肝癌染色体17p13.3区的杂合性缺失分析及缺失区连续克隆群？…

目的 检测原发性肝癌在染色体１７ｐ１３．３区的杂合性缺失状况,确定其共同缺失范围和最小热点缺失范围,并获得缺失范围内基因组克隆和构建连续克隆群。方法 应用Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析ＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ,ＶＮＴＲ）和ＲＦＬＰ标志在肝癌中杂合性缺失（ＬＯＨ）状况。应用ＰＣＲ扩增微卫星标志,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析各个微卫星标志的ＬＯＨ状况。以微卫星标     

染色体17p13.3肿瘤杂合性缺失区域内外显子的分离

目的 在染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内进行表达的分离。方法 采用外显子搏获法对位于１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内的ＢＡＣ基因组克隆进行外显子的分离。结果 在获得的克隆中,４个克隆为已知基因的外显子,另４个史隆属于３个上显子（２个克隆中的外显子片段序列一致）。结论 在染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内获得了一些表达序列。     

乳腺癌组织染色体17p13的杂合性缺失分析

目的检测乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３区各位点的杂合性缺失。用方法通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析ＶＮＴＲ探针ＹＮＺ２２的杂合性缺失。用ＰＣＲ扩增微卫星重复序列后，同位素标记、变性胶分离分析微卫星ｍａｒｋｅｒ的杂合性缺失。结果１１例乳腺癌组织中有３例在染色体１７ｐ１３．３区有杂合性缺失，占２７％。缺失的上限为紧邻端粒的Ｄ１７Ｓ１８６６位点，缺失至Ｄ１７Ｓ１８４０位点，缺失的下限尚待确定。位于染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点有１例变化产生新长度的微卫星重复序列，４例存在杂合性缺失，其中２例在１７ｐ１３．３区也有杂合性缺失。结论乳腺癌组织在染色体１７ｐ１３．３区有较高的杂合性缺失。预示该区可能存在有关的抑癌基因。１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点也有变化，说明ｐ５３基因及产物在乳腺癌的癌变过程中也起着一定的作用     

肝癌中具有高突变率位于染色体17p13.3区的新抑癌基因

目的　以往研究表明肝癌中染色体 1 7p1 3 .3区有高频率的杂合性缺失。其最小杂合性缺失范围已被确定在D1 7S643至D1 7S1 574位点间 ,而且其中的D1 7S92 6位点有最高的杂合性缺失率。含有该位点的基因组克隆P579已被测序分析 ,在P579范围共有 1 3个新基因。这里报告其中的一个新基因 (命名为肝癌抑癌基因 1 ,HCCS1 )的克隆和特性研究结果。方法　利用直接杂交筛选方法获得基因组克隆P579中的基因克隆。根据HCCS1基因克隆的cDNA序列与基因组序列进行比较确定基因的外显子与内含子。应用RT PCR扩增组织中的HCCS1基因 ,序列测定检查突变。应用免疫组化检测HCCS1在组织中的表达。应用克隆形成试验和裸鼠成瘤试验检测HCCS1的生物学功能。结果　HCCS1有 1 8个外显子 ,cDNA全长约2 .0kb ,蛋白产物定位于线粒体。HCCS1在肝癌组织中有高频率的突变 ,免疫组化检测表明HCCS1在癌旁组织的表达明显高于癌组织。HCCS1转染肝癌细胞明显抑制其克隆的形成及在裸鼠体内的成瘤。结论　上述发现表明HCCS1具有肝癌抑癌基因的作用     

