疏肝健脾方对实验性腹泻型肠易激综合征5-羟色胺相关的结肠黏膜离子通道转运机制的影响

目的 探讨疏肝健脾方对实验性腹泻型肠易激综合征5-羟色胺(5-HT)相关的结肠黏膜离子转运的调节机制。方法 将SD大鼠随机分成正常组、模型组、疏肝健脾组,每组12只;模型组及疏肝健脾组采用乙酸灌肠加束缚应激进行造模,造模成功后,正常组和模型组给予生理盐水,疏肝健脾组给予疏肝健脾方灌胃14天。在药物和特异性阻断剂的作用下,采用短路电流技术,体外测量5-HT引起的结肠上皮短路电流变化。结果 3组大鼠离体远端结肠基础电流、基础电压及跨膜电阻之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。5-HT引起的大鼠结肠黏膜产生的短路电流峰值模型组比正常组降低(P<0.05),疏肝健脾组较模型组升高(P<0.05)。在结肠黏膜的顶膜侧加入4,4′-diisothiocyanato-stilbene-2,2′-disulfonic acid（ DIDS,500μmol/L)后,5-HT引起的短路电流峰值模型组比正常组降低(P<0.05),疏肝健脾组较模型组升高(P<0.05);当顶膜溶液中Na+被替换(无Na+)或顶膜侧加入阿米洛利(100μmol/L)后,5-HT引起的短路电流峰值模型组比正常组降低(P<0.05),疏肝健脾组较模型组升高(P<0.05)。结论 疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠黏膜5-HT通路相关的跨上皮电活动的作用是通过调节Cl-和HCO3-的分泌实现的,其调节是通过位于结肠上皮顶膜的囊性纤维化跨膜调控性Cl-通道,以及位于基底膜的Na+-K+泵、钠钾氯共转运体、钠碳酸氢根共转运体、Cl-/HCO3-交换器和基底膜K+通道共同作用的结果     

苦参素对结肠炎大鼠能量代谢水平的调控作用

目的探讨苦参素对结肠炎大鼠能量代谢水平的调控作用。方法将40只雄性SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、苦参素组、美沙拉嗪组,除正常组以外,其他组均采用TNBS/乙醇复合法复制大鼠结肠炎模型。造模成功后,模型组和正常对照组大鼠均以饮用水灌胃,苦参素组大鼠给予200mg/kg苦参素溶液灌胃,美沙拉嗪组大鼠给予150mg/kg美沙拉嗪混悬液灌胃。观察实验大鼠一般情况及结肠黏膜大体形态,并采用ELISA法检测实验大鼠结肠黏膜VEGF、EGF、IGF-1、TGF-β1的水平;比色法检测大鼠结肠组织中ATP含量及SDH、Na~+-K~+-ATPase,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活性。结果与TNBS模型组相比,OMT治疗组一般情况和结肠黏膜损伤的形态学均有明显改善,结肠组织SDH、Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase等酶的活性升高(P0.05或P0.01),VEGF、IGF-1在结肠黏膜中的水平均有明显改善(P0.05或P0.01),ATP含量、EGF浓度、TGF-β1浓度降低(P0.05)。结论苦参素可有效缓解TNBS/乙醇引起的大鼠结肠黏膜能量代谢障碍,促进肠黏膜屏障的修复,抑制结肠黏膜损伤。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响

目的探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响。方法采用"大黄+利血平+控制饮食"的多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,连续造模15 d;大鼠随机分为正常组,模型组,补中益气汤低、中、高剂量组(4.67,9.35,18.70 g·kg-1),连续给药15 d;观察并计算大鼠腹泻指数;测定大鼠肠黏膜Na+-K+ATP酶的活性;Western Blot法检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠-氢交换体3(NHE3)、p38MAPK、p-p38MAPK、MAPKAPK2、p-MAPKAPK2、Akt2、p-Akt2、Ezrin、p-Ezrin蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠小肠黏膜Na~+-K~+ATP酶活性显著降低(P0.01),小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3、p-p38MAPK、p-MAPKAPK2、p-Akt2、p-Ezrin蛋白相对表达量显著降低(P0.01)。与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组大鼠在第25,30天的腹泻指数明显下降(P0.05,P0.01),补中益气汤高剂量组大鼠小肠黏膜Na~+-K~+ATP酶活性显著提高(P0.05),补中益气汤中、高剂量组的SGLT1、GLUT2蛋白相对表达量及补中益气汤高剂量组的NHE3、p-MAPKAPK2、p-Akt2、p-Ezrin蛋白相对表达量显著上调(P0.05,P0.01)。结论通过提高SGLT1蛋白的表达,促进p38MAPK/Ezrin通路中蛋白的磷酸化,可能是补中益气汤治疗脾虚泄泻的机理之一。     

