姜黄素诱导人慢粒白血病K562细胞凋亡与线粒体途径的关系

目的研究姜黄素（Cur）对慢性粒细胞白血病（CML）细胞株K562的作用，并且探讨该作用与线粒体凋亡途径的关系。方法应用MTT法检测Cur对细胞增殖的影响，AO／EB荧光染色法、细胞光度术、DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡，分光光度法检测Caspase-3的活性，用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C的含量。结果Cur对K562细胞抑制作用呈量效、时效关系；Cur对人正常骨髓单个核细胞与K562细胞之间有一定的选择性，对K562细胞的敏感性约为人正常骨髓单个核细胞的5倍，在对K562细胞抑制超过95％时，对人正常骨髓有核细胞几无毒性。Cur5．0，10．00g／mL作用24h，可诱导K562细胞凋亡，促进细胞色素C释放，激活caspase-3。结论Cur可通过线粒体途径诱导人慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡。     

CRKL基因反义寡核苷酸诱导K562细胞的凋亡

背景与目的：近几年研究发现,CRKL（CT10regulator of kinase like)基因编码的蛋白在慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML)发病中起重要作用。本实验研究CRKL基因反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。方法：以脂质体为载体,用CRKL基因反义寡核苷酸转染K562细胞,通过活细胞计数,透射电镜,流式细胞术,DNALadder测定观察K562细胞形态学,细胞周期,基因表达等的变化。结果：在CRKL基因反义寡核苷酸作用下,K562细胞的生长明显出现抑制;流式细胞仪检测见二倍体峰前出现凋亡峰;在电镜下可见处于凋亡各期的K562细胞;提取其基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,可见明显的细胞凋亡梯状条带,而对照组K562细胞未观察到上述变化。结论：CRKL基因是Ph染色体阳性CML发病的重要因素。     

葛根总黄酮诱导白血病细胞株凋亡及其分子机制的研究

 目的　探讨葛根总黄酮（PR）对慢性粒细胞白血病（CML）细胞株K562和急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞增殖及凋亡的影响。方法　采用MTT法检测PR对K562细胞、NB4细胞的增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;Hoechest33258荧光染色AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡率;DNA PI染色法分析细胞周期及亚二倍体峰。Western blot分别检测NB4细胞JNK、PARP、bcl-2、Caspase3,K562细胞bcr-abl、p53、bcl-2、Fas／FasL蛋白表达的变化。结果　12.5～200 μg／ml PR均能抑制K562、NB4细胞增殖。光学显微镜及荧光显微镜下观察到核固缩、凋亡小体等典型的细胞凋亡改变;Annexin V+／PI-细胞呈时间-剂量依赖性增加;DNA PI染色法发现细胞亚二倍体比例增加,G1期比例下降、S期比例增加。PR呈时间-剂量依赖性抑制K562细胞、NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡。不同浓度PR干预后K562细胞bcr-abl蛋白水平呈浓度依赖性下调（F＝18.74,P＜0.05）,而bcl-2则无明显变化;p53 表达呈浓度依赖性上调;Fas／FasL 表达无明显变化。NB4细胞JNK、PARP及Caspase 3蛋白表达与PR浓度呈正相关,与凋亡抑制蛋白bcl-2则呈负相关（F＝42.32,P＜0.05）。结论　PR能有效抑制K562、NB4细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,但分子机制不同。提示一定浓度PR具有较广谱的抗白血病效应。     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

 目的　探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BOR）对慢性粒细胞白血病（CML）伊马替尼耐药细胞株K562／G01的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法　采用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞周期与凋亡。结果　K562／G01细胞对伊马替尼不敏感,伊马替尼对K562／G01和K562细胞的IC50分别是（20.09±1.38）、（0.54±0.13）μmol／L;BOR对K562／G01细胞具有增殖抑制作用,并于48 h时作用效果达高峰,IC50（23.10±2.71）nmol／L,随着BOR浓度和作用时间的增加,FCM检测可见G2／M 期细胞周期阻滞及明显的凋亡峰。结论　BOR对CML伊马替尼耐药细胞株具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G2／M 期的阻滞有关。     

