金丝桃素对培养的人视网膜色素上皮细胞钙离子内流的抑制

目的研究蛋白激酶C (PKC) 抑制剂金丝桃素对视网膜色素上皮细胞(RPE cells)钙离子信号共聚成像的影响. 方法使用钙荧光指示剂fluo-3 AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM),分析在100 nmol*L-1 佛波酯(PMA)和(或)5个浓度的金丝桃素(1, 2, 3, 4和5 μmol*L-1)刺激时培养的人RPE细胞的钙离子信号的变化. 结果 RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强. 只用PMA或金丝桃素刺激时,可以观察到荧光强度迅速下降,并且5个浓度金丝桃素之间的下降曲线无明显差异. 用PMA预先处理细胞24 h后,再给予金丝桃素刺激发现荧光强度并没有进一步下降. 结论 fluo-3 AM 是人RPE细胞钙离子良好的指示剂,金丝桃素能强力抑制钙离子内流,它作为治疗增殖性玻璃体视网膜病变的潜在药物可能是因为能抑制PKC活性和钙离子内流.     

大鼠肝癌细胞系H4-ⅡE钙内流的检测方法

目的利用大鼠肝癌细胞系H4-ⅡE建立一种适用于贴壁生长的细胞检测细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的方法.原理用荧光染料fluo-3在细胞内能与游离Ca2+结合.在一定波长的光激发下,可发出荧光,根据荧光的强度来检测细胞内游离Ca2+浓度及钙内流的方法.方法以H4-ⅡE细胞系为材料,通过Ca2+回加技术、荧光显微镜技术和UMANS计算机软件或Axon计算机成像系统来记录图像和处理数据.结果可检测、定量细胞内游离Ca2+的浓度,并可用以研究细胞钙信号的传递和传导机制.结论该方法较为简便、易行,相对费用较低,适用于国内实验室.     

双光子显微镜用于在体监测小鼠视交叉上核Ca2+动态变化的方法学研究

目的 通过颅底暴露手术联合双光子荧光成像技术实现在体记录视交叉上核(SCN)神经元钙离子活动信号并研究其活动规律的新型方法.方法 对麻醉小鼠实行颅底暴露手术,通过双光子荧光显微镜对已注射钙指示剂的活体小鼠SCN核团钙信号进行实时动态测定.结果 成功建立一套小鼠颅底暴露SCN核团手术方法,术后应用双光子显微镜清晰地检测到SCN核团钙离子荧光信号,也能够实现稳定的在体细胞钙离子成像,并发现不同自发反应细胞中钙离子活动规律差异.结论 通过颅底暴露手术,利用双光子显微镜成功实现了实时监测SCN区域神经元钙离子信号.     

基于不同信号通路研究自噬在心脏疾病中的作用及进展

细胞自噬是将生命体细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体内进行消化降解的过程,对维持生命体的内环境稳定具有重要意义.自噬的过程又受到一系列复杂的信号转导通路的调控,其中信号通路主要包括mTOR、PI3K/Akt、JAK/STAT、AMPK等,同时参与多种疾病的病理过程,与人类的心血管疾病有着密切的联系.近年来,细胞自噬及其信号通路的调控机制越来越成为人们关注的热点,研究其与心脏疾病的关系,以期有助于为临床治疗心脏疾病提供新的思路.     

自噬及其在疾病中的研究进展

自噬广泛存在于真核生物,是依赖胞浆溶酶体降解和吸收细胞中衰老细胞器或生物大分子的过程,是维持细胞内稳态的重要途径。细胞自噬对于各种疾病的病理生理机制存在重要的意义,目前研究结果表明,肺、肝、肾、心肌等动物纤维化疾病病理发生大多数都与细胞自噬存在一定的相关性。本文分析总结了自噬信号传导机制及细胞自噬在纤维化疾病中的可能发生机制。     