11株肝癌细胞系染色体17P13.3和p53基因状况的研究

目的了解１１株肝癌细胞系染色体１７ｐ１３．３区基因组结构和ｐ５３基因状况，为今后更好使用这些细胞株提供信息。方法应用染色体微卫星标志ＰＣＲ扩增，同位素标记，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析以及染色体可变数目重复排列序列ＶＮＴＲ标志ＹＮＺ２２的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测各细胞株染色体１７ｐ１３．３区基因组结构和ｐ５３基因状况。结果通过上述检测，获得了１１株肝癌细胞在染色体１７ｐ１３．３区８个位点的结构状况。发现来源于我国上海地区构建的６株细胞系在染色体１７ｐ１３．３区各个位点的结构状况基本一致。ＣＣＬ细胞株在该区的两个位点呈纯合子缺失。上述６株细胞系在染色体１７ｐ１３．１区的ＴＰ５３位点呈杂合子，且微卫星重复序列的大小一致，ＣＣＬ及Ｈｅｐ３Ｂ细胞系在ｐ５３基因外显子５，６，７，８基因组片段有缺失，其它细胞系在该区有正常大小的基因组片段。结论本研究提供了１１株肝癌细胞系在染色体１７ｐ１３．３区和ｐ５３基因的结构状况信息     

肝癌1号染色体等位基因杂合性缺失及临床意义

研究肝癌１号染色体等痊基因杂合性缺失（Ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｌｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ,ＬＯＨ）及临床意义。方法采用ＰＣＲ及微卫星多态技术,对６５例肝癌１号染色体上２８个微卫生标志位点杂合性缺失进行检测。结果：６５例肝癌中６３例为杂合子,５７例至少在１个微卫星标志位点上发生ＬＯＨ,１号染色体ＬＯＨ率为９１％（５７／６３）,１ｐ７６％（４８／６３）,１ｑ８８％（５２／５９）;１ｐ３６．３２－ｐ３６．３３     

肝外胆管癌染色体3p21.3区段微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的:研究肝外胆管癌染色体3p21.3区段的微卫星不稳定性(MSI)及杂合性缺失(LOH),探讨染色体3p21.3区段遗传不稳定性与肝外胆管癌的发生发展的关系,定位该区段上肝外胆管癌相关肿瘤基因。方法:用PCR-SSCP方法检测24例肝外胆管癌染色体3p21.3区段上D3S1568,D3S1621,D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率,分析其与临床病理因素之间的关系。结果:24例肝外胆管癌组织中,四个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7.23%和15.63%。其中D3S1621位点的LOH最高(45.83%,11/24),并与TNM分期、是否伴有局部/淋巴结转移相关(p<0.05)。结论:染色体3p21.3区段D3S1621位点高频率杂合性缺失,提示3p21.3区段可能定位有肝外胆管癌的候选抑癌基因,并在肝外胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。     

显微切割鼻咽癌组织16号染色体杂合性缺失的研究

目的：研究鼻咽癌中１６号染色体的缺失情况。方法：采用显微切割的方法获取肿瘤组织,然后用ＰＣＲ的方法以１６号染色体上的８对引物对３８例鼻咽癌进行分析。结果：３８例鼻咽癌组织中所有标本至少有一个位点出现有杂合笥缺失,其中Ｄ１６Ｓ５３３出现杂合性缺失的频率最高,占８６．１％（３１／３３）,此外,杂合性缺失频率超过５０％的有引物Ｄ１６Ｓ３９８、Ｄ１６Ｓ３００和Ｄ１６Ｓ４２０。分别占７８．８％（２６／３３）     

鼻咽癌全基因组杂合性缺失分析

目的：分析鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPS)全基因组染色体杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH),定位NPC发生高频率LOH的区域,为定位NPC相关基因提供分子遗传学依据。方法：用PCR微卫星多态性分析（335个位点）技术检测98例NPC肿瘤基因组DNA等位基因缺失。结果：在22对染色体中,19对染色体在所选取位点中有至少1个位点LOH频率≥30%,3对染色体（15号,20号和22号）无LOH频率大于30%的位点;在335个位点中,4个位点LOH频率≥60%,其中3个在3号染色体,1个在9号染色体;5个位点LOH频率介于50%-59%,其中3个在3号染色体,5号和11号染色体各1个位点;22个位点LOH频率介于40%-49%,52个位点LOH频率介于30%-39%,轼52个位点LOH频率低于30%,提示为背景缺失;LOH频率≥30%的位点主要集中于12个染色体臂,分布于：1p36-34,3p24-26,3p14-21,3q25-27,4q35-31,5q15-21和5q32-33,8p22-23,9p21-23和9q33-34,11p12-14,11q13-23,13q13-14和13q31-32,14q11-13,14q23-24,14q32。本研究新报道在染色体区带1p,5q和19q等发生高频率LOH,LOH精细图谱提示这些区域内可能存在与NPC相关的TSG。结论：NPC肿瘤细胞在多染色体区带发生高频率LOH是常见的分子事件,提示在这些缺失区,可能存在与NPC发生,发展过程中起重要作用的肿瘤抑制基因。     

