更年汤对肾阳虚围绝经期模型大鼠卵巢PI3K/AKT/mTOR蛋白表达的影响

目的:探讨肾阳虚围绝经期模型大鼠在自拟更年汤不同剂量干预下对卵巢PI3K/AKT/mTOR蛋白表达的影响。方法:选24只4～6月龄的青年大鼠作为对照组,构建肾阳虚模型。另采集阴道脱落细胞将10～12月龄雌性SD大鼠筛选出围绝经期模型,并将该模型大鼠随机分为模型组、利维爱组、更年汤低、中及高剂量共5组,每组24只。以上6组均给予相应药物灌胃,末次给药24 h后,检测卵巢组织中IGF-1、IGF-1R及PI3K/AKT/mTOR蛋白表达。结果:更年汤高剂量组、西药组IGF-1、IGF-1R及PI3K/AKT/mTOR蛋白表达均较高,与模型组比较均有统计学差异(P0.05)。结论:更年汤能改善肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR蛋白表达,可能与能调节IGF-1及其受体的表达量有关。     

大豆异黄酮对围绝经期大鼠卵巢FSHR表达的影响

目的：观察大豆异黄酮（SI）对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体（FSHR）表达的影响,初步探讨大豆异黄酮作用于卵巢的分子机制。方法：采用自然老化法建立围绝经期大鼠动物模型,分别给予低剂量（50mg/kg）、中剂量（158mg/kg）、高剂量（500mg/kg）的SI灌胃处理8周。采用放射免疫分析法（RIA）检测血清FSH水平,RT-PCR检测卵巢组织中FSHRmRNA的表达。结果：与青年对照组相比,围绝经期模型组大鼠血清FSH水平有所升高（P〈0.05）,卵巢FSHRmRNA表达显著降低（P〈0.01）。与模型组相比,各SI组血清FSH水平的降低无统计学意义（P〉0.05）,卵巢FSHRmRNA的表达量则显著升高（P〈0.05或P〈0.01）。结论：一定剂量的大豆异黄酮虽不能降低围绝经期大鼠血清FSH水平,但可明显上调衰老卵巢FSHRmRNA的表达。     

补肾温阳祛风散寒法对肾阳虚型围绝经期模型大鼠ER、VEGF、HSP70作用的研究

目的:探讨补肾温阳祛风散寒法对肾阳虚型围绝经期模型大鼠ER、VEGF、HSP70的影响及作用机制。方法:选用自然老化的围绝经期雌性SD大鼠,肌注氢化可的松构建肾阳虚型围绝经期大鼠模型,将模型大鼠随机分为更年汤组、教材方组、替勃龙组、生理盐水组;另选青年组、老年组SD雌性大鼠作为对照组。各组给予相应药物治疗15 d,于第16天处死大鼠,分离摘取双侧子宫,称重了解子宫湿重及子宫指数,采用病理切片观察大鼠子宫形态学变化,免疫组化及原位杂交检测方法观察大鼠子宫雌激素受体(ER)、血管内皮生长因子(VEGF)、热休克蛋白70(HSP70)及信使mRNA(ERmRNA、VEGFmRNA、HSP70mRNA)的阳性表达情况。结果:1更年汤组、教材方组、替勃龙组能明显增加子宫湿重、子宫指数,有统计学意义(P0.05),更年汤组与替勃龙组、教材方组比较差异有统计学意义(P0.05);2更年汤组、教材方组、替勃龙组能抑制子宫萎缩,有显著性差异(P0.01),更年汤组与替勃龙组比较无统计学意义(P0.05);3更年汤组、教材方组、替勃龙组能增加ER、ERmRNA、VEGF、VEGFmRNA阳性表达,有统计学意义(P0.05),但教材方组的上调低于更年汤组及替勃龙组(P0.05),替勃龙组与更年汤组之间比较无显著差异(P0.05);4更年汤组、替勃龙组能增加HSP70及HSP70mRNA阳性表达,有统计学意义(P0.05),更年汤组与替勃龙组比较无显著性差异(P0.05)。结论:自拟更年汤可能通过上调ER、VEGF、HSP70蛋白及基因在子宫中的阳性表达而发挥雌激素样作用,从而达到改善病理状态下的子宫的形态结构及功能的目的。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠下丘脑雌激素受体及肾上腺皮质Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨自拟更年汤治疗围绝经期综合征肾阳虚证的可能作用机制。方法选取11~12月龄动情周期紊乱、动情间期延长的雌性大鼠,并予氢化可的松注射液0.5ml/100 g连续肌注9天,建立肾阳虚型围绝经期综合征大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为更年汤组、右归丸组、替勃龙组和模型组,每组20只。更年汤组大鼠给予自拟更年汤溶液18 g/(kg·d)灌胃,右归丸组给予右归丸溶液16 g/(kg·d)灌胃,替勃龙组给予替勃龙片溶液0.294 mg/(kg·d)灌胃。另取4月龄大鼠(青年组)20只,18月龄大鼠(老年组)20只,模型组、青年组、老年组大鼠用生理盐水4ml灌胃,各组连续灌胃15天。检测各组大鼠下丘脑雌激素受体(ER)和ER mRNA表达及肾上腺皮质Bax、Bcl-2蛋白表达。结果更年汤组与右归丸组、模型组、青年组下丘脑ER阳性表达比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);各组大鼠下丘脑ER mRNA阳性表达均无统计学意义(P0.05)。模型组肾上腺球状带Bax蛋白表达显著增加,而Bcl-2蛋白明显降低,自拟更年汤可下调Bax蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达(P0.05);在束状带,自拟更年汤亦可下调Bax蛋白表达(P0.05),而对Bcl-2蛋白表达影响不明显(P0.05);在网状带,自拟更年汤对Bax蛋白表达具有降低作用,对Bcl-2蛋白明显上调,优于右归丸组和替勃龙组(P0.05)。结论自拟更年汤治疗围绝经期综合征肾阳虚证可能与提高下丘脑ER、肾上腺皮质Bcl-2蛋白表达及降低肾上腺皮质Bax蛋白表达水平有关。     