麻仁软胶囊在诱导大鼠结肠上皮细胞阴离子分泌中的作用

目的:探讨麻仁胶囊对大鼠结肠上皮电解质转运的影响和机制.方法:在药物和特异性通道阻断剂的作用下,用短路电流(ISC)技术,体外测量跨结肠上皮电解质转运的变化;并且用ELISA方法测定火麻仁对结肠上皮细胞内cAMP浓度的影响.结果:在结肠上皮的浆膜面加入麻仁胶囊(0.1～25mg/ml),能产生一个剂量依赖性的短路电流,EC50为2.88±0.39mg/ml;将Cl-或HCO3-从浴液中替换掉以后,分别将火麻仁诱导的短路电流抑制了78.3 %(n=4,P<0.05)和28.3%(n=4,P<0.05),当两种阴离子同时被替换后,该电流减少了97. 8%(n=4,P<0.01);在结肠上皮的黏膜面用Na 通道阻断剂amiloride(100μ M)预处理后,不影响随后由该药产生的短路电流;而该短路电流能被黏膜面Cl-通道非选择性阻断剂DPC(1mM)完全阻断,但对DIDS(100 M)(Ca2 激活的Cl-通道阻断剂)不敏感;在结肠上皮的浆膜面加入Na -K -2Cl-共转运体(NKCC)阻断剂bumetanide(100 M)能完全抑制该药产生的短路电流;浆膜面K 通道阻断剂quindine(100 M)能部分抑制该药在结肠上皮产生的短路电流(n=4,P<0.01).胞内腺苷酸环化酶(AC)的抑制剂MDL-12330A(20 M)预处理结肠上皮30分钟后,显著抑制了该药诱导的短路电流增加;在ELISA测定结肠上皮胞内[cAMP]i的实验中,该药被证实能升高胞内[cAMP]i.结论:麻仁胶囊能呈剂量依赖性地刺激大鼠远端结肠上皮的阴离子分泌;通过升高胞内[cAMP]i激活黏膜面上的CFTR通道,并且共同作用位于基底膜面的NKCC和K通道,从而促进结肠上皮的水和电解质转运.     

糖尿病周围神经病变“络损”辨证属性的研究

[目的]采用益气法、养血法、养阴法、温阳法,观察其对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经Na~+-K~+-ATP酶活性变化的影响,反证DPN"络损"的辨证属性。[方法]采用STZ诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、益气组、养血组、养阴组、温阳组,另设正常对照组。益气组灌胃四君子汤;养血组灌胃四物汤;养阴组灌胃六味地黄汤;温阳组灌胃金匮肾气丸;模型组和正常对照组灌胃同容积的蒸馏水,连续8周,观察糖尿病大鼠坐骨神经Na~+-K~+-ATP酶活性、血糖等指标的变化。[结果]模型组较正常组大鼠坐骨神经Na~+-K~+-ATP酶活性明显降低(P<0.05),益气组、养阴组能明显提高Na~+-K~+-ATP酶活性,养血组、温阳组较模型组有所提高,但无统计学意义(P>0.05)。[结论]糖尿病周围神经病变"络损"的中医辨证属性以气阴两虚为主。     