锌指蛋白KLF4在K562细胞株中的表达和作用

 目的　研究锌指蛋白KLF4在慢性粒细胞白血病细胞株K562中的表达,探讨KLF4在其中的作用。方法　采用RT-PCR及蛋白印迹法检测KLF4 mRNA、KLF4蛋白在K562细胞株和健康人单个核细胞中的表达。结果　KLF4在K562细胞株中表达,KLF4 mRNA表达量为0.02±0.01,与其在健康人单个核细胞中的表达0.43±0.03比较,差异有统计学意义。KLF4蛋白在K562细胞株中的表达也明显低于正常对照组。结论　KLF4在K562细胞株中呈低表达,提示KLF4可能具有肿瘤抑制因子作用,但其对白血病的增生、凋亡及耐药机制需要进一步研究。     

整合素α5β1介导的PI3K-AKT信号分子在CML发病机制中的作用

摘 要　目的：研究整合素α5β1介导的PI3K-AKT信号转导通路在慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）发病机制中的作用。方法：流式细胞术检测不同剂量抗整合素α5β1单抗（Anti-α5β1）作用后白血病K562细胞的凋亡率, Western blotting检测健康志愿者、CML急变期患者、K562细胞和Anti-α5β1处理的K562细胞中PI3K和AKT蛋白的表达水平。结果：Anti-α5β1可诱导K562细胞凋亡,并呈剂量依赖性。与健康志愿者比较,CML急变期患者骨髓单个核细胞和K562细胞中PI3K和AKT蛋白的表达水平明显增高（P<0.05）;Anti-α5β1处理后,K562细胞内PI3K、AKT蛋白表达水平明显降低,其磷酸化水平也下降（P<0.05）。结论: 整合素α5β1可能通过影响PI3K-AKT信号转导通路中关键分子PI3K和AKT的表达水平诱导CML祖细胞凋亡耐受,参与了CML的发生、发展过程。     

他莫昔芬诱导K562细胞凋亡的实验研究

 目的 观察他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增生抑制及诱导凋亡作用。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下用他莫昔芬处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率,Wright-Giemsa染色光镜观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带（DNA,ladder）、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 他莫昔芬能够抑制K562细胞增生;1 ~ 5μmol／L他莫昔芬可诱导K562他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞。结论 他莫昔芬可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

Ch1/2对肿瘤细胞凋亡的调节作用

目的:观察顺铂作用下K562细胞及白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)的细胞周期变化和转染Chk1／2反义寡核 苷酸对顺铂诱导下K562细胞及白血病BMMNC凋亡的影响。方法:用流式细胞仪检测顺铂作用下。K562细胞及白血病 BMMNC的细胞周期变化。转染Chk1和Chk2反义寡核苷酸于K562细胞及白血病BMMNC,检测顺铂作用下转染细胞的凋亡 率。结果:10μmol／L顺铂作用下K562细胞和白血病BMMNC均出现S期阻滞,转染Chk1／2反义寡核苷酸可明显增加顺铂 诱导下K562细胞凋亡,转染Chk1反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下白血病BMMNC的凋亡率,但转染Chk2反义寡核苷酸 未增加白血病BMMNC的凋亡率。结论:Chk1在肿瘤细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肿瘤增敏治疗的有效靶点,Chk2在 肿瘤细胞凋亡中的作用需进一步研究。     

内吗啡肽-1诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：探讨内吗啡肽-1（endomorphine-1，EM-1）诱导人类慢性髓性白血病K562细胞株的凋亡作用。方法：采用M1vr法检测EM-1对K562细胞的增殖抑制作用；瑞士-吉姆萨染色和荧光显微镜观察细胞形态变化；流式细胞术（FCM）和琼脂糖凝胶电泳测定细胞凋亡，免疫组化探讨其机制。结果：EM-1能明显抑制K562细胞增殖，使K562细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征，同时对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有时间依赖性和剂量依赖性。与对照组相比，细胞抑制率和凋亡率差异有统计学意义，P〈0．01。bcl-2表达降低，bax表达增高。结论：EM-1能诱导K562细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度和时间依赖关系，其作用机制可能与bcl-2／bax通路激活有关。     

