可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat对2型糖尿病大鼠血管并发症的作用

目的探讨可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat对2型糖尿病大鼠血管并发症的干预作用。方法雄性SD大鼠28只,8只采用普通饲料喂养者为对照组,20只高脂饲料喂养4周后给予小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备2型糖尿病大鼠模型,16只大鼠造模成功并随机分为模型组和干预组各8只。继续饲养12周,干预组给予Cinaciguat7μg/(kg·d)腹腔注射,模型组和对照组大鼠给予等量质量分数0.1%DMSO腹腔注射,疗程均为2周。测定各组大鼠血清空腹血糖、糖化血红蛋白、碱性磷酸酶、钙、磷、一氧化氮和一氧化氮合酶水平,并对胸主动脉行组织病理学检查。结果模型组大鼠血清碱性磷酸酶活性[(886.63±527.08)u/L]明显高于干预组[(564.17±475.89)u/L]和对照组[(139.00±32.29)u/L],干预组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);模型组一氧化氮水平[(43.20±7.49)μmol/L]、一氧化氮合酶活性(12.23±2.32)u/mL]明显低于干预组[(49.18±8.38)μmol/L、(17.43±4.27)u/mL]和对照组[(62.23±10.04)μmol/L、(24.90±5.39)u/mL](P<0.05),干预组低于对照组(P<0.05);干预组和模型组空腹血糖[(24.89±4.79)、(24.60±4.42)mmol/L]及糖化血红蛋白[(11.38±0.61)%、(12.13±0.78)%]水平明显高于对照组[(5.02±0.65)mmol/L、(4.60±0.51)%](P<0.01),模型组与干预组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组、模型组与干预组大鼠血清钙[(1.75±0.17)、(1.89±0.50)、(1.97±0.52)mmol/L]和磷[(2.48±0.12)、(2.85±0.19)、(2.62±0.09)mmol/L]水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);组织病理检查结果显示对照组大鼠胸主动脉内膜连续、光滑,中膜平滑肌细胞走行清晰、无增生;模型组大鼠胸主动脉血管壁增厚,中膜平滑肌细胞增生且排列不规则;干预组大鼠胸主动脉壁较为完整、连续,中膜平滑肌细胞稍有增生,排列较规则,走行无明显异常。结论 Cinaciguat能有效改善2型糖尿病大鼠的抗氧化能力,为2型糖尿病血管并发症干预治疗提供了新思路和依据。     

血管钙化对大鼠离体胸主动脉环张力的影响

目的　在大鼠血管钙化模型上,观察血管钙化时对血管张力的直接影响,并探讨其作用机制。方法　维生素D3 (Vit D3)和尼古丁(nicotine)诱导大鼠血管钙化模型,通过BL-Newcentrary型多导生理记录仪,观察钙化大鼠离体胸主动脉环对去甲肾上腺素(norepinephine,NE,10-8～ 10-4 mol/L)和乙酰胆碱(acetylcholine,ACh, 10-8～ 10-4 mol/L)引起的收缩和舒张反应。结果　钙化血管Von Kossa 染色见钙化组血管的中膜弹性纤维间可见大量黑色颗粒, 沉积于细胞外基质和平滑肌细胞内,表明存在钙沉积。主动脉钙含量和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性分别较对照组高6.8 倍和1.9倍( P < 0.01) , 与对照组相比,钙化大鼠胸主动脉环对N E 的缩血管反应和对ACh的舒血管反应均减弱( P < 0.05)。结论　钙化血管僵硬度增加,舒缩功能均明显降低。     

血清Apelin和补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9与糖尿病肾病慢性肾脏病Ⅴ期患者血管钙化的关系

目的探讨糖尿病肾病慢性肾脏病Ⅴ期(chronic kidney disease-Ⅴ, CKD-Ⅴ)患者血清Apelin、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9(complement C1q tumor necrosis factor related protein 9, CTRP9)水平与血管钙化的关系。方法糖尿病肾病CKD-Ⅴ期患者139例,根据腹主动脉钙化评分分为钙化组67例和非钙化组72例。比较2组一般资料,血清Apelin、CTRP9、白蛋白、肌酐、胆固醇、三酰甘油、25-羟维生素D_3、甲状旁腺激素、血钙、血磷、血红蛋白水平以及预估肾小球滤过率、尿蛋白肌酐比值;多因素logistic回归分析糖尿病肾病CKD-Ⅴ期患者血管钙化的影响因素;绘制ROC曲线评价血清Apelin和CTRP9诊断糖尿病肾病CKD-Ⅴ期患者血管钙化的价值。结果钙化组血清Apelin[(57.62±4.91)μg/L]、CTRP9[(7.81±0.90)μg/L]水平低于非钙化组[(91.32±7.11)、(10.62±1.81)μg/L],年龄[(68.40±8.90)岁]、血磷[(2.31±1.20)mmol/L]、25-羟维生素D_3[(24.88±6.21)μg/L]和甲状旁腺激素[(469.13±98.31)ng/L]水平高于非钙化组[(62.10±6.20)岁、(1.91±0.90)mmol/L、(21.72±4.51)μg/L、(412.62±67.22) ng/L](P0.05);2组性别比例、血压、体质量指数和白蛋白、肌酐、胆固醇、三酰甘油、血钙、血红蛋白水平以及估算肾小球滤过率、尿蛋白肌酐比值比较差异均无统计学意义(P0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄≥65岁(OR=1.864,95%CI:1.079～3.220,P=0.025)、甲状旁腺激素水平≥440 ng/L(OR=2.289,95%CI:1.484～3.532,P0.001)是糖尿病肾病CKD-Ⅴ期患者发生血管钙化的独立危险因素,血清Apelin≥75μg/L (OR=0.817,95%CI:0.705～0.947,P=0.007)、CTRP9≥9μg/L(OR=0.901,95%CI:0.831～0.976,P=0.011)是其保护因素。血清Apelin、CTRP9分别以60μg/L、8μg/L为最佳截断值,诊断糖尿病肾病CKD-Ⅴ期患者血管钙化的AUC分别为0.816(95%CI0.751～0.874,P0.001)、0.824(95%CI:0.762～0.893,P0.001),灵敏度分别为76.7%、82.1%,特异度分别为81.2%、77.5%。结论糖尿病肾病CKD-Ⅴ期血管钙化患者血清Apelin、CTRP9水平降低,是糖尿病肾病CKD-Ⅴ期患者发生血管钙化的危险因素。     