平胃散对湿阻中焦证大鼠肝脏水通道蛋白SLC12家族影响的研究

目的:观察平胃散对湿阻中焦证大鼠肝脏水通道蛋白SLC12家族的影响,探讨平胃散揭示湿阻中焦证可能存在的作用机制。方法:将大鼠分成正常组、模型组、自然恢复组、平胃散6.0、3.0、1.5g/kg剂量组,连续灌胃3天。利用酶联免疫法分别检测各组大鼠肝脏水通道蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量。结果:与正常组比较,模型组胃肠动力明显障碍,肠道吸收明显降低,Na~+-K~+-ATP酶活力显著降低,肝脏组织KCC1、KCC3、NKCC1含量明显上升,KCC4含量明显下降。与模型组比较,平胃散组胃肠动力肠道吸收明显改善,Na~+-K~+-ATP酶活力显著增强,以平胃散1.5g/kg剂量组尤为明显,KCC1含量下降,KCC3和NKCC1含量明显上升。结论:平胃散能够减轻湿阻中焦证大鼠症状,可能与平胃散降低胃残留,促进肠道吸收功能,改善Na~+-K~+-ATP酶活性,抑制KCC1,激活KCC3和NKCC1的表达有关。     

生姜对缺血性脑水肿大鼠脑组织Na~+-K~+-2Cl~-联合转运蛋白1型的影响

目的:研究生姜对缺血性脑水肿大鼠脑组织Na~+-K~+-2Cl~-联合转运蛋白1型(Na~+-K~+-2Cl~- combined transporter type 1,NKCC1)表达水平的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型对照组,生姜高、中、低剂量组。通过线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。各组在造模前、后均给药5 d。生姜高、中、低剂量组依次给予生姜10,20,40μL/g,假手术组、模型对照组给予等容积生理盐水10μL/g,灌胃给药,1 d 1次,连续给药10 d。进行神经功能评分,通过病理组织学检查大脑病变情况,干湿重法测大脑含水量,免疫荧光染色法和Western-Blot法研究NKCC1的表达水平。结果:与假手术组对比,模型对照组大鼠出现明显的神经功能障碍,脑组织出现明显梗死灶,脑组织含水量明显升高, NKCC1蛋白表达水平升高(P0.01)。与模型对照组对比,生姜高、中剂量组神经功能评分降低,脑梗死面积缩小,脑组织含水量降低,NKCC1蛋白的表达降低(P0.05)。结论:生姜可能通过降低NKCC1水平,对缺血性脑水肿大鼠产生保护作用。     

疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征大鼠5-羟色胺相关的结肠黏膜上皮分泌功能的影响

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠及疏肝健脾方干预后IBS-D大鼠结肠黏膜上皮分泌功能的影响。方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、疏肝健脾组,模型组及疏肝健脾组采用乙酸灌肠加束缚应激进行造模,造模成功后,正常组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃,疏肝健脾组予疏肝健脾方灌胃。采用恒温灌流装置体外测量跨上皮电流为短路电流。观察5-HT、去甲肾上腺素(NE)对各组大鼠结肠上皮短路电流的影响。结果:模型组大鼠基础电流较正常组及疏肝健脾组高,但是差异无统计学意义;5-HT引起的模型组大鼠结肠黏膜上皮产生的短路电流较正常组及疏肝健脾组大鼠降低(P0.05);去甲肾上腺素引起的模型组大鼠结肠黏膜上皮产生的短路电流降低幅度较正常组及疏肝健脾组低。结论:5-HT引起的IBS-D大鼠结肠黏膜上皮的分泌活动较正常大鼠弱,疏肝健脾方通过改善IBS-D大鼠对5-HT的反应性达到治疗目的。     

四神丸对慢性复发型结肠炎大鼠结肠组织LDH、SDH、Na~+-K~+-ATPase和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活力的影响

目的:探究四神丸对慢性复发型结肠炎大鼠结肠组织乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、Na~+-K~+-ATPase和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活力的影响。方法:参考文献复制慢性复发型SD大鼠结肠炎模型,将60只大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、四神丸高、中、低剂量组和美沙拉嗪对照组,观察大鼠一般情况并进行结肠肉眼下及镜下损伤评分,分别采用考马斯亮蓝法检测结肠黏膜总蛋白量、定磷法及分光光度法检测LDH、SDH、Na~+-K~+-ATPase和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活力变化。结果:与模型组比较,四神丸各组大鼠结肠质量明显减轻,结肠长度增长,以及结肠肉眼下及镜下损伤评分均明显降低,同时SDH、Na~+-K~+-ATPase和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活力均显著提升,但LDH活力出现明显降低。结论:四神丸可能通过恢复结肠黏膜局部能量代谢水平而达到减轻慢性复发型UC大鼠的目的。     

