缺氧诱导因子-1对缺氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的调控作用

【目的】探讨细胞凋亡在缺氧肺损伤的作用及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对细胞凋亡的调控作用。【方法】体外培养大鼠肺泡上皮细胞加入氯化钴(cobalt chloride,COCl2)制作细胞缺氧模型,将小分子干扰缺氧诱导因子-1(HIF-1αsmall interference RNA,HIF-1αsi RNA)有效的转染至细胞内,检测常氧、缺氧4、24 h、小分子干扰后缺氧4、24 h后HIF-1αmRNA的表达水平变化,同时应用荧光显微镜以及流式细胞术检测非转染以及转染组不同缺氧时间细胞凋亡率的变化。【结果】常氧下HIF-1αmRNA表达水平较低,随缺氧时间增加HIF-1αmRNA的表达水平明显升高(P<0.05);HIF-1αsiRNA可有效沉默HIF-1α,下调率为56%、57%(P<0.01)。细胞凋亡率随着缺氧时间延长而增加(P<0.05),48 h细胞开始出现坏死现象;通过HIF-1αsi RNA预处理细胞后,可降低缺氧诱导的细胞凋亡的发生率(P<0.05)。【结论】缺氧引起肺泡上皮细胞的凋亡,随缺氧时间增加凋亡增加,HIF-1α在缺氧诱导细胞凋亡中起着重要的作用,HIF-1αsiRNA可以减少肺泡上皮细胞凋亡的发生。     

RNA干扰β-catenin基因对二氧化硅诱导的MH-S细胞中基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察β-catenin短发夹RNA干扰(shRNA)重组慢病毒对二氧化硅诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S细胞中基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMP)9表达的影响。方法将MH-S细胞分为4组:空白细胞对照组(MH-S)、SiO_2诱导组(silica)、病毒干扰组(silica+LV-shβ-catenin)、病毒对照组(silica+LV-shβ-catenin-NC),除空白细胞对照组外,各组细胞均用终浓度为200μg/ml的SiO_2刺激,培养18 h后,western blot检测各组细胞β-catenin和MMP9蛋白表达水平,realtime-PCR检测各组细胞MMP9 mRNA水平。结果 SiO_2诱导后,与silica组和silica+LV-shβ-cateninNC组比较,silica+LV-shβ-catenin组β-catenin蛋白表达显著降低(P0.05);realtime-PCR和western blot检测结果显示,silica+LV-shβ-catenin组细胞中MMP9的mRNA和蛋白表达较silica组和silica+LV-shβ-catenin-NC组均显著降低(P0.05)。结论重组慢病毒LV-shβ-catenin能够有效抑制经SiO_2诱导的MH-S细胞株β-catenin蛋白表达,并对MMP9的表达有明显抑制作用。     

下调FoxM1 mRNA对子宫颈癌细胞的增殖及侵袭能力的影响

目的探讨宫颈癌细胞中叉头框转录因子(Fox M1) mRNA表达下调对其增殖、侵袭能力的影响。方法采用RNA干扰技术(si Fox M1)下调子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha中的Fox M1 mRNA表达为干扰处理组,未经si FoxM1处理的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha作为对照组,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Westren-blot)检测转染24 h后两组Fox M1 mRNA、蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝染色观察两组转然后的细胞增殖能力,采用Transwell方法检测转染48 h后细胞的侵袭能力。结果 si Fox M1转染处理24 h后,干扰处理组的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha中的Fox M1 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组(P<0. 05); si Fox M1转染处理48 h后,干扰处理组的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha增殖能力均低于对照组(P<0. 05); si Fox M1转染处理48 h后,干扰处理组的子宫颈癌细胞系C33A、Hela及Siha中的穿透Transwell小室的细胞数均低于对照组(P<0. 05)。结论宫颈癌细胞中Fox M1 mRNA表达下调可以抑制肿瘤细胞的增殖及侵袭能力。     

siRNA对胰腺癌细胞c-Src表达的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)干扰胰腺癌PANC-1细胞的c-Src表达,为后续试验做准备.方法 将c-Src siRNA,经LipofectamineTM2000脂质体转染胰腺癌PANC-1细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)分别检测c-Src基因mRNA和c-Src蛋白表达的变化.结果 转染后胰腺癌PANC-1细胞的c-Src的mRNA与蛋白表达明显减少.结论 运用RNA干扰技术,可以有效地干扰胰腺癌PANC-1细胞c-Src的表达.     