硫酸吲哚酚对大鼠主动脉平滑肌细胞钙化影响的实验研究

目的观察硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)钙化的影响以及这种变化和氧化应激的关系。方法培养的VSMC分别加入100μmol/L、300μmol/L和500μmol/L IS,每组再分别加入10μmol/L辛伐他汀。应用甲σ-酚肽络合酮法检测细胞内的钙含量,硫代巴比妥酸(TBA)法检测上清液中丙二醛(MDA)含量。结果与正常组相比,IS 300μmol/L组含钙量[(10.96±3.05)mg/g蛋白vs.(7.52±1.51)mg/g蛋白,P<0.05]和IS 500μmol/L组含钙量[(14.34±4.31)mg/g蛋白vs.(7.52±1.51)mg/g蛋白,P<0.01]均明显增高。与同浓度IS组相比,辛伐他汀10μmol/L+IS 300μmol/L组和辛伐他汀10μmol/L+IS 500μmol/L组含钙量均明显降低[(7.46±1.86)mg/g蛋白vs.(10.96±3.05)mg/g蛋白;(8.83±2.76)mg/g蛋白vs.(14.34±4.31)mg/g蛋白,均P<0.05]。与正常组相比,IS 300μmol/L组(2.52±0.47 vs.1.54±0.23,P<0.01)和IS 500μmol/L组上清液MDA含量(2.72±0.53 vs.1.54±0.23,P<0.01)均明显增高。与同浓度IS组相比,辛伐他汀10μmol/L+IS 300μmol/L组和辛伐他汀10μmol/L+IS 500μmol/L组上清液MDA含量均明显降低(1.54±0.39 vs.2.52±0.47,1.60±0.39 vs.2.72±0.53,均P<0.01)。大鼠VSMC的含钙量与MDA呈正相关关系(r=0.59,P<0.01)。结论 IS可浓度依赖性地促进大鼠VSMC钙化,其作用可能与IS增加VSMC的氧化应激有关,辛伐他汀可抑制此作用。     

当归补血汤协同肌源性干细胞移植重建小鼠造血功能的实验研究

目的:探讨当归补血汤(Danggui Buxue Decoction, DBD)协同肌源性干细胞(muscle-derived stem cell,MDSC)移植促小鼠造血重建的作用机制。方法:应用随机数字表法将雌性昆明小鼠随机分为6组:照射模型组、骨髓移植组、MDSC移植组和DBD 1(4.5 g/kg)、2(13.5 g/kg)、3(22.5 g/kg)+MDSC移植组。给予生理盐水或不同剂量DBD灌胃预处理1周后,采用8 Gy ~(137)Csγ射线照射,再分别进行骨髓移植或MDSC移植。于3周末和8周末检测小鼠Notch1、Jagged1和Hes1 m RNA在小鼠骨髓、胸腺和脾脏的表达量。结果:骨髓细胞中,3周末各干预组Notch1 mRNA表达量均较照射模型组明显增加,Jagged1和Hes1 mRNA表达量均明显减少;8周末,各干预组Notch1 mRNA表达均明显下调,Jagged1 mRNA表达除了骨髓移植组增加外均明显减少,Hes1 mRNA表达均增加(P0.05)。胸腺细胞中,3周末,与照射模型组比,仅DBD 1+MDSC组Notch1 m RNA表达增加,MDSC移植组和DBD1、2+MDSC组Jagged1和Hes1 mRNA表达增加;8周末,各干预组Notch1、Jagged1 mRNA表达均减少,MDSC移植组和DBD 1、2+MDSC组Hes1 mRNA表达均明显增加(P0.05)。脾脏中,3周末,各干预组Notch1、Jagged1 mRNA表达均较照射模型组明显减少;8周末,各干预组Jagged1和Hes1 m RNA表达均较照射模型组明显增加(P0.05)。结论:DBD协同MDSC移植可促进受致死剂量辐射损伤小鼠的造血重建,Notch1、Jagged1和Hes1在此过程中扮演不同角色,其具体作用机制有待深入研究。     