基于水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+ -K~+ -ATP酶活性变化研究湿阻中焦证的水液代谢机制

目的:以前期研究的水通道蛋白为平台,通过观察并分析水协同转运蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+-K~+-ATP酶活性变化,揭示湿阻中焦致水液代谢紊乱及平胃散对其修复作用机制的科学内涵,为中医临床治疗本证型疾病提供实验参考;同时搭建中药复方水通道调节剂的研究平台。方法:模拟"外湿过盛,困阻脾胃、饮食不节,湿从内生、情志不遂,气机受阻、水湿不运三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型。用蛋白定量法测定Na~+-K~+-ATP酶活性,用酶联免疫法(ELISA)测定肾脏组织KCC1,KCC3,KCC4,NKCC1的含量。结果:与空白组比较,模型组肾脏KCC1、KCC4含量升高,KCC3、NKCC1、Na~+-K~+-ATP酶活力降低,与模型组比较,自然恢复组肾脏KCC1、KCC3、NKCC1含量降低,Na~+-K~+-ATP酶活力明显升高(P0.01),KCC4含量有上升趋势,经药物干预后,各给药组KCC1含量均明显降低(P0.01),平胃散中剂量组KCC3、KCC4含量明显升高(P0.01),平胃散低剂量组NKCC1含量明显降低(P0.01);平胃散低剂量组肾脏Na~+-K~+-ATP酶活力明显升高(P0.01);呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+-K~+-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义(P0.01);与自然恢复组比较,平胃散中剂量组肾脏KCC1、KCC3、KCC4含量及Na~+-K~+-ATP酶活力有上升趋势,平胃散低剂量组NKCC1含量下降明显(P0.01),呋塞米组和平胃散加泽泻组KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na~+-K~+-ATP酶活性均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:(1)湿阻中焦证模型不仅能够影响体内能量代谢,还能够影响KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量表达,这可能是湿阻中焦导致水代谢输布障碍的机制之一;(2)平胃散能够调整Na~+-K~+-ATP酶活性和KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量分布参与能量代谢和水液代谢调控,这可能是平胃散燥湿运脾、行气导滞、散中焦之湿阻治疗湿阻中焦证的分子机理之一;(3)水协同转运蛋白之间可能存在互补代偿机制。     

清热祛湿法对实验性溃疡性结肠炎大鼠黏膜损伤的影响

目的 探讨清热祛湿法(肠涤清灌肠液灌肠+肠炎清1号灌胃)对实验性溃疡性结肠炎(UC)大鼠黏膜损伤、血清和结肠组织中SOD活力及MDA含量的影响.方法 成年雌性SD大鼠51只,先随机抽取8只大鼠作为正常组,不予造模;剩余的43只大鼠予造模后,第3天随机抽取2只解剖,观察造模是否成功;剩余的41只大鼠随机分为模型组11只,肠涤清组、肠涤清+肠炎清组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组各10只.造模后第4天开始,正常组和模型组给予生理盐水灌肠、其余三组分别给予肠涤清灌肠、肠涤清灌肠+肠炎清灌胃、SASP灌肠+灌胃,疗程2周.分别从大鼠的一般状况、结肠黏膜损伤指数及病理形态变化、血清和结肠组织中SOD活力及MDA含量的变化来观察清热祛湿法对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的实验性UC大鼠的作用机制.结果 与模型组和其他两个治疗组比较,肠涤清+肠炎清可以显著改善UC大鼠的腹泻和便血情况,减轻结肠黏膜损伤指数,改善结肠黏膜的病理形态学情况,提高血清和结肠组织中SOD活力,降低血清和结肠组织中MDA含量.结论 肠涤清和肠炎清可能通过提高血清和结肠组织中SOD活力及降低MDA含量来达到对实验性UC大鼠的治疗作用.     

疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征大鼠多巴胺信号通路结肠黏膜吸收功能的影响

[目的] 探讨疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠结肠黏膜吸收功能的影响。[方法] 将体质量(200±20)g 雄性SD大鼠随机分为D-IBS模型组、疏肝健脾方治疗组和正常对照组,经过造模及疏肝健脾方治疗后,采用短路电流技术体外测定各组大鼠结肠黏膜的短路电流变化,并观察多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和疏肝健脾方对大鼠结肠黏膜短路电流的影响。[结果] D-IBS模型组较正常组大鼠基础短路电流值略高,但差异无统计学意义(P>0.05);NE可引起大鼠结肠黏膜短路电流下降,且D-IBS模型组较正常组下降幅度明显增加(P<0.05);经疏肝健脾方治疗后,治疗组较模型组对DA 引起的最大短路电流变化明显减小(P<0.05)。[结论] DA可引起D-IBS模型大鼠结肠黏膜吸收活动增强,疏肝健脾方能通过改善D-IBS大鼠对DA的反应性而发挥其改善肠道吸收功能的作用。     

基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方治疗气虚型便秘大鼠的作用机制

目的：基于VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路探讨益气润肠方对气虚便秘模型大鼠作用及其机制。方法：选取48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、乳果糖组、益气润肠方低剂量组、益气润肠方中剂量组和益气润肠方高剂量组，每组8只。空白组大鼠正常饮食，每日给予生理盐水灌胃，其余大鼠给予洛哌丁胺混悬液3 mg/（kg·d）灌胃加饥饱饮食2周制作气虚便秘模型。造模成功后，空白组及模型组每日给予生理盐水灌胃，乳果糖组给予乳果糖口服溶液1.67 g/（kg·d）灌胃，益气润肠方高、中、低剂量组分别给予益气润肠方17.5、8.75、4.375 g/（kg·d）灌胃，连续2周。14 d后称量大鼠粪便湿重、粪便干重并计算粪便含水率；留取结肠组织，采用苏木精伊红染色法观察结肠病理变化，qPCR检测大鼠结肠血管活性肠肽（VIP）、环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A(PKA)、水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平，Western blot检测大鼠VIP、AQP3蛋白表达水平。结果：与空白组比较，模型组大鼠体质量明显降低（P <0.01），粪便湿重及粒数明显减少（P <0.01）；与模型组比较，益...     

参苓白术散加减方对结肠黏膜组织水通道蛋白4、水通道蛋白8表达的影响

目的观察参苓白术散加减方对脾虚泄泻模型大鼠结肠黏膜组织水通道蛋白(aquaporin,AQP)4、AQP8的表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠42只随机分为正常组、模型组、高中低剂量组及西药组6组,采用水环境小平台站立法复合高乳糖饲料喂养的方法复制腹泻模型,模型成功后,灌胃给药7天,取结肠组织,通过免疫组化的方法观察结肠黏膜组织AQP4、AQP8的变化。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织AQP4、AQP8的表达明显降低;与模型组比较,高中低剂量组及西药组均可以提高结肠黏膜组织中AQP4的表达,高低剂量组和西药组可提高AQP8的表达,中剂量组改善不明显。结论参苓白术散加减方可提高脾虚泄泻模型大鼠结肠黏膜组织中的AQP4、AQP8的表达水平,促进水分的吸收,从而达到止泻的目的。     

车前子对腹泻大鼠结肠组织AQP3基因蛋白表达的影响

目的观察车前子对腹泻大鼠结肠组织AQP3基因蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法采用番泻叶灌胃复制腹泻大鼠模型。将60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药(氢氯噻嗪)对照组和车前子低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组均于每日上午灌胃番泻叶药液,正常组灌胃等量蒸馏水;每日下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量的蒸馏水,连续14 d。实验结束后,根据粪便性状和大便次数,统计对比各组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数,采集结肠组织,苏木精-伊红(HE)染色法观察结肠黏膜病理形态学变化,免疫荧光法检测结肠中AQP3蛋白表达情况,qRT-PCR法和Western blot法检测结肠组织AQP3基因和蛋白的表达水平。结果模型组大鼠稀便率、平均稀便级和腹泻指数均明显增加(P0.01);结肠黏膜表皮细胞出现凋亡坏死,固有层毛细血管扩张充血,少量中性粒细胞浸润;AQP3基因和蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与模型组比,车前子各剂量组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数均明显降低(P0.01);车前子各剂量组结肠黏膜表皮细胞凋亡坏死、毛细血管扩张充血和中性粒细胞浸润现象均有改善,以高剂量组改善较为显著;AQP3基因和蛋白表达水平显著升高(P0.01)。结论车前子具有较好的止泻作用,其作用机制可能与改善结肠黏膜炎性损伤,上调AQP3基因蛋白的表达,提高结肠对水的吸收能力有关。     

