肝癌及癌旁组织中4-1BB分子的表达及意义

目的研究肝癌及癌旁组织中4-1BB分子的表达及意义。方法应用RT-PCR、直接免疫荧光细胞化学法、激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测肝癌和癌旁组织以及外周血淋巴细胞中4-1BB分子的表达情况。结果全部肝癌癌旁1cm组织中可检测到4-1BB mRNA，8例肝癌组织和6例癌旁5cm组织中4-1BB mRNA呈弱表达。激光共聚焦显微镜检测到13例癌旁1cm肝组织中浸润淋巴细胞4-1BB^ ／CD4^ 或CD8^ 荧光。两组外周血CD4^ 和CD8^ T细胞表面几乎均未检测到4-1BB分子的表达。结论肿瘤浸润淋巴细胞可能通过4-1BB共刺激信号途径得以有限活化并发挥局部杀伤效应。     

转染4-1BBL的前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用

目的:观察转染4-1BBL重组腺病毒载体的小鼠前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用及机制。方法:利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-m4-1BBL及Ad-eGFP。将Ad-m4-1BBL和Ad-eGFP感染小鼠前列腺癌细胞RM-1,以丝裂霉素C(MMC)处理,制成肿瘤细胞疫苗(TCV,TCV-Ad-eG-FP,TCV-Ad-m4-1BBL),经体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养,ELISA法检测脾细胞分泌细胞因子(IL-2,INF-γ)的影响,CCK-8试剂检测脾淋巴细胞特异性杀伤活性。结果:转染4-1BBL基因的小鼠前列腺癌细胞瘤苗TCV-Ad-m4-1BBL高表达4-1BBL蛋白,培养上清中细胞因子IL-2[(180.24±2.22)pg/ml]和INF-γ[(1 512.46±23.64)pg/ml]表达水平均明显高于TCV和TCV-Ad-eGFP组(P<0.05),TCV-Ad-m4-1BBL瘤苗诱导RM-1细胞特异性杀伤率[(34.24±2.64)%],相比TCV-Ad-eGFP[(14.65±3.21)%]和TCV[(9.82±1.48)%],差异有显著性(P<0.05)。但针对Hepal-6细胞,3种瘤苗均无效。结论:表达4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞瘤苗能诱导有效的抗肿瘤免疫反应。     

前列腺特异性膜抗原和4-1BB配体共表达基因疫苗诱导的抗肿瘤作用

目的 探讨小鼠4-1BB配体(m4-1BBL)对截短的人前列腺特异性膜抗原(tPSMA)基因疫苗诱导的抗肿瘤作用.方法 构建携带tPSMA和m4-1BBL基因的真核表达载体pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL,以及编码tPSMA的对照载体pDC316-tPSMA和空载体pDC316.3种质粒分别于C57BL/6小鼠股四头肌内接种免疫,CCK-8试剂盒检测小鼠脾细胞体外特异性杀伤前列腺癌细胞株RM-1-tPSMA的活性,观察小鼠体内肿瘤生长变化.结果 pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL疫苗诱导增强的靶细胞特异性杀伤率为42.62%,pDC316-tPSMA组为24.81%,pDC316组为10.81%,组间杀伤率比较差异有统计学意义(P<0.05).pDC316疫苗免疫小鼠7 d成瘤,瘤体积2657.4 mm3;pDC316-tPSMA组9 d成瘤,瘤体积1334.5 mm3;pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL组12 d成瘤,瘤体积445.8 mm3;组间瘤体大小比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 共表达tPSMA和m4-1BBL的基因疫苗能显著增强小鼠抗前列腺肿瘤作用.