左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体表达的影响及机制

目的探讨左归饮对围绝经期大鼠卵巢促卵泡激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周,用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢FSHR mRNA及蛋白的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养卵巢颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理因素后FSHR mRNA的表达水平。结果(1)围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达明显低于青年组(P0.01),给予不同剂量左归饮处理后,FSHR表达均显著升高(P0.01)。(2)培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,左归饮提取物可促进FSHR mRNA表达(P0.01);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和福司考林(Forskolin)可进一步促进FSHR mRNA的表达(P0.01),同时加入左归饮提取物和酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein则能明显削弱左归饮的促进作用。结论左归饮可通过上调围绝经期大鼠卵巢FSHR的表达,提高卵巢对卵泡刺激素的反应性,改善围绝经期卵巢功能。左归饮对FSHR mRNA表达的促进作用可能是通过激活腺苷酸环化酶-蛋白激酶A(cAMP-PKA)及酪氨酸蛋白激酶途径实现的。     

紫河车对围绝经期模型大鼠E2、LH、FSH干预作用研究

目的：探讨紫河车对围绝经期大鼠血清雌二醇（E2）、促卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）的影响。方法：选取4 月龄阴道细胞学涂片显示动情周期正常的青年雌性SD 大鼠,和18 月龄阴道细胞学涂片表现为无动情周期的老年SD 大鼠,为正常对照组;选取11~12 月龄阴道细胞学涂片显示动情周期紊乱的围绝经期SD 大鼠,随机分为模型组、治疗组和阳性对照组,正常对照组、模型组给予生理盐水,治疗组给予紫河车,阳性对照组给予教材方,观察紫河车对围绝经期模型大鼠E2、LH、FSH 的干预作用。结果：与青年组比较,老年组、模型组血清E2 水平均显著降低（P＜0.01）,FSH 和LH 水平均显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,治疗组、阳性对照组血清E2 水平均显著升高（P＜0.01）,FSH 和LH 水平均显著降低（P＜0.01）。结论：紫河车及教材方均能降低围绝经期大鼠的FSH、LH 水平和提高雌激素水平。     

更年宁神汤对围绝经大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的影响

目的探讨更年宁神汤对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的影响。方法选用雌性wister大鼠40只,月龄13~15月,随机分为4组:模型组、更年宁神汤高剂量组、更年宁神汤低剂量组、西药利维爱组,每组各10只。另选5月龄、体质量(180±20)g的雌性wister大鼠10只作为青年对照组。中药高剂量组灌服更年宁神汤5.68 g/(kg.d),中药低剂量组更年宁神汤1.42 g/(kg.d),围绝经期模型组灌服等量生理盐水,西药对照组每日灌服3mL西药利维爱溶液0.26 mg/(kg.d),连续治疗4周。采用免疫组织化学法及Westernblot方法检验各组大鼠卵巢颗粒细胞caspase-3蛋白的表达。结果模型组大鼠卵巢中caspase-3蛋白表达高于青年对照组,治疗组caspase-3蛋白表达水平较模型组降低,更年宁神汤高剂量组、利维爱组大鼠卵巢中caspase-3蛋白表达低于模型组差异显著;中药高剂量组与中药低剂量组比较有统计学意义;中药高剂量组与利维爱组比较比较,差异无统计学意义。结论更年宁神汤治疗围绝经期综合征的机制可能是通过抑制卵巢颗粒细胞分泌caspase-3凋亡因子,延缓卵巢衰老,疗效与利维爱相当。     

