脑络欣通对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经上皮干细胞蛋白巢蛋白表达的影响

目的观察益气活血治法代表中药复方脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠室下区（SVZ）神经干细胞增殖的影响。方法采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，分别观察益气活血、益气、活血3种治法及其代表方药在缺血2h后，分别再灌注1、3、7d的治疗效果；免疫组化染色SABC法检测神经上皮干细胞蛋白巢蛋白表达。结果各治疗组巢蛋白表达增加，但仅在缺血再灌注7d时与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；益气活血法组表达明显增加，在缺血再灌注7d时与益气法组和活血法组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论经过脑络欣通（益气活血法）及其拆方（益气方、活血方）干预后，可使内源性神经干细胞的增殖明显增加，脑络欣通在促进神经干细胞增殖（7d）表达的效应上要优于其拆方（益气方、活血方）。     

左归丸对体外培养新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

左归丸具有滋阴补肾功效.笔者的在体实验表明左旋单钠谷氨酸模拟肾阴虚证大鼠神经干细胞(Nerve Stemceu,NSC)增殖分化和凋亡与正常组有明显差异[1,2].为探讨左归丸以及左旋单钠谷氨酸所致肾阴虚模型中有关NSC增殖分化的作用及机制,本实验从神经干细胞增殖分化方面作以下探讨.     

脑络欣通对局灶脑缺血再灌注大鼠神经干细胞及相关调节因子影响的实验研究

目的探讨益气活血治法与其中药复方脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠神经干细胞及相关调节因子的影响，比较其在不同时问位点的作用特点及其机制。方法采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，分别观察益气活血、益气、活血三种治法及其代表方药在缺血2h、再灌注1、3、7d的治疗效果；免疫组化染色SABC法检测Nestin、BDNF、EGF蛋白表达。结果（1）Nestin表达情况：缺血再灌注7d时，各治疗组与模型组比较有显著差异；组间比较，仅在缺血再灌注7d时有显著差异。（2）BDNF表达情况：益气活血法组与模型组比较有显著差异（3d、7d），益气法组和活血法组与模型组比较有显著差异（3d或7d）；组间比较，缺血再灌注7d时益气活血法组与益气法组和活血法组有显著差异。（3）EGF表达情况：益气活血法组与模型组比较有显著差异（7d）；组间比较，7d时益气活血法组与益气法组和活血法组有显著差异。结论经过脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）干预后，可使内源性神经干细胞的增殖明显增加，相关调节因子BDNF、EGF的表达也发生不同的变化；脑络欣通在促进神经干细胞的增殖（7d）、促进BDNF（3d、7d）、EGF（7d）表达的效应上优于其拆方（益气方、活血方）。     

脑络欣通对局灶脑缺血/再灌注大鼠神经干细胞及相关调节因子影响的实验研究

中枢神经系统神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的发现,为治疗多种神经系统疾病带来了希望,显示了中枢神经系统具有一定的自我修复潜能。大量研究已经证实,脑缺血可以激活成年脑内神经干细胞的自我增殖潜能,促进神经干细胞增殖。然而,脑缺血损伤后仅仅调动内源性NSCs试图自我     

中医药对神经干细胞增殖分化作用的研究

神经干细胞的定向分化问题是神经干细胞移植治疗中的难点,目前还没有行之有效的办法。中医药在神经干细胞定向分化方面进行了一定探索,并取得一些进展,近年来的研究表明中药复方、单味中药及中药单体都有促进神经干细胞分化增殖的作用。当然这些研究多数还比较肤浅,有待进一步深化。     

黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响

目的 观察黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响,并探讨其作用机理.方法 体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,Nestin 免疫细胞化学染色进行神经干细胞的鉴定,BrdU 标记鉴定增殖.采用稀释法检测黄芪甲苷高、中、低剂量组(6、0.6、0.06 μmol/L)对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响.结果 Nestin 染色为阳性,BrdU 的增殖鉴定为阳性.与对照组相比,黄芪甲苷高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加.结论 黄芪甲苷能够明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用.     