连续性肾脏替代治疗对急性肾损伤患者尿肝型脂肪酸结合蛋白表达的影响

目的观察连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement herapy,CRRT)对严重脓毒症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者肝型脂肪酸结合蛋白表达水平的影响。方法确诊严重脓毒症AKI患者68例,分为常规药物治疗组(A组,n=33例)和CRRT组(B组,n=35例)。2组均在确诊严重脓毒症后,立即给予规范的抗脓毒症治疗(按照2012年SCC标准),B组在规范治疗的基础上同步行CRRT 24h。2组均监测0h、12h、24h及48h血肌酐(serum creatinine,s Cr)、血L-FABP(serum L-FABP,s L-FABP)、尿L-FABP(urine L-FABP,u L-FABP)水平,同时监测B组CRRT废液中L-FABP的表达水平。记录28天病死率。结果 A组s L-FABP水平在治疗后48h显著高于治疗前[(1328±101)μg/(g·Cr)比(700±88)μg/(g·Cr),t=5.435,P0.02)],而B组治疗后48h与治疗前比较s L-FABP水平改变不明显[(680±74)μg/(g·Cr)比(712±82)μg/(g·Cr),t=1.682,P0.05)];A组u L-FABP水平治疗后48h改变不明显[(1428±124)μg/(g·C)比(1082±89)μg/(g·C),t=4.854,P0.05)],B组在CRRT治疗后48h u LFABP水平较治疗前显著下降,(1324±123)μg/(g·C)比(1978±88)μg/(g·C),t=2.654,P0.02)。B组在CRRT治疗48h,s L-FABP水平与A组同期比较显著降低[(680±32)μg/(g·Cr)比(1328±101)μg/(g·Cr),t=3.028,P=0.042],u L-FABP水平与A组同期比较显著下降[(1324±123)μg/(g·Cr)比(1428±124)μg/(g·Cr),t=12.856,P=0.022],s Cr水平与A组同期比较显著下降[(115±12)μmol/L比(295±32)μmol/L,t=8.256,P=0.032]。B组超滤液中未检测出L-FABP表达。结论 CRRT能降低u L-FABP的表达,改善AKI的预后,但并非通过直接清除血中的L-FABP途径。u L-FABP水平可作为CRRT疗效判断的可靠指标。     

活性维生素D_3对大鼠肾小管间质纤维化的影响及其机制研究

目的:观察活性维生素D_3对大鼠肾小管间质纤维化的影响及其可能机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)、UUO+低剂量活性维生素D_3组(LV组)、UUO+大剂量活性维生素D_3组(HV组),每组10只。采用单侧(左)输尿管结扎法建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型。Sham组只游离左侧输尿管而不结扎。LV组与HV组分别予以0.03μg/(kg·d)、0.06μg/(kg·d)活性维生素D_3(溶于花生油)腹腔注射,Sham组和UUO组均予以等体积花生油腹腔注射。术后14 d处死大鼠,采集血、肾脏标本,并检测血清钙、磷、肌酐(SCr)、甲状旁腺激素(PTH)。制作肾脏病理组织切片,行H-E、Masson染色,在光镜下观察肾小管间质损伤及纤维化情况。采用免疫组织化学法检测肾小管间质中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β(TGF-β)的表达。结果:与UUO组相比,LV组和HV组SCr水平[(39.0±1.83)μmol/L、(36.0±2.11)μmol/L比(43.1±5.55)μmol/L]、肾小管间质纤维化指数(2.00±0.12、1.70±0.10比2.80±0.11)、α-SMA表达(0.22±0.02、0.20±0.03比0.24±0.02)、TGF-β表达(0.26±0.03、0.25±0.03比0.32±0.04)均显著下降(P0.05),E-cadherin表达(0.30±0.08、0.34±0.11比0.22±0.07)明显升高。与LV组相比,HV组SCr水平肾间质纤维化指数、肾间质损伤指数、α-SMA表达、TGF-β表达明显下降(P0.05),E-cadherin表达上升(P0.05)。相关性分析显示,TGF-β、α-SMA表达与肾间质纤维化指数正相关,E-cadherin表达与肾间质纤维化指数负相关;TGF-β表达与α-SMA表达正相关,E-cadherin与TGF-β负相关;α-SMA表达与E-cadherin表达负相关。结论:活性维生素D_3可改善UUO大鼠肾小管间质纤维化,大剂量活性维生素D_3改善作用优于小剂量,其机制可能是:通过抑制TGF-β的过度表达从而抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化进而改善肾小管间质纤维化。     

