低氧内皮细胞条件培养液和DDPH对肺动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因及α平滑肌肌蛋白表达的影响

目的：研究低氧内皮细胞条件培养液（HEC-CM）和DDPH对肺动脉平滑肌细胞（PASMC）骨桥蛋白（OPN）基因表达和α平滑肌肌动蛋白（α-SM-actin）的影响,进而探讨DDPH对增殖后PASMC的逆转效应。方法：利用HECCM建立猪PASMC的增殖模型;采用细胞培养、改良的四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）、免疫细胞化学染色测定α-SM-actin、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测OPN基因表达等方法观察HECCM的促PASMC增殖作用,以及DDPH对增殖后PASMCα-SM-actin和OPN表达的影响。结果：（1）HECCM促PASMC增殖后,PASMC的α-SM-actin含量降低而其OPN基因表达上调;（2）HECCM促PASMC增殖后,加入DDPH可使PASMC的α-SM-actin含量回升,OPN表达下调。结论：DDPH对HECCM促PASMC增殖有逆转效应,可使增殖后PASMC由合成表型逆转为正常收缩表型。     

大鼠血管平滑肌细胞的贴块法培养

目的:探讨大鼠血管平滑肌细胞的原代培养方法与生长特性,为中药研究提供实验材料。方法:采用组织贴块法培养,倒置显微镜观察形态,电镜鉴定,台盼蓝染色活力检测。结果:倒置显微镜和电镜观察培养的血管平滑肌细胞生长状态良好,呈现平滑肌细胞特征性的“峰—谷”状结构,台盼蓝染色约有95%以上的细胞为活细胞。结论:本培养方法简单、经济,经过一定时间的操作训练,即可成功培养出平滑肌细胞。     

消化法培养大鼠脑血管平滑肌细胞

目的建立大鼠基底动脉平滑肌细胞培养的方法。方法取大鼠基底动脉,剪成约0.2mm的小段,用含胶原酶Ⅱ型(0.5g.L-1)、弹性酶(0.15g.L-1)、透明质酸酶Ⅳ-S型(0.5g.L-1)及脱氧核糖核酸酶Ⅰ型(0.1g.L-1)的消化液在37℃消化1h。而后用含20%FCS的DMEM/F12进行培养。结果原代培养3d后细胞可少量贴壁,1wk左右可传代,细胞传代成活率达97%。光镜和免疫细胞化学染色检测第4代细胞纯度为98%。结论与目前国内培养脑血管平滑肌细胞的方法相比,本方法操作简单,培养周期短,细胞纯度高。     

局部注射IGF对大鼠正畸牙齿移动的影响

目的：观察局部注射重组鼠的胰岛素样生长因子-1（rrIGF-1）对大鼠正畸牙齿移动的影响,探讨IGF在正畸牙齿移动中的作用机制。方法：建立大鼠牙齿移动模型．实验中分别将rrIGF及生理盐水注射入实验组及对照组大鼠右侧上颌第一磨牙腭侧的骨黏膜下,分别在加力1、3、7、14、21d后记录上颌第一磨牙移动距离。用HE染色观察牙周组织变化情况并采用免疫组织化学方法对组织中表达的IGF进行分析。结果：实验组大鼠压力侧破骨细胞数和成骨细胞数在实验全过程中均多于对照组,实验组大鼠牙齿移动距离明显大于对照组。结论：证实IGF参与了牙齿移动过程中的牙周组织改建,内源性IGF和注射IGF都使牙齿移动量显著增加。     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7极化为M1型巨噬细胞,制备炎症模型即条件培养基(CM),未加LPS诱导组为对照组即非条件培养基(nCM)。体外培养VSMC分为5组,分别予nCM、CM、CM+IGF-1 60 ng/ml、CM+IGF-190 ng/ml、CM+IGF-1 120 ng/ml干预,用噻唑蓝(MTT)法检测各组吸光度(A)值,以A值反应各组VSMC的数量。结果巨噬细胞RAW264.7在LPS 0 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1μg/ml、10μg/ml浓度刺激下各组上清液中IL-6的浓度分别是(6.75±0.12)pg/ml、(7.82±1.53)pg/ml、(44.09±1.58)pg/ml、(155.71±23.93)pg/ml、(436.59±3.15)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);VSMC在5组不同干预下各组A值分别是(0.53±0.07)、(0.26±0.06)、(0.30±0.10)、(0.62±0.09)、(0.55±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 M1型巨噬细胞可抑制VSMC增殖,但IGF-1可拮抗M1型巨噬细胞对VSMC增殖的抑制作用,本实验中IGF-1促进VSMC增殖的最适浓度为90 ng/ml。     