当归芍药散对神经干细胞增殖作用的体外研究

目的:研究当归芍药散不同提取部位对体外培养的大鼠海马神经干细胞的增殖作用。方法:以无血清传代培养法,从胎鼠中获得神经干细胞;传至3代后用免疫荧光法对神经干细胞进行鉴定;将当归芍药散不同部位的含药培养基加入神经细胞中进行培养,于第10天进行免疫细胞化学法染色,观察神经干细胞增殖标志物Brdu的表达。结果:当归芍药散的醇提部位(浓度为50μg/ml,100μg/ml)、二氯甲烷部位(浓度为100μg/ml)对体外培养的神经干细胞有明显的增殖作用(P0.05),正丁醇部位和剩余水部位对体外培养的神经干细胞无明显增殖作用。结论:当归芍药散的醇提部位和二氯甲烷部位可显著促进体外培养大鼠海马神经干细胞的增殖。     

火针干预脊髓损伤大鼠后血清对神经干细胞增殖分化的影响

[目的]研究离体状态下火针干预脊髓损伤大鼠后提取血清对神经干细胞增殖分化的影响。[方法]将15只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及火针组,相应干预3 d后取各组大鼠血清。从孕14天昆明小鼠胚胎脊髓组织中分离培养神经干细胞,同时采用上述各组血清进行培养,7 d后观察各组神经干细胞增殖与分化情况。[结果]神经干细胞在各组血清中均能存活、增殖并可向神经元分化,火针组神经干细胞增殖数目显著多于假手术组及模型组,且火针组神经元分化比例高于其余两组(P<0.05)。[结论]火针干预脊髓损伤大鼠后血清可促进神经干细胞增殖并向神经元分化。     

脑络欣通治疗脑梗死恢复期气虚血瘀证的临床研究

目的评价脑络欣通治疗脑梗死恢复期气虚血瘀证的临床疗效,观察脑络欣通对梗死后神经功能缺损程度和日常生活能力、中医证候积分及凝血功能变化的影响.方法将符合纳入标准的90例脑梗死恢复期气虚血瘀证患者随机分为脑络欣通组、通心络组、对照组,对照组给予常规治疗,通心络组在常规治疗基础上给予通心络胶囊,脑络欣通组在常规治疗基础上加用脑络欣通.观察治疗前、治疗后14 d、治疗后28 d三个不同时点的神经功能缺损程度评分、日常生活活动能力评分、中医证候积分值、凝血功能等指标变化.结果脑络欣通治疗脑梗死恢复期气虚血瘀证28 d的总有效率为93.3%,优于通心络组和对照组（P〈0.05或P〈0.01）,同时脑络欣通能改善病人的神经功能缺损程度、提高病人日常生活活动能力,明显降低中医证候积分值,改善凝血相关指标.结论脑络欣通对脑梗死恢复期气虚血瘀证患者有较好的治疗作用,其临床疗效优于通心络组.     

川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨川续断皂苷Ⅵ含药血清对神经干细胞增殖分化的影响。方法体外建立神经干细胞培养体系,川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)处理神经干细胞72 h。CCK-8和BrdU法检测NSCs增殖;细胞免疫荧光检测NSCs分化;DAPI染色检测NSCs的凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中、低浓度)对NSCs增殖无影响(P>0.05)。川续断皂苷Ⅵ含药血清(高、中浓度)促进神经干细胞分化(P<0.05),促进Notch1、Tublin、caspase-3 mRNA表达(P<0.05),抑制Jagged1、Hes1、Sox2,Pax6 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);高浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进神经干细胞凋亡(P<0.05),促进GFAP mRNA表达(P<0.05),抑制Ngn1 mRNA表达(P<0.01)。中浓度川续断皂苷Ⅵ含药血清促进Tublin蛋白及Ngn1 mRNA表达,抑制GFAP、Jagged1蛋白及GFAP mRNA表达(P<0.05,P<...     

Akt信号通路在左归丸对体外培养新生大鼠海马神经干细胞凋亡中的作用

目的观察 Akt 信号通路在左旋单钠谷氨酸(MSG)和左归丸(ZGW)对新生大鼠体外培养海马神经干细胞(NSC)和子细胞凋亡中的作用。方法分离、培养新生大鼠海马 NSC,选第二代克隆球做诱导分化实验。每个培养孔(3ml 培养体积)加入终浓度为10μmol//L 的 MSC 或10μmol/L MSG 加左归丸10μg 与NSC 孵育30min,培养7天后收集细胞进行检测。采用流式细胞仪和 Western blot 方法分别检测细胞凋亡率和 Akt 信号通路变化。结果 MSG 可增加细胞凋亡率,抑制总 Akt 表达,显著降低 Akt(Ser473)和 Akt(Thr308)水平;明显增加 FKHR(Ser256)、GSK-3β(Ser9)和 PTEN 表达。ZGW 可抑制 MSG 的部分效应。分别给予 PI3K选择性抑制剂 LY294002和激动剂,可显著反转和增强 ZGW 效应。结论左归丸能抑制 NSC 及其子细胞凋亡,这一作用与 Akt 信号通路有关。     