不同剂量别嘌呤醇对阿霉素诱导慢性心力衰竭大鼠心功能的影响

目的 研究不同剂量别嘌呤醇对阿霉素诱导慢性心力衰竭大鼠心功能的影响,探讨别嘌呤醇在改善心力衰竭大鼠血管内皮功能及心室重构方面是否具有剂量依赖性,从而为临床治疗心力衰竭提供理论依据和新思路.方法 40只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为4组:正常对照组(A组)、模型时照组(B组)、别嘌呤醇低刺量组(C组)、别嘌呤醇高剂量组(D组).经腹腔注射阿霉素建立心力衰竭模型,模型成功后A组和B组经口灌注安慰剂,C组经口灌注别嘌呤醇20 mg/(kg·d),D组经口灌注别嘌呤醇40 mg/(kg·d).于灌药4周后处死大鼠测心功能、血清生化指标、心脏重量指数及电镜下观察心肌病理学变化.结果 与正常对照组比较,模型对照组及各治疗组大鼠的体重均明显减轻[A组(300.10±9.85)g、B组(200.67±9.91)g、C组(233.14±9.42)g、D组(248.25±13.34)g,P<0.05],全心重量亦明显减轻[A组(828.30±50.97)mg、B组(681.50±16.97)mg、C组(743.00±17.20)mg、D组(784.88±36.83)mg,P<0.05],而全心重量指数增加[A组(2.76±0.15)mg/g、B组(3.41±0.17)mg/g、C组(3.26±0.76)mg/g、D组(3.11±0.65)me/g,P<0.05];药物组血流动力学显示心肌收缩力加强;血清生化显示一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)较模型对照组明显升高[B组NO(41.55±6.28)μmol/L、C组(52.47±5.59)μmol/L、D组(61.04±4.26)μmol/L;B组SOD(63.83±6.40)U/ml、C组(76.29±7.99)U/ml、D组(100.13±7.43)U/ml,P均<0.05],丙二醛(MDA)明显降低[B组MDA(9.70±1.08)μmol/L、C组(6.64±0.34)μmol/L、D组(5.72±0.71)μmol/L,P<0.05];D组NO、SOD较C组明显升高(P<0.05),MDA明显降低(P<0.05);病理学显示心肌细胞病变明显减轻.结论别嘌呤醇对改善血管内皮功能具有明显的剂量依赖性,较大剂量的别嘌呤醇能显著降低MDA,升高NO、SOD,从而更好地改善心力衰竭大鼠的心功能.     

不同剂量右美托咪定对先天性心脏病患儿体外循环术后急性肾损伤的影响

目的探讨不同剂量右美托咪定对先天性心脏病患儿体外循环术后急性肾损伤的影响。方法择期拟行房间隔缺损、室间隔缺损修补的患儿180例,随机分为观察1组、观察2组和对照组,观察1、2组于麻醉诱导前10min静脉注射右美托咪定1μg/kg负荷量,随后观察1组以0.4μg/(kg·h)速率泵注至术后12h,观察2组以0.5μg/(kg·h)速率泵注至术后12h,对照组静脉泵注生理盐水。记录3组患者术后48h内每小时尿量,于术前(T_0)、麻醉诱导后30min(T_1)、体外复温后1h(T_2)、术后24h(T_3)、术后48h(T_4)时测定血清肌酐(serum creatinine,SCr)和尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-beta-D-glucosaminidase,NAG)水平,监测3组心率、平均动脉压、中心静脉压,比较3组术后48h内急性肾损伤发生率。结果 3组T_0～T_4心率、平均动脉压、中心静脉压比较差异均无统计学意义(P0.05);3组T_0、T_1时血清SCr和尿NAG水平比较差异无统计学意义(P0.05);T_3时观察1、2组血清SCr[(63.8±15.6)、(55.4±19.2)μmol/L]和尿NAG水平[(84.2±43.4)、(67.6±35.2)u/L]低于对照组[(72.6±27.2)μmol/L、(135.3±68.5)u/L],观察2组低于观察1组(P0.05),T_4时观察1、2组血清SCr[(61.4±13.4)、(56.2±17.6)μmol/L]和尿NAG水平[(74.6±38.5)、(53.5±29.6)u/L]低于对照组[(75.4±24.2)μmol/L、(126.0±63.2)u/L],观察2组低于观察1组(P0.05);观察2组(6.67%)、观察1组(20.69%)和对照组(38.98%)急性肾损伤发生率依次升高(P0.05)。结论右美托咪定可降低体外循环下先天性心脏病患儿术后急性肾损伤发生率,以0.5μg/(kg·h)速率泵注至术后12h优于0.4μg/(kg·h)速率。     