更年舒胶囊对围绝经期卵巢功能衰退大鼠植物神经功能的调节作用

目的观察更年舒胶囊对围绝经期大鼠植物神经紊乱的调节作用。方法将50只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、更年安组(更年安胶囊0.9g/kg)、更年舒高剂量组(1.0g/kg)、更年舒低剂量组(0.5g/kg)5组,每组10只。除空白对照组外,其余各组大鼠均切除卵巢造成围绝经期卵巢功能衰退模型,药物灌胃治疗连续45天。观察各组大鼠血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量的变化。结果与模型组相比较,更年舒高剂量组E2水平明显升高(P<0.01),更年舒低剂量组以及更年安组升高不明显(P>0.05)。与模型组相比,更年舒高低剂量组、更年安组FSH、LH均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,更年舒高剂量组TSH明显降低(P<0.05),更年舒低剂量组和更年安组则无明显差异(P>0.05)。与模型组比较,更年舒高剂量组T4明显升高(P<0.01),更年舒低剂量组及更年安组与其无明显差异(P>0.05)。结论更年舒胶囊能有效调节围绝经期切除卵巢模型大鼠的下丘脑-垂体-卵巢轴失衡,从而改善植物神经功能紊乱。     

补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素／环磷酸腺苷-蛋白激酶A（follicle stimulating hormone／cyclic adenosine monophosphate-protein kinaseA,FSH／cAMP-PKA）通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精一胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF．ET）患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇（estrogen,E2）、孕酮（progesterone,P）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的水平,采用蛋白印迹法和Real-timePCR分别检测卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）蛋白和FSHR、P450芳香化酶（P450 aromatase,P450arom）mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高（P〈0．05）,补肾强经方中剂量纽P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。大鼠含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组E2均升高（P〈0．01）,cAMP明显升高（P〈0．05,P〈0．01）,补肾调经方中剂量组P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。结论补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH／cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。     

菟丝子总黄酮对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用

【目的】 探讨菟丝子总黄酮通过卵泡刺激素（FSH）-环磷酸腺苷（cAMP）信号轴对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用。 【方法】 从68只雌性SD大鼠中抽取10只为正常组,其余构建卵巢储备功能减退模型。将成功建模的48只大鼠随机分为抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组,每组12只。抑制剂组灌胃H-89 0.1 mg/kg,抑制剂+菟丝子总黄酮组灌胃H-89 0.1 mg/kg+菟丝子总黄酮 530.1 mg/kg,菟丝子总黄酮组灌胃菟丝子总黄酮530.1 mg/kg,模型组、正常组灌胃等体积生理盐水,均连续4周,每周休息1 d。给药4周后,称取各组大鼠卵巢湿质量,计算卵巢指数,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测大鼠血清性激素水平,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织形态学变化,ELISA 法检测卵巢组织中 cAMP 含 量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测卵巢组织卵泡刺激素受体（FSHR）、蛋白激酶A（PKA）及磷酸化PKA（p-PKA）表达。 【结果】 模型组大鼠进食、二便、毛色、动情周期出现异常,卵巢萎缩明显,卵泡数量、黄体减少;与模型组比较,抑制剂组大鼠进食、二便、毛色、动情周期异常情况更严重,卵巢萎缩更明显,卵泡与黄体数量更少,而抑制剂组+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组大鼠进食、二便、毛色、动情周期,卵巢、卵泡与黄体数量明显改善。与正常组比较,抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数降低,FSH、FSH/LH、E2水平升高,卵巢组织中cAMP含量降低,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与抑制剂组比较,模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与模型组比较,抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与抑制剂+菟丝子总黄酮组比较,菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。【结论】 菟丝子总黄酮可能通过FSH-cAMP信号轴改善大鼠卵巢储备功能减退。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响

[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E2)含量。[结果]各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