参麦注射液对内毒素诱导心肌细胞凋亡的抑制作用及机制

目的 探讨参麦注射液对内毒素诱导心肌细胞凋亡的影响。方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组,内毒素（LPS）处理组,参麦注射液（SMI）+内毒素（LPS）处理组。MTT法检测心肌细胞存活率;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;RT - PCR检测心肌细胞Wnt2、β - catenin mRNA的表达;Western blot 检测心肌细胞内Wnt2、β - catenin蛋白表达。结果 0.8 g/L 与1 g/L SMI组心肌细胞存活率高于LPS组;0.8 g/L 与1 g/L SMI组心肌细胞凋亡率低于LPS组。SMI + LPS组中Wnt2、β - catenin mRNA的表达随SMI剂量的增加而降低,0.8 g/L SMI组中β - catenin mRNA表达低于LPS组,1g/L SMI组中Wnt2、β - catenin mRNA表达低于LPS组; SMI + LPS组中Wnt2、β - catenin蛋白的表达随SMI剂量的增加而降低,0.8 g/L SMI组中β - catenin蛋白表达低于LPS组,1g/L SMI组中Wnt2、β - catenin蛋白表达低于LPS组,差异有统计学意义(P ＜0.05)。结论 参麦注射液对内毒素诱导的乳鼠心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2、β - catenin的表达有关。     

PLB小干扰RNA对感染性休克大鼠左心功能的作用

目的探讨磷酸受纳蛋白(PLB)小干扰RNA对感染性休克大鼠左心功能的影响。方法雌性Wistar大鼠75只,随机分为假手术组、感染性休克组、盐水组、PLB siRNA组和对照组,每组15只,通过腺病毒表达载体构建重组RNA干扰腺病毒表达载体(pAdeno-X-siPLB),并导入大鼠心肌,6周后,测量左室舒张末期压(LVEDP),左室收缩压(LVSP),左室内压最大上升和下降速率(±dP/dtmax),RT-PCR和Western-blotting分别检测PLB表达水平。结果感染性休克组、盐水组PLB mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);PLB siRNA组PLB mRNA表达水平显著低于感染性休克组(P<0.05);感染性休克组、盐水组PLB mRNA表达水平比较差异无统计学意义;感染性休克组、盐水组和PLB siRNA组SR Ca~(2+)-ATPase活力显著低于对照组(P<0.05);PLB siRNA组PLB SR Ca~(2+)-ATPase活力显著高于感染性休克组(P<0.05);感染性休克组、盐水组SR Ca~(2+)-ATPase活力比较差异无统计学意义;感染性休克组、盐水组、PLB siRNA组LVSP、+dP/dtmax、-dP/dtmax显著低于对照组(P<0.05),LVEDP显著高于对照组(P<0.05);PLB siRNA组LVSP、+dP/dtmax、-dP/dtmax显著高于感染性休克组(P<0.05),LVEDP显著低于感染性休克组(P<0.05);感染性休克组、盐水组LVSP、LVEDP、+dP/dtmax、-dP/dtmax比较差异无统计学意义。结论通过构建PLB小干扰RNA,心肌注射后对PLB表达有一定的沉默作用,从而提高SR Ca~(2+)-ATPase活性,提高心脏储备,改善心功能。     

