超声破坏微泡对心肌细胞膜通透性影响的研究

目的探讨超声破坏微泡造影剂对心肌细胞膜通透性的影响。方法将15只昆明小白鼠随机分为3组,一组采用尾静脉输入白蛋白微泡造影剂,胸壁用频率为1MHz,强度为1.5W/cm2的超声进行辐照1min;一组单纯采用同等超声辐照相同时间;一组作为对照。作用后即刻取心肌组织用硝酸镧(La)示踪法做透射电镜观察心肌细胞膜通透性的变化。结果采用超声破坏微泡后可见部分镧颗粒分布于心肌细胞胞浆内,部分分布于线粒体外、细胞核外;单纯超声作用组心肌细胞胞浆中可有少量的镧颗粒分布,而大部分镧颗粒分布于细胞膜外;而对照组镧颗粒分布于心肌细胞膜外。结论超声破坏微泡可提高心肌细胞膜通透性,可能是超声微泡造影剂增强组织中基因转染的机制之一。     

超声造影剂增强HIFU消融作用的病理学研究

目的探讨超声造影剂增强高强度聚焦超声（HIFU）消融生物组织作用的病理学改变。 方法24只新西兰大白兔按体质量配对分为两组，A组肝脏接受单纯HIFU辐照，B组动物接受辐照前经静脉注射超声造影剂SonoVue。辐照后测量组织凝固体积并观察光电镜下组织学及细胞超微结构改变。 结果A组与B组组织凝固体积分别为（0．07±0．02）cm^3和（0．21±0．06）cm^3（P＜0．05）。光镜下两组辐照区肝组织未见凝固性坏死，B组可见部分细胞膜及胞核破坏。电镜下两组辐照区细胞内均未见完整细胞器，均呈现不可逆凝固性坏死，A组辐照区细胞结构较B组清楚。 结论超声造影剂增加HIFU焦域体积并进一步破坏细胞结构，从而增强HIFU消融作用。     

诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性影响的实验研究

目的 研究诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性的影响.方法 将48只已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠随机分为4组:空白对照(A)组、单纯微泡剂(B)组、单纯超声(C)组和超声联合微泡(D)组.以伊文思蓝(Evens blue,EB)为指示剂,选择频率为1.75 MHz、机械指数为1.4的诊断超声持续照射肿瘤区5 min,经大鼠尾静脉注射/不注射微泡造影剂.使用分光光度计和标准曲线法测量大鼠肿瘤组织内EB含量变化,激光共聚焦显微镜观察EB外溢情况.结果 超声联合微泡可增加肿瘤组织微血管通透性.D组瘤内EB含量较A、B、C组明显增加(P＜0.05),血管周围EB外溢明显.A、B、C组EB含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),血管周围均未见明显EB渗出.结论 在一定条件下,诊断超声联合微泡可明显提高辐照肿瘤组织血管通透性,这对临床肿瘤化疗患者具有潜在的应用意义.     

低频超声辐照联合微泡抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的实验研究

目的 观察低频超声(20 kHz)辐照联合静脉注射微泡造影剂SonoVue对裸鼠人前列腺癌Du145移植瘤的抑瘤效应,并探讨其可能的抑瘤机制.方法 通过细胞移植和瘤块移植方法建立24只裸鼠人前列腺癌Du145移植瘤模型,随机分为超声微泡组、单纯超声组、单纯微泡组和对照组,每组6只.超声微泡组:尾静脉注射0.2 mL SonoVue的同时对瘤体行20 kHz超声辐照,辐照强度2 W/cm2,辐照2 min;单纯超声组:尾静脉持续缓慢推注生理盐水0.2 mL,同时超声辐照2 min;单纯微泡组:尾静脉持续缓慢推注SonoVue 0.2 mL同时行假照;对照组不做任何处理.各组均隔天治疗1次,共3次.治疗后测量瘤体大小,绘制瘤体生长曲线,计算抑瘤率.首次治疗后14 d剥离瘤体,通过光镜、电镜观察肿瘤组织病理改变.免疫组织化学法观察CD34阳性染色血管,计算肿瘤微血管密度(MVD),比较各组间MVD的差异.结果 24只裸鼠均成功植瘤.治疗后超声微泡组瘤体体积明显小于其他各组(P＜0.05),抑瘤率为62.70%.HE染色观察超声微泡组瘤体组织大部分损伤坏死,电镜下超声微泡组肿瘤内微血管的内皮细胞损伤,线粒体肿大,基底膜断裂.超声微泡组瘤体内CD34阳性染色微血管数减少,其MVD值显著低于其他各组(P＜0.05).结论 20 kHz低频超声辐照联合微泡造影剂SonoVue可有效抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的生长,其抑瘤机制是超声空化效应破坏肿瘤的微血管.     