Abstract：

Objective To investigate the influence of m4-1BBL on the anti-tumor effects induced by truncated human prostate specific membrane antigen (tPSMA) gene in mice. Methods A eukaryotic expression plasmid encoding tPSMA and m4-1BBL (pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL), pDC316-tPSMA and pDC316 were constructed. C57BL/6 mice were vaccinated in the quadriceps femoris, respectively. The CTL activity of spleen cells from the immunized mice against prostate cancer RM-1-tPSMA was detected by CCK-8 kit in vitro. The tumor growth was then observed. Results The target cell specific cytotoxicity rate induced by pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL was 42.6%, compared to 24.8% in the pDC316-tPSMA group and 10.8% in the pDC316 group. The difference was significant (P<0.05). The volume of tumor in the pDC316 group was 2657.4mm3 7 d after vaccination, compared to 1334.5 mm3 in the pDC316-tPSMA group, 9 d after vaccination. In the pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL group, the tumor volume was 445.8 mm3, 12d after vaccination. The difference was significant (P<0.05). Conclusion Gene vaccines co-expressing tPSMA gene and m4-1BBL gene could significantly enhance anti-prostate cancer effects in mice.     

2型糖尿病肾病患者外周血CD28/CTLA4共刺激分子的表达及其意义

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)肾病患者外周血T细胞亚群、共刺激分子CD 28及细胞毒T淋巴细胞抗原(CTLA)4的表达及其临床意义。方法:选取2015年07月~2018年06月至我科室和内分泌科治疗的患者,根据尿微量清蛋白排泄率(UAER)将其分为DM组(T2DM无肾病,n=42)和DN组(T2DM合并肾病,n=40),同时选取健康人群40例作为对照(NC组)。采用流式细胞技术测定两组患者外周血T淋巴细胞上CD4、CD8的表达,并用流式细胞技术测定CD4^+、CD8^+T淋巴细胞表面CD28、CTLA4分子的表达。结果:三组外周血CD4^+和CD4^+/CD8^+按NC组-DM组-DN组顺序均呈显著递增趋势(P<0.01),CD3^+、CD8^+按照顺序呈显著递减趋势(P<0.01),且各组间差异明显(P<0.01);三组外周血CD4^+CD28^+、CD8^+CD28^+ T细胞按NC组-DM组-DN组顺序均呈显著递增趋势(P<0.01),CD4^+CTLA4+及CD8^+CTLA4+T细胞按照顺序呈显著递减趋势(P<0.01),且各组间差异明显(P<0.01)。结论:T2DM患者T细胞亚群失衡,其中合并肾病患者表达失衡更为严重,提示糖尿病肾病患者存在自身免疫调节异常。同时T2DM合并肾病患者外周血CD28和CTLA4表达也显著异于正常对照,提示共刺激分子可能参与了T2DM合并肾病的免疫功能紊乱。     

转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞Hepal-6生物学特性的观察

为了探讨4-1BBL在肿瘤免疫中的作用，我们研究了转染共刺激分子4-1BBL后的小鼠肝癌细胞体内外生长特性的改变。为今后肿瘤疫苗的研究提供依据。     

白细胞介素-12、γ干扰素协同共刺激分子B7-1诱导淋巴细胞活化的研究

为了探讨肿瘤免疫反应中细胞因子对B7 1肿瘤细胞诱导淋巴细胞活化有无协同作用 ,我们观察了γ干扰素、白细胞介素 12对转B7 1基因肝癌细胞表面的B7 1分子表达的影响。一、材料和方法1.材料 :HepG2细胞株 ,HepG2 /B7 1细胞株由苏州大学附属第一医院血研所赠送。鼠抗人直标B7 1单抗、CD4单抗、CD8单抗、CD2 5单抗购自深圳晶美生物有限公司。IFN γ ,IL 2ELISA试剂药盒购自上海森雄生物有限公司。2 .细胞株的培养 :将用液氮冷冻的HepG2细胞和HepG2 /B7 1细胞快速复温解冻 ,种植于细胞培养液中 ,于 3 7℃ ,5 %CO2 的条件下培养 ;…     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞共刺激分子的表达及意义

