丙戊酸抗裸鼠Kasumi-1细胞移植瘤血管新生的作用研究

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸（VPA）体内、体外抑制急性髓系白血病血管新生及其作用机制。用不同浓度的VPA处理人t（8;21）急性白血病细胞株Kasumi-1细胞3d后用RT-PCR及Westernblot分析细胞Angl、Ang2mRNA及蛋白水平的变化;建立Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤模型,采用RT-PCR、Westernblot的方法分析对照组和VPA治疗组瘤组织ang]、Ang2、VEGFmRNA及蛋白水平的变化,免疫组织化学的方法分析瘤组织CD34及Angl、An蛇蛋白水平的改变。结果表明,VPAl-3mmol／L处理3d能够下调Kasumi-1细胞AnglmRNA（3mmol／L组0．040±0．008,对照组O．360±0．116）、Ang2mRNA（3mmol／L组0．146±0．038,对照组0．540±0．049）及蛋白的相对表达,呈浓度依赖性;VPA500mg／kg,ip,处理14d能够明显降低裸鼠瘤组织Angl、Ang2、VEGFmRNA及蛋白的相对表达（P〈0．01）,并能明显减少荷Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤微血管密度（8．470±0．3001352．600±O．200）。结论：VPA可能通过调节血管生成素及VEGF的表达,阻碍白血病的血管新生,从而抑制白血病细胞浸润、迁移。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞细胞周期的阻滞作用及其机制探讨

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对白血病细胞系Kasnmi-1细胞周期的影响并探讨其分子机制.方法 不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,碘化丙锭染色流式细胞术分析细胞周期的变化.RT-PCR及Western blot方法 分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21 WAF1/CIP mRNA或蛋白水平变化.结果 ①VPA抑制Kasumi-1细胞的细胞周期,使其阻滞于G0/G1期.3 mmol/L VPA处理3 d,G0/G1期细胞由(50.7±2.8)%上升至(80.7±1.7)%.②以3 mmol/LVPA处理Kasumi-1细胞不同时间,与对照组比较,3 mmol/L VPA组cyclin D1 mRNA表达水平下调;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3 d,结果 发现随着VPA药物浓度增加cyclin D1 mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性.③VPA诱导p21WAF1/CIP mRNA表达明显增加,呈现时间及剂量依赖性.不同浓度VPA处理细胞3 d时,随着用药浓度的增加,p21WF1/CIP蛋白相对表达水平增加,3 mmol/L VPA处理细胞2 d与0 d比较,p21 WAF1/CIP蛋白相对表达水平明显增加(2.498±0.240对0).结论 VPA可以通过对cyclin D1及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF1/CIP调节使Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期.     

高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞Ang-2、Tie-2、VEGF的变化及氯沙坦对其的影响

目的:研究高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞血管生成素-2(Ang-2)和其受体Tie-2及血管内皮生长因子(VEGF)的变化以及血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦对其的影响.方法:细胞同步化后分为对照组(含糖5.5 mmol/L)、甘露醇组(含糖5.5 mmol/L +19.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(含糖30 mmol/L)、氯沙坦组(含糖30 mmol/L + 10-5 mol/L 氯沙坦),培养48 h.real-time PCR法检测Ang-2、Tie-2、VEGF mRNA表达,western blot法检测Ang-2、Tie-2、VEGF蛋白表达. 结果:Ang-2、Tie-2、VEGF mRNA和蛋白在对照组及甘露醇组仅有少量表达,而在高糖组明显升高(P ＜ 0.05),氯沙坦组Ang-2、Tie-2、VEGF mRNA和蛋白的水平较高糖组出现下调(P ＜ 0.05). 结论:Ang-2及VEGF参与糖尿病肾损害的发生,氯沙坦可能通过下调这些血管生长因子的表达发挥肾保护作用.     

