PCR技术在结核杆菌检测中的应用(摘要)

ＰＣＲ技术在结核杆菌检测中的应用（摘要）张清华冷英目前，我国受结核杆菌感染的人数已超过３．３亿，而且许多病例表现不典型，给临床诊断带来困难。准确、快速地作出诊断对临床及时治疗起着重要作用。聚合酶链反应（ＰＣＲ）能从分子水平上特异、准确、快速地检测出结...     

PCR技术在汉坦病毒研究中的应用

ＰＣＲ(Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ)技术是一种试管内快速、大量扩增特异性序列的技术 ,该技术自 1985年问世以来 ,以惊人的速度广泛应用于生物科学的各个领域 ,成为分子生物学发展史上的又一重大技术革新 ,由于该方法对ＤＮＡ片段的扩增具有简单、快速、敏感、特异的特点 ,特别是在病原微生物特异性核苷酸序列的检测、分析和克隆等方面显示出无比的优越性 ,因此得到了广泛的应用。自 1986年美国学者Ｃ .Ｓ .Ｓｃｈｍａｌｊｏｈｎ发表了汉坦病毒原型株 76 - 118株的Ｓ片段序列以来 ,多株汉坦病毒的Ｓ、Ｍ和Ｌ片段序列…     

聚合酶链反应(PCR)──高科技检测技术

聚合防链反应（P。ly。e。Ch。inReaetinn）．为一种快速的特定DNA片段作外扩增法，是近年发展起来的分子生物学搞科技实验技术。具有简便、快速、敏感、特异等特点，故被喻为“临床诊断上的CT”。为新兴的第三件检测方法Z·一。PCR的问世，使庭学实验技术提高到基因水平，在基础研究和实际应用上只有广阔的发展前景。lP（二l｛原理卜CR是一种在体外模拟夭然DNA片段的方法。其特异性依赖于两个寡核香酸引物，每一反应过程由高温变性，低温退火及中级延伸三步组成一个周期。在高温下持扩增的toA经变性使双链解链为2个单链DNAS在低…     

PCR技术在呼吸道病毒检测中的应用进展

反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)在病毒监测中的作用随着其自身的发展越来越重要,它从最初的RT-PCR到与其他各项新兴技术相结合,逐渐发展成实时荧光定量RT-PCR、多重RT-PCR、多重实时荧光RT-PCR、多重PCR技术为基础的反式线点杂交、环介导的反转录等温扩增、反转录为基础的电喷雾电离质谱技术、扩增片段长度多态性分析等各项技术。现对这几项技术在病毒检测中的优点与不足予以综述。     

罗氏诊断与PCR技术

罗氏诊断拥有PCR(聚合酶链反应)技术的全球专利权。它的发明在1 993年获得了诺贝尔化学奖。目前已经广泛应用于病毒学、妇女健康、微生物学、血液筛查、肿瘤学、基因组学等方面。CobasAmplicor是全球首个完全实现PCR扩增与检测自动化的桌面平台。它主要应用于疾病诊断、病毒载量测定、药物疗效监测及评估、血液筛查等领域罗氏诊断与PCR技术     

PCR检测技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自创建以来已逐步应用于临床疾病的诊治［１］，特别是对临床结核标本的辅助诊断更具有重要意义。近期，我们对临床送检的各种可疑结核病标本，应用ＰＣＲ技术对结核病的感染情况进行了检测，结果报告如下。１ 资料与方法１．１ 标本来源 临床送检标本８２例，其中痰３０例，胸水１６例，腹水１４例，尿７例，脑脊液８例，肺泡灌洗液７例。１．２ 方法 标本采集后存放于经高压灭菌和紫外线照射后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中。模板ＤＮＡ提取的主要过程是：取适量组…     

PCR技术在传染病中的应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术是1985年Mullis建立的;1988年Erlich引入耐热Taq酶后几年来其应用越来越广泛,给医学生物界带来了一场深刻的变革。该技术具有灵敏性高、特异性强及快速、操作简便等优点,故尤其适用于传染病中难以培养和(或)生长缓慢的病原微生物的诊断。本文重点介绍PCR技术在诊断结核性脑膜炎、乙型肝炎、爱滋病等疾病中的应用。     

PCR在结核病诊断中的应用

ＰＣＲ在结核病诊断中的应用游纲佳钟玉莲（江西省肺科医院南昌３３０００６）关键词结核病诊断聚合酶链反应基因检测在当今诊断疾病中越来越受到重视，聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术已在很多医院作为诊断结核病的方法之一。本院近１年来也开展此项工作，现将１３３例检测情...     