HMGB1对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨高迁移率蛋白1(HMGB1)对缺氧复氧环境下心肌细胞凋亡的影响及机制。 方法 心肌细胞H9C2分为正常组、H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组。其中正常组细胞为正常培养的H9C2细胞,H/R组、siRNA-NC组、HMGB1 siRNA组细胞分别进行缺氧复氧处理,HMGB1 siRNA组、siRNA-NC组细胞在缺氧处理前48 h分别转染HMGB1小干扰RNA(HMGB1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control)。RT-PCR和Western blot检测细胞中HMGB1表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平。 结果 与正常组相比,H/R组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平显著升高(P<0.05),而SOD、p-STAT3水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NC组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、LDH、MDA及SOD水平、STAT3、p-STAT3、Cleaved Caspase-3水平与H/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与H/R组相比,HMGB1 siRNA组细胞中HMGB1 mRNA、HMGB1蛋白、细胞凋亡率、LDH和MDA、 Cleaved Caspase-3水平明显降低,而SOD、p-STAT3水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 HMGB1表达下调可能通过降低缺氧复氧对心肌细胞的氧化损伤而抑制心肌细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶1siRNA提高人宫颈癌HeLa细胞的化疗敏感性

目的探讨应用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达,提高人类宫颈癌He La细胞对顺铂(DDP)化疗敏感性的作用与机制。方法合成针对HDAC1的siRNA采用脂质体法转染宫颈癌He La细胞,将其分为siRNA组、阴性siRNA组及对照组。对照组、siRNA组和阴性siRNA组通过DDP处理后分别作为对照+DDP组、siRNA+DDP组和阴性siRNA+DDP组。采用PCR检测HDAC1 mRNA表达,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测He La细胞对DDP的敏感性。结果与阴性siRNA组及对照组比较,siRNA组He La细胞的凋亡率增加,差异具有统计学意义(P0.05);和阴性siRNA组及对照组比较,siRNA组HDAC1 mRNA表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05),siRNA+DDP组IC50值低于阴性siRNA+DDP组及对照+DDP组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 HDAC1 siRNA可抑制HDAC1基因的表达水平,使组蛋白去乙酰化水平增加,提高宫颈癌He La细胞对顺铂的敏感性。     

快速筛选芳香烃受体基因特异RNA干扰序列的初步研究

目的筛选能诱导人芳香烃受体(AhR)基因表达沉默的特异RNA干扰片段。方法根据RNA干扰设计的原则,选择4个片段,用聚合酶链反应(PCR)方法,以含有人U6启动子的质粒为模板,分别扩增正义和反义小干扰RNA(siRNA)表达盒,纯化后直接转染人支气管上皮细胞(16HBE),抽提细胞总RNA,定量竞争逆转录PCR(RT-PCR)检测目的基因的mRNA表达差异,确定RNA干扰的效率。结果含AhR的干扰序列a493、a671、a1337和a1885的siRNA表达盒对AhR的mRNA表达抑制率分别为61.6%、-0.5%、78.6%和95.4%。结论运用PCR扩增siRNA表达盒从多个候选序列中快速筛选出芳香烃受体有效的干扰序列,为进一步的基因功能研究创造了条件。     

胶质瘤患者中BMI1通过抑制CXXC4表达激活Wnt途径对胶质瘤细胞转移的影响

目的 探究BMI1对胶质瘤的作用及可能的作用机制。方法 收集胶质瘤和正常脑组织各25例。RT-PCR和免疫组化检测BMI1的表达; RT-PCR检测U251和SVGp12细胞中BMI1和CXXC4 m RNA表达; Western blot检测BMI1、CXXC4、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin、β-catenin、C-myc和Cyclin D1表达; Ch IP-PCR实验检测BMI1与CXXC4启动子的结合; CCK-8检测细胞活力; Ed U试剂盒检测细胞增殖; Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果 胶质瘤组BMI1 m RNA表达和免疫组化评分较正常组明显上调(P <0.05)。U251组细胞中BMI1 m RNA和蛋白表达较SVGp12组明显上调(P <0.05),CXXC4 m RNA和蛋白表达明显下调(P <0.05)。BMI1可与CXXC4启动子相结合。si RNA-BMI1+si RNA-CXXC4组细胞中CXXC4 m RNA表达以及CXXC4和E-cadherin蛋白表达较si RNA-BMI1组明显下调(P ...     