外泌体调控自噬对心血管疾病影响的研究进展

外泌体作为细胞间生物信息的载体,在细胞间信号传递中发挥了重要作用,并广泛参与细胞自噬、细胞凋亡、炎症反应、免疫调节等多种病理生理过程。外泌体通过其传递的内容物影响目标细胞的自噬水平。自噬是一种细胞分解代谢过程,可通过消除错误折叠的蛋白质和受损的细胞器来维持细胞内稳态,目前的研究表明自噬与心脏的衰老和萎缩密切相关。因此,调节自噬可能是未来心血管疾病治疗的新靶点。通过综述外泌体的生物发生和自噬的意义以及外泌体和自噬之间的关系,总结介绍了外泌体调控自噬对心血管疾病的影响作用及其研究的进展情况。     

线粒体在细胞凋亡中的介导作用

细胞凋亡(Apoptosis),又称细胞程序性死亡(Programmed cell death,PCD),是指机体在生理或病理条件下,启动自身内部机制,经过多途径的信号传递,结束其自身生命的过程.     

巨噬细胞钙敏感受体通过TRPC6/Ca2+信号促进炎症反应

目的 观察钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)对RAW264.7细胞炎症反应的影响,并探讨其分子机制.方法 采用Fura-2荧光探针对RAW264.7细胞质中Ca2+进行荧光染色,使用单细胞荧光钙离子检测仪检测CaSR对巨噬细胞内Ca2+信号的影响;采用脂多糖(lipopolysac...     

内质网应激线粒体功能紊乱与非酒精性脂肪性肝病

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是细胞内重要的细胞器,也是重要的钙离子贮存库.它调节细胞内蛋白质的合成后折叠与聚集、细胞对应激的反应以及细胞内钙离子的水平,还参与脂质代谢和类固醇激素的合成.     

姜黄素干预人视网膜色素上皮细胞钙离子信号的改变与整合素基因表达的探讨分析

目的 探讨视网膜色素上皮细胞(RPE)的钙离子与整合素基因表达的相关性.方法 人RPE细胞经分离培养,免疫细胞化学鉴定后,传至第4~6代;对各组RPE细胞进行5 μmol/L Fluo-3负载30 min,姜黄素分别以0.9375、1.8750、3.7500、7.5000、15.0000 mg/L浓度干预人RPE细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定各组RPE细胞内早期钙离子的变化.利用MTT法测定不同浓度的姜黄素干预人RPE细胞48 h后的IC50,并观察相应的形态学变化.用Real-Time PCR测定姜黄素干预后的整合素基因的表达.结果 LSCM检测结果:空白对照组、0.9375、1.8750、3.7500、7.5000、15.0000 mg/L姜黄素组RPE细胞内均有钙荧光.空白对照组钙荧光强度明显低于姜黄素各组,且差异有统计学意义(P＜0.05),对照组基因表达量与整合素α4和整合素β5呈正效应,与整合素α3和整合素α5呈负效应.结论 体外培养的人RPE细胞经不同浓度姜黄素干预后,较空白对照组早期细胞内钙离子荧光强度明显增加,且有显著性差异.当细胞受到姜黄素外界信号刺激时,细胞内钙离子浓度能迅速增加,继而调节整合素的活性,继而引起细胞的生物学效应.因此,姜黄素通过调节细胞内的信号传导,可能成为治疗人眼疾,如增殖性玻璃体视网膜病变的一种有效物质.     

ATP2A2通过钙离子浓度变化参与肿瘤发生机制的研究进展

ATP2A2是ATP2As基因家族的成员,编码肌浆(内质)网钙转运ATP酶中的一种,即SERCA2b。由于该酶的主要功能为将钙离子从胞质转运至肌浆(内质)网内,因而它在控制肿瘤生长、分化、血管生成、转移和凋亡的钙离子相关信号通路中发挥着重要作用。近期研究已在一些类型的肿瘤中明确了ATP2A2表达水平的具体变化,在探究ATP2A2是如何参与肿瘤形成以及它是否可作为肿瘤标记物和治疗靶点方面迈出了第一步。本文对ATP2A2参与肿瘤发生的可能机制的相关研究进行了总结,认为其表达异常可引起细胞胞质内和内质网间钙离子稳态的破坏,从而造成细胞的恶性增殖并促进肿瘤的迁移和血管形成等。本文还对该基因的研究和应用前景进行了展望。     