左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中碱性磷酸酶含量的影响

目的:研究左归丸含药血清对间充质干细胞骨向分化过程中碱性磷酸酶含量变化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养间充质干细胞,连续进行3次差速贴壁法纯化间充质干细胞。常规诱导组以β-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C诱导间充质干细胞骨向分化,实验组在常规诱导组基础上加以左归丸含药血清。使用茜素红染色钙结节、碱性磷酸酶染色鉴定诱导成功。分别在0,7,14,21 d用比色法检测细胞中碱性磷酸酶含量。结果:全骨髓贴壁法和差速贴壁法联合使用可得到较为均一间充质干细胞。用比色法测得碱性磷酸酶含量随着诱导时间延长而增加。结论:大鼠间充质干细胞经药物诱导后可以分化为成骨细胞。左归丸含药血清能够促使诱导过程中碱性磷酸酶含量表达增加。     

左归丸对肾虚大鼠MSCs增殖的影响

目的探讨补肾益精代表方左归丸对肾虚大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法 SD雌性大鼠双侧卵巢切除增龄3月法复制肾虚模型,用左归丸给予部分模型大鼠灌胃。分离、培养正常组、模型组、左归丸组大鼠MSCs。观察各组大鼠MSCs细胞形态,生长周期,P3、P5代细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶衰老细胞染色结果。结果模型组大鼠P3、P5代MSCsOD值明显低于正常组、左归丸组(P<0.05)。各组大鼠MSCs细胞周期无明显差异(P>0.05)。模型组衰老细胞阳性率最高,明显高于正常组(P<0.01),但与左归丸组间差异不明显(P>0.05)。结论去卵巢大鼠MSCs增殖能力减弱,左归丸一定程度上改善肾虚大鼠MSCs增殖能力。     

左归丸对间充质干细胞向软骨细胞分化过程中Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响

目的观察左归丸含药血清对间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）向软骨细胞定向分化过程中MSCs增殖、Ⅱ型胶原及蛋白多糖基因表达的影响。方法分离培养大鼠MSCs,体外诱导其向软骨细胞分化,诱导同时分别以高（57 g/kg）、中（28.5 g/kg）、低（9.5 g/kg）浓度左归丸含药血清及大鼠空白血清刺激细胞。CCK-8法检测各组对MSCs增殖的影响。将第3代MSCs分为空白对照组（加入大鼠空白血清）、诱导对照组（加入诱导液及大鼠空白血清）及左归丸含药血清组（加入诱导液及中浓度左归丸含药血清）,采用RT-PCR、免疫组织化学和Real-time PCR检测诱导分化软骨细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达。结果与空白对照组比较,不同浓度左归丸含药血清均能促进MSCs增殖（P〈0.05）,其中以中浓度组最为明显（P〈0.05）。诱导第21天RT-PCR和免疫组织化学显示诱导对照组和左归丸含药血清组MSCs中均可见Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达,其中左归丸含药血清组中Ⅱ型胶原mRNA表达明显高于诱导对照组。Real-time PCR结果显示,诱导第21天左归丸含药血清组蛋白多糖mRNA相对表达定量分别约是第7、14天表达量的16倍和3倍（P〈0.05）,并明显高于同期诱导对照组（P〈0.05）。结论左归丸含药血清能促进MSCs增殖、Ⅱ型胶原和蛋白多糖基因表达,可能是其软骨保护作用的分子基础之一。     

左归丸对MSG-大鼠胸腺及淋巴细胞增殖反应的影响

新生期大鼠给予左旋谷氨酸单钠（ＭＳＧ）损害下丘脑弓状核（ＡＲＣ），成年后大鼠除表现生长发育迟缓外，还可见到胸腺体积缩小、重量减轻，脾脏Ｔ淋巴细胞对Ｃｏｎ－Ａ诱导的增殖反应减弱。滋补肾阴代表名方左归丸能明显改善ＭＳＧ－大鼠的胸腺与淋巴细胞增殖反应的异常。提示：１．下丘脑弓状核参与细胞免疫功能的调节；２．左归丸能明显改善ＭＳＧ－大鼠的胸腺与淋巴细胞增殖反应的异常     

左归丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度左归丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。方法:应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,并传代扩增,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度左归丸干预组,采用MTT比色法观察不同浓度左归丸水提液干预后BMSCs增殖的情况。结果:采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态以长梭形为主,呈集落样生长。体外培养的BMSCs免疫组织化学鉴定显示CD44,CD29呈阳性表达,CD34呈阴性表达。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,相当于生药质量浓度2.5～4 g·L-1的左归丸水提液干预24 h后,干预组吸光度均明显增高(P<0.01),而与其他浓度相比1 g·L-1时左归丸水提液促进BMSCs增殖的作用最强。结论:所培养的大鼠骨髓基质细胞在细胞表型表达和细胞形态上具备BMSC特征。左归丸水提液在一定浓度范围内可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

