PTEN基因在早孕小鼠子宫内膜的表达规律

目的:探讨PTEN基因在早孕小鼠子宫内膜,细胞凋亡中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕小鼠及孕d1、d3、d4、d5、d7子宫内膜PTEN基因和蛋白的表达。结果:妊娠子宫内膜组织PTEN的表达高于未妊娠的,且随妊娠天数的增加呈逐渐增加的趋势,到妊娠d5达到最高。免疫组化分析显示PTEN蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:在小鼠胚胎着床过程中PTEN诱导子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一。     

PCNA在早孕小鼠子宫内膜的表达

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的作用。方法:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)及免疫组化方法分别检测未孕(d0)及早孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜PCNA mRNA和蛋白的表达。结果:随着小鼠妊娠天数的增加,PCNAmRNA及蛋白表达量也逐渐增高,在孕d4、d5达到峰值,孕d6、d7逐渐下降。结论:在胚泡植入窗口期子宫内膜PCNA的高表达,可能参与了子宫内膜蜕膜化过程,在胚泡早期植入中发挥作用。     

骨桥蛋白在人子宫内膜、早孕蜕膜和绒毛中的表达及意义

目的:通过检测育龄妇女正常月经周期中不同时期的子宫内膜组织、早孕蜕膜和绒毛组织中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达,探讨OPN在子宫内膜表达的变化规律及其在胚胎着床过程中的作用。方法:采用免疫组化和逆转录聚合酶链反应等技术,检测正常月经周期的子宫内膜组织、早孕蜕膜、绒毛中骨桥蛋白的表达。结果:OPN在月经周期的各期子宫内膜均有表达,以分泌中期子宫内膜组织的表达最强,且分泌中、晚期的表达量明显高于增生期和分泌早期(P<0.05)。早孕蜕膜和绒毛组织中OPN均呈强表达,明显高于非孕各期子宫内膜组织(P<0.05)。结论:OPN mRNA及其蛋白在分泌中期(种植窗期)子宫内膜的表达明显升高,推测OPN可能与种植窗的开放密切相关。OPNmRNA及其蛋白在早孕蜕膜和绒毛组织中的表达水平进一步升高,提示OPN在胚胎着床后也有重要作用。     

Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中的作用。方法:采用免疫组织化学定位检测Meis1在小鼠子宫内膜中的表达;采用Real-time RT-PCR和免疫印迹方法,分别在mRNA和蛋白水平定量检测Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,Meis1蛋白主要表达于小鼠子宫内膜腺上皮细胞的细胞膜和胞质以及基质细胞和蜕膜细胞的细胞核中,在围着床期小鼠子宫内膜中的表达随妊娠天数的增加而增加,着床后在基质和蜕膜中的表达增强;在孕第4日显著增加,孕第5日达高峰,孕第6日表达下降。Real-time RT-PCR和免疫印迹结果显示,Meis1的表达随妊娠天数的增加逐渐增强,孕第4日明显增强,孕第5日达高峰,孕第6日开始下降。结论:Meis1在围着床期小鼠子宫内膜中呈规律表达,与小鼠着床窗吻合,提示Meis1是调控围着床期子宫内膜容受性的重要因子。     

mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨mmu-miR-141在早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜组织中的表达及作用。方法:荧光定量PCR(FQ-PCR)及原位杂交检测早孕小鼠胚胎着床前、后子宫内膜mmu-miR-141的表达;MTT和流式细胞术检测孕第4日(d 4)子宫内膜基质细胞被mmu-miR-141抑制剂作用72 h后其细胞活力和细胞凋亡情况。结果:mmu-miR-141在小鼠胚胎着床后(d 6)子宫内膜组织中的表达明显低于着床前(d 4)(P<0.05),且表达于基质细胞;其表达下调能使基质细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:mmu-miR-141通过调控子宫内膜基质细胞的增殖或凋亡,在早孕小鼠胚胎着床前、后的子宫内膜组织中发挥重要的作用。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)在早孕小鼠子宫内膜的表达规律