人髓性白血病细胞VEGF及其受体的检测

目的 建立人髓性白血病细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体KDR和Flt-1在基因转录和蛋白质水平上的检测方法,为临床判断白血病患者的预后提供技术支持。方法 用RT-PCR测定K562和HL-602种白血病细胞VEGF及其受体mRNA表达,免疫组织化学染色法检测VEGF及其受体蛋白表达;ELISA法检测细胞上清液中VEGF的分泌水平。结果 2种髓系白血病细胞均检测到VEGF的基因转录和蛋白表达。HL-60细胞同时表达Fh-1和KDR2种受体,而K562细胞仅有受体Flt-1的表达,未见受体KDR的mRNA和蛋白表达。细胞培养上清液中检出VEGF的高分泌。结论 VEGF及其受体在髓性白血病细胞表达增高,但不同细胞系VEGF受体表达有差异。VEGF及其受体在白血病的发生、发展中可能起重要作用。     

丙戊酸钠逆转Kasumi-1白血病细胞株AML1-ETO融合蛋白转录抑制的作用

本研究探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂（HDAC）丙戊酸钠（VPA）逆转Kasumi-1白血病细胞株AML1-ETO融合蛋白转录抑制机制的作用。Kasumi-1细胞经不同浓度VPA处理不同时间,采用半定量RT—PCR分析AML1-ETO、AML1及cyclinD2mRNA水平的变化情况。结果表明：不同浓度VPA处理Kasumi-1不同时间,AML1-ETOmRNA水平无明显变化;1—3mmol／LVPA处理Kasumi-1细胞3天时,与对照组比较,AML1mRNA表达水平增高,呈现剂量依赖性,差别具有统计学意义。以3mmol／LVPA处理Kasumi-1细胞,与对照组比较,3mmol／LVPA组cyclinD2mRNA表达水平降低;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3天,结果发现随着VPA药物浓度加大cyclinD2mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性,差别具有统计学意义。结论：VPA能通过抑制HDAC的活性,消除AMLl／ETO融合蛋白的转录抑制并增加aml-1基因转录,下调aml-1靶基因cyclin D2 mRNA的表达。     

血管内皮细胞生长因子及其受体KDR、Flt1在急性髓系白血病中的表达及其意义

目的　分析血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体KDR、Flt1在急性髓系白血病 (AML)中的表达和意义。方法　用RT PCR方法检测VEGF及其受体KDR、Flt1mRNA表达 ,ELISA法检测血浆中VEGF水平。结果　 13个髓系白血病细胞系VEGF、KDR及Flt1mRNA表达阳性率分别为 10 0 %、5 3 8%和 92 .3 %;39例治疗前AML患者有 32例检测了骨髓单个核细胞 (BMMNC)VEGF、KDR及Flt1mRNA的表达 ,其阳性例数分别为 2 1例 ( 6 5 .6 %)、1例 ( 3.1%)和 17例 ( 5 3 .1%) ,3名健康献髓者BMMNC及 2名健康人骨髓CD34 +细胞均不表达VEGF及其受体。 39例治疗前AML患者血浆VEGF水平为 ( 135 .3±87.9)ng/L ,较 15例治疗后获完全缓解 (CR)的AML患者 [( 80 .6± 36 .9)ng/L]及 12名正常对照 [( 80 .6± 33 .1)ng/L]明显升高 (P =0 .0 2 8,0 .0 0 7)。 39例患者中有 35例接受常规化疗 ,2个疗程后未达CR的15例患者血浆VEGF水平为 ( 188.2± 118.6 )ng/L ,明显高于 2个疗程内获CR的 2 0例患者血浆VEGF水平 [( 10 4.2± 30 .9)ng/L](P =0 .0 0 4)。结论　AML白血病细胞不同程度表达VEGF及其受体mRNA ,AML患者血浆VEGF水平升高 ,VEGF水平影响患者化疗的疗效。     