超声声致孔隙效应增强兔前列腺组织通透性的研究

目的 探讨超声联合造影剂微泡的超声声致孔隙效应开放血-前列腺屏障,提高前列腺组织通透性的可行性.方法 15只健康8月龄性成熟新西兰兔,随机分为单纯微泡组、单纯超声组、超声联合微泡辐照组,超声直接辐照前列腺,荧光显微镜、体视显微镜、伊文思蓝(EB)示踪观察前列腺组织通透性的变化.结果 体视显微镜下超声联合微泡辐照组前列腺组织可见蓝色EB分布于前列腺包膜,部分EB渗透到腺体实质,腺体呈均匀蓝染,单纯超声组及单纯微泡组EB均分布于包膜,腺体实质部分渗透不明显.单纯超声组、单纯微泡组、超声联合微泡辐照组前列腺冰冻切片均可见红色EB荧光分布;经苏木素复染后可见超声联合微泡辐照组腺体管腔内有EB荧光,而单纯超声组、单纯微泡组均未见管腔内红色EB荧光;超声联合微泡辐照组前列腺EB平均浓度较单纯超声组、单纯微泡组高,差异有统计学意义(P<0.01),单纯微泡组及单纯超声组EB浓度均值未见显著差异(P>0.05).结论 超声联合造影剂微泡的超声声致孔隙效应可以有效开放血-前列腺屏障,明显提高兔前列腺组织通透性.     

微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的病理观察

目的 探讨微泡增强的超声空化阻断肿瘤微循环的病理机制。方法 建立兔肝VX2转移瘤模型18只,随机分为超声微泡组(n=6)、单纯超声组(n=6)及假照组(n=6)。对超声微泡组经耳缘静脉注射微泡,并进行超声辐照;对单纯超声组以生理盐水代替微泡,并进行超声辐照;对假照组注射生理盐水,并进行超声假照。观察辐照后各组病理变化。结果 大体解剖观察,超声微泡组辐照面可见较多出血点;单纯超声组及假照组辐照后肿瘤组织均未见明显改变。光镜下观察,超声微泡组肿瘤组织可见大片出血,血管内皮细胞损伤、连续性中断,红细胞外溢;单纯超声组可见局灶性小片状出血,血管内皮尚完整;假照组肿瘤组织未见明显出血,血管内皮完整。电镜下观察,超声微泡组肿瘤血管内皮破损严重,可见大量红细胞渗出,线粒体肿胀及吞饮小泡;单纯超声组及假照组仅见内质网略水肿。结论 微泡增强的超声空化阻断兔VX2肝脏肿瘤微循环的机制可能为血管机械性损伤。     

电镜硝酸镧示踪超声微泡造影剂开放血脑屏障

目的 研究超声波破坏微泡造影剂对大鼠血脑屏障通透性的影响。 方法 用电镜硝酸镧示踪法观察超声波破坏微泡造影剂对大鼠血脑屏障通透性的变化。 结果 超声波照射后即刻，即可见镧颗粒通过毛细血管内皮细胞及细胞间的紧密连接进入组织间隙，血脑屏障开放持续至6h，12h时已关闭。电镜下可以见到血管源性脑水肿，细胞器水肿不明显。 结论 超声波破坏微泡造影剂开放血脑屏障，为中枢神经系统疾病的治疗提供了一种无创、具靶向性的药物转运方法。     