雌激素与辛伐他汀序贯法干预对去势大鼠骨质疏松的治疗作用

背景:Frost根据骨重建的概念创建了骨重建干预理论--序贯疗法,即在骨吸收抑制剂之后可给予刺激骨形成的药物.目的:基于骨重建干预理论,序贯应用雌激素与辛伐他汀干预骨重建吸收期和形成期,观察其对去势大鼠骨质疏松的治疗作用.方法:3月龄雄性SD大鼠40只,以随机数字表法分为去势组与正常对照组.去势组切除双侧卵巢,正常对照组只进行下腹部皮肤单纯切开术.大鼠去势后1个月,将去势组随机分为3组:序贯组、雌激素组、去势对照组,并开始药物干预:序贯组,皮下注射苯甲酸雌二醇0.1 mg/kg,3 d给药1次,2周后,灌胃给予辛伐他汀5 mg/(kg·d)2周,停药5周,再应用辛伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃2周;雌激素组,皮下注射苯甲酸雌二醇0.1 mg/kg,每3 d给药1次,连续用药11周;去势对照组,单纯的饲料喂养,无药物干预.11周后,双能X射线骨密度仪测定股骨骨密度,放射免疫法检测血清白细胞介素6、骨钙素水平.结果与结论:各治疗组大鼠股骨骨密度、骨钙素水平高于去势对照组(P<0.05),并且序贯组明显高于雌激素组(P<0.05).各治疗组白细胞介素6水平低于去势对照组(P<0.05),并且序贯组低于雌激素组(P<0.05).说明雌激素和辛伐他汀序贯疗法可以通过抑制骨吸收,促进骨形成有效地治疗骨质疏松.     

鼠血管外膜涂抹雌激素抑制血管再狭窄

目的探讨局部应用雌激素对雌性去势大鼠血管成形术后再狭窄的影响及其作用机制.方法制作40只雌性大鼠去势模型,并在此基础上制作左颈总动脉血管再狭窄模型,将其随机分为去势组、去势 E(应用雌激素)组.雌激素由pluronic gelatine携带局部涂抹于实验组的血管外膜,观察不同时间点血管腔及血管壁的变化.结果PTA后7天、14天、28天,去势组血管狭窄指数最大,去势 E组与未去势组之间无显著性差异.血管成形术(PTA)后3天、7天、14天,去势组血管外膜细胞增殖指数最大,去势 E组与未去势组之间无显著性差异.结论用pluronic gelatine携带雌激素局部涂抹血管外膜是一种有效的血管再狭窄预防方法,其作用机制可能与雌激素干预血管外膜细胞的活化有关.     

培哚普利对卵巢去势大鼠骨质疏松的作用及其机制

目的探讨培哚普利改善卵巢去势大鼠骨质疏松的作用及其机理。方法 50只SD大鼠分为正常对照组、假手术组、卵巢去势组、培哚普利组、雌激素组各10只,假手术组大鼠切除双侧卵巢周边脂肪组织,卵巢去势组、培哚普利组和雌激素组大鼠摘除双侧卵巢,正常对照组大鼠不做处理。卵巢摘除后第5周,培哚普利组大鼠给予培哚普利4mg/kg灌胃,雌激素组大鼠给予戊酸雌二醇胺1.2mg/kg灌胃,正常对照组、假手术组和卵巢去势组大鼠给予相同体积蒸馏水灌胃,均1次/d,持续12周。12周后取各组大鼠左侧股骨采用双能X线骨密度测定仪测量骨密度,取右侧股骨采用实时荧光定量PCR法检测骨组织Wnt3a、LRP5、β-catenin mRNA表达水平。结果雌激素组左侧股骨骨密度值(0.263±0.002)高于培哚普利组(0.131±0.023)、卵巢去势组(0.053±0.002)、假手术组(0.165±0.003)和正常对照组(0.133±0.002)(P0.01),正常对照组、假手术组、培哚普利组高于卵巢去势组(P0.05);雌激素组右侧股骨组织Wnt3a、LRP5、β-catenin mRNA表达水平(4.6±0.3、1.0±0.1、0.258±0.004)明显高于卵巢去势组(1.0±0.2、0.3±0.1、0.057±0.002)和培哚普利组(3.1±0.7、0.4±0.2、0.165±0.003),培哚普利组高于卵巢去势组(P0.05)。结论培哚普利可增加卵巢去势大鼠骨密度,其机制可能是通过上调Wnt3a/LRP5/β-catenin而促进前成骨细胞增殖和分化,从而促进骨形成。     

糖尿病大鼠肺组织超微结构病理变化及罗格列酮干预研究

目的 观察糖尿病大鼠肺组织的超微结构病理变化及其罗格列酮干预效果.方法 通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法,建立2型糖尿病大鼠模型;采用透射电镜观察对照组、单纯糖尿病组、罗格列酮干预组3组大鼠肺组织超微结构改变;同时测定羟脯氨酸含量的变化.结果 单纯糖尿病大鼠肺组织出现了胶原纤维的聚集,细胞外基质的增加,出现了肺纤维化,罗格列酮组大鼠肺组织的胶原聚集明显减轻;12周[(0.77±0.03)μg/(nag·prot)与(0.63±0.0 3)μg/(mg·prot),t=7.071]、20周[(0.93±0.10)μg/(mg·prot)与(0.87±0.10)μg/(mg·prot),t=0.831]单纯糖尿病组肺组织中羟脯氨酸均高于对照组(P均<0.05).20周罗格列酮干预组的羟脯氨酸低于同期单纯糖尿病组[(0.85±0.08)μg/(mg·prot)与(0.87±0.10)μg/(mg·prot)t=0.834,P<0.05).结论 糖尿病大鼠出现了肺纤维化,罗格列酮干预能减轻糖尿病大鼠肺纤维化的程度.