急性髓系白血病患者治疗前后血管内皮生长因子及其受体的变化

目的　探讨急性髓系白血病 (AML)中血管生成的作用。方法　用ELISA法检测AML骨髓单个核细胞培养上清血管内皮生长因子 (VEGF)的表达 ;应用免疫组化技术检测 2 8例初治AML患者治疗前后的骨髓活检标本VEGF及受体Flt 1、KDR和微血管密度 (MVD)的变化。结果　AML患者骨髓细胞VEGF的分泌量 (42 5 .31ng L)大于对照组 (14 0 .12ng L)。初治AML患者骨髓病理组织中VEGF、KDR和Flt 1的表达 (分别为 78.6 %、78.6 %和 7.1% )高于对照组 (分别为 10 .0 %、5 .0 %和 5 .0 % ) (P值均 <0 .0 5 ) ;VEGF与MVD及KDR呈正相关 ;化疗后完全缓解组骨髓组织的VEGF、KDR阳性率及MVD明显下降 (P <0 0 5 ) ,化疗后未完全缓解组的VEGF、KDR阳性率及MVD与治疗前相比无显著性下降(P >0 .0 5 ) ;Kaplan Meier分析显示治疗前VEGF阳性组和MVD高表达组的生存时间分别大于VEGF阴性组和MVD低表达组 (P <0 0 5 ) ,但治疗前KDR表达情况与生存时间无关 (P >0 .0 5 )。结论　AML骨髓组织中存在血管生成 ,VEGF KDR信号传导通路在急性白血病血管新生中起主要作用 ,VEGF的表达与AML的预后有关。     

绿茶的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抗血液肿瘤血管新生机制的研究

目的 对绿茶的丰要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对血液肿瘤血管新牛抑制作用进行研究,为EGCG用于白血病治疗提供依据.方法 采用MTT法,测定不同浓度的EGCG对白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用,并采用RT-PCR方法检测EGCG处理前后K562细胞血管内皮牛长因子(VEGF)mRNA的表达情况.结果 EGCG可明显抑制K562增殖,IC50值为118.34μM,并可以下调K562细胞VEGF mRNA的表达.结论 EGCG可下调VEGF mRNA的表达,从而减少VEGF的分泌.既可以减少VEGF的旁分泌,减弱其促进内皮细胞增生的作用;又可以减少VEGF的自分泌,削弱其通过白血病细胞细胞表而VEGF受体促进肿瘤细胞的分裂增殖、抑制肿瘤细胞的凋亡的作用.从不同途径发挥其抗血液肿瘤血管新生的作用.     

NGF预处理对AMI大鼠心肌VEGF及其受体KDR/flk-1表达的影响

目的研究神经生长因子（NGF）预处理对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌中VEGF及其受体KDR/flk-1表达的影响。方法雄性成年Wistar大鼠60只,随机分为3组：NGF预处理组和非NGF预处理组和对照组（每组20只）。大鼠NGF预处理使用注射用鼠神经生长因子（0.5μg/kg）尾静脉注射。采用电凝烧灼左冠状动脉前降支制作大鼠急性心肌梗死动物模型。观察各组大鼠心肌损伤的病理改变;以RT-PCR方法检测大鼠心肌组织中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体KDR/flk-1的表达情况。结果大鼠心肌坏死面积组间比较差异有统计学意义（F=12.13,P〈0.01）,NGF预处理组（25.41±9.06）%明显少于非NGF组（40.08±11.38）%,P〈0.01。大鼠心肌VEGF、KDR/flk-1mRNA表达组间比较差异有统计学意义（F=18.23,14.10,P均〈0.01）;NGF预处理组VEGF（45.41±11.54）、KDR/flk-1（47.40±7.83）均高于非NGF组VEGF（32.34±8.10）、KDR/flk-1（31.09±7.88）,P均〈0.01。大鼠心肌VEGF mRNA表达与其受体KDR/flk-1 mRNA表达呈正相关关系（r=0.691,P〈0.01）。结论 NGF预处理可能通过上调VEGF及其受体表达,增加大鼠心肌中新生血管密度,减轻AMI大鼠心肌损伤。     