电针对围绝经期模型大鼠E_2及胰岛素样生长因子的影响

目的：探讨电针治疗对围绝经期模型大鼠E2和胰岛素样生长因子（IGF）的影响。方法：雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、假手术组、雌激素组、电针组,采用双侧卵巢摘除术复制围绝经期模型,造模成功后,治疗3疗程,检测大鼠血清中E2、IGF-1、IGF-2的变化。结果：模型组大鼠E2和IGF-1含量明显下降,与正常组相比,分别有非常显著性（P〈0.01）及显著性差异（P〈0.05）;治疗后,雌激素组、电针组E2、IGF-1含量增加,与模型组相比,有非常显著性（P〈0.01）及显著性差异（P〈0.05）,电针、雌激素组两组间作用无显著性差异（P〉0.05）。各组IGF-2变化无显著性差异。结论：电针对围绝经期模型大鼠E2和IGF-1具有良好的调节作用,其作用与雌激素接近。     

紫石英对排卵障碍大鼠卵巢局部卵泡刺 激素受体、黄体生成素受体表达的影响

目的:探讨紫石英对排卵障碍大鼠模型卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)的影响以及紫石英作用的物质基础。方法:选用未成年24日龄SD雌性大鼠60只随机分为模型组、克罗米芬组、紫石英组、氟化钙组、补肾活血方组、正常组6组。用Bogovich法建立大鼠排卵障碍病理模型,给药组分别ig紫石英4.8 g.kg-1,氟化钙4.0 g.kg-1,补肾活血方16.2 g.kg-1,连续14 d,克罗米芬0.009 5 g.kg-1,连续5 d。以克罗米芬及补肾活血汤为对照,用免疫组化法观察紫石英对排卵障碍大鼠卵巢局部FSHR与LHR表达的影响。结果:模型组卵巢卵泡膜细胞存在LHR高表达,与正常组比较P<0.01;卵巢颗粒细胞存在FSHR低表达,与正常组比较P<0.05。紫石英组、氟化钙组、补肾活血方组及克罗米芬组与模型组比较,卵巢组织FSHR的表达增强(P<0.05),卵巢组织LHR表达降低,但仅氟化钙组P<0.01。紫石英组与氟化钙组比较,FSHR差异无统计学意义,LHR表达强度高于氟化钙组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:紫石英可明显提高FSHR在卵巢颗粒细胞中的表达强度,其对FSHR的激动作用及对LHR的抑制作用可能源于紫石英中氟化钙和其他成分的共同作用。紫石英对FSHR,LHR在卵巢组织中表达水平的影响,可能是其改善大鼠排卵障碍的机制之一。     

更年汤对肾阳虚围绝经期模型大鼠肾上腺皮质中Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠肾上腺皮质中Bax、Bcl-2表达的影响。方法:建立自然衰老的雌性肾阳虚型围绝经期大鼠模型,11~12月龄60只,随机分为更年汤组、利维爱组、生理盐水组,每组20只;4月龄20只作为青年组;18月龄20只作为老年组。用免疫组化法检测肾上腺皮质Bax、Bcl-2的表达。结果:与生理盐数组比较,利维爱组肾上腺皮质Bax表达降低、Bcl-2的表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。更年汤组肾上腺皮质Bax阳性总积分表达低于利维爱组、生理盐水组,Bcl-2阳性总积分表达高于利维爱组、生理盐水组,差异均有统计学意义(P0.05),更年汤组稍优于利维爱组。结论:自拟更年汤能降低肾阳虚型围绝经期模型大鼠肾上腺皮质Bax的表达,提高肾上腺皮质Bcl-2表达水平,平衡围绝经期内分泌失调。     

“益坤宁”对自然老化大鼠性激素的调节及卵巢修复的研究

目的：研究中药益坤宁对围绝经期大鼠卵巢功能和结构的影响。方法：选用11～13月龄雌性围绝经期wistar大鼠32只。随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组。另选青年大鼠10只，月龄4个月，作为青年对照组，采用血清性激素分泌水平、血管内皮生长因子（VEGF）、颗粒细胞调亡及细胞形态等指标来观察益坤宁对卵巢结构和功能的影响。结果：益坤宁组与模型组比较，各项指标差异均有显著性或极显著性（P〈0．05或P〈0．01）。结论：研究证实益坤宁可升高围绝经期大鼠血清E2、P水平，降低血清FSH、LH水平；对围绝经期大鼠卵巢VEGF有促进作用；对卵巢颗粒细胞凋亡有抑制作用，提示益坤宁可以阻止卵泡闭锁，从而达到预防和延缓卵巢衰老的作用机制。     