超声辐照微泡对大鼠前列腺增生组织通透性的影响

目的探讨大鼠前列腺增生组织通透性的改变及超声微泡对通透性的影响。方法24只SD大鼠随机分为正常组、前列腺增生组、超声辐照微泡治疗前列腺列增生组(UM BPH组)。UM BPH组注射白蛋白微泡并对前列腺局部用UGT1025型超声基因转染仪辐照。各组电镜观察其前列腺血管及细胞膜变化、计算前列腺指数(prostaticindex,PI),并测定前列腺组织中台盼蓝含量。结果电镜观察可见UM BPH组微血管基底膜变薄,部分血管周围有红细胞漏出,前列腺上皮细胞结构疏松,线粒体内可见空化;BPH组前列腺指数为2.88±0.03,UM BPH组为2.88±0.02,较正常组1.57±0.04均明显增加(P<0.05);前列腺组织中台盼蓝的含量:UM BPH组为(8.54±0.23)×10-9g/L,较BPH组[(2.54±0.11)×10-9g/L]及NP组[(4.20±0.22)×10-9g/L]明显增加(P<0.05)。结论在大鼠BPH时,组织通透性有所下降,超声辐照白蛋白微泡可以增加前列腺组织的通透性。     

低频超声联合SonoVue微泡促进裸鼠基因体内转染的可行性

目的 探讨利用低频超声联合SonoVue微泡造影剂促进基因转染人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤的可行性。方法 采用人前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后随机分为空白组（仅注射生理盐水）、单纯质粒组（注射生理盐水和质粒混悬液）、低频超声组（注射生理盐水和质粒混悬液后超声辐照）和低频超声+微泡组（注射超声微泡造影剂和质粒混悬液后超声辐照）。超声辐照条件：功率3 W/cm²,占空比5：5,频率80 kHz,辐照10 min。基因转染3天后在激光共聚焦显微镜下观察各组绿色荧光蛋白表达情况,并分析其平均荧光强度;同时行常规病理检查,观察低频超声联合微泡辐照对组织的损伤程度。结果 4组中,仅低频超声+微泡组可见明显绿色荧光,与其他各组差异均有统计学意义（P均<0.05）;空白组、单纯质粒组和低频超声组均未见明显绿色荧光。各组均未见明显组织损伤。结论 SonoVue微泡造影剂在低频超声辐照下能够安全有效地促进pEGFP基因转染进入人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤组织内。     

诊断超声联合微泡辐照卡铂缓释微球对VX2皮下移植瘤疗效的初步探讨

目的探讨诊断超声联合微泡辐照瘤内卡铂缓释微球是否能提高局部化疗疗效。方法 30只VX2皮下移植瘤兔以随机方式分为3组:A组,正常对照,不做处理;B组,瘤内注射卡铂缓释微球;C组,瘤内注射卡铂缓释微球后,静脉注射微泡造影剂,使用诊断超声辐照肿瘤。实验后12h各组随机选取5只瘤兔取完整肿瘤行HE及Tunel染色,以病理情况及肿瘤凋亡指数行定性、定量分析,探讨不同方式对肿瘤细胞凋亡的影响。其余瘤兔于实验后第7、14天测量瘤体大小,以体积变化情况行定量分析,观察不同方式肿瘤局部化疗后期疗效。结果 C组肿瘤凋亡指数(14.9±1.59)%高于B组(10.8±2.13)%、A组(3.0±0.63)%,与B组比较差异有统计学意义(P0.05);病理检查见呈片状坏死,损伤程度最重。C组肿瘤大小在第7天(525.22±57.89)mm~3,第14天(930.87±102.34)mm~3增长程度较A、B组低,与B组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论诊断超声联合微泡辐照卡铂缓释微球对VX2肿瘤疗效有一定促进作用。     