The minimum LOH region defined on chromosome 17p13.3 in human hepatocellular carcinoma with gene content analysis

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common human cancers in Asia. Previous studies have shown that in addition to aberrations of the p53 gene on chromosome 17p13.1, other gene(s) on chromosome 17p13.3 may also play a role in HCC. To detect the status of loss of heterozygosity (LOH) in HCC and to determine the minimum region of LOH on 17p13.3, we analyzed 22 paired HCC and non-cancerous liver samples with 14 polymorphic markers plus TP53 (p53 gene) as a comparison. The data revealed a high level of LOH (>68%) in a minimum region between D17S1866 and D17S1574, spanning over a 1.5 Mb region. Genomic library screening using markers in the region has resulted in the isolation of a cluster of BAC/PAC clones. We created a physical map in this region. Using large-scale genome sequencing, gene annotation, cDNA screening, and exon trapping, we identified 17 known genes and 13 novel genes in the minimum region. The function of these genes was analyzed and the possibility of several putative tumor suppressor genes was discussed.     

肝细胞癌17pl3.3位点杂合缺失及其临床意义

目的 探讨染色体17pl3.3 位点杂合缺失与肝细胞癌临床病理参数的关系。方法 采用PCR 扩增肝细胞癌组织和癌旁正常肝组织17pl3.3 位点的3个微卫星标志,即D175643, D175926 和D1751574,并比较和确定杂合子等位基因缺失。结果 3个微卫星标志总的杂合率为89.8 % (79/88) ,杂合缺失率为41.7 % (33/79) ;杂合缺失与肝细胞癌门静脉癌栓和肝内转移明显相关（P＜0.01）。结论 染色体17pl3.3 位点杂合缺失是肝细胞癌最常见的遗传学事件之一,该位点的缺失与肝癌门静脉癌栓和肝内转移密切相关。     

鼻咽癌染色体3p21-26的等位基因杂合性丢失研究

目的细胞遗传学研究表明,３号染色体缺失是鼻咽癌常见的染色体异常之一。分子生物学研究表明,染色体３ｐ在鼻咽癌中出现高频率的等位基因杂合性丢失（ＬＯＨ）。本研究将进一步确定鼻咽癌３ｐ等位基因杂合性丢失的频率及范围。方法应用位于３ｐ２１２６区域１６个微卫星多态性位点,对２４例低分化鼻咽癌患者进行了ＬＯＨ分析。结果２４例患者中有１６例存在杂合性丢失（６６．７％）。丢失频率最高的两个位点是Ｄ３Ｓ１５６０（５０％,１１／２１）和Ｄ３Ｓ１６２０（５０％,９／１８）。在具有丢失的１６例患者中,８例显示为１个连续的多个相邻位点的杂合性丢失区域,５例患者存在２个或２个以上的杂合性丢失区。病例１,３,４,７,８,１０,１６,１７,１８,１９和２２在Ｄ３Ｓ１５９７和Ｄ３Ｓ１２９７之间,表现为一个不同大小的杂合性丢失区。结论最小共同丢失区位于Ｄ３Ｓ１５６０Ｄ３Ｓ１６２０（３ｐ２５．３２６．２）之间,提示该区域有一个尚未克隆的、与晚期鼻咽癌明显相关的抑癌基因。     