胰岛素样生长因子-1对大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨在动脉粥样硬化过程中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7制备炎症培养基(IM)。体外培养VSMC分为4组,给予IM、IM+IGF-1 60 ng/ml、IM+IGF-1 90 ng/ml、IM+IGF-1 120 ng/ml进行干预,然后分别用溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)法和Annexin-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)流式细胞术对平滑肌细胞的细胞活力[用吸光度(A)值表示]及凋亡率进行检测。结果各组VSMC在不同干预下,用MTT法测得的A值分别是(0.26±0.06),(0.30±0.10),(0.62±0.09),(0.55±0.05)。IM+IGF-1 90 ng/ml组、IM+IGF-1 120 ng/ml组与IM组相比较差异有统计学意义(P<0.01)。不同干预条件下,各组VSMC凋亡率分别是(10.86±0.15)%,(9.64±0.65)%,(3.85±0.51)%,(4.82±0.08)%。干预后的3组与IM组相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在动脉粥样硬化发生发展过程中,IGF-1在促进VSMC增殖的同时抑制VSMC凋亡。     

糖尿病大鼠视网膜中IGF-1的动态表达及巴曲酶对其的影响

目的探讨胰岛素样生长因子（IGF-1）在糖尿病大鼠视网膜中的动态变化规律，初步证实巴曲酶对IGF-1的影响并探讨其机制，为临床上治疗糖尿病视网膜病变（DR）提供理论依据。方法将大鼠腹腔注射链脲佐菌素制作实验性糖尿病模型，再分别于成模后2个月和3个月时腹腔注射巴曲酶进行干预。通遏免疫组织化学和原位杂交双重检测IGF-1在视网膜中的表达。结果DM造模后2个月时视网膜中IGF-1的含量明显增加，且随时间变化有统计学差异，而巴曲酶治疗后IGF-1的表达明显增加。结论DR大鼠视网膜中IGF-1表达增加可能参与DR的发病机制。巴曲酶对DR有保护作用，其机制可能包括对IGF-1的调节。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞MMP-2表达的影响

目的：探讨糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响。方法：采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞。将50mmol／L葡萄糖孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白稀释成不同浓度分别干预24h和用同一浓度的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白（浓度为200mg／L）分别干预0、4、8、16、24、48、72h，逆转录聚合酶链反应检测细胞中的MMP-2 mRNA表达水平，明胶酶图分析方法观察培养上清液中MMP-2活性。结果：随糖基化终产物修饰牛血清白蛋白干预浓度升高，MMP-2 mRNA表达增加（P〈0．01），以糖基化终产物修饰牛血清白蛋白（200mg／L）对平滑肌细胞干预4h时MMP-2 mRNA表达已升高，24h时最高，以后仍维持较高水平，与未干预组相比差异有统计学意义（P〈0．01），MMP-2降解明胶活性随着糖基化终产物修饰牛血清白蛋白干预浓度升高而增强（P〈0．05）。结论：糖基化终产物可促进大鼠主动脉平滑肌细胞MMP-2的表达。     

瘦素对大鼠关节软骨IGF-I表达的影响

目的 探讨瘦素(leptin)对大鼠膝关节软骨的外周作用.方法 在SD大鼠膝关节腔内注射瘦素100μg后,取胫骨平台,分别用RT-PCR法及免疫组织化学法检测胫骨平台软骨中瘦素及胰岛素样生长因子I(IGF-I)的变化.结果 瘦素无论在RNA水平或蛋白水平都可诱导正常关节软骨IGF-I合成.结论 瘦素在外周对关节软骨有保护作用,并在骨关节炎的病理生理过程中起到重要的作用.     

骨桥蛋白mRNA在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨骨桥蛋白(OPN)mRNA在卵巢癌中的表达并分析其临床意义。方法利用实时荧光定量RT-PCR技术检测35例卵巢癌及正常卵巢组织中OPNmRNA的表达,并结合卵巢癌的临床病理特征进行分析。结果OPNmRNA在卵巢癌组织中表达明显升高,其表达与卵巢癌临床分期及是否存在淋巴结转移显著相关(P<0.01),临床分期较晚、有淋巴结转移的卵巢癌组织中表达水平显著升高。OPNmRNA与CA125在卵巢癌中的表达没有相关性(P>0.05)。结论OPN可能在卵巢癌的发生发展以及转移中起着重要作用,OPN和CA125的联合检测可提高卵巢癌的阳性诊断率。     

缬沙坦对人脐静脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的调节作用,以探讨缬沙坦抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:荧光显微镜观察缬沙坦作用后VSMC凋亡的形态学变化,用流式细胞仪测定缬沙坦用药前后VSMC凋亡率并作周期分析,用流式细胞仪检测缬沙坦对凋亡相关基因Bax,Bcl-2和caspase3表达的影响.结果:缬沙坦高浓度 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组的VSMC凋亡率较AngⅡ模型组明显提高,缬沙坦单药高、中、低浓度组的VSMC凋亡率较对照组明显提高.细胞周期分析表明,AngⅡ 缬沙坦组与AngⅡ组比较,G0/G1期百分率显著升高,S期百分率显著降低,且具有浓度依赖性.Bax和caspase 3基因经高浓度缬沙坦组作用24 h后表达水平增加,Bcl-2则没有改变.结论:缬沙坦对AngⅡ诱导VSMC的增殖有抑制作用;缬沙坦可能促进VSMC凋亡;缬沙坦促进VSMC凋亡可能与Bax和caspase基因表达增加有关.     