2-甲氧基雌二醇对白血病细胞K562增生、凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对体外培养的慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞系bcr-abl（+）K562细胞增生、凋亡及细胞周期的影响。方法 将不同浓度和作用时间的2-ME与K562细胞共同培养，采用相差显微镜观察细胞的形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2-ME对K562细胞增生的抑制作用；流式细胞术分析2-ME对K562细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 1~ 16μmol／L浓度的2-ME在24、36、48及60 h均可明显抑制K562细胞增生，并在一定范围内呈时间和剂量依赖性；2-ME作用后G0／G1期细胞增加，并伴随细胞凋亡峰和凋亡率的升高。结论 2-ME可抑制K562细胞增生，诱导其凋亡，为2-ME的临床应用提供实验依据。     

核因子-E2相关因子2在慢性粒细胞白血病的表达及其与硫氧还蛋白还原酶的相关性

 【摘要】　目的　探讨慢性粒细胞白血病（CML）核因子-E2相关因子2 （Nrf2）基因表达与临床特点的关系及其与硫氧还蛋白还原酶（TrxR）表达的相关性。方法　应用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测30例CML患者（慢性期20例,加速期3例,急变期7例）骨髓细胞及CML细胞株K562中Nrf2及TrxR mRNA的表达,以10例骨髓良性疾病患者骨髓细胞为正常对照。结果　CML慢性期骨髓细胞Nrf2和TrxR mRNA相对定量表达分别为5.601±1.069、9.017±2.398,加速期骨髓细胞分别为1.698±0.349、5.590±1.015,急变期骨髓细胞分别为1.252±0.807、5.050±1.469;正常对照组分别为1.377± 0.344、1.867±0.977。CML患者Nrf2及TrxR mRNA相对表达量与正常对照组比较差异有统计学意义 （χ2＝14.680,P＝0.002;χ2＝8.271,P＝0.041）。CML加速期、急变期之间Nrf2表达量差异无统计学意义（Z＝0.011,P＝0.496）,但与慢性期比较差异有统计学意义（Z＝2.155,P＝0.016;Z＝2.534,P＝0.006）。初发与治疗组之间差异有统计学意义（Z＝2.015,P＝0.022）。K562细胞与正常对照组间差异有统计学意义（Z＝1.898,P＝0.029）。在CML患者骨髓细胞中Nrf2与TrxR表达呈正相关（r＝0.738,P＝0.037）。结论　初发CML患者骨髓细胞Nrf2 mRNA表达升高,经治疗后表达下降,Nrf2可作为判断病情进展的分子标志物;Nrf2与TrxR的表达有相关性。     

增强子结合蛋白C/EBPα对白血病BALB/c裸鼠的肿瘤抑制作用

  目的　探讨增强子结合蛋白C／EBPα在白血病裸鼠体内的肿瘤抑制作用。方法　将30只BALB／c裸鼠随机分转染组（10只）、空载组（10只）、对照组（10只）,建立皮下瘤模型,并将30只BALB／c裸鼠如上分组建立白血病模型,将C／EBPα稳定表达细胞株pEGFP-C／EBPα-K562、空载细胞株pEGFP-K562及白血病细胞株K562分别经皮下和尾静脉注射到相应组裸鼠体内,形成皮下瘤和血液病模型。观测皮下肿瘤的变化,应用TUNEL检测细胞的凋亡,瑞特-吉姆萨染色观察血液病模型裸鼠外周血和骨髓中白血病细胞增殖能力,RT-PCR检测增殖相关基因的表达。结果　皮下瘤模型中pEGFP-C／EBPα-K562组肿瘤质量及最大直径为（2.4±0.1）g和（11±2）mm,空载组和对照组分别为（5.1±0.3）g、（19±3）mm和（5.7±0.4）g、（23±3）mm（均P＜0.05）,TUNEL检测发现pEGFP-C／EBPα-K562组肿瘤细胞凋亡明显增加（P＜0.05）;血液病模型鼠外周血可见白血病细胞,pEGFP-C／EBPα-K562组白血病细胞增殖能力明显低于空载组和对照组,可见明显细胞分化现象,RT-PCR检测发现p53基因上调和c-myc基因下调。结论　增强子结合蛋白C／EBPα在白血病小鼠体内具有促进肿瘤细胞凋亡和抑制白血病细胞增殖的能力,并能促进白血病细胞分化。C／EBPα的白血病抑制作用可能是通过对相应基因的调控来实现。     