An astroblastoma case associated with loss of heterozygosity on chromosome 9p

The tumorigenesis of astroblastomas has not yet been elucidated on the basis of histopathological studies, and genetic studies may be useful for obtaining additional information regarding the tumorigenesis of these tumors. Here, we report an astroblastoma case in which a genetic analysis was performed. A 16-year-old female with a progressive headache was found to have a demarcated cystic tumor with a mural nodule in the right parietal lobe. Total removal of the tumor was achieved and a histological examination verified that the tumor was an astroblastoma. A genetic analysis using microsatellite markers revealed loss of heterozygosity (LOH) on chromosome 9p. The postoperative course was uneventful and, to date, she has been followed up for 2 years with no signs of recurrence. This is the first reported case of an astroblastoma in which LOH was detected on 9p. Based on this result, the tumorigenesis of astroblastomas is discussed.     

鼻咽癌染色体11q13等位基因杂合性缺失的研究

目的：对鼻咽癌中染色体11q13上的4个位点进行微卫星多态性分析,明确这些位点染色体位基因杂合性丢失的情况。方法：采用显微切割的方法获取较纯的肿瘤组织,然后用PCR的方法以PYGM、D11S4946、D11S449和INT－2为引物,对38例鼻咽癌进行微卫生序列分析。结果38例鼻咽癌组织中,至少有一个位点出现杂合性缺失者36例,占94．7％。其中D11S4946杂合性缺失的频率最高,占78．8％（26／33）,其余的引物分别为：INT－2占51．5％（17／33）,PYGM占45．5％（15／33）,D11S449占45．7％（16／35）。结论鼻咽癌染色体11q13区发生高频率杂合性缺失,提示缺失区域可能存在与鼻咽癌发生有关的抑癌基因。     

LOSS OF HETEROZYGOSITY ON CHROMOSOME 17p13.3 IN OVARIAN CANCER AND CERVICAL CANCER

ＣａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｅｐｓｉｎｗｈｉｃｈａｃｃｕｍｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＤＮＡａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｃｕｒｓａｎｄｃｒｉｔｉｃａｌｅｖｅｎｔｓ，ｉｎｖｏｌｖｉ...     

卵巢癌及宫颈癌中17p13.3的杂合性丢失

目的探讨染色体１７ｐ１３．３的杂合性丢失（ＬＯＨ）与卵巢癌、宫颈癌发生及发展之间的相关性。方法采用ＰＹＮＺ．２２探针做Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术,检测２４例卵巢癌、９例宫颈癌及１３例妇科非癌患者手术切除组织染色体１７ｐ１３．３的ＬＯＨ。结果１２例卵巢癌（包括１例交界性粘液性囊腺癌）和４例宫颈癌发生１７ｐ１３．３的ＬＯＨ,丢失频率分别为５０．０％和４４．４％。１３例非癌组织中,仅１例（７．７％）发生丢失,该例经病理证实为宫颈上皮内瘤变Ⅲ级,属癌前期病变（Ｐ＜０．０１）。结论染色体１７ｐ１３．３的ＬＯＨ可能与宫颈癌和卵巢癌的发生相关,检测１７ｐ１３．３的杂合性丢失将有助于深入了解卵巢癌和宫颈癌发生及发展的分子基础。     

原发性肝细胞癌多染色体杂合性丢失研究

研究原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）５对染色体３８个位点等位基因杂合性丢失（ＬＯＨ）,ＬＯＨ与肝癌的临床病理改变和肝炎病毒的关系。方法：用ＰＣＲ微卫星多态性分析检测肝癌ＬＯＨ。结果发生高频率ＬＯＨ的位点有染色体１ｐ的Ｄ１Ｓ１８６（这,４８．１％）和Ｄ１Ｓ２４３（１ｐ３６．３,５１．６％）;染色体９ｎ２４的Ｄ９Ｓ５４（６１．８％）,９这的Ｄ９Ｓ１７４７（５２．％）和ＤＤ９Ｓ１７５２（５１．８％）ＷＵＧ ＨＫ