靶向EZH2基因的shRNA干扰对人卵巢癌细胞Drosha基因表达的影响

目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因对卵巢癌细胞株A2780的Drosha基因表达的影响。方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞株A2780-shEZH2,实时定量PCR法(qRT-PCR)和免疫印记法(Western blot)检测转染株的Drosha基因表达。结果:以未转染组A2780细胞Drosha的表达水平为100%,EZH2-shRNA转染组A2780-shEZH2细胞Drosha的mRNA及蛋白水平分别上升(53.02±4.32)%和(51.26±1.35)%,与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:沉默EZH2基因可以上调Drosha基因的表达。     

靶向白色假丝酵母菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的小分子干扰RNA对白色假丝酵母菌毒力影响

目的探讨靶向白色假丝酵母菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)的小分子干扰RNA(siRNA)对白色假丝酵母菌SAP的基因表达影响,以期为RNA干扰技术抑制真菌毒力提供实验基础。方法设计并合成SAP靶向的siRNA,用醋酸锂转染白色假丝酵母菌,试验设空白对照组、错义对照组、SAP siRNA组,采用RT-PCR测定转染后白色假丝酵母菌SAP mRNA表达水平,制备BSA培养基测定天冬氨酸蛋白酶活性及小鼠毒力实验。结果与空白对照组、错义对照组相比,转染48h后,siRNA组白色假丝酵母菌中SAP mRNA表达明显下调为(0.51±0.05),siRNA组天冬氨酸蛋白酶活性PA值为(0.84±0.04)均高于空白及错义对照组,小鼠30d死亡率显著降低为20.0%。结论化学合成的靶向SAP siRNA能够下调白色假丝酵母菌中SAP基因的表达,降低白色假丝酵母菌的毒力,该实验为进一步研究应用RNA干扰技术抗真菌治疗奠定基础。     

siRNA干扰β-catenin对亚砷酸钠致大鼠肺组织病变的影响

目的探讨通过si RNA干扰β-catenin对亚砷酸钠致大鼠体内砷水平和肺组织病变的影响。方法将32只健康成年SPF级SD大鼠按体重随机分为对照(超纯水)组、染砷空白对照组、染砷+β-catenin干扰组和染砷+阴性转染对照组,每组8只,雌雄各半。采用自由饮水方式染毒亚砷酸钠溶液(11.25 mg/kg),连续染毒16周;在最后1周,腹腔注射β-catenin si RNA转染试剂和阴性对照转染试剂(0.49μg/g),连续1周。观察大鼠肺组织病理学改变,检测大鼠血砷、尿砷和肺组织砷水平。结果染砷第16周,染砷空白对照组、染砷+β-catenin干扰组和染砷+阴性转染对照组大鼠体重较对照组减轻(P0.05)。染砷+β-catenin干扰组大鼠肺组织病理损伤较染砷空白对照组和染砷+阴性转染对照组严重,出现大部分纤维化,肺泡结构几乎消失。染砷空白对照组、染砷+β-catenin干扰组和染砷+阴性转染对照组大鼠血砷、尿砷和肺组织砷水平较对照组增加(P0.05)。染砷+β-catenin干扰组大鼠血砷、尿砷和肺组织砷水平较染砷+阴性转染对照组增加(P0.05);其中雄性大鼠肺组织砷含量较染砷空白对照组增加(P0.05)。结论长期砷暴露致大鼠肺组织病变;而干扰β-catenin基因后可能增加砷的蓄积,加重大鼠肺组织病变。     

结缔组织生长因子对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞释放IL-17A的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞(16HBE)表达白介素17A(IL-17A)水平的影响。方法采用0、12.5、25、50、100μg/ml石英粉尘染毒人支气管上皮细胞(16HBE)24、48 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,以荧光定量PCR方法检测细胞内CTGF mRNA相对表达水平;用CTGF siRNA干扰16HBE细胞12 h后,加入0、25、50μg/ml石英粉尘染毒48 h,并设同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞为对照组,收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-17A的含量。结果与24 h染尘组比较,石英粉尘染毒16HBE细胞48 h后细胞毒性作用更明显,其细胞存活率随石英粉尘浓度的增加逐渐降低(P0.05);同时细胞内CTGF mRNA相对表达水平和细胞分泌IL-17A的水平均显著升高(P0.05),且呈剂量-效应关系,50μg/ml染毒组细胞内表达CTGF mRNA和分泌IL-17A的水平达到最高;与同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞相比,25、50μg/ml石英粉尘诱导CTGF siRNA干扰组细胞分泌IL-17A的水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论抑制CTGF可显著降低石英粉尘诱导16HBE细胞表达IL-17A的水平,提示CTGF可能参与调节石英粉尘致肺部炎性及纤维化的反应过程。     