补肾促排方对大鼠卵巢颗粒细胞黄体生成素受体和卵泡刺激素受体的影响

目的通过体外实验阐述补肾促排方治疗多囊卵巢综合征的药理学作用机制。方法提取与鉴定大鼠卵巢颗粒细胞,提取补肾促排方水溶液。实验分为补肾促排方低、中、高剂量组和空白对照组,分别相应处理分离与鉴定的大鼠卵巢颗粒细胞24 h后提取mRNA,48 h后提取蛋白。通过RT-PCR和Wester-blot法分别检测各组黄体生成素受体(LHR)和卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和蛋白表达水平。结果补肾促排方水溶液能够显著上调大鼠卵巢颗粒细胞LHR和FSHR mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05),且呈现显著的浓度梯度依赖效应。结论补肾促排方通过上调卵巢颗粒细胞LHR和FSHR的表达,促进卵泡的发育与排出,从而起到治疗多囊卵巢综合征的作用。     

更年汤对围绝经期模型大鼠E_2、LH、FSH、GnRH的干预作用研究

目的:通过构建围绝经期大鼠模型,观察更年汤对模型大鼠内分泌相关指标的影响,探讨更年汤延缓卵巢衰老的作用机制。方法:将SD雌性大鼠随机分为更年汤组、教材方组、模型组、青年组、老年组各10只。前三组采用自然老化的围绝经期大鼠模型,青年和老年组为正常青年、老年模型。分别灌胃更年汤、教材方和生理盐水15日,于末次给药24h后麻醉,颈动脉取血5mL,剖取子宫、卵巢,观察血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)、促性腺激素释放激素(GnRH)和子宫、卵巢指数。结果:与模型组比较,治疗组、对照组E2含量均升高,治疗组有非常显著性差异(P<0.01);治疗组、对照组均能显著降低血清LH含量(P<0.01),组间比较有非常显著性差异(P<0.01);治疗组、对照组FSH含量均显著降低(P<0.01)组间比较无显著性差异(P>0.05);治疗组能显著降低血清GnRH含量(P<0.01),组间比较有非常显著性差异(P<0.01);治疗组、对照组均使卵巢、子宫指数升高,有非常显著性差异(P<0.01),卵巢组间比较差异无显著性差异(P>0.05),子宫组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论:更年汤可明显提高模型大鼠E2水平,升高大鼠卵巢、子宫指数,降低血清FSH、LH、GnRH水平,从而达到延缓卵巢功能衰退的作用。     

自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢细胞凋亡相关因子的影响

目的探讨自拟更年汤对肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢组织形态学及卵巢颗粒细胞凋亡因子bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA的影响。方法选用自然老化的围绝经期雌性SD大鼠,臀部肌肉左右交替肌注氢化可的松构建肾阳虚型围绝经期大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为更年汤组、教材方组、利维爱组、生理盐水组;另选择4月龄SD雌性大鼠20只作为青年组,18月龄SD雌性大鼠20只作为老年组。青年组、老年组、生理盐水组均给予生理盐水灌胃,各给药组给予相应药物灌胃,灌胃15 d后处死大鼠,分离摘取双侧卵巢,运用病理切片观察卵巢组织大体形态,运用免疫组化及原位杂交法检测卵巢颗粒细胞凋亡因子bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA表达情况。结果各给药组卵泡发育良好情况优于老年组和生理盐水组(P均0.05),卵泡闭锁、卵泡扩张情况轻于老年组和生理盐水组(P均0.05);自拟更年汤组与利维爱组卵泡发育良好情况优于教材方组(P均0.05),自拟更年汤组与利维爱组比较差异无统计学意义(P0.05);自拟更年汤组卵泡闭锁、卵泡扩张情况轻于教材方组和利维爱组(P均0.05),教材方组与利维爱组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。各给药组bax、bax mRNA阳性表达明显低于老年组和生理盐水组(P均0.05),bcl-2与bcl-2 mRNA阳性表达明显高于老年组和生理盐水组(P均0.05);自拟更年汤组与利维爱组bax、bax mRNA阳性表达明显低于教材方组(P均0.05),bcl-2与bcl-2 mRNA阳性表达明显高于教材方组(P均0.05),自拟更年汤组bax、bax mRNA、bcl-2、bcl-2 mRNA阳性表达与利维爱组比较差异无统计学意义(P均0.05)。结论自拟更年汤能促进卵泡发育,抑制卵泡闭锁和扩张,能上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子bcl-2、bcl-2 mRNA的阳性表达,抑制促凋亡因子bax、bax mRNA的阳性表达。     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB＼FSHRmRNA及分泌功能的影响

[目的】运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素（INHB）、促卵泡激素受体（FSHR）mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素（FSH）及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法（ELISA）,逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇（E2）含量。【结果】各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论1乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。