Abstract：

Objective To observe the pathological infrastructure changes of lung tissue in diabetic rat with pulmonary fibrosis and the preventive effect of rosiglitazone intervention. Methods The experimental type 2 diabetic rats were yielded by high-sugar, high fat diet plus intraperitoneal injecting streptozotocin (STZ). The pathological infrastructure changes of lung tissue were observed by transmission electron microscopy in the control, diabetes mellitus group and rosiglitazone treatment group respectively, and the hydroxyproline contentswere determined simultaneously. Results We observed accumulation of collagen fibers and extracellular matrix in the lung tissue of simple diabetic rat, which indicated pulmonary fibrosis. The hydroxyproline contents were significantly higher in diatetes mellitus group when compared to the control at 12 weeks[ 0. 77 ± 0. 03μg/(mg·prot) vs.0.63 ±0.03 μg/(mg·prot)] and 20 weeks [0.93 ±0. 10 μg/(mg·prot) vs.0.87 ±0.10μg/ (mg·prot) ]. (Ps < 0.05) , but the rosiglitazone intervention significantly reduced the hydroxyproline 3contents in diabetes mellitus rats [0.85 ±0.08 μg/(mg·prot) vs.0.87 ±0. 10 μg/(mg·prot) ,P<0.05].Conclusion Pulmonary fibrosis occurred in diabetic rats lung tissue,while rosiglitazone can alleviate it.     

镁对慢性阻塞性肺疾病大鼠血管钙化和弹力纤维降解的影响及机制

目的探讨镁在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠血管钙化和弹力纤维降解中的作用及可能机制。方法SD大鼠40只,随机分为低镁组、高镁组、模型组、对照组各10只。低镁组、高镁组、模型组雾化吸入丙烯醛制备COPD模型,对照组雾化吸入蒸馏水。造模成功后,低镁组给予低镁饮食(镁元素质量构成比0.02%)、高镁组给予高镁饮食(镁元素质量构成比0.20%),对照组和模型组给予正常饮食(镁含量正常),连续14 d。干预结束,检测4组血镁含量;处死大鼠取胸主动脉和肺组织,采用von Kossa染色法检测胸主动脉钙化程度,邻甲酚酞络合酮比色法测定胸主动脉壁钙含量,实时荧光定量PCR法检测肺组织弹力纤维mRNA相对表达量,Western blot法检测肺组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、MMP-2相对表达量。结果镁干预14 d,高镁组血镁含量[(1.33±0.45)mmol/L]高于低镁组[(0.62±0.24)mmol/L]、模型组[(0.91±0.34)mmol/L]、对照组[(0.91±0.15)mmol/L](P<0.05),且对照组和模型组高于低镁组(P<0.05),模型组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);低镁组、模型组、高镁组、对照组肺组织弹力纤维mRNA相对表达量(0.14±0.09、0.31±0.05、0.81±0.04、0.95±0.08)依次增高(P<0.05);对照组胸主动脉几乎无钙化,模型组胸主动脉一定程度钙化,低镁组胸主动脉弥漫性钙化,高镁组胸主动脉钙化程度较模型组、低镁组轻;低镁组、模型组、高镁组、对照组胸主动脉壁钙含量[(13.21±0.22)、(8.12±0.55)、(5.21±0.35)、(3.98±0.15)μg/mg]依次降低(P<0.05),肺组织MMP-9相对表达量(6.12±0.15、4.21±0.32、2.21±0.25、1.98±0.05)、MMP-2相对表达量(4.34±0.09、3.21±0.15、1.61±0.21、1.55±0.15)依次降低(P<0.05)。结论镁可通过下调肺组织MMP-9、MMP-2表达,进而抑制COPD大鼠血管钙化及弹力纤维降解。     

染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化及骨质疏松的影响

背景染料木黄酮是植物性雌激素大豆异黄酮的主要成分,其结构与雌激素相似,提示它可能预防或延缓骨质疏松的发生发展.有关染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化及骨钙、磷、锌和锰影响的研究较少.目的研究染料木黄酮对去势大鼠骨骼矿化及骨钙、磷、锌和锰的影响,为染料木黄酮用于预防骨质疏松提供理论依据.设计以实验动物为研究对象的对照性实验研究.单位解放军总医院营养科.材料实验于2003-02/06在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所完成.10周龄雌性Wistar大鼠(合格证号军医动D98014号),体重(170±20)g.干预实验动物饲正常饲料6周后,改饲AIN-93合成饲料,5 d后按体质量随机分为去势组(n=40)和假手术组(n=7).去势组手术切除双侧卵巢,假手术组只做腹部切开术,恢复5 d后,将去势组按体质量随机分为5组,每组8只去势对照组、雌激素组[己烯雌酚20 μg/(kg穌)]、染料木黄酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组[剂量分别为25,50,100 mg/(kg·d)].饲养3个月,随机抽取各组大鼠6只测量骨密度和骨组织形态计量学相关指标.主要观察指标各组大鼠骨密度、骨矿化相关参数、骨中钙、磷、锌和镁含量.结果大鼠去势后,股骨骨密度[(0.247±0.007)g/cm2]降低,平均类骨质宽度[(7.04±0.32)μm]增大,骨矿化延迟时间[(4 96±0.99)d]和类骨质成熟时间[(26.99±7.70)d]延长,骨中钙[(251.11±5.31)mg/g]、磷[(115.08±3.78)mg/g]、锌[(299.69±37.1)μg/g]和镁[(4.32±0.12)μg/g],与假手术组比较,差异均有显著性(P＜0.05);补充染料木黄酮后,股骨骨密度[(0.250±0.007)g/cm2]有改善的趋势,平均类骨质宽度[(4.87±0.77)μm]变窄,骨矿化延迟时间[(3.18±0.69)d]和类骨质成熟时间[(14.53±3.84)d]缩短,骨中钙[(270.00±5.65)mg/g]、磷[(124.25±2.37)mg/g]、镁[(4.61±0.08)μg/g]含量升高,锌无显著变化.结论染料木黄酮促进去势大鼠类骨质矿化,减少骨中钙、磷、镁丢失,预防骨质疏松的发生.     