目的:探讨肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)在胚胎植入过程中的作用。方法:①用RT-PCR及免疫组化方法分别检测未孕(n=10)及孕d1-7小鼠(n=10×7)子宫内膜TACE mRNA和蛋白的表达;②向妊娠小鼠(n=6)左侧子宫角注射TACE抗体,观察TACE对胚胎着床数的影响。并以右侧为自身对照和注射生理盐水为手术对照组(n=6)。结果:①TACE mRNA在早孕期小鼠子宫内膜的表达明显高于未孕期,且随妊娠天数的增加而逐渐增加,于孕d4达高峰,随后渐降。免疫组化结果与RT-PCR一致;②子宫角TACE抗体注射后胚胎植入数目明显减少。结论:在小鼠妊娠早期,TACE表达增高,其在胚泡植入中可能发挥着重要作用。     

表皮生长因子受体在子宫内膜、早孕蜕膜及滋养细胞中的表达

目的了解表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）在子宫内膜细胞分化及发育中的作用。方法采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术测定５８例正常子宫内膜（３２例增生期,２６例分泌期）与２６例早孕蜕膜。结果ＥＧＦＲ存在于正常子宫内膜、早孕蜕膜腺体及间质细胞的细胞膜、核膜及胞浆内,分布均匀。ＥＧＦＲ还位于早孕蜕膜腺体及间质细胞核内。正常子宫内膜ＥＧＦＲ的表达,腺体部分高于间质部分（Ｐ＜０．０５）,ＥＧＦＲ在增生期及分泌期子宫内膜腺体的表达差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,但ＥＧＦＲ在早孕蜕膜组织中的表达明显高于增生期及分泌期（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ在间质细胞的表达,早孕蜕膜高于分泌期内膜,而增生期内膜则表达最低（Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达从弱到强依次为增生期、分泌期、蜕膜、滋养细胞,增生期与分泌期比较,差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,早孕蜕膜较分泌期及增生期明显增加（Ｐ＜０．０５）,滋养细胞ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达明显高于增生期、分泌期及早孕蜕膜（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＧＦＲ存在于各期子宫内膜中,其表达在正常月经周期中无明显变化,但在早孕蜕膜、滋养细胞中的表达明显高于增生期及分泌期内膜     

TGFβI及其受体在子宫内膜和早孕蜕膜中的表达及意义

目的　探讨转化生长因子 β1 (transforminggrowthfactorβ1 ,TGFβ1 )及受体Ⅰ、Ⅱ型 (TβRⅠ、TβRⅡ )在子宫内膜及早孕 (孕 3个月以内 )蜕膜组织的表达规律 ,了解其对子宫内膜生物学作用。 方法　应用免疫组织化学法 (SP法 )检测 2 5例增生期、 2 9例分泌期子宫内膜及 1 2例早孕蜕膜中TGFβ1及其受体的蛋白表达。结果　TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ在早、中增生期腺体及间质细胞大多无表达或弱阳性 ,晚增生期三者染色强度明显增加 ,与早、中增生期相比 ,在腺上皮细胞染色有统计学意义 (P <0 0 1 )。TGFβ1及受体在中分泌期腺体和间质细胞表达丰富 ,与早分泌期比较TGFβ1均有统计学意义 (P <0 0 1 ) ,TβRⅠ、TβRⅡ仅在腺上皮细胞有统计学意义。晚分泌期三者表达强度较中分泌期相比下降 ,无统计学意义。三者在早孕蜕蟆腺体及蜕膜细胞均有强染色。结论　TGFβ1调节子宫内膜生长、分化 ,可能参与胚胎的着床过程 ,同时调节胚胎生长、发育。     

基质金属蛋白酶-26在正常妇女和子宫内膜异位症患者子宫内膜中的时空变化

目的 :研究正常生理状况下和子宫内膜异位症患者子宫内膜中 MMP- 2 6的时空变化 ,为进一步阐明 MMP- 2 6在子宫内膜周期性增生和剥脱及子宫内膜异位症发生中的作用提供依据。方法 :收集正常人和子宫内膜异位症患者在位及异位内膜共 1 0 5例 ,经苏木精 -伊红染色后 ,根据形态学标准确定标本的实际月经时期 ;以免疫组化分析研究 MMP- 2 6的时空变化。结果 :MMP- 2 6在子宫内膜功能层较强表达 ;在正常子宫内膜的基质细胞、腺上皮细胞和螺旋小动脉的血管内皮细胞均有阳性信号 ,信号强度随月经周期发生一定的变化 ,且内异症在位和异位内膜中的表达模式与正常组有显著不同。结论 :MMP- 2 6在正常子宫内膜中的表达模式显示这一分子在子宫内膜周期性变化和胚胎植入中发挥了一定的作用 ,而在异位症患者中的异常表达提示其与异位症的发病密切相关。     