低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

双龙丸对大鼠实验性心肌梗死血管新生的影响与分子学机制

目的 探讨双龙丸对缺血心肌血管新生的影响和分子学机制。方法 63只Wistar大鼠参照Drexler法结扎冠状动脉左前降支，制成急性心肌梗死(AMI)模型。随机分为双龙丸大剂量组(6．72g／kg)、双龙丸小剂量组(3．36g/kg)、AMI对照组(生理盐水灌胃)，另取11只大鼠为正常对照组(生理盐水灌胃)，各组治疗观察半数至2w、半数至4w结束。应用免疫组化两步法检测AMI大鼠缺血心肌新生血管数量、免疫组化SP法检测缺血心肌血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bPGF)的表达、逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)法检测缺血心肌VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。结果 双龙丸大、小剂量组各期的缺血心肌新生血管数均比AMI对照组增多，且第4w比第2w更显著；第2w时，大剂量组VEGF较AMI对照组、bFGF较小剂量组和AMI对照组均增高，大剂量组4w时VEGF较2w降低；大、小剂量组各期VEGF mRNA的表达均比AMI对照组增高，其第4w均较第2w为低；而bFGF mRNA的表达则仅见大剂量组第2w时高于其他组；以上各组比较均具有显著性差异(P＜0．05—0．01)。结论 双龙丸能够促进缺血心肌血管新生；大剂量应用对VEGF、bFGF及其mRNA均有明显的上调作用。     

bFGF和VEGF在急性白血病中的表达及对HL-60细胞生长的影响

为了研究急性白血病患者血清及细胞株培养上清中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达水平 ,并初步探讨白血病患者VEGF水平的评价方法以及VEGF特异性反义寡脱氧核苷酸(ASODN)的抗血管生成作用 ,用夹心ELISA法测定患者血清、细胞株 (HL 6 0、U937、NB4、JM和K5 6 2 )培养上清中bFGF和VEGF浓度 ,比较其差异 ,将VEGF血清浓度测定值 (pg ml)、血清浓度测定值经外周血血小板计数标化后标化值VEGF PLT(pg 10 6 )分别作为比较指示 ;HL 6 0细胞经不同浓度VEGFASODN作用后 ,利用噻唑蓝、ELISA法分别测定靶细胞的生长状态及其VEGF分泌水平。结果发现 :①急性白血病患者血清bFGF阳性率 (37.5 % )高于健康对照者 (10 % ) (P <0 .0 1) ,在 5株白血病细胞株中 ,NB4 、U937和K5 6 2细胞上清中检测到了bFGF表达 ;②急性白血病患者及健康者血清VEGF测定值差异无统计学差异 ,但二者标化值测相差显著 (P <0 .0 5 ) ;除U937外 ,其余 4株细胞株培养上清中均有VEGF表达 ;③HL 6 0细胞经 0 .5 ,1及 5 μmol LVEGFASODN作用 2 4小时后 ,其存活率与对照组相比明显降低 (P <0 .0 5 ) ;经 1,5 ,2 0 μmol LVEGFASODN作用 2 4小时后 ,HL 6 0细胞培养上清中VEGF浓度均明显低于对照 (P <0 .0 5 )。结论 :     

血管内皮细胞生长因子及其受体在正常核型急性髓系白血病中的表达及其意义

目的 分析血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR、Flt1在正常核型急性髓系白血病(NC-AML)中的表达和意义.方法 用RT-PCR方法检测VEGF及其受体KDR、Flt1 mRNA表达,荧光定量PCR分析细胞中VEGF及其受体表达丰度.结果 45例NC-AML患者骨髓单核细胞(BMMNC)中,表达VEGF、KDR及Flt1 mRNA阳性的例数分别为42例(93.3%)、34例(75.6%)和37例(82.2%),而10名健康对照者经RT-PCR未检测到VEGF及其受体表达.筛选符合要求的标本进行荧光定量PCR检测,发现化疗前后细胞VEGF的表达存在显著性差异(P<0.05),化疗后获完全缓解的患者细胞VEGF表达水平仍较10名健康对照者升高(P<0.05),但其受体表达量与对照组比较未见显著性差异.结论 NC-AML白血病细胞不同程度表达VEGF及其受体,其中VEGF表达水平明显升高,通过对细胞VEGF表达水平的检测,对评估NC-AML白血病的进展、预测患者预后以及对微量残留白血病细胞的监测具有重要意义.     

