SARS冠状病毒N基因的扩增与克隆

目的 RT—PCR扩增、克隆SARS冠状病毒N蛋白基因。方法 根据GenBank数据库中TOR2株的全基因组序列，利用Primer Premier5．0软件设计引物RT-PCR巢式扩增SARS冠状病毒的N基因，PCR产物克隆后进行测序鉴定。结果 序列分析表明。pMD18-T载体中已成功重组了N基因。结论 N蛋白基因的扩增、克隆成功，为N蛋白的表达、N蛋白结构与功能的研究奠定了基础。     

SARS冠状病毒医院感染的防治

目的 探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(简称SARS-Cov)医院内感染的流行特点和预防措施，为临床诊治提供依据。方法 根据诊断SARS的临床实践和体会，参考相关资料，综合评价本病的早期诊断和治疗。结果 SARS-Cov医院内感染医务人员主要由于接触门诊首诊或抢救严重SARS患，感染主要由于与患间近距离接触，预防主要是有效切断传播途径，保护高危人群。结论 SARS由冠状病毒引起，诊断主要依据流行痫学和临床综合资料，积极有效的内科综合治疗可提高SARS的治愈率，降低死亡率。     

SARS冠状病毒S蛋白基因片段的表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb).方法: 原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确.将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒转化E.coli M15诱导表达His-S1m蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果: 表达并纯化了重组蛋白His-S1m,获得1株抗His-S蛋白的mAb1H2.Ig亚类鉴定为IgG1a,轻链为κ型.经Western blotting检测,mAb1H2与S蛋白发生特异性反应,而与His蛋白无交叉反应.结论: 成功表达了重组S蛋白并制备了特异性mAb,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究S蛋白的功能奠定了基础.     

SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性

①目的 了解SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。②方法 分别将具有明确致病性的22种冠状病毒(包括6株SARS病毒)S蛋白编码序列和22种冠状病毒全基因序列(包括11株SARS病毒)进行对排并绘制系统发生树，观察具有不同组织嗜性和宿主范围的冠状病毒所处的位置，预测SARS病毒的组织嗜性和宿主趋向性。③结果 在依据编码S蛋白序列和全基因序列所绘制的系统发生树中各冠状病毒的分支明确，与其在美国国立医学图书馆(NCBI)中的分类相一致。④结论 SARS病毒县需特病毒的一个新的变种，具有呼吸道上皮嗜性。     

SARS相关冠状病毒S1融合蛋白的原核表达与纯化

目的：克隆严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARS-CoV)S1蛋白编码DNA，构建原核表达质粒pGEX-5T／S1，并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法：采用PCR方法扩增合成S1片段，并克隆入载体中，经双酶切鉴定和测序后把S1序列定向插入原核表达载体pGEX-5T的多克隆位点，转化大肠杆菌K802，将纯化后的融合蛋白用于SARS—CoV抗体阳性血清的检测。结果：GST—S1融合蛋白以可溶形式表达，纯化后的蛋白用ELISA法检测，结果与对照相符。结论：成功诱导原核表达并纬化出融合蛋白S1，为将其应用于SARS—CoV的特异性检测和亚单位疫苗研究奠定了基础。     

SARS相关冠状病毒S2基因的克隆及其DNA疫苗的免疫效果

目的：构建抗原基因为SARS相关冠状病毒(severe acute resplratory syndrome coronavtrus，SARS—CoV)S2基因的DNA疫苗，将其接种小鼠后观察病毒特异性抗体产生情况。方法：将合成的S2基因片段克隆至真核表达载体，随之将质粒进行小鼠肌内接种免疫，定期检测血清中抗SARS—CoV的病毒特异性抗体水平。结果：疫苗接种后第2周就能检测出病毒特异性抗体，随着时间的延续，抗体水平逐步升高，而空质粒对照组未检测出明显的特异性抗体。结论：以S2为抗原基因的DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体。     

抗SARS冠状病毒S1蛋白N端249至667的单克隆抗体的制备与鉴定

目的 在获得了具有免疫原性的SARS冠状病毒S1蛋白片段的基础上，制备和鉴定特异性抗该段S1蛋白单克隆抗体(mAb)。方法 原核表达含S蛋白受体结合区的SARS冠状病毒S1蛋白片段Slc(N端249-667氨基酸残基)，其免疫原性经SARS病人恢复期血清鉴定后免疫BALB／c小鼠，按常规方法制备单克隆抗体，并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果 筛选出3株特异性针对SARS冠状病毒S1蛋白N端249-667的mAb杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定1株为IgG1，2株为IgG2a，经免疫荧光鉴定与人冠状病毒株229E和OC43无交叉反应。结论 获得3株抗SARS冠状病毒S蛋白受体结合区特异性单克隆抗体。为建立新的SARS冠状病毒检测方法的和进一步研究S蛋白的功能奠定了基础。     

SARS冠状病毒刺突蛋白编码基因及氨基酸序列的同源性分析

①目的 分析严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒刺突蛋白(S蛋白)编码基因及氨基酸序列的变异情况，并在GenBank中寻找其同源序列。②方法 将网上公布的具有全基因序列的12株SARS冠状病毒S蛋白的编码基因序列及氨基酸序列应用Clustal W方法对排分析变异情况，并应用GenBank的Blast对排功能寻找被GenBank收录的同源序列。③结果 SARS冠状病毒S蛋白相对比较保守，变异率较低，其氨基酸序列与鼠的肝炎病毒氨基酸序列有较高的同源性，某些核苷酸序列与人的基因组有同源性。④结论 S蛋白编码基因及氨基酸序列相对保守，为预防性疫苗的研发提供了可行性；据其同源基因及蛋白序列可以预测S蛋白的二、三级结构，对推测SARS可能的发病机制有积极作用。     

