白三烯D4在促进培养的人气管 平滑肌细胞增殖中的作用

目的和方法:研究白三烯D₄(LTD₄)是否剌激培养的人气管平滑肌细胞(ASMC)增殖。将分离的人ASMC进行传代培养,在培养基中加入各种浓度的LTD₄,计数细胞并测定 [³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入量和三磷酸肌醇(IP₃)累积量。结果: LTD₄在一定范围内(0.1 nmoL·L^-1~10 nmoL·L^-1)以浓度依赖的方式增加人ASMC(P＜0.01)。LTD₄也增加[³H]-TdR的掺入量和IP₃累积量(P＜0.01)。磷脂酶C抑制剂新霉素(1 μmol·L^-1)阻止IP₃累积量的增加(P＜0.01)。结论:LTD₄剌激培养的人ASMC增殖并且可能在哮喘的气道重塑中起了作用。     

Salusins对大鼠离体心脏及心肌细胞的生物学效应的研究

目的:研究新发现的心血管活性肽salusin的心脏及心肌细胞的生物学效应。方法:利用Langendorff装置灌流的成年大鼠离体心脏及原代培养的乳鼠心肌细胞,测定心功能和心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入及[³H]-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量。结果:10^-12-10^-7mol/L salusin-α及salusin-β对成年大鼠离体心脏功能无明显影响;但10^-10-10^-6mol/L salusin-α及salusin-β均呈浓度依赖性地促进心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入及[³H]-Leu掺入,其效应在10^-8mol/L时达峰值;salusin-α及salusin-β对心肌细胞[⁴⁵Ca²⁺]摄入的效应可被钙通道阻断剂尼卡地平(nicardipine)所拮抗,且与内皮素有协同效应。 Salusin-α及salusin-β对心肌细胞[³H]-Leu掺入的效应可被尼卡地平、钙调磷酸酶抑制剂FK506、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD₉₈₀₅₉及蛋白激酶C(PKC)阻断剂chelerthine chloride等不同程度抑制。Salusin-β对心肌细胞 摄入的效应强于salusin-α,但[³H]-Leu掺入的效应两者之间无显著性差异。结论:Salusin-α及salusin-β对成年大鼠离体心脏功能无直接效应,但能促进乳鼠心肌细胞钙摄入及蛋白合成,其效应可能与钙通道、钙调神经磷酸酶、MAPK和PKC等信号转导途径有关。Salusin可能具有心肌生长、肥大的调节的作用。     

The relative order of IP3 sensitivity of types 1 and 3 IP3 receptors is pH dependent

The type-3 inositol 1,4,5-trisphosphate (IP₃) receptor, in contrast to the type-1 IP₃ receptor (IP₃R), is not stimulated by sulfhydryl oxidation and is less sensitive to adenosine 5’-triphosphate. In the present study we compared the effect of pH on the Ca²⁺ release induced by IP₃ and cytosolic Ca²⁺ between IP₃R3-expressing 16HBE14o– cells and IP₃R1-expressing A7r5 cells. Changing pH from 6.8 to 7.5 decreased the IP₃ concentration required for half-maximal stimulation of IP₃R3 (EC₅₀) 10.7-fold (from 2.14 to 0.20 μM). Similar alkalinization decreased the IP₃ concentration (EC₅₀) for stimulation of IP₃R1 only 2.5-fold (from 0.87 to 0.35 μM). IP₃R1 is therefore the more sensitive isoform at pH 6.8, while IP₃R3 is more sensitive at pH 7.5. Stimulation and inhibition of IP₃R1 and -3 by low and high cytosolic [Ca²⁺] respectively was observed at both pH 6.8 and 7.5. Increasing [H⁺] shifted the Ca²⁺-activation curve of IP₃R1 towards higher [Ca²⁺] but did not affect the Ca²⁺ dependence of IP₃R3. We conclude that IP₃R1 and -3 differ markedly in their response to protons. Received: 24 November 1998 / Received after revision: 15 March 1999 / Accepted: 8 April 1999     

ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖信号转导机制的研究

目的:探讨ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖信号转导机制。方法:观察0.4mmol/LATP与不死化人成纤维细胞共培养不同时间下,细胞内游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]i)和三磷酸肌醇(IP₃)浓度的变化特点和意义,以及分别应用Ca²⁺和K⁺通道拮抗剂时,细胞增殖率的改变。结果:ATP与不死化人成纤维细胞共培养时,[Ca²⁺]i明显升高,IP₃浓度明显降低(均P＜0.01)。分别应用Ca²⁺和K⁺通道拮抗剂时,细胞增殖率都显著增高(均P＜0.01)。结论:ATP抑制不死化人成纤维细胞增殖过程中有钙通道和钾通道以及IP₃的参与。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

血小板源生长因子对低氧培养内皮细胞氚-亮氨酸掺入量的影响

目的：观察低氧条件下血小板源生长因子（PDGF）对于培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氚-亮氨酸（[³H]-Leu）掺入量的影响。方法：[³H]-Leu掺入实验参照Michiels等介绍的方法。结果：低氧可显著降低HUVEC [³H]-Leu的掺入量,低浓度的PDGF（5 μg/L）对低氧条件培养的HUVEC [³H]-Leu的掺入量影响不明显;高浓度PDGF（10 ng/L、20 ng/L）显著增加低氧培养HUVEC [³H]-Leu掺入量,此作用呈剂量依赖性。结论：PDGF能够拮抗低氧所致的培养HUVEC增生能力的下降,低浓度PDGF（5 μg/L）作用不显著,剂量越大,拮抗作用愈显著。     

环胞霉素A抑制神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大效应

目的:观察Ca²⁺/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂环胞素A(CsA)对神经肽Y诱导心肌细胞肥大效应的影响。方法:用神经肽Y(NPY)刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用环胞素A加以干预。应用氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率、RT-PCR法测心肌细胞c-junmRNA表达。结果:(1)心肌细胞氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量测定:与对照组相比,NPY10nmol/L组氚-亮氨酸([³H]-Leu)掺入量有所增高,但与对照组比无显著差别,而NPY100nmol/L组心肌细胞氚[³H]-Leu掺入量较对照组明显增高(P＜0.05)。CsA组和对照组相比无显著差别。(2)心肌细胞内c-junmRNA表达:NPY组心肌细胞c-junmRNA的RT-PCR产物量明显高于对照组和CsA组(P＜0.01),对照组和CsA组间无显著差别。结论:NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加、心肌细胞原癌基因(肥大早期反应基因)c-junmRNA表达,提示NPY可诱导心肌细胞肥大;CaN抑制剂CsA可阻断NPY上述效应,说明Ca²⁺/CaM依赖的CaN信号途径在其中起重要作用。     

尾加压素Ⅱ促兔肺动脉平滑肌细胞增殖及机理探讨

目的:探讨尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ,U-Ⅱ)对兔肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的作用及机理。方法:采用植块法培养家兔PASMCs,以MTT测定和[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入法观察U-Ⅱ对PASMCs增殖的影响,加入不同浓度的几种细胞内信号转导阻断剂,观察对U-Ⅱ效应的影响。 结果:U-Ⅱ(10^-9 mol/L-10^-7 mol/L)浓度依赖地促进PASMCs的A值增加及 -TdR掺入,以10^-7 mol/L U-Ⅱ的作用最明显,A值和[³H]-TdR掺入量分别较对照组高42.9%和68.5%(P＜0.05) 。10^-10 mol/L U-Ⅱ对PASMCs增殖无作用。尼卡地平、W₇、H₇、PD₉₈₀₅₉在一定浓度范围内(10^-7 mol/L-10^-5 mol/L)均可以浓度依赖地抑制U-Ⅱ诱导的PASMCs的A值增加及[³H]-TdR掺入增加。在浓度为10^-5 mol/L时,其抑制作用最明显,A值的抑制率分别为42.3%、19.6%、23.2%和10.5%(P＜0.05), -TdR掺入量的抑制率分别为46.6%、9.8%、21.7%和14.7%(P＜0.05 )。 结论: U-Ⅱ具有较强的促PASMCs增殖的作用,其诱导PASMCs增殖是通过Ca²⁺、CaM、PKC、MAPK来介导的。     

硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

高速投射物压力波作用下内皮细胞磷酸肌醇信号通路的变化

目的:探讨投射物压力波作用于血管内皮细胞时,细胞内磷脂酰肌醇代谢与细胞损伤的关系。方法:以枪弹压力波作用培养细胞为实验模型,测定压力波作用后细胞内三磷酸肌醇(IP₃)、游离钙[Ca²⁺]i、蛋白激酶C(PKC)以及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,并以特异阻断磷脂酰肌醇代谢后重复检测上述参数的变化。结果:压力波可导致细胞内(IP₃)、[Ca²⁺]i、以及PKC活性明显升高,且与培养液中LDH活性升高一致。阻断磷脂酰肌醇代谢后可部分抑制上述生化参数的变化。结论:枪弹压力波可激活血管内皮细胞磷酸肌醇代谢,进而导致细胞损伤、LDH泄漏。     

氟伐他汀抑制高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨氟伐他汀对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:培养自发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞,不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血小板源生长因子(PDGF)、氟伐他汀及甲羟戊酸干预后,行细胞计数和[³H]-TdR掺入率测定。结果:①氟伐他汀呈浓度依赖性抑制10^-6mol/LAngⅡ和10μg/LPDGF刺激诱导的血管平滑肌细胞数和[³H]-TdR掺入率增加;②10^-3mol/L甲羟戊酸几乎完全逆转氟伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。结论:氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF诱导的高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖;甲羟戊酸代谢途径可能参与血管平滑肌细胞增殖过程。     

肾上腺髓质素对尾加压素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察肾上腺髓质素(ADM)对尾加压素Ⅱ(UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC;[³H]-胸腺嘧啶([³H]-TdR)掺入测定反映VSMCDNA合成;[γ-³²P]-ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:UⅡ(10^-8mol/L)显著促进VSMC-TdR掺入和激活MAPK比对照组分别高38%(P＜0.05)和260%(P＜0.01)。UⅡ加10^-10、10^-9、10^-8mol/LADM组VSMC-TdR掺入分别较UⅡ组低7%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和41%(P＜0.01)。MAPK活性分别低24%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和36%(P＜0.05)。结论:肾上腺髓质素抑制UⅡ诱导的VSMC增殖,可能与其抑制MAPK活性有关。     

牛磺酸减轻β-甘油磷酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化氧化应激在反流物所致食管粘膜损伤中的作用

目的：观察牛磺酸对钙化的形成及逆转作用的影响，探讨牛磺酸在血管钙化发生中的作用。方法：利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞（VSMCs），测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性、[⁴⁵Ca]沉积及[³H]-胸腺嘧啶。结果：与对照组相比，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均明显升高（P<0.05），而牛磺酸与β-甘油磷酸同时孵育呈剂量依赖性地抑制钙化发生。在牛磺酸逆转实验中，钙化细胞的钙含量、ALP活性和[⁴⁵Ca]沉积均较换液前明显降低（P<0.01）；且牛磺酸呈剂量依赖性地逆转已钙化细胞。与对照组相比，钙化细胞的细胞数量和[³H]-TdR掺入量增加（P<0.01），牛磺酸早期干预组显著抑制钙化细胞的增殖，但牛磺酸对已钙化的细胞,增殖抑制效应不明显。结论：牛磺酸可抑制细胞钙化形成且能逆转已形成钙化。     

红景天甙对低氧培养的兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天甙(Salidroside,Sal)对低氧(3%)条件下兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖、DNA合成、细胞内钙离子浓度的影响。方法:应用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入试验、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微术测定细胞内Ca²⁺浓度等方法。结果:低氧24h可直接刺激PASMC,使MTT的A值增加62%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量增加138%(P＜0.01)。在低氧的PASMC培养液中加入Sal(32×10^-5mol/L)可抑制低氧的这种促增殖作用,与低氧组相比MTT的A值下降29%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量下降37%。在低氧的PASMC培养液中加入钙通道阻滞剂verapamil也可抑制低氧的促增殖作用,与低氧组相比较,MTT的A值下降23%(P＜0.05),[³H][³H]-TdR掺入量下降51%(P＜0.01)。PASMC的低氧培养可使细胞内Ca²⁺浓度明显增加(P＜0.05),Sal可抑制低氧所致的细胞内Ca²⁺浓度的上升。结论:红景天甙可抑制低氧促进PASMC增殖、DNA合成的作用,其机制可能与抑制低氧时细胞内Ca²⁺浓度增加有关。     