钙池操纵性钙通道与细胞增殖关系的研究进展

Ca2+是维持细胞正常生理功能的重要离子,参与细胞信息传递并调控一系列生命过程。钙池操纵性钙通道(SOCC)是细胞膜钙通道的一种。许多细胞内Ca2+主要通过SOCC机制影响正常细胞和肿瘤细胞的生长增殖。不同类型的细胞,SOCC通道相关蛋白的表达量及其相互作用存在差异,从而影响细胞内Ca2+浓度,造成细胞的增殖、凋亡和迁移等生物学功能的改变。     

铅对骨骼的损伤机制及其生物学标志物

环境中各种铅的化合物被机体吸收后,可以在细胞和分子水平影响骨骼系统的功能,主要有调节血液中激素的水平,干扰骨细胞对激素的调节能力;直接影响成骨细胞的功能;通过氧化应激损伤骨骼系统中的细胞或大分子活性蛋白;影响钙信使系统,导致骨细胞生理调节功能损伤。因此,骨骼中铅的水平较血液中铅的水平更能反映慢性铅中毒对机体的损害程度。     

铅对神经发育毒性的研究进展

铅能够损害神经系统的多种功能,婴幼儿是其易感人群,甚至脐血铅水平与婴幼儿神经系统发育就密切相关。铅对中枢神经系统发育的毒性主要表现在损伤神经元细胞、诱导脑细胞凋亡,铅的过氧化作用,铅与钙、锌竞争受体亦影响机体正常的生理功能,影响信息传递的形成和发育,从而造成儿童智力、记忆力、神经、行为障碍等。     

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca2+]i的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法培养人肺腺癌Anip973细胞,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察As2O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响.结果①LSCM显示As2O3 作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.001).②As2O3 对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内[Ca2+]i升高作用具有剂量依赖性.③As2O3 能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖.结论 As2O3 可能是通过升高人肺腺癌细胞内[Ca2+]i 来启动细胞凋亡机制,诱导肺癌细胞凋亡,从而抑制其增殖.     

次乌头碱对心肌细胞Ca2+调控蛋白mRNA表达的影响

目的 考察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞L-钙通道、钙调蛋白(CaM)、肌质网雷诺定受体(RyR2)mRNA表达的影响.方法 体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定L-钙通道α1C亚基、CaM及RyR2 mRNA的表达.结果 HA作用15 min时,60、120 μΜ/L能提高心肌细胞膜L-钙α1C ...     

Research letter: Adaptation of Inuit children to a low-calcium diet

FOR INUIT CHILDREN, A TRADITIONAL DIET contains 20 mg of elemental calcium per day, well below the recommended daily intake. To identify alterations in intestinal or renal calcium absorption, 10 healthy Inuit children (5 to 17 years of age) were given a standardized calcium load (Pak test). Five had hypercalciuria (hyperabsorptive in 3 and renal leak in 2), a frequency markedly different from that for white children (p < 0.004) and not explained by calcitropic hormone and serum calcium levels, which were normal. There was a preponderance of the bb vitamin D receptor genotype (8 of 10 subjects; p < 0.01 for comparison with white populations). Dietary calcium absorption appeared to be more efficient in these Inuit children, with an increased frequency of hypercalciuria associated with the bb genotype. This may represent a genetic adaptation to dietary constraints and may predispose to nephrolithiasis or nephrocalcinosis if standard nutritional guidelines are followed.     