诊断超声联合微泡增强骨髓间充质干细胞归巢兔缺血心肌的研究

目的 探讨诊断超声联合微泡对经静脉移植兔骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)归巢缺血心肌的靶向能力.方法 采用密度梯度离心与贴壁法培养兔BM-MSCs,用DAPI标记细胞.完全结扎冠状动脉左前降支(LAD)法建立兔心肌梗死模型.将分离培养的BM-MSCs经静脉途径移植人心肌梗死兔体内.根据移植时是否介入超声与微泡分成单纯静脉移植MSCs组与超声辐照+微泡+MSCs组,移植后48 h荧光显微镜下观察缺血梗死区域及其周围的荧光标记阳性细胞数目,并对两组进行计数和统计学分析.HE染色观察局部缺血心肌的病理学改变.透射电镜观察心肌血管及内皮细胞情况.结果 荧光显微镜下显示超声辐照+微泡+细胞组较单纯静脉细胞移植组阳性细胞分布更为密集.单纯静脉细胞移植组与超声辐照+微泡+细胞组阳性细胞个数分别为(146.8±18.78)个和(213.2±26.5)个,差异有统计学意义(P<0.01).HE染色结果显示超声+微泡+细胞组缺血心肌及周围区心肌组织间隙可见红细胞成分漏出,而单纯细胞组无此发现.透射电镜显示在超声联合微泡的介导下,心肌血管内皮细胞间隔增大,血浆成分渗出.结论 超声联合微泡经静脉移植MSCs后能增加MSCs在缺血及周围区心肌的聚集与归巢,增强其靶向性.     

经多功能心腔内超声导管超声辐照破坏微泡对犬心肌组织的生物学效应

目的观察经多功能心腔内超声(ICE)导管超声辐照破坏微泡对动物心肌产生的生物学效应,探索基因治疗缺血性心脏病的新方法。方法 15只犬随机分为US+MB组、US组、对照组3组,每组5只。以介入法将多功能ICE导管送入犬心室。对US+MB在ICE监控下向左心室游离壁注射0.5ml微泡,并以1 W/cm2的声能对注射部位辐照1min;对US组以相同条件行左心室壁辐照,但不注射微泡;对照组在插入导管后不进行任何处理。术后3天处死动物,观察心肌组织大体改变,并行HE染色观察细微结构变化。结果ICE能对注射针的进针深度、微泡注射及辐照过程进行实时监控。观察期内所有动物均正常存活。US+MB组心肌辐照部位出现充血、心肌细胞间隙增宽、少量炎性细胞浸润等改变,US组心肌组织仅出现轻微充血;对照组动物心肌无异常变化。结论经ICE导管超声辐照破坏微泡能在靶区域产生相应生物学效应,内置ICE可对心肌内微泡注射、超声辐照过程进行实时监控。此款新型多功能导管可能为基因治疗缺血性心脏病提供新的、更加安全有效的途径。     

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠，取3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂，观察对心肌组织显微结构的影响。将另15只急性心肌梗死3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式，将pcDzVEGFm基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影(约6min)；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD。VEGF。基因的造影剂；第三组为对照。2周后，取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色，观察心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血，产生大量空泡，并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应，其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

低能量脉冲式超声联合微泡对兔VX2肿瘤微循环的阻断作用

目的探讨低能量脉冲式超声联合微泡对兔VX2肿瘤微循环的阻断作用及其病理机制。方法将36只皮下VX2荷瘤兔随机平均分成3组:超声微泡组注入0.2ml/kg体质量微泡5ml,并辅以超声辐照10min;单纯超声组注入生理盐水5ml,辐照10min;单纯微泡组仅注入0.2ml/kg体质量微泡5ml,不进行超声辐照。CEUS观察各组治疗前、治疗后0、30min、60min时血流灌注情况,比较各时间点的灌注面积。治疗后即刻随机选取各组6只荷瘤兔处死,完整切取肿瘤,行病理学检查。结果超声微泡组治疗后即刻肿瘤血流灌注完全消失,灌注面积为0,但30min及60min后灌注有所恢复,各时间点治疗后灌注面积显著大于治疗前(均P<0.05);大体病理检查见肿瘤微血管扩张、管壁结构崩解,弥漫性充血、出血和肿瘤组织水肿,局部血肿,形成血栓等。单纯超声组及单纯微泡组治疗前、后造影剂灌注面积无差异,肿瘤内部未见出血、水肿等。结论低能量超声联合微泡能够阻断肿瘤微循环,可能是由于空化效应导致血管壁损伤,组织水肿对局部肿瘤血液循环产生阻力,从而阻断肿瘤血液循环。     