丹参酮ⅡA抑制髓系白血病细胞株增殖及诱导凋亡的研究

目的 探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）对髓系白血病细胞株NB4、K562、THP-1增殖抑制作用及促凋亡作用.方法 将不同浓度TanⅡA与NB4、K562、THP-1细胞共培养24、48、72 h,以柔红霉素为阳性对照,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测TanⅡA对白血病细胞株的增殖抑制作用,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,紫外分光光度法检测Caspase-3蛋白表达.结果 TanⅡA作用24、48、72 h对NB4细胞的IC50值分别为24.11、9.60、7.28 μmol/L,对K562细胞IC50值分别为31.75、11.88、6.81 μmol/L,对THP-1细胞IC50值分别为111.10、32.82、11.82 μmol/L.流式细胞术检测结果显示：与空白对照组相比,TanⅡA与各白血病细胞株作用48 h后,细胞凋亡明显增加,G1期细胞数增加,Caspase-3蛋白表达显著升高（P＜0.05）.结论 TanⅡA对白血病细胞具有增殖抑制与促凋亡作用,其作用强度从高到低依次为NB4、K562、THP-1细胞.其抗癌作用机制可能与阻滞细胞于G1期,上调Caspase-3表达有关.     

慢病毒载体介导SHIP基因抑制K562细胞增殖及对P13K／Akt信号通路的调控

背景与目的：SHIP基因主要表达于造血细胞,通过降解PIP3抑制P13K／Akt信号通路而在造血细胞增殖和存活中起重要负调控作用。本研究通过慢病毒载体介导SHIP基因转染K562细胞,探讨SHIP基因改变及功能丢失与白血病发病的关系。方法：将携带SHIP基因的慢病毒感染K562细胞．FQ—PCR法检测SHIP转录水平,Western blot法检测转染后SHIP蛋白表达及Akt磷酸化水平的变化;比较SHIP基因表达前后细胞增殖、形态的变化。结果：K562细胞中SHIP蛋白阴性。以携带SHIP基因的慢病毒载体转染K562细胞后．细胞增殖抑制率升高,K562-wtSHIP—FIV—G细胞的增殖抑制率由转染第3天的（9．9±1．5）％升到第5天的（40．6±2．3）％;伴有Akt磷酸化水平明显减弱;转染后,K562．wtSHIP—FIV—G组细胞p-Akt的表达水平由0．533降低到0．245（P〈0．01）,细胞增殖明显被抑制。此外,SHIP蛋白还能使K562细胞出现凋亡特征,Hoechst33342染色结果转染wtSHIP基因组K562细胞第5天早期凋亡率[（38．3±4．3）％]明显高于K562-FIV—G组细胞[（8．2±0．9）％]和未转染组K562细胞[（7．7±0．8）％]。结论：SHIP基因具有重要的抑制细胞增殖和促进凋亡的能力,SHIP基因缺失导致K562细胞P13K／Akt信号途径失调,促进K562细胞增殖。     

低剂量地西他滨联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用

 目的　研究低剂量地西他滨（DAC）联合伊马替尼（IM）对K562细胞株的增殖抑制作用及对bcr-abl表达的影响。方法　单药及两药联合后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察药物对K562细胞株的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物对K562细胞株早期凋亡率及细胞周期,巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测药物对K562细胞株bcr-abl mRNA表达。结果　DAC与IM单药对K562细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性。两药联合用药抑制作用较单药组明显（F＝43.947、165.580、321.193、296.101,均P＜0.05）,24、 48、72 h各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（F＝202.759、168.457、417.538,均P＜0.05）。DAC及IM单药作用药物对K562细胞株均使G1期细胞明显增多,IM 0.2 μmol／L作用于K562细胞株48 h可见6.7 %早期凋亡细胞,IM 0.2 μmol／L联合DAC 4 μmol／L早期凋亡细胞增加至8.4 %。bcr-abl mRNA表达水平降低,DAC 4 μmol／L作用48 h后可降低K562细胞中bcr-abl mRNA表达（约14 %）,IM 0.2 μmol／L降低约40 %,联合用药表达量明显降低（约60 %）。联合用药组与单药组比较差异有统计学意义（F＝71.981,P＜0.05）。结论　DAC 对K562细胞的增殖抑制作用与细胞周期阻滞、诱导凋亡及降低bcr-abl mRNA表达有关,两药联合可显著抑制K562细胞增殖。     