抗补体5a受体抗体对变应性鼻炎大鼠Treg/Th17免疫失衡的调控作用

目的 探究抗补体5a受体(C5aR)抗体对变应性鼻炎(AR)大鼠调节性T细胞(Treg)/辅助T淋巴细胞17(Th17)免疫失衡的调控作用及机制初探。方法 60只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、抗C5aR抗体组、抗C5aR抗体+Jagged1组,每组15只,除对照组外,其余各组大鼠均用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)₃]致敏法建立AR模型。造模成功后,抗C5aR抗体组腹腔注射10 mg/kg抗C5aR抗体,抗C5aR抗体+Jagged1组腹腔注射10 mg/kg抗C5aR抗体和5μL的10μg/mL Jagged1钛,对照组和模型组注射等体积的生理盐水,每周注射1次,持续4周。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清免疫球蛋白E(IgE)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-6、IL-10和IL-17水平,HE染色和PAS染色观察鼻腔黏膜组织嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目,免疫组织化学染色检测Notch1表达,Western blot检测RORγt、Foxp3、Notch1及Jagged1蛋白表达,流式细胞术检测外周血Treg和Th17亚...     

运动干预对实验性高同型半胱氨酸血症大鼠过氧化及血管内皮功能的影响

目的:探讨运动干预对实验性高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)大鼠过氧化及血管内皮功能的影响。方法:将48只大鼠随机分为6组,每组各8只。对照组(n=8只)给予普通饲料喂养;高蛋氨酸组(n=40只)在此基础上加3%的蛋氨酸,再根据运动强度分为模型组、叶酸组、HHcy运动组(低强度组、中强度组、高强度组),8只/组,持续16周。检测各组大鼠血清同型半胱氨酸(Hcy)、血浆丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,测定一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素1(ET-1)水平。结果:干预后8周,HHcy运动组血清Hcy水平明显下降,且显著低于模型组(16.09±4.85 vs.24.24±3.11μmol/L)(P0.05);干预后16周,HHcy运动组血清Hcy水平与对照组无显著性差异(7.81±0.64 vs.6.63±1.27μmol/L)(P0.05),各组血清Hcy水平依次为叶酸组(6.63±1.27μmol/L)低强度组(7.62±0.73μmol/L)中强度组(6.91±0.37μmol/L)高强度组(6.19±0.34μmol/L)(P0.05);干预后16周,HHcy运动组MDA均显著下降,SOD活力和GSH-PX含量明显升高(P0.05),中、高强度运动组各过氧化指标与对照组无显著性差异(P0.05);与对照组比较,干预后16周模型组、叶酸组和低强度组ET-1明显升高(61.64±12.29、58.86±10.32、59.11±9.09 vs 49.48±11.09pg/ml),NOS(8.52±2.09、18.13±4.65、17.08±4.20 vs 33.98±6.67U/ml)、NO(1.19±0.24、1.30±0.41、1.30±0.41 vs 2.29±0.28μg/L)明显下降(P0.05),而中强度组、高强度组中ET-1、NOS与对照组比较,差异无显著性意义(P0.05);HHcy运动组、叶酸组NO均明显高于模型组(P0.05)。结论:高蛋氨酸饮食可诱发大鼠HHcy,而中、高强度运动干预有助于降低HHcy大鼠血清Hcy水平,改善氧化应激状态,减轻内皮功能损伤。     