聚合酶链反应检测疟疾的研究

目的 建立能鉴别诊断恶性疟原虫间和日疟原虫的PCR检测方法。方法 根据红内期疟原虫SSUr-RNA基因序列,设计合成两对引物,采用PCR技术,检测89份门诊“四热”病人血样,并与镜检法进行比较研究。结果 恶性疟原虫血样能扩增出205bp的特异带,间日疟原虫血样能扩增出120bp的特异带,PCR检测的阳性率为74.16%,镜检法为68.54%,PCR法与镜检法的符合率为94.38%。结论 PCR检测的敏感性和特异性均优于镜检法,对于诊断恶性疟原虫和间日疟原虫以及恶性疟原虫的间日疟原虫的混合感染具有一定的应用价值。     

聚合酶链反应检测铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡的实验研究及临床应用

目的：探索聚合酶链反应（PCR）技术对铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡快速诊断的可行性。优越性及其在临床应用中的价值。方法：建立PCR检测标准铜绿假单胞菌方法，对兔铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡模型研究并应用于临床，并与细菌培养做比较。结果：铜绿假单胞菌扩增出一条长504bp的阳性条带，其他常见细菌，人和兔正常角膜组织均为阴性，动物模型PCR敏感性为93.8%。特异性为100.0%；细菌培养敏感性为68.7%。特异性为93.7%。临床标本PCR阳性率为66.7%；细菌培养阳性率为38.1%。结论：PCR技术对快速检测实验室和临床标本中的铜绿假单胞菌具有重要的应用价值。     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

人类白细胞抗原—I类抗原的DNA分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原－Ｉ（ＨＬＡ－Ｉ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法 设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物,组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型。结果 所有样本ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功,无假阳性和假阴性出现,４０份样本的重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ     

荧光多重PCR对α地中海贫血的基因诊断

目的 :建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法 :应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR ,同时扩增α1和α2 珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白 ( β actin) ,用PerkinElmerABIPRISMTM3 77DNASequencer自动分析结果 ,并对所得数据进行统计。用连锁分析的方法PCR扩增同一批模板α2 珠蛋白基因上游的 (CA) n,跑变性胶并将结果与前一种方法对照。结果 :荧光多重PCR自动分析和扩增 (CA) n 连锁分析得出的结论与实际情况完全相符 ,结果判断容易。结论 :荧光多重PCR法灵敏、简便 ,单管内就能完成 ,适合运用于α地中海贫血的快速诊断 ,并有可能运用于移植前诊断和母体外周血分离胎儿有核红细胞产前诊断。     

荧光多重PCR对α地中海贫血的基因诊断

目的：建立一种快速、灵敏的α地中海贫血诊断方法。方法：应用荧光引物对正常人和患者进行多重PCR，同时扩增α1和α2珠蛋白基因和内对照β肌动蛋白(α—actin)，用Perkin E1mer ABI PBISM^TM 377 DNA Sequencer自动分析结果，并对所得救据进行统计。用连锁分析的方法PCR扩增同一批模板α2珠蛋白基因上游的(CA)n，跑变性胶并将结果与前一种方法对照。结果：荧光多重PCR自动分析和扩增(CA)n连锁分析得出的结论与实际情况完全相符，结果判断容易。结论：荧光多重PCR法灵敏、简便，单管内就能完成，适合运用于α地中海贫血的快速诊断，并有可能运用于移植前诊断和母体外周血分离胎儿有核红细胞产前诊断。     

Establishment of a fluorescent polymerase chain reaction method for the detection of the SARS-associated coronavirus and its clinical application

Objective To establish a fluorescent polymerase chain reaction (F-PCR) method for detecting the coronavirus related to severe acute respiratory syndrome (SARS) and to evaluate its value for clinical application.Methods The primers and the fluorescence-labeled probe were designed and synthesized according to the published sequence of the SARS-associated coronavirus genes.A F-PCR diagnosis kit for detecting the coronavirus was developed, and 115 clinical nasopharyngeal gargling liquid samples were tested.Results The sequence of PCR amplified products completely matched the related sequence of the SARS-associated coronavirus genome. Forty-nine out of 67 samples from identified SARS patients and 8 of 18 samples from persons having close contact with SARS patients showed positive results.All 30 samples from healthy controls were negative.Conclusion The F-PCR method established may be a rapid, accurate and efficient way for screening and for the early diagnosis of SARS patients.     

荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2在乳腺癌临床应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测Bcl-2基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定30名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和以及随访5年以上81例乳腺癌患者外周血中Bcl-2的表达量。结果 Bcl-2表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),β2-微球蛋白在三组间差异无统计学意义(P>0.05)。81例乳腺癌患者阳性率为58.0%,良性乳腺疾病组为0。Bcl-2表达与患者年龄和肿瘤大小和类型无关(P>0.05),与乳腺癌组织学分级和预后相关(P<0.05)。结论 FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测Bcl-2方法,可有效监测乳腺癌的诊断、疗效、转移和预后。乳腺癌Bcl-2蛋白表达阳性提示肿瘤分化程度高,患者预后好。     

The polymerase chain reaction and its applications

The advent of recombinant DNA technology has brought us many new techniques for the detection of genetic defects. With these methods it has become possible to do prenatal screening of the DNA of fetuses and to detect genetic defects that would lead to congenital disease. The biggest problem facing researchers has been the limited sensitivity of the techniques of molecular biology especially in detecting small changes in the DNA.