肝源性溃疡黏膜中VEGF、bFGE表达的临床意义

目的 探究肝源性溃疡中胃黏膜组织血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达,分析其与病情进展及患者并发症发生率的关系.方法 临床选取2014年7月至2016年5月133例肝硬化伴门静脉高压合并胃或十二指肠溃疡患者,内镜下活检溃疡边缘及正常黏膜组织为对照.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常胃黏膜(133例)、胃溃疡活动期(GA期52例)、胃溃疡愈合期(GH期45例)、胃溃疡瘢痕期(GS期36例)患者黏膜组织VEGF mRNA、bFGF mRNA的表达情况,并与患者的并发症发生率行Spearman秩相关分析.结果 溃疡边缘组织VEGF mRNA、bFGF mRNA的表达量显著高于正常黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.05);GH、GS期患者VEGF mRNA的表达量明显高于GA期患者,差异有统计学意义(P＜0.05),GS期患者bFGF mRNA的表达量明显高于GA期患者,差异有统计学意义(P＜0.05);Spearman秩相关分析结果示VEGF mRNA、bFGF mRNA的表达量与患者溃疡并发症发生率呈负相关(rs=-0.672,-0.508,P＜0.05).结论 VEGF mRNA、bFGF mRNA在肝源性溃疡的修复过程中可能发挥重要的促进作用,是潜在的临床标志物.     

比较VEGF及其受体KDR在结直肠腺瘤和腺癌中的表达及与预后的关系

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体KDR在结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达和临床病理的关系,了解VEGF和KDR的表达与预后的关系。方法选择结直肠腺瘤和结直肠腺癌组织标本各100例,采用免疫组织化学染色法检测VEGF和KDR在结直肠腺瘤和结直肠腺癌中的表达情况,分析VEGF及KDR与各临床病理因素及预后之间的关系。结果VEGF和KDR在结直肠腺癌组中的阳性表达明显高于结直肠腺瘤组,二者表达差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGF和KDR在结直肠腺癌组织中的阳性表达与肿瘤大小、转移情况、浸润深度相关,差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGF和KDR在结直肠腺瘤组织中的表达与增生程度相关,差异有统计学意义（P〈0．05）;结直肠腺癌患者的Kaplan-Meier生存曲线显示,VEGF阳性表达较VEGF阴性表达术后生存率低（P〈0．01）,KDR表达与患者术后生存率差异无统计学意义（P〉0．01）。结论结直肠腺癌组织中VEGF和KDR的表达与肿瘤大小、转移情况和浸润深度密切相关,VEGF阳性表达较VEGF阴性表达者术后生存率低。VEGF和KDR在结直肠腺瘤中的表达与增生程度存在相关性。     

大肠癌术后复发与血管内皮细胞生长因子及其受体表达的关系

目的：研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体（KDR）与大肠癌术后复发的关系。方法：应用免疫组化SP法检测94例大肠癌标本VEGF及KDR蛋白表达，分析VEGF和KDR与临床病理因素、微血管密度（MVD）及术后复发的关系。结果：VEGF和KDR表达与大肠癌Duke分期、淋巴结转移密切相关（P＜0．01），而与组织学分型无关（P＞0．05）。VEGF和KDR表达阳性组MVD显著高于阴性组（P＜0．01）。大肠癌术后复发与VEGF、KDR密切相关，VEGF组（P＜0．01），KDR组（P＜0．05）。但各复发转移部位的关系并不密切（P＞0．05）。结论：VEGF和KDR与大肠癌血管生成相关，在大肠癌的发生、发展及术后复发中起重要作用，可反映大肠癌的进展情况，并可作为判断预后的指标。