sLe~x在小鼠胚泡植入早期子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨唾液酸化的路易斯寡糖(sLex)在胚泡植入早期小鼠子宫内膜的表达及作用。方法:①应用免疫组化方法对sLex在小鼠妊娠早期子宫内膜的表达进行定位,免疫印迹法以另一侧为自身对照,检测妊娠d1-5小鼠子宫内膜sLeX的表达情况。②向妊娠小鼠一侧子宫角注射sLeX单克隆抗体,观察其对胚胎着床的影响。结果:妊娠d1-5小鼠子宫内膜组织中,sLeX表达量逐渐增加,在植入窗口期(d4)达高峰;子宫角注射抗体后对胚泡植入有明显的抑制作用。结论:在小鼠胚泡植入早期,sLex参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要的作用。     

Annexin A1在小鼠胚泡植入不同时期子宫内膜组织中的表达及意义

目的:探讨Annexin A1在小鼠胚泡植入期的作用。方法:双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析孕d3、d5、d7小鼠子宫内膜蛋白质组,用差异蛋白质组学显示pI约5.1、分子量约38kD的蛋白点在d3、d5上调,且在d5更明显。经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)和数据库搜索对此蛋白点进行鉴定;再用RT-PCR、原位杂交、Western blot和免疫组织化学技术进行验证分析。结果:该蛋白点鉴定为鼠源性Annexin A1;d5小鼠子宫内膜组织中Annexin A1的mRNA和蛋白质水平均增加。结论:Annexin A1可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

米非司酮对围植入期小鼠子宫内膜中STAT3表达的影响

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在小鼠胚泡植入过程中的生物学作用。方法:将孕鼠随机分为米非司酮组、溶剂组和空白对照组,用免疫组织化学技术和图像分析方法检测各组小鼠孕3～8 d子宫内膜中STAT3的动态表达,并对其进行半定量分析。结果:溶剂组和对照组小鼠子宫内膜中STAT3的表达在孕3 d明显增强,孕4 d达到峰值,且溶剂组和对照组间在孕3～8 d各时间点的表达差异无统计学意义;米非司酮组STAT3的表达较2个对照组显著降低(P<0.01),在孕4 d亦无表达高峰。结论:STAT3是介导胚泡植入的重要因子之一,米非司酮可能通过抑制孕激素与其受体结合而下调STAT3的表达,影响子宫内膜容受性的建立,阻碍胚泡顺利植入。     

人子宫内膜细胞共培养体系对早期鼠胚体外发育的影响

目的:研究人子宫内膜共培养体系对早期鼠胚体外发育的影响及移植后的妊娠情况。方法:将2-细胞小鼠胚胎与人子宫内膜细胞进行体外共培养,对照组为无营养细胞的单纯培养液,每日在显微镜下观察胚胎的发育情况。将培养到囊胚期的胚胎移植回小鼠的子宫腔,观察着床情况。结果:共培养体系中68.3％的2-细胞胚胎发育至桑椹胚期,50.8％发育至囊胚期,囊胚的孵化率为36.7％,胚胎的着床率为25.0％。而对照组只有24.8％的2-细胞胚胎发育至桑椹胚期,11.4％到达囊胚期,且其中大部分为早期囊胚即停止发育。另外对照组细胞碎片出现早且多,卵裂球不均匀,胚形态差,移植后胚胎的着床率仅为3.1％。结论:人子宫内膜细胞共培养体系可以促进小鼠胚胎的体外发育,改善胚胎的质量,提高着床率。     

肿瘤抑制基因p16~(INK4A)在小鼠早孕子宫内膜中的表达

目的:初步探讨p16INK4A在胚胎着床过程中的作用。方法:采用实时FQ-PCR和免疫组织化学技术分别检测未孕(d0)及孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜p16INK4AmRNA及其蛋白的表达。结果:实时FQ-PCR显示妊娠子宫内膜组织p16INK4A的mRNA表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增强的趋势,到孕d5达到最高。免疫组化显示p16INK4A蛋白在子宫内膜的表达及规律与实时FQ-PCR的结果一致。结论:小鼠胚胎着床过程中p16INK4A诱导的小鼠子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎着床的重要机制之一。     

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。