重组人类核心蛋白聚糖对白血病K562细胞增殖的影响

 【摘要】　目的　观察重组人类核心蛋白聚糖（rhDCN）对白血病 K562细胞生长抑制、凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法　通过Lipofectamine 2000脂质体介导转染对数生长期的白血病K562细胞,实验分组为0.9 % NaCl溶液组、pcDNA3.1（+）／K562组、pcDNA3.1（+）-DCN／K562组和脂质体组。经瑞特染色观察转染后细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1及Bax的表达。结果　pcDNA3.1（+）-DCN／K562组瑞特染色呈现典型的凋亡形态学改变。MTT结果显示,pcDNA3.1（+）-DCN／K562组转染24 h细胞增殖抑制率为（16.14±1.08）%,转染48 h为（14.07±1.01）%,转染72 h为（20.29±1.19）%,明显高于对应时间点其他组增殖抑制率,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。FCM检测结果显示,pcDNA3.1（+）-DCN／K562组凋亡率为（20.15±1.31）%、细胞的G0／G1期细胞百分率为（51.15±0.57）%,与其他各组比较增加明显,差异有统计学意义（均P＜0.05）。Western blot结果显示,pcDNA3.1（+）-DCN／K562组与其他各组比较bcl-xl、Mcl-1蛋白表达减低,Bax蛋白表达升高。结论　rhDCN重组质粒可有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,rhDCN对细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-xl、Mcl-1、Bax的影响可能是其发挥作用的机制。     

The inhibitory effect of a novel organoselenium compound BBSKE on the tongue cancer Tca8113 in vitro and in vivo

The aim of this study was to evaluate the anti-cancer effect of a novel organoselenium compound BBSKE (1,2-[bis(1,2-Benzisoselenazolone-3(2H)-ketone)]ethane, BBSKE, PCT: CN02/00412) on cell growth and apoptosis, focusing on the protein activity of Thioredoxin Reductase (TrxR) and Caspase-3, in oral squamous cell carcinoma (OSCC) in vitro and in vivo. Oral squamous cancer cell line Tca8113 was treated with various concentrations of BBSKE. Growth and apoptosis as well as the protein activities were analyzed. Morphologic changes of Tca8113 cells after 24h treatment of BBSKE were determined by fluorescence microscopy. The increase of Caspase-3 activity and decrease of Thioredoxin reductase (TrxR) activity were also measured. BBSKE induced a significant cell growth inhibition and elicited typical apoptotic morphologic changes (chromatic condensation, nucleus fragmentation). This phenomenon was accompanied by a change in protein activity of Thioredoxin reductase (TrxR) and Caspase-3. The anti-cancer effect of BBSKE was then studied in well-established Tca8113 xenografts in nude mice. In those tumors, anti-cancer effects were observed and significantly higher than the controls. Together, these results indicate that BBSKE can inhibit tongue cancer cell proliferation in vitro and in vivo, and induce apoptosis in Tca8113 cell lines partially via inhibiting the activity of TrxR and promoting the activity of Caspase-3.     

夜香树花甾体皂苷抑制K562细胞增殖及对PI3K／AKt信号通路的调控

目的探讨夜香树花甾体皂苷（SSFCN）抑制K562细胞增殖及作用机制。方法夜香树花用有机溶剂提取、分离并鉴定SSFCN,体外培养K562细胞,采用MTT比色法测定抑制率;流式细胞仪分析细胞周期、琼脂糖凝胶电泳检测DNA图谱的变化,Western blot法检测用SSFCN处理的K562细胞AKt磷酸化水平的变化。结果SSFCN能显著抑制人白血病细胞K562的生长,作用后细胞生长有明显凋亡特征性改变,凋亡率呈时间和剂量依赖性。60mg／L的SSF—CN作用K562细胞24h后,流式细胞仪检测出现亚G,峰及DNA电泳呈梯形条带。Western blot结果表明,SSFCN处理K562细胞72h后,K562细胞P—AKt磷酸化水平明显下调。结论SSFCN具有抑制K562细胞增殖和促进凋亡的作用,SSFCN通过抑制K562细胞PI3K／AKt信号通路,从而抑制K562细胞增殖。