障碍患者Y染色体AZF区微缺失的筛查及意义

目的　探讨精子发生障碍患者Y染色体AZF区微缺失情况及意义。　方法　选取 6个Y染色体特异性序列标签位点 (STS) ,用PCR技术检测 2 7例精子发生障碍患者AZF区微缺失情况。　结果　 2 7例中AZF区微缺失 2例 ,表现为无精症。缺失均在AZFc区 ,1例为DAZ(sY2 5 4、sY2 5 5 )缺失 ,另 1例为DAZ加sY15 7缺失。　结论　与其他人种一样 ,Y染色体AZF区微缺失也可能是中国人精子发生障碍的原因之一 ,因而精子发生障碍患者在行辅助生育技术前进行AZF区微缺失的筛查是必要的。     

原因不明性无精症和少精症Y染色体微缺失的筛查分析

目的 探讨原因不明性无精症和少精症不男性与Y染色体微缺失的关系。方法 应用多重PCR技术,对38例原因不明性无精症和少精症者（无精症11例、严重少精症9例、少精症18例）基因组DNA进行Y染色体连锁的18个序列标记位点缺失检测。结果 38例中发现Y染色体微缺失6例,缺失率为16％,其中无精症2例,严重少精症1例,少精症3例。缺失形式前两者为AZFd(DYS 237) AZFc(DAZ DYS240),后者为AZFd(DYS237)。结论 Y染色体微缺失是原因不明性无精症和少精症的重要原因之一。采用多重PCR技术进行缺失检测,是一种非常有效的方法。     

无精症患者Y染色体微缺失的多重PCR筛查

目的 建立一套Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法。方法 建立5套稳定和可靠的多重PCR筛查方法，对进行ICSI治疗的26例无精子症患者和进行睾丸活检的30例无精子症患者进行Y染色体微缺失的检测。结果 在56例无精子症患者中发现5例AZFc／DAZ缺失，2例同时具有AZFc／DAZ和AZFb／RBMl的缺失，1例仅具有sY153一个片段的缺失。结论 本研究Y染色体微缺失的多重PCR筛查方法是易行和可靠的，对无精子症患者有必要进行Y染色体微缺失的常规筛查。     

精索静脉曲张男性不育患者Y染色体微缺失检测

目的:探讨精索静脉曲张(varicocele,VC)不育患者Y染色体微缺失特点及其与临床表型的关系,为评价VC不育患者是否行手术治疗或ICSI提供依据。方法:VC不育患者174例,分为3组,A组:无精子症47例;B组:严重少精子症57例;C组:轻度少精子症70例;设立正常生育的健康志愿者男性28例作为对照组(D组)。抽取外周血提取DNA,选取Y染色体上AZFa、AZFb、AZFc区共6个序列标签位点,应用多重PCR进行扩增;已生育女性26例作为阴性对照,分别运用琼脂糖凝胶电泳分离,对照阅读扩增产物,判定有无缺失存在以及缺失类型。结果:174例男性不育患者中有22例检测到Y染色体微缺失,缺失率12.64%;A组11例存在微缺失,B组11例存在微缺失,C组未检测到微缺失。A组与C组、B组与C组比较,差异均有显著性。A组缺失病例中有6例为AZFc区缺失,1例为AZFa缺失,2例为AZFb区缺失,2例为AZFb、AZFc区共同缺失;B组缺失病例中有8例为AZFc缺失,2例为AZFb缺失,1例为AZFb、AZFc区共同缺失。结论:①精液异常VC不育与Y染色体微缺失有关;②VC不育患者特别是无精子症和严重少精子症患者,应该进行Y染色体微缺失的检测。     

男性不育病人Y染色体AZFc/DAZ微缺失的实时荧光PCR筛查

目的 :建立一套Y染色体微缺失的实时荧光PCR筛查方法 ,对无精子症或少精子症男性不育病人进行Y染色体AZFc/DAZ微缺失的常规筛查。　方法 :采用实时荧光PCR对进行卵细胞胞质内单精子注射 (ICSI)治疗的 87例无精子症和少精子症病人以及睾丸活检的 30例无精子症病人进行Y染色体AZFc/DAZ微缺失的检测 ,同时用多重PCR作为方法学对照。　结果 :AZFc/DAZ缺失 11例 (9.4%) ,其中 6 1例少精子症病人中发现 4例(6 .6 %) ,5 6例无精子症病人中发现 7例 (12 .5 %)。　结论 :Y染色体AZFc/DAZ微缺失的实时荧光PCR筛查方法是易行和可靠的 ,与多重PCR筛查结果完全一致。     