益气解毒化瘀方对溃疡性结肠炎大鼠肠粘膜超微结构及F-actin蛋白影响

目的观察益气解毒化瘀方对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜电镜超微结构及F-actin蛋白的影响,探讨其对UC大鼠肠粘膜屏障的作用。方法采用TNBS/乙醇灌肠法复制UC模型大鼠,将50只随机分为正常组、模型组、益气解毒化瘀方高、低剂量组及柳氮磺吡啶组,益气解毒化瘀方低、高剂量组,每组10只。观察大鼠一般情况及组织病理学改变,并采用透射电镜观察结肠黏膜超微结构改变,免疫组织化学法测定大鼠肠黏膜F-actin蛋白的表达。结果益气解毒化瘀方可明显降低结肠黏膜损伤指数,修复肠粘膜。与模型组比较,中药组及SASP组大鼠结肠黏膜上皮间相互连接致密,紧密连接结构完整,细胞间隙增宽程度明显减轻,桥粒结构完整,未见扩张的内质网及肿胀的线粒体。各治疗组大鼠结肠组织F-actin蛋白的表达均显著升高(P0.01);与SASP组比较,中药低剂量组有显著差异(P0.05),而中药高剂量组则无明显差异(P0.05);与中药低剂量组比较,中药高剂量组大鼠结肠组织F-actin蛋白的表达明显升高(P0.01)。结论益气解毒化瘀方能改善UC模型大鼠的结肠黏膜电镜超微结构,提高UC模型大鼠结肠组织纤丝状肌动蛋白的表达,进而对肠粘膜起到修复作用。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠小肠黏膜修复及葡萄糖吸收相关转运体的影响

目的:探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠小肠黏膜修复及葡萄糖相关转运体表达的影响。方法:以"大黄+利血平+控制饮食"多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,随机分为补中益气汤低、中、高剂量组和脾虚泄泻模型组,采用HE染色观察大鼠小肠黏膜组织病理学改变,并检测大鼠体质量、尿D-木糖排泄率及小肠葡萄糖吸收量,采用荧光定量RT-PCR检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠氢交换体3(NHE3)mRNA的表达。结果:脾虚泄泻大鼠小肠绒毛部分损伤,表面上皮缺失,补中益气汤可促进小肠黏膜的修复;与正常对照组比较,造模后大鼠尿D-木糖排泄率和葡萄糖吸收量显著降低(P0.05或P0.01);经补中益气汤治疗后尿D-木糖排泄率及葡萄糖吸收量升高。模型组大鼠小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3 mRNA表达量均显著低于正常对照组(P0.01);给予补中益气汤后SGLT1、GLUT2、NHE3 mRNA表达量均不同程度提高,其中以高剂量组作用最佳(P0.05或P0.01)。结论:补中益气汤可促进脾虚泄泻大鼠小肠黏膜损伤的修复,上调SGLT1、GLUT2、NHE3mRNA表达,从而促进葡萄糖及水、钠的吸收。     

补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响

目的:观察补中益气汤对实验性结肠炎Treg细胞的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组和美沙拉嗪组,每组各8只。采用5%葡聚糖硫酸钠溶液制备UC大鼠模型。造模结束后,补中益气汤组分别予低、中、高剂量补中益气汤灌胃,空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪溶液灌胃,连续7天。观察大鼠结肠组织形态学改变,检测大鼠外周血清中的IL-10的含量、结肠组织中Foxp3基因表达水平及Foxp3蛋白的含量,并检测大鼠外周血、肠系膜淋巴结、结肠固有层和脾脏中Treg细胞的数量。结果:(1)与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组和美沙拉嗪组均可上调大鼠血清中IL-10含量(P0.01);(2)与模型组比较,补中益气汤低、高剂量组和美沙拉嗪组结肠组织中Foxp3的基因表达均有所升高(P0.05),各给药组大鼠结肠中的Foxp3蛋白表达均明显增加(P0.01);(3)模型组大鼠结肠固有层中的Treg细胞数量低于各组,且与补中益气汤中剂量组和美沙拉嗪组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补中益气汤可以改善DSS诱导的大鼠结肠黏膜损伤,其作用机制可能与上调损伤部位Treg细胞数量,促使Treg分泌IL-10有关。     