目的：探讨共刺激分子的表达与特发性肾病综合征（INS）的关系。方法：采用流式细胞仪直接计数法测定INS患儿和健康对照者外周血CD28、CD152、CD80和CD86的表达。结果：初发肾病组外周血单个核细胞表面CO80、CD86、CD28和CD152的表达均较正常对照组明显增高，初发肾病组CD28^＋／CD152^＋和CD^80^＋／CD86^＋均较正常对照组明显降低。与初发肾病组相比，激素完全效应组和激素部分效应组CD80、CD86．CD28和CD152的表达均明显降低；CD28^＋／CD152^＋和CD80^＋／CD86^＋则与初发肾病组无统计学差异。激素完全效应组CD80、CD86、CD28和CD152的表达，CD28^＋／CD152^＋和CD80^＋／CD86^＋均和激素部分效应组无统计学差异。结论：抗原递呈细胞表面抑制细胞活性的配体CD80的表达增高不足以抑制促进细胞活性的配体CD86异常的增高表达可能是促进INS的发生因素之一，糖皮质激素可影响INS外周血单个核细胞共刺激分子的表达，但与其激素治疗效应无关。     

CTLA4-Ig抑制异种混合淋巴细胞反应

目的：研究共刺激分子细胞毒性T细胞抗原4（CTLA4）对人－猪异种移植反应中，T细胞活化的抑制作用。方法：用转染CTLA4－Ig融合基因的猪血管内皮细胞系（PIEC）和CTLA4－Ig融合蛋白抑制T细胞增殖反应，结果：B7／CD28共刺激信号途径在异种细胞排斥反应中起重要作用，CTLA4－Ig的抑制效应没有对同种细胞反应的影响强。结论：上述结果的机制可能是因 种间分子不相容性降低协同分子的匹配性，或者异种移植反应中其它协同分子“替代性”参与了辅佐信号的传导。     

不同免疫状态肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子的表达及意义

目的探讨不同免疫状态肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+)、共刺激分子(CD80、CD86)的表达,及其判断肝移植受者不同免疫状态的价值。方法 52例肝移植受者,分为免疫耐受组28例、急性排斥反应组(排斥组)13例、药物不良反应组(药物反应组)11例。采用流式细胞术测定三组患者外周血CD4+、CD8+及CD80、CD86的表达水平,并计算CD4+/CD8+。结果与免疫耐受组和药物反应组比较,排斥组患者外周血CD8+水平较低,而CD4+、CD4+/CD8+、CD80、CD86均较高(P0.05～0.01)。与免疫耐受组比较,药物反应组患者外周血CD8+、CD80、CD86水平明显升高(P0.05～0.01),而CD4+、CD4+/CD8+差异无统计学意义(均为P0.05)。结论免疫T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)、CD80、CD86可作为判断肝移植受者免疫状态的指标。     

肝细胞肝癌患者TACE前后血清sICAM-1的表达及其意义

目的探讨血清sICAM-1在原发性肝细胞癌（HCC）患者经肝动脉插管化疗栓塞（TACE）前后表达变化的临床意义。方法运用ELISA方法测定50例原发性HCC患者第1次TACE术前、术后3天、7天及1个月血清ICAM-1的水平及50名健康对照者的血清ICAM-1水平,将HCC患者术前与健康体检者、HCC患者TACE前后sICAM-1的表达水平进行比较。结果TACE术前原发性HCC患者sICAM-1的水平[（651.08±65.29）μg/L]明显高于健康对照组sI-CAM-1的含量[（197.29±38.87）μg/L,P〈0.01];原发性HCC患者术前门静脉癌栓组的sICAM-1水平明显高于无门静脉癌栓组（P〈0.01）,术前sICAM-1水平在甲胎蛋白（AFP）各不同含量组间无明显差异（P〉0.05）。术后3天sICAM-1水平[（539.60±61.94）μg/L]与术后7天sICAM-1水平[（496.22±58.78）μg/L]较术前有显著下降（P〈0.01）;术后1个月sICAM-1的水平[（597.32±81.60）μg/L]与术前相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论sICAM-1水平的变化与肿瘤活性密切相关,可以作为评价HCC转移、复发及预后的指标,尤其对AFP阴性的HCC患者,在评价TACE疗效与判断再次TACE指征方面有一定参考价值。     