雌激素替代疗法对去卵巢大鼠血清一氧化氮及骨显微结构的影响

目的:探讨骨质疏松症及雌激素替代疗法与血清一氧化氮和骨显微结构变化的关系。方法:2002-05/2003-07在郑州大学第一附属医院骨科实验室完成。4月龄雌性大鼠随机分为假手术组和骨质疏松模型组,其中骨质疏松模型组待造模成功1周后,再随机分为骨质疏松组和雌激素替代治疗组。全部大鼠于灌胃给药12周后测量全身骨密度,取血清测量一氧化氮水平及雌激素含量,并做左侧股骨的扫描电镜观察。结果:骨质疏松组血清一氧化氮水平(67.25±8.28)μmol/L和雌激素含量(34.79±4.21)μg/L分别低于假手术组犤(75.36±7.49)μmol/L,(66.68±3.39)μg/L犦(P<0.05,P<0.01);雌激素替代治疗大鼠骨密度升高,其血清一氧化氮水平(75.22±7.66)μmol/L和雌激素含量(72.25±3.52)μg/L高于骨质疏松组(P<0.05,P<0.01)。电镜观察雌激素替代治疗组和假手术组在骨小梁数量、连续性等方面均明显优于骨质疏松组。结论:一氧化氮与骨质疏松症的发生有密切关系,雌激素可通过改变血清一氧化氮水平治疗骨质疏松症。     

通络方剂对糖尿病大鼠血浆和组织血管紧张素水平的调整

目的:观察通络方剂对实验性糖尿病大鼠血浆、肾脏、心脏和腹主动脉组织血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ的影响。方法:实验于2005-08/12在解放军第二军医大学动物中心完成。选取健康雄性SD大鼠30只,体质量160～200g,大鼠适应性饲养5d、禁食18h后,随机数字表法分为糖尿病模型组20只和正常对照组10只。用链脲佐菌素(60mg/kg,一次性腹腔注射)诱导糖尿病模型。3d后测定尾静脉末梢血糖≥16.7mmol/L,尿糖强阳性者为诱导糖尿病模型成功。将造模成功的大鼠适应性饲养1周后,再随机分成糖尿病通络方剂治疗组10只:通络方剂直接溶于蒸馏水,1.0g/(kg·d)、糖尿病未治疗组10只。糖尿病未治疗组和正常对照组均以同一时间同等剂量蒸馏水一次灌胃。在实验第8周取血并取肾、心脏及腹主动脉,采用放射免疫分析法测定血浆和各组织匀浆血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平。显著性分析采用单因素方差分析,组间比较采用t检验。结果:纳入大鼠30只,均进入结果分析。①第8周时,糖尿病未治疗组血浆、肾脏、心室肌和腹主动脉组织匀浆血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平较正常对照组明显升高[血管紧张素Ⅰ(14.77±0.54),(10.31±0.37)μg/L;(5.65±1.06),(3.73±0.28);(3.99±0.34),(2.72±0.34);(13.05±1.29),(5.00±0.29)ng/kg;血管紧张素Ⅱ(669.61±38.15),(471.08±23.47)ng/L;(6.36±1.81),(2.64±0.25);(3.84±0.59),(2.49±0.15);(12.52±1.95),(4.37±0.19)ng/kg;P<0.01]。②通络方剂干预后血浆、肾脏、腹主动脉血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平较糖尿病未治疗组明显下降,差异有显著性意义[血管紧张素Ⅰ(12.81±0.65)(14.77±0.54)μg/L;(4.06±0.46)(5.65±1.06);(8.50±1.15),(13.05±1.29)ng/kg;血管紧张素Ⅱ(543.92±30.80),(669.61±38.15)ng/L;(3.58±0.77),(6.36±1.81);(8.54±1.58),(12.52±1.95)ng/kg;P<0.01]。③各组大鼠通络方剂干预后心脏血管紧张素Ⅰ、血管紧张素Ⅱ水平较糖尿病未治疗组虽有下降,但其差异并无显著性意义[(3.69±0.67),(3.99±0.34);(3.71±1.05),(3.84±0.59)ng/kg]。结论:通络方剂能不同程度降低实验性糖尿病大鼠血浆、肾脏、心脏和腹主动脉组织血管紧张素Ⅰ和血管紧张素Ⅱ水平,对保护和延缓糖尿病肾脏及心血管并发症的发生和进展有一定意义。     

维生素D3和华法令诱导的大鼠动脉钙化模型特点

目的探讨维生素D3联合华法令对大鼠动脉钙化的作用,为心血管疾病的康复预防措施介入提供基础研究数据.方法实验选用12只4周龄雄性SD大鼠,随机分为钙化组和正常组,每组6只.钙化组给予皮下注射维生素D3 3×105 U/(kg·d),持续3 d,同时华法令15 mg/(100g·12 h),持续4 d,制备大鼠动脉钙化模型.取腹主动脉制成石蜡切片von Kossa染色观察动脉钙化情况,同时取胸主动脉按RT-PCR方法检测骨保护素的表达,另取右侧胫骨测量骨密度.结果钙化组大鼠主动脉yon Kossa染色见中膜有成片或局灶黑色深染区域,为主动脉的钙化部位.正常组主动脉壁骨保护素mRNA相对含量[(45.6±0.6)%]明显高于钙化组[(24.6±0.4)%](P＜0.05).正常组大鼠胫骨骨密度[(0.108±0.032)g/cm2]高于钙化组[(0.082±0.038)g/cm2],但差异无显著性意义(P＞0.05).结论华法令和维生素D3能诱导大鼠主动脉中膜钙化,钙化的主动脉局部骨保护素的表达水平降低.