雌激素在脓毒症大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢中的作用及其可能机制研究

目的:探讨雌激素在脓毒症大鼠骨骼肌蛋白高分解代谢中的作用及其可能机制. 方法:采用腹腔内注射10 mg/kg内毒素制造脓毒症动物模型.将36只大鼠随机分为正常对照组、脓毒症组、脓毒症+雌激素注射组,每组12只.采用高效液相色谱分析法测定酪氨酸和三甲基组氨酸,实时聚合酶链式反应(RT-PCR)分析肌肉和下丘脑组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、骨骼肌萎缩基因(MuRF-1)、雌激素受体α(ER-α)和雌激素受体β(ER-β) mRNA的表达. 结果:脓毒症组大鼠三甲基组氨酸(3-MH)、酪氨酸(Tyr)水平和萎缩基因MuRF-1 mRNA表达上调(P＜0.05),而且中枢IL-1β mRNA和TNF-α mRNA表达量增加(P＜0.05),ER-α、ER-β mRNA表达量减少(P＜0.05).给予皮下注射雌激素后,外周骨骼肌消耗及中枢炎症减轻,且有显著性差异(P＜0.05).下丘脑中雌激素受体表达与炎性递质表达呈负相关(P＜0.05). 结论:雌激素能缓解骨骼肌高分解代谢,可能与其能减轻下丘脑炎症有关.     

转化生长因子β1小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 观察转化生长因子β1小干扰RNA（TGFβ1 siRNA）对肝星状细胞增殖、活化、胶原合成的影响.方法 利用脂质体将TGFβ1 siRNA表达质粒转入肝星状细胞中,培养72 h后,收集肝星状细胞和上清液,采用Western blotting和RT-PCR法分别检测细胞TGFβ1和a-SMA蛋白表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达;MTT法检测细胞增殖活性和放射免疫法检测培养上清液中IV型胶原和透明质酸含量.结果 与无关对照siRNA组相比,TGFβ1和a-SMA蛋白表达分别下调（79±5）%和（55±4）%（均P〈0.01）;细胞增殖活性降低（25±4）%（P〈0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达分别下调（63±6）%和（57±4）%（均P〈0.01）;培养上清中IV型前胶原和透明质酸含量分别降低（53±8）%和（46±8）%（均P〈0.01）.结论 TGFβ1 siRNA能显著下调TGFβ1的表达,抑制肝星状细胞活化、增殖及细胞外基质的合成和分泌.     

β-淀粉样蛋白对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株内质网钙库的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株(PC-12细胞)内质网钙库的影响。方法用已老化的Aβ25-35[浓度分别为0(对照)、10、15、20μmol/L]对经神经生长因子(NGF)处理过的PC-12细胞染毒24、48、72 h。测定PC-12细胞内[Ca2+]i及内质网Ca2+-ATP、IP3m RNA的表达水平。结果与对照组比较,15、20μmol/L Aβ25-35染毒各时间点PC-12细胞内[Ca2+]i均较高,差异均有统计学意义(P0.05);与染毒24 h比较,各剂量Aβ25-35染毒48 h、72 h时PC-12细胞内[Ca2+]i均增高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各剂量Aβ25-35染毒各时间点PC-12细胞内质网IP3m RNA表达水平均较高,差异均有统计学意义(P0.05);与染毒24 h比较,各剂量Aβ25-35染毒48 h、72 h时PC-12细胞IP3m RNA表达水平均增高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,20μmol/L Aβ25-35染毒24、48 h及各剂量Aβ25-35染毒72 h后PC-12细胞内质网Ca2+-ATP mRNA表达水平均较高,差异均有统计学意义(P0.05);与染毒24 h比较,20μmol/L Aβ25-35染毒48 h及各剂量Aβ25-35染毒72 h时PC-12细胞内质网Ca2+-ATP mRNA表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。随着Aβ25-35染毒剂量的升高和染毒时间的延长,PC-12细胞内[Ca2+]i及内质网Ca2+-ATP、IP3mRNA的表达水平均呈上升趋势。结论 Aβ具有神经毒性,可抑制PC-12细胞的生长,破坏神经细胞内质网及细胞内钙稳态。     

阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白拮抗作用

目的 在体外培养条件下,探讨阿魏酸钠(SF)拮抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)的作用机制.方法 在体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中分别和同时加入SF和Ox-LDL,采用基因芯片技术分析内皮细胞中自细胞介素-1β(IL-1β)的基因表达改变;用实时PCR技术(RT-PCR)检测IL-1βmRNA表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β蛋白表达.结果 基因芯片检测结果显示,HUVEC受Ox-LDL诱导后,IL-1β基因表达上调,比空白对照组高2.4倍;而采用SF+Ox-LDL处理后,IL-1β基因表达下调,是Ox-LDL组的2.6倍.RT-PCR与ELISA结果显示,Ox-LDL组与空白对照组比较,IL-1β mRNA及蛋白表达均明显增高;SF+Ox-LDL组与空白对照组比较,IL-1β mRNA表达差异无统计学意义;蛋白表达则明显降低.结论 结论Ox-LDL可诱导内皮细胞的IL-1β表达明显增强,阿魏酸钠能够抑制Ox-LDL活性,下调IL-1β的mRNA表达,可减少IL-1β对血管内皮细胞的损害.     

RNA干扰对子宫内膜癌HEC-1A细胞PTTG影响的研究

目的 建立靶向垂体瘤转化基因(PTTG)干扰RNA质粒表达载体,观察对子宫内膜癌HEC-1A细胞PTTG的影响.方法 根据PTTG基因设计3对干扰序列,合成特异性干扰PTTG的siRNA片段,并与pSilencer3.0-Hl载体连接,构建3个PTTG干扰载体(pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA),分别命名为PTTG siRNA-1、PTTG siRNA-2、PTTG siRNA-3.利用脂质体将其转染子宫内膜癌系HEC-1A细胞,以带有绿色荧光蛋白的真核表达质粒pSilencer3.0-Hl作为转染效率测定组,免疫荧光技术检测转染效率;应用RT-PCR 及Western blot分别检测PTTG mRNA和蛋白表达水平.结果 序列分析法证明构建pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA质粒成功;RT-PCR和Western-blot分析表明PTTG siRNA-2在mRNA水平和蛋白水平特异性抑制PTTG基因的表达最强.结果 显示HEC-1A细胞阴性对照组荧光表达百分率约为5.3%,转染组荧光表达百分率为74.9%,瞬时转染效率约为69.6%,已经可以满足实验需要.结论 成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体,筛选了干扰效果最强的序列,为进一步实验打下了基础.     

RNAi技术干扰TGF-β/Smads表达对卵巢癌细胞株的影响作用

目的研究RNAi技术干扰TGF-β/Smads表达对卵巢癌细胞株的影响作用。方法将卵巢细胞SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组。采用免疫组化法比较三组的TGFRβⅠ、TGFRβⅡ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7表达水平以及细胞生长速度、凋亡率。结果 siRNA干扰组的TGFRβⅠ、Smad7表达水平显著高于对照组和空白载体组(P<0.05),而TGFRβⅡ、Smad2、Smad3、Smad4表达水平低于对照组和空白载体组(P<0.05)。siRNA干扰组接种24h、48 h和72 h时的吸光度显著低于对照组和空白载体组(P<0.05)。siRNA干扰组的细胞凋亡率显著高于对照组和空白载体组(P<0.05)。结论 RNAi技术可干扰TGF-β/Smads表达,对卵巢癌细胞株的生长具有抑制作用。