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。     

氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响

目的探讨氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)的影响。方法贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,分别给予不同浓度血管紧张肽Ⅱ(ATⅡ)和氯沙坦,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blotting检测不同处理组平滑肌细胞CYR61 mRNA和蛋白表达。采用酶联免疫吸附技术检测平滑肌细胞培养介质中CYR61含量的变化。结果10~(-6)/10~(10) mol·L~(-1)ATⅡ呈剂量依赖性地增加平滑肌细胞内CYR61蛋白及其mRNA表达水平,增高培养介质中CYR61含量(P<0.01)。10~(-5)～10~(-7)mol·L~(-1)氯沙坦预处理组中,ATⅡ刺激的平滑肌细胞CYR61蛋白及其mRNA表达水平及培养介质中CYR61含量明显减低(P<0.01)。结论氯沙坦可拮抗ATⅡ所致的平滑肌细胞内CYR61的表达与分泌。     

Angiotensin II-induced growth of vascular smooth muscle cells is associated with modulation of cell surface area and platelet-derived growth factor receptor expression

1. Excessive growth of vascular smooth muscle cells (VSMC) can lead to critical problems in the treatment of some vascular diseases. Recent studies suggest a connection between this abnormal growth of VSMC and the octapeptide hormone angiotensin (Ang) II. However, the growth-promotive potential of AngII on VSMC is unclear. 2. Using the novel AngII inhibitor E4177 and an original animal model, we confirmed that AngII does function in abnormal growth of VSMC induced after transplantation of vein grafts in an animal model. 3. Furthermore, using a primary culture of human aortic smooth muscle cells (HASMC), we found that AngII augmented the growth of HASMC in a serum-dependent manner and induced enlargement of the cell surface area in HASMC, both effects being nullified by E4177. The latter effect of AngII was associated with an increase in the expression level of platelet-derived growth factor (PDGF) receptors. In specimens obtained from the animal model, PDGF receptors were highly expressed. 4. These data obtained in vitro and in vivo imply that AngII has the potential to promote growth of VSMC and suggest that this growth promotion may be mediated by enlargement of the cell surface area.     

缬沙坦对球囊损伤后血管平滑肌细胞增生的影响

目的 探讨缬沙坦因子防治人类血管成形术后再狭窄的可行性方法观察新的非肽类血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型(AT_1)受体拮抗剂,缬沙坦(Valsartan),对血管平滑肌细胞(VSMC)增生的影响。对大鼠髂动脉球囊内皮剥脱术后过度增生模型采用~3H-TdR和~3H-Leu掺入,免疫组化染色检测VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及图象分析血管壁形态学变化。结果 缬沙坦显著减少~3H-TdR和~3H-Leu的掺入量,减少新生内膜面积和PCNA阳性细胞数。结论 缬沙坦能抑制大鼠动脉的球褒内皮损伤后的VSMC增生,可能它是防治血管成形术再狭窄的有效药物。     

全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增殖和转化生长因子-β mRNA表达的影响

目的：研究全反式维甲酸对血管平滑肌细胞增殖，ＤＮＡ合成和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）基因表达的影响。方法：采用血管平滑肌细胞培养，细胞计数，３Ｈ－ＴｄＲ参入，斑点杂交和图像分析方法。结果：全反式维甲酸（Ａ－ＴＲＡ，０．０１，０．１，１μｍｏｌ·Ｌ－１）明显抑制胎牛血清（ＦＣＳ）促进的血管平滑肌细胞增殖和ＤＮＡ合成，其最大抑制率分别是２２．４％和８７．１％；全反式维甲酸明显抑制ＦＣＳ促进的血管平滑肌细胞ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达。结论：ＡＴＲＡ具有抗血管平滑肌细胞增殖作用，其机制与抑制ＴＧＦ－β基因表达有关。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用，并研究福辛普利对其的影响。方法：采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2表达的变化和福辛普利对其的影响。结果：血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngⅡ作用，对细胞凋亡有一定的影响，同时可影响凋亡调控基因的表达。结论：血管紧张素Ⅱ具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用，尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用。     

硝苯地平抑制自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞内肌醇磷脂量的增加

目的：观察硝苯地平对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）的动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增殖、ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达和细胞内肌醇磷脂含量的影响，以进一步阐明硝苯地平的抗高血压作用机制。方法：以ＭＴＴ法、斑点印迹杂交和细胞内肌醇磷脂含量测定方法与对照组比较硝苯地平对细胞的影响。结果：硝苯地平是ＶＳＭＣｓ异常增殖的有效抑制剂，并能明显阻止ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ内ｃ－ｆｏｓ过度表达；研究也显示，硝苯地平显著地减小细胞内肌醇磷脂的过量增加。结论：硝苯地平能抑制ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ的ｃ－ｆｏｓ过度表达和细胞异常增殖，而这一作用可能与其阻止细胞内肌醇磷脂的过量增加有关。