SARS期间医院管理工作的体会

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是一种人类尚未了解和研究清楚的传染性疾病,我国规定按照甲类传染病管理.2003年5月初,根据北京市SARS疫情情况,我院被要求在短短的10天内从综合医院转成SARS专病医院.这对医疗管理工作如何重新组织、整合医院所有的医疗技术力量、如何安排传染病专科医院的医疗流程、如何从管理角度提高危重患者的抢救成功率、降低死亡率等是一个挑战.     

北京409例SARS 病人的呼吸系统症状分析

目的分析传染性非典型肺炎的呼吸系统症状学的特点。方法回顾性分析北京地区6家SARS定点医院收治的409例传染性非典型肺炎病例的临床资料。结果409例临床确诊的SARS患者的呼吸系统症状中以咳嗽为最主要表现(306例，7418％)，其次为胸闷(221例，54．0％)、咯痰(202例，49．4％)，血丝痰最少见(46例，11．2％)。呼吸系统症状在病程第1d的出现率最高，咳嗽、咯痰、血丝痰、胸闷、胸痛的出现率分别为：45．09％(138例／306例)、30．2％(61例／202例)、15．22％(7例／46例)、23．98％(53例／221例)、17．91％(12例／67例)。在病程第8d上述症状的出现率出现第二峰。各呼吸系统症状与血象、胸片的严重程度之间似乎无明显的相关性。结论SARS是SARS-CoV所致的新型烈性传染病，肺为该病毒攻击的主要靶器官，呼吸系统症状是SARS的主要临床表现，其中以咳嗽为最常见，次之为胸闷、咯痰，以血丝痰最少见。目前尚无早期确诊SARS的金标准，也没有针对该病毒的特异性治疗方法；流行病学资料及临床特征是早期诊断的主要依据。     

SARS相关冠状病毒的基因组和主要蛋白酶的研究进展

严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)在2003年我国南方暴发流行,波及众多国家和地区,引起了全球关注.在SARS 病原体被确证为一类新的冠状病毒并被命名为SARS coronavirus(SARS-CoV)之后,全球对SARS相关冠状病毒进行了广泛的研究.至目前,SARS-CoV的基因组已在多个实验室被测定,并通过多种途径分析了其基因结构特征,研究了基因复制与翻译中相关的蛋白酶特性.SARS-CoV具有复杂的基因复制和翻译调节机制,如sg mRNA的不连续转录、核糖体的框移、翻译后的水解过程等等.其中SARS-CoV的3种蛋白酶(解旋酶和另外2种半胱氨酸蛋白酶)在病毒的复制、转录、翻译和翻译后加工等过程中发挥重要的生理和病理作用.本文综述了SARS-CoV的基因组成和主要蛋白酶的结构及其功能等方面的研究进展.     

乙酰半胱氨酸对SARS肺部影像吸收缓慢的治疗作用

传染性非典型肺炎，为一种新发现的由冠状病毒亚型引起传染性强的呼吸系统疾病，世界卫生组织将其命名为严重呼吸综合征(SARS)。该病传染性强，病死率高，而且部分患者会遗留肺间质纤维化。我们在北京小汤山医院治疗SARS中，发现部分患者肺部病变吸收缓慢，激素治疗疗效差，采用乙酰半胱氨酸治疗初见疗效，总结报告如下。     

谈传染性非典型性肺炎患者床边拍片的防护措施

传染性非典型性肺炎(严重急性呼吸综合征，Severe Acute Resxpiratory Syndrome，SARS)是一种由新型冠状病毒引起的以肺炎为主要临床表现的呼吸道传染病。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒Spike蛋白诱发小鼠免疫损伤的实验研究

目的 研究严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)的Spike蛋白(S蛋白)引起免疫病理损伤的分子机制.方法 采用信号转导通路发现者基因芯片筛选相关诱导免疫炎症的信号转导通路基因的表达,通过RT-PCR对基因芯片筛选基因进一步验证并观察信号分子阻断剂干预的影响;将SARS-CoV的S蛋白及信号分子阻断剂分别经气管滴注、尾静脉注射的途径感染BALB/c小鼠,通过免疫组织化学观察肺及免疫器官的病理变化.结果 S蛋白诱导了与γ干扰素(IFN-γ)类似的JAK-STAT的信号通路相关基因的表达,RT-PCR证实S蛋白诱导了人支气管上皮细胞的γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)基因表达,该作用能够被JAK3抑制剂完全阻断.经气管滴注或尾静脉注射S蛋白均可引起小鼠肺损伤和脾脏损伤.JAK3抑制剂能够抑制S蛋白诱导小鼠肺内IP-10表达,减轻病理损伤.结论 JAK-STAT信号转导通路的激活可能在SARS-CoV的S蛋白诱导的以IP-10为代表的炎症级联中起重要作用,该发现可为发展抗SARS病毒诱导的免疫损伤治疗提供新的策略.