Frequency of Y chromosome microdeletions and chromosomal abnormalities in infertile Thai men with oligozoospermia and azoospermia

Aim： To investigate the possible causes of oligozoospermia and azoospermia in infertile Thai men, and to find the frequencies of Y chromosome microdeletions and cytogenetic abnormalities in this group. Methods： From June 2003 to November 2005, 50 azoospermic and 80 oligozoospermic men were enrolled in the study. A detailed history was taken for each man, followed by general and genital examinations. Y chromosome microdeletions were detected by multiplex polymerase chain reaction （PCR） using 11 gene-specific primers that covered all three regions of the azoospermic factor （AZFa, AZFb and AZFc）. Fifty men with normal semen analysis were also studied. Karyotyping was done with the standard G- and Q-banding. Serum concentrations of follicle stimulating hormone （FSH）, luteinizing hormone （LH）, prolactin （PRL） and testosterone were measured by electrochemiluminescence immunoassays （ECLIA）. Results： Azoospermia and oligozoospermia could be explained by previous orchitis in 22.3%, former bilateral cryptorchidism in 19.2%, abnormal karyotypes in 4.6% and Y chromosome microdeletions in 3.8% of the subjects. The most frequent deletions were in the AZFc region （50%）, followed by AZFb （33%） and AZFbc （17%）. No significant difference was detected in hormonal profiles of infertile men, with or without microdeletions. Conclusion： The frequencies of Y chromosome microdeletions and cytogenetic abnormalities in oligozoospermic and azoospermic Thai men are comparable with similarly infertile men from other Asian and Western countries.     

Molecular genetic analysis of microdeletion on AZF/DAZ gene in patients with idiopathic azoospermia and severe oligozoospermia in Fujian

Objective: To identify microdeletions in azoospermia factor(AZF) gene loci in patients with idiopathic azoospermia and severe oligozoospermia in Fujian. Methods: Molecular genetic detection method was used to detect microdeletion at the AZFa, AZFb, AZFc /DAZ,SRY region of Y chromosome in 47 azoospermia and 4 severe oligozoospermia patients. Genomic DNA was extracted from peripheral blood. The sequence tagged site (STS) primers tested in each cases were sY84(AZFa), sY 143(AZFb) sY254(AZFc).SRY region of Y chromosome for control. The PCR products were analyzed on a 2.0% agarose gel. Results: Microdeletions of the Y-chromosomal AZF loci were revealed in 18(35.3%,18/51) of 51 patients with idiopathic azoospermia and severe oligozoospermia. AZFa deletion was found in four (7.8%) patients, AZF b in five (9.8%) patients, AZF c in four (7.8%) patients. AZF a+b in one(1.9%)patient, AZF b+c in two (3.9%) patients, AZF a+b+c in two (3.9%)patients respectively. No deletion of SRY region was found. No deletion of AZF a, AZF b, AZF c/DAZ,SRY regions was found in five fertile male who had at least one or more children. Conclusions: Microdeletions on AZF/DAZ gene loci were major genetics defects leading to azoospermia and severe oligozoospermia in male idiopathic infertility in Fujian. It is necessary to have genetic counseling and carry out microdeletion detection on AZF/DAZ gene loci before performing intracytoplasmic sperm injection (ICSI).     

Multiplex sequence-tagged site PCR for efficient screening of microdeletions in Y chromosome in infertile males with azoospermia or severe oligozoospermia

The multiplex STS-PCR method was used to detect microdeletions in the long arm of the Y chromosome (Yq) of cytogenetically normal men. One hundred infertile men with azoospermia or oligozoospermia were screened with the multiplex PCR method using 58 STSs, which are specific to Yq for detecting microdeletions on this chromosome. Correlations between the microdeletions on Yq and phenotypes of spermatogenetic disturbance were also examined. Ten patients (10%) had microdeletions on Yq. Seven of the 60 azoospermic patients (11.7%), and 3 of the 40 oligozoospermic patients (7.5%) had microdeletions on Yq. None of the patients showed microdeletions in the AZFa region, but 2 had deletions in the AZFb region, another 2 in the AZFc region, including DAZ, and 1 had deletions in both the AZFb and in the AZFc, including RBM and DAZ. Single microdeletions were found in 4 patients, all of them in the AZFc around DAZ, and 1 patient had 2 microdeletions in the AZFb. The improved multiplex STS-PCR method efficiently detected microdeletions in 10% of azoospermic or severe oligozoospermic men who were cytogenetically normal. All of these microdeletions were presented in the AZFb and/or AZFc regions. This suggests that these regions contain candidate genes for spermatogenesis.