Neuroprotective effects of ginsenoside Rg1 against oxygen–glucose deprivation in cultured hippocampal neurons

BackgroundGinsenoside Rg1 (Rg1) is believed to be one of the main active principles in ginseng, a traditional Chinese medicine extensively used to enhance stamina and deal with fatigue as well as physical stress. It has been reported that Rg1 performs multiple biological activities, including neuroprotective activity. In this study, we investigated the efficacy of ginsenoside Rg1 on ischemia–reperfusion injury in cultured hippocampal cells and also probed its possible mechanisms.MethodsTo establish a model of oxygen–glucose deprivation (OGD) and reperfusion, cultured hippocampal neurons were exposed to OGD for 2.5 hours, followed by a 24-hour reoxygenation. Cultured hippocampal neurons were randomly divided into control group, model group (vehicle), and ginsenoside Rg1 treatment groups (5μM, 20μM, 60μM). At 24 hours post-OGD, the intracellular free calcium concentration was detected using Furo-3/AM-loaded hippocampal neurons deprived of oxygen and glucose. Neuronal nitric oxide synthase (nNOS) activity was measured by chemical colorimetry. Cell apoptosis was evaluated by Hoechst staining, and the neuron viability was determined by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay.ResultsExcitotoxic neuronal injury of OGD was demonstrated by the increase of intracellular free calcium concentrations and elevated nNOS activity in the model group compared with the control group. The intracellular free calcium concentrations and the nNOS activity in the groups receiving intermediate and high dose of ginsenoside Rg1 were significantly lower than those of the control group (p < 0.05). In addition, intermediate and high dose of ginsenoside Rg1 administration could also attenuate the cell viability loss (p < 0.05) and cell apoptosis induced by OGD.ConclusionGinsenoside Rg1 has neuroprotective effect on ischemia–reperfusion injury in cultured hippocampal cells mediated by blocking calcium over-influx into neuronal cells and decreasing the nNOS activity after OGD exposure. We infer that ginsenoside Rg1 may serve as a potential therapeutic agent for cerebral ischemia injury.     

钠钙交换体亚型2在大鼠逼尿肌细胞中的表达与功能

目的 检测大鼠逼尿肌细胞是否表达钠钙交换体亚型2(NCX2),并测试其功能.方法 10只大鼠(7只雌性,3只雄性)为实验对象,取膀胱组织为实验组,大脑组织为对照组.首先利用急性酶分离技术,制备和培养大鼠逼尿肌细胞,再采用反转录-聚合酶链式反应和免疫印迹技术,检测大鼠膀胱组织中是否表达NCX2基因及蛋白;免疫荧光技术进一步明确NCX2与逼尿肌细胞的关系;膜片钳技术测试逼尿肌细胞是否存在NCX2电流.结果 首先制备了光镜下以梭形为主,免疫组化染色α-actin呈阳性的逼尿肌细胞;利用逆转录-聚合酶链式反应,在大鼠大脑组织、膀胱组织中分别发现NCX2 mRNA表达;免疫印迹技术在上述组织中检测NCX2的蛋白相对表达量,差异均未见统计学意义;免疫荧光双抗进一步证实NCX2蛋白与逼尿肌细胞共表达;膜片钳检测到逼尿肌细胞上的NCX2电流,电流密度为(0.79±0.45) pA/pF.结论 发现NCX2表达于大鼠逼尿肌细胞,电生理证实NCX2具有维持逼尿肌细胞内钙离子平衡的能力,其生理作用需要进一步的探索.     

高糖对视网膜Müller细胞碱性成纤维细胞生长因子表达及钙离子通道的影响

目的：观察在高浓度葡萄糖条件下体外培养兔视网膜Müller细胞碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）的表达及其钙（Ca2+）通道的变化。方法：采用免疫细胞化学及透射电镜方法鉴定体外培养的兔视网膜Müller细胞;应用免疫细胞化学方法定性观察高糖条件下视网膜Müller细胞bFGF表达的变化;利用膜片钳技术观察高糖条件下Müller细胞Ca²⁺通道的变化。结果：高糖可以刺激视网膜Müller细胞表达bFGF,对Ca²⁺通道无明显影响。 结论：高糖刺激Müller细胞bFGF的表达,而发挥促血管生成的作用,在此过程中Ca²⁺通道无明显变化。