LFA-1共刺激诱导狼疮性肾炎外周血单个核细胞IL-10表达的研究

目的：探讨淋巴细胞功能相关抗原－１（ＬＦＡ－１）对活动性狼疮肾炎（ＬＮ）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）白介素 １０（ＩＬ－１０）的调节作用。方法：利用半定量 ＲＴ－ＰＣＲ技术观察 ＬＦＡ－ １共刺激对活动性 ＬＮ患者 ＰＢＭＣ ＩＬ－１０ ｍＲＮＡ表达的影响。结果：单独抗ＣＤ３抗体（３０ ｎｇ／ｍｌ）能诱导ＬＮ 患者ＰＢＭＣ ＩＬ－１０ ｍＲＮＡ轻微表达（０．４３＋０．０３ｖｓ ０．５５±０．４４,Ｐ＜０．０５）而在抗ＣＤ３抗体（３０ ｎｇ／ｍｌ）存在的情况下,抗ＬＦＡ－１抗体（２ μｇ／ｍｌ,相当于ＬＦＡ－１配体）共刺激时明显增加了ＰＢＭＣ ＩＬ—１０ ｍＲＮＡ表达（１．３１±０．０８ｖｓ ０．５５＋０,０４,Ｐ＜０．０１）。ＬＦＡ－１中和抗体明显抑制了这种共刺激诱导的ＩＬ—１０ ｍＲＮＡ表达（１．３１±０．０８ｖｓ ０．６４ ±０．０３,Ｐ＜０．０１）。抗ＬＦＡ－１抗体单独刺激时并不引起 ＩＬ－１０ ｍＲＮＡ表达变化（Ｐ＞０．０５）。结论：ＬＦＡ－１作为共刺激分子诱导 ＩＬ－ １０ ｍＲＮＡ表达可能是其参与 ＬＮ发病的机制之一。     

原发性肝癌经肝动脉化疗栓塞术后共刺激分子4-1BB(CD137)配体的变化和意义

目的　探讨原发性肝癌经肝动脉化疗栓塞(TACE)前后肝癌细胞的共刺激分子4 -1BB(CD13 7)的配体(4- 1BBL)的变化及意义。方法　选取经TACE治疗后二期手术切除的原发性肝癌患者标本14例(TACE组)和未经TACE单纯手术切除的原发性肝癌患者标本2 1例(单纯手术组) ,应用免疫组织化学方法和RT -PCR方法检测肝癌细胞的4 -1BBL及4- 1BBLmRNA表达情况。结果　TACE组肝癌细胞中4 -1BBL和4- 1BBLmRNA的表达明显低于单纯手术组。结论　TACE后肝癌细胞中4 -1BBL的表达下调会影响机体的抗肿瘤免疫反应,并可能是TACE治疗原发性肝癌难以根治并易复发、转移的原因之一。     

川芎嗪对活动期狼疮性肾炎外周血单个核细胞 B7-1和B7-2 mRNA表达的影响

目的：探讨川芎嗪对活动期狼疮肾炎（LN）外周血单个核细胞（PBMC）的B7－1（CD80）和B7－2（CD86）mRNA表达的,影响,为临床使用川芎嗪治疗LN提供理论依据。方法：取活动期LN患PBMC培养,分别以川芎嗪,地塞米松和川芎嗪＋地塞米松进行处理,以PBS对照,采用半定量反转录PCR的方法,检测PBMC的B7－1和B7－2mRNA表达,结果：与对照组相比,川芎嗪组和地塞米松组均能明显抑制B7－2mRNA表达（P＜0．05）,而川芎嗪＋地塞米松组对B7－2mRNA表达的抑制更加明显（P＜0．01）,各组对B7－1mRNA表达均无显影响（P＞0．05）,结论：川芎嗪能下调活动期LN外周血单个核细胞B7－2mRNA表达,合并使用地塞米检能更好地抑制B7－2mRNA表达。     

Increased expression of HLA-DR molecule on peripheral blood Th lymphocytes from patients with IgA nephropathy