脑络欣通胶囊对脑缺血再灌注模型大鼠血小板聚集及血栓形成的影响

目的:观察脑络欣通胶囊对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血小板聚集和血栓形成的影响。方法:雄性SD大鼠,随机分为假手术组10只,造模组60只,线栓法制备大脑中动脉闭塞缺血-再灌注(MCAO/R)模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,阿司匹林组(0.010 g·kg-1),脑络欣通高、中、低剂量组(4.500,2.250,1.125 g·kg-1)。透射电子显微镜观察海马神经元超微结构变化,检测各组血清中血栓素B2(TXB2),6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α),血小板聚集率及体内血栓形成时间。结果:与假手术组比较,模型组损伤大鼠的神经元的病理形态损坏严重,大鼠血清中TXB2水平明显升高,6-keto-PGF1α水平明显降低,模型组大鼠血小板在1,2,5 min的聚集率和最大聚集率明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,脑络欣通胶囊低、中、高剂量组损伤大鼠的神经元的病理形态学均有明显改善,明显降低大鼠血清中TXB2水平,明显升高6-keto-PGF1α水平,1,2 min时,脑络欣通3个剂量组均明显降低大鼠血小板的聚集率,5 min时,低、高剂量组均明显降低大鼠血小板聚集率,低、中剂量组5 min内的最大聚集率,脑络欣通胶囊低、中剂量组大鼠体内血栓形成时间显著延长(P0.05,P0.01)。结论:脑络欣通胶囊具有抑制脑缺血再灌注损伤模型大鼠血小板的聚集和血栓形成,对缺血性脑血管疾病具有一定的保护作用。     

人参皂苷Rg_1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响。方法从孕16天SD大鼠胚胎脑组织中分离培养胚胎神经干细胞,免疫组化法进行神经干细胞的鉴定及增殖鉴定,采用稀释法筛选和检测人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响。结果剂量筛选结果显示,人参皂苷Rg1组(100、4、0.8μmol/L)神经球数明显增加。选定人参皂苷Rg140、4、0.4μmol/L作为高、中、低剂量进行进一步实验研究,与对照组相比,人参皂苷Rg1高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加。结论人参皂苷Rg1可以明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用。     

脑络欣通方对脑缺血大鼠血管再生及局部脑血流量的影响

目的:探讨脑络欣通方对大脑中动脉闭塞模型大鼠缺血再灌注(MCAO/R)损伤后大鼠血管新生及局部脑血流量(r CBF)的影响。方法:Wistar大鼠90只随机分为假手术组、模型组和脑络欣通组,采用线栓法制作MCAO/R模型,每组分为3,7,14 d共3个时间点的亚组,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织匀浆中内皮素(ET)和血小板生成素(TPO)水平,免疫组化法检测脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,运用激光多普勒仪动态观察r CBF。结果:与假手术组比较,模型组TPO和ET水平明显升高,VEGF蛋白表达增加,r CBF降低;与模型组比较,脑络欣通组TPO和ET水平显著降低,VEGF蛋白表达增加,r CBF明显恢复;同组内比较,脑络欣通组第7天和第14天较第3天TPO水平显著下降,第7天和第14天ET水平较第3天明显下降,第14天较第3天VEGF蛋白表达增加,第14天r CBF较第3天显著增加。结论:脑络欣通冻干粉通过调节模型大鼠凝血纤溶调节因子和VEGF,促进血管新生而改善血流状态,提高局部脑血流量来发挥对缺血性脑血管病的治疗作用。     

灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

目的探讨灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓自身神经干细胞增殖和分化的影响。方法将成年SD 大鼠随机分成损伤不用药组和损伤用药组。对两组动物 T12脊髓段施行右侧半横断后,在其腹腔内注射溴脱氧尿嘧啶(5’-Bromo-2’-deoxyuridine,BrdU 50mg/kg),每天2次,连续注射10天。损伤用药组动物胃饲灵芝孢子。在脊髓损伤后2周和4周,用免疫荧光组织化学法检测两组动物脊髓中央管室管膜细胞的 BrdU、nestin、neurofilament(NF)、oligodendrocyte specific protein 和 glial fibrillary acidic protein(GFAP)标记物,并分析其增殖和分化情况。结果损伤用药组大鼠脊髓室管膜细胞 BrdU 阳性染色数量[(45.67±3.62)个]高于损伤不用药组[(29.91±3.68)个]。在脊髓白质中,有些 BrdU 阳性细胞同时表达 oligodendrocyte specific protein 或nestin 或 NF 或 GFAP。结论灵芝孢子能够促进大鼠受损伤脊髓中央管室管膜细胞增殖,少数增殖后的细胞能分化为神经干细胞、神经元...