超声微泡介导自杀基因对卵巢癌细胞的抗瘤效应

目的探讨超声微泡介导自杀基因对卵巢癌SKOV3细胞抗瘤效应的机制。方法采用最适超声转染参数,以超声介导微泡转染pORF-HSV1TK质粒,将SKOV3细胞分成6组:阴性对照组(C组)、超声辐照组(U组)、脂质体组(L组,阳性对照组)、脂质体+超声辐照组(L+U组)、脂质体+微泡+超声辐照组(L+M+U组)和微泡+超声辐照组(M+U组)。以RT-PCR检测HSV1TK的表达,以MTT测定各组细胞增殖抑制率。光镜下观察各组转染细胞数量、形态变化,以流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率及细胞周期。结果L+M+U组HSV1TK基因表达最强,细胞增殖抑制率明显高于其他组(P均<0.05),且光镜下细胞数量减少最多,形态明显异常;其细胞凋亡率为(49.13±0.82)%,且大多数细胞周期被阻断于G1期(P<0.05)。结论超声介导微泡能增强HSV1TK/GCV系统抑制SKOV3增殖和诱导SKOV3凋亡的作用,且将SKOV3细胞周期阻断在G1期,从而发挥抗瘤效应。     

超声微泡介导EGFP质粒转染视网膜母细胞瘤细胞与传统转染方法效率对比

目的探讨超声微泡造影剂在一定能量的超声波辐照下，介导EGFP质粒转染视网膜母细胞瘤（RB）细胞的效率及可行性。 方法将RB细胞分为6组，1组以一定能量的超声波辐照，2组加适当剂量的微泡造影剂，3组加入质粒，4组加入质粒与微泡，5组加入质粒、微泡，并用一定能量的超声辐照，6组予脂质体与质粒。转染24-48h后观察EGFP表达，并用RT—PCR进行检测。同时对1、2组予以染色。 结果超声微泡介导的DNA质粒对RB细胞的转染效率，与脂质体介导的质粒转染效率相似，明显高于其他实验组。一定能量和时间的超声波辐照，及适当浓度的微泡，对RB细胞的活性无明显抑制。 结论利用低频率和一定能量的超声击碎携带EGFP质粒的超声微泡造影剂，能够有效地提高DNA质粒在RB细胞中的转染效率。     

超声介导重组腺相关病毒载体心肌靶向转染对大鼠左室心功能的影响

目的 探讨超声造影剂介导下重组腺相关病毒载体(rAAV2-GFP)心肌靶向转染前后大鼠左室心肌功能的变化.方法 健康成年SD大鼠20只,随机分为对照组与实验组:对照组尾静脉注射超声造影剂+超声照射;实验组注射携带rAAV2-GFP造影剂+超声照射.分别于实验前和实验后14 d利用斑点追踪技术测量大鼠周向应变、收缩期应变率,舒张期应变率、扭转角度,并同时测量大鼠射血分数、短轴缩短率、舒张末期容积及收缩末期容积等左心功能指标.行心肌组织冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP的表达情况.结果 超声介导重组腺相关病毒心肌靶向转染前后大鼠左室心肌功能指标及相对于心底水平的扭转角度及达峰时间的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 超声及超声造影剂介导重组腺相关病毒载体靶向转染心肌组织对大鼠左室心肌功能无影响.