Background. IgA nephropathy is the commonest type of glomerulonephritis. Recent studies have shown a decrease in the expression of HLA class I antigens on peripheral blood mononuclear leukocytes (PBML) from patients with HLA class II-associated autoimmune diseases. In this study, the expression of HLA molecules on T cells from patients with IgA nephropathy was examined in order to investigate the immunological events contributing to the pathogenesis of this disorder. Methods. Thirty Japanese patients with IgA nephropathy were studied. Nine patients with membranous nephropathy and 21 sex- and age-matched healthy individuals were enrolled as controls. Heparinized PBML with or without stimulation by an anti-CD3 monoclonal antibody were analyzed in regard to the expression of HLA-class I, HLA-DR, CD4, CD8, CD11a, CD11b, and CD56, by two-color fluorescence flow cytometry. Results. The expressions of HLA-class I, HLA-DR, CD11a, CD11b, and CD56 on resting CD3-positive, CD4-positive, CD8-positive, or CD20-positive cells from patients with IgA nephropathy were found to be comparable with those from the controls. However, after stimulation by anti-CD3 antibody, the expression of HLA-DR on CD4-positive cells from these patients was significantly higher than that from the controls. Further, the expression of HLA-DR on CD4-positive cells from patients with proteinuria of more than 1 g/day was much higher than that in patients with proteinuria of less than 1 g/day. Conclusions. In this study, the expression of HLA-DR on stimulated Th cells from IgA nephropathy patients was shown to be significantly higher than the expression in the stimulated T cells from the controls. This finding suggests that Th cells may acquire antigen-presenting activity by HLA-DR expression, present antigens to other Th cells, promote B cells to produce antibodies, and, presumably, lead to the development of IgA nephropathy. Received: October 26, 1998 / Accepted: February 16, 1999     

门静脉高压症患者脾切除后外周血B7-1/CD28表达的变化

目的探讨B7-1/CD28对门静脉高压症（portal hypertension,PHT）患者免疫功能的影响和作用。方法采用流式细胞分析技术对30例门静脉高压症患者进行研究,检测门静脉高压症患者行脾切除前后外周血淋巴细胞中以及脾脏中B7-1/CD28的表达情况,分析其与患者淋巴细胞亚群以及免疫功能的关系。对患者外周血B7-1/CD28和淋巴细胞进行检测。利用免疫组化方法检测B7-1/CD28在脾脏中的表达,与10例外伤性脾破裂行脾切除之脾脏组织进行比较。结果门静脉高压症患者外周血中淋巴细胞亚群和B7-1/CD28表达较低,脾切除后短期内升高。其脾脏中表达的B7-1/CD28较正常人群高。结论门静脉高压症患者全脾切除后外周血B7-1/CD28通路被激活,患者免疫功能得到部分恢复。     

反义B7-1质粒载体的构建与鉴定

目的 构建反义B7-1质粒载体,为研究阻断B7-1/CD28共刺激分子通路提供基础.方法 设计含有Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的1对引物,通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增获取质粒载体pcDNA3-B7-1上的目的片段B7-1( 118～ 530 nt,426 bp),克隆入PMD18-T中间载体.PMD18-T-B7-1经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,B7-1片段与pcDNA3B(-)连接,pcDNA3B(-)的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点与B7-1全基因序列所含酶切位点相反,构建反义B7-1表达载体.结果 反义基因重组体经过酶切和PCR检测,得到426 bp左右的目的基因片段.测序证明插入的目的片段碱基序列与Genebank报道的B7-1基因序列(G1:111038144)中的B7-1片段100％同源,且反方向插入载体.结论 成功构建大鼠B7-1反义真核表达载体,为阻断B7-1/CD28共刺激通路抑制排斥反应奠定了基础.     

凝血酶对狼疮肾炎末梢血单个核细胞分泌Th1/Th2细胞因子的影响

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者凝血活性对其Th1/Th2平衡的影响。方法LN患者20例,按红斑狼疮病情活动指数(SLEDAI)分为稳定组11例(SLEDAI<9分),活动组9例(SLEDAI≥9分)。健康对照组8例。采集末梢血单个核细胞(PBMC),进行高、低浓度凝血酶刺激下体外培养。ELISA法检测培养液上清IL-10、IFN-γ水平。RT-PCR检测IL-10和IFN-γmRNA表达。结果凝血酶呈浓度依赖性上调LN患者PBMCIL-10表达,但不影响IFN-γ表达,故增加IL-10/IFN-γ比值。结论凝血酶加重狼疮肾炎患者PBMC分泌Th1/Th2细胞因子的平衡紊乱。