养血清脑血清拮抗溶血磷脂酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察养血清脑药物血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的大鼠血管平滑细胞(VSMC)增殖作用的影响。方法:在培养的大鼠平滑肌细胞上,测定[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-thymidine,[³H]-TdR)掺入、丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性及脂质过氧化终产物丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)含量。结果:1×10^－9、1×10^－8和1×10^－7 mol·L^-1 LPA呈浓度依赖性引起VSMC[³H]-TdR掺入量、MAPK活性及MDA含量增加。5％、10％和15％养血清脑血清预孵育使1×10^－7 mol·L^-1 LPA诱导VSMC[³H]-TdR掺入量分别下降23.0％、42.0％和52.0％(P<0.01);使VSMC MAPK的活性分别下降13.9％(P<0.05)、29.6％(P<0.01)和48.9％(P<0.01);使细胞MDA含量分别下降19.4％、24.7％和43.2％(P<0.01)。结论:LPA呈浓度依赖性引起VSMC增殖及脂质过氧化,VSMC增殖与其细胞内信号转导MAPK途径有关。养血清脑血清可有效地拮抗LPA诱导的VSMC增殖、MAPK激活和脂质过氧化损伤。     

尼氟灭酸对气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨尼氟灭酸(NFA)对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及机制。方法:采用含胎牛血清的DMEM原代培养BALB／c小鼠ASMCs,[³H]-TdR掺入法检测不同剂量NFA(10和50 μmol／L)对ASMCs增殖活性的影响。激光共聚焦显微镜下观察NFA及硝苯地平对组胺致ASMCs中[Ca²⁺]i变化的影响。间接免疫荧光法观察NFA对ASMCs表达MAPK蛋白的影响。结果:10 μmol／L和50 mol／L NFA组细胞的活性明显低于对照组,并且高浓度50 μmol／L NFA组比低浓度10 mol／L NFA组更显著(P<0.01),表现出剂量依赖性。共聚焦显微镜下,对照组ASMCs胞浆和胞核呈现亮绿色荧光,胞膜周围较淡。加入激动剂组胺后,荧光亮度逐渐增强。相反,当同时存在NFA或硝苯地平干预时,镜下观察荧光强度变化不够明显。间接免疫荧光染色结果表明,培养24 h后,对照组中ASMCs细胞沿梭形胞浆出现大斑片状亮绿色荧光,而NFA干预组细胞表现为弱绿色荧光,胞浆内分布区域局限。结论:NFA能有效抑制培养ASMCs的增殖活性,这种作用可能是通过阻断钙激活性Cl^-通道对 [Ca²⁺]i的正反馈效应,以及降低MAPK的表达来实现的。     

钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节

目的:观察钙调神经磷酸酶(CaN)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激的大鼠心肌细胞肥大中的作用及其活性调节。方法:建立AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,观察CaN抑制剂对AngⅡ刺激的心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入的影响,以及各种因素对心肌细胞CaN酶活性的影响。结果:10、 100、 1000 nmol·L^-1的AngⅡ作用12 h分别使心肌细胞的CaN活性增加了13%、 57%(P＜0.05)、 228%(P＜0.01)。AngⅡ(10 nmol·L^-1)刺激心肌细胞2 h内,CaN活性与对照组无明显差异(P＜0.05);AngⅡ刺激心肌细胞12 h以上,CaN活性才明显增高(P＜0.05)。Losartan(50 μmol·L^-1)、H₇(50 μmol·L^-1)及Fura-2/AM(4 μmol·L^-1)可明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性;而PD98059(50 μmol·L^-1)对AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性无明显影响。AngⅡ(10^-7mol/L)刺激的大鼠心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入明显高于对照组(P＜0.01),而CaN特异性抑制剂-环孢素A(0.5~5 μg/mL)可以明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞 [³H]-亮氨酸掺入。结论:依赖Ca²⁺/CaM活化的CaN可能在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;CaN的活化可能有赖于胞内Ca²⁺水平的持续升高,另外,CaN的活性还可能受到蛋白激酶C等信号分子的磷酸化调节。