车前子对腹泻大鼠炎性因子和结肠组织AQP4 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察车前子对腹泻大鼠血清中炎性因子和结肠组织水通道蛋白4(AQP4)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗腹泻的作用机制。方法:采用番泻叶药液灌胃法复制大鼠腹泻模型。将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氢氯噻嗪组(9 mg·kg-1)和车前子低、中、高剂量组(0.95,1.9,3.8 g·kg-1)。除正常组外,其余各组均于每日上午灌胃番泻叶药液(20 mL·kg-1),正常组灌胃等量的蒸馏水;每日下午各治疗组灌服相应药物,正常组和模型组灌服等量蒸馏水,连续14 d。实验结束后,根据粪便性状和大便次数,统计对比各组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数,采集血清和结肠组织标本,检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠黏膜病理形态学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中AQP4 mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组稀便率、平均稀便级和腹泻指数显著升高(P0.01),结肠黏膜表皮细胞出现凋亡坏死,固有层毛细血管扩张充血明显,少量中性粒细胞浸润,血清中TNF-α,IL-6和CRP的含量明显升高(P0.05,P0.01),AQP4 mRNA和蛋白的表达均明显下降(P0.01);与模型组比较,车前子各剂量组大鼠的稀便率、平均稀便级和腹泻指数均显著降低(P0.01),结肠黏膜表皮细胞凋亡坏死、毛细血管扩张充血和中性粒细胞浸润现象明显改善,血清中TNF-α和CRP的含量降低(P0.05,P0.01),AQP4 mRNA和蛋白的表达水平明显升高(P0.05,P0.01)。结论:车前子具有较好的止泻作用,其机制可能是抑制炎症反应、修复结肠黏膜病理损伤,上调AQP4的表达,调节水液代谢。     

痛泻要方加减引经药防风对肠易激综合征大鼠水液代谢和5-HT系统的调控作用

目的:探讨引经药防风对痛泻要方调控腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠水液代谢和5-羟色胺(5-HT)信号系统的影响。方法:将40只IBS-D SD大鼠随机分为模型组,痛泻要方缺防风组(26 g·kg^-1),痛泻要方全方组(30 g·kg^-1)和痛泻要方倍用防风组(34 g·kg^-1),另取10只正常SD大鼠作为正常组,除正常组外,其余各组采用母子分离联合乙酸灌肠法,建立腹泻型肠易激综合征大鼠模型,造模后各组灌胃给予相应药物,连续14 d,观察并计算腹泻指数和粪便含水量,微量法检测肠黏膜Na^+-K^+-ATP酶活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测5-HT的含量,化学发光法检测单胺氧化酶-A(MAO-A)活性,通过免疫组化法检测结肠中水通道蛋白4(AQP4)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测下丘脑和结肠中5-HT受体3(5-HT3R),5-HT受体4(5-HT4R)和5-HT转运体(SERT)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的粪便含水量,5-HT含量,MAO-A酶活性,5-HT3R表达均显著升高(P<0.01),肠黏膜Na^+-K^+-ATP酶活性,AQP4,5-HT4R和SERT表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠的腹泻指数和粪便含水量、下丘脑与结肠中的5-HT含量,MAO-A酶活性,5-HT3R蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),但痛泻要方缺防风组5-HT3R蛋白表达未见明显差异,各给药组肠黏膜Na^+-K^+-ATP酶活性,AQP4,5-HT4R和SERT表达均明显增加(P<0.05,P<0.01);与痛泻要方缺防风组比较,痛泻要方全方组和痛泻要方倍用防风组大鼠腹泻指数和粪便含水量,5-HT含量及MAO-A酶活性,5-HT3R的蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),Na^+-K^+-ATP酶活性和SERT的蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:防风可增强痛泻要方改善IBS-D水液代谢、调控5-HT信号系统多靶点的效应,进一步证实了防风的引经增效作用。