左归丸对不育症SD大鼠Ki67蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察左归丸对雷公藤多苷(tripterygium wilfordii,GTW)构建的少弱精子症模型大鼠睾丸组织中组织细胞增殖核抗原(Ki67)蛋白及mRNA表达的影响,初步探讨左归丸改善大鼠模型生殖功能的作用机制。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、左归丸组,每组12只,共干预8周。正常组全程给予去离子水灌胃;模型组前4周给予40 mg·(kg·d)~(-1)的GTW进行造模,实验5～8周给予去离子水灌胃干预。左归丸组前4周用40 mg·(kg·d)~(-1)的GTW造模,实验5～8周,给予6 g·(kg·d)~(-1)的左归丸混悬液灌胃。8周后将所有大鼠处死,无菌取睾丸组织,固定、包埋并切片。免疫组化法检测各组大鼠睾丸Ki67蛋白的表达,比较各组平均光密度值。采用RT-PCR方法检测各组大鼠睾丸组织Ki67mRNA的表达情况。结果:模型组大鼠睾丸组织各级生精细胞核中Ki67较正常组表达明显减弱(P<0.05);左归丸组睾丸组织中各级生精细胞核中Ki67蛋白表达较模型组明显增多(P<0.05)。模型组ki67 mRNA表达水平较正常组明显降低(P<0.05);正常组与左归丸组ki67 mRNA表达水平相当;左归丸组ki67 mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05)。结论:左归丸能够上调Ki67蛋白及mRNA的表达,促进生精细胞增殖,提高各级生精细胞的数量并改善其功能,最终提高精子质量。     

左归丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织干细胞因子及其mRNA表达的影响研究

目的　观察左归丸对雷公藤多苷（GTW）诱导的少弱精子症模型大鼠睾丸干细胞因子（SCF）及其mRNA表达的影响,初步探讨其改善模型大鼠生殖功能的机制。方法　2014年3—4月选取36只SPF级SD大鼠,随机分为正常组、雷公藤多苷模型组、左归丸治疗组,每组12只。正常组全程给予去离子水灌胃干预;实验前4周,雷公藤多苷模型组、左归丸治疗组均给予雷公藤多苷40 mg?kg-1?d-1造模;实验第5~8周,雷公藤多苷模型组给予去离子水灌胃干预,左归丸治疗组给予左归丸6 g?kg-1?d-1。8周后处死所有大鼠,无菌留取睾丸组织,并进行固定、包埋、切片。采用免疫组化法检测各组大鼠睾丸组织SCF表达水平,采用Real-time PCR法检测各组大鼠睾丸组织SCF mRNA表达水平。结果　左归丸治疗组大鼠睾丸组织SCF及其mRNA表达水平高于雷公藤多苷模型组（P<0.05）。结论　左归丸可通过上调SCF及其mRNA表达水平,促进精原干细胞的分裂和增殖,抑制生精细胞凋亡。     

左归丸对生精障碍大鼠模型生殖激素水平及精子质量的影响

目的观察左归丸对雷公藤多苷诱导的生精障碍大鼠模型血清生殖激素水平和精子质量的影响。方法 36只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组12只造模组24只。空白对照组采用去离子水造模组采用雷公藤多苷干预4周,每组随机抽取4只大鼠进行模型验证。造模成功后,空白对照组大鼠中随机选取6只做为空白对照组;造模组中随机选取12只,按随机数字表法分为生精障碍模型组和左归丸组,每组6只。空白对照组和生精障碍模型组采用去离子水灌胃左归丸组采用左归丸进行灌胃干预4周。称重大鼠睾丸、附睾质量,计算脏器指数,检测血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、雌二醇(E2)的含量和精子参数。结果左归丸组大鼠FSH、LH、T、E2水平、精子浓度、精子总活率(PR+NP)、前向运动精子百分率(PR)显著高于生精障碍模型组差异有统计学意义(P0.01或P0.05);除PRL水平外,空白对照组FSH、LH、PRL、T、E2水平低于左归丸组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论左归丸可以在一定程度上恢复下丘脑-垂体-睾丸轴的作用,进而调控生殖内分泌激素分泌,使其恢复至正常水平这可能是其改善生精功能的重要途径之一。     

巴戟天萃取物对环磷酰胺诱导生精障碍大鼠支持细胞的影响

目的 探讨巴戟天萃取物对环磷酰胺(CTX)诱导生精障碍大鼠睾丸支持细胞的影响.方法 48只成年雄性SD大鼠,随机分为6组,空白对照组、CTX+NS组、CTX+ MO 10 g/kg组、CTX+ MO 20 g/kg组、CTX+MO 30 g/kg组、CTX+ MO 40 g/kg组.以CTX构建大鼠生精障碍动物模型;巴戟天水提物用乙酸乙酯萃取后取水层成分,分别以10、20、30、40 g/(kg·d)的浓度给予4个剂量实验组灌胃,空白对照组及CTX+ NS组予生理盐水灌胃,持续2周.取各组大鼠睾丸组织,荧光定量PCR检测卵泡刺激素受体(FSHR) mRNA和雄激素结合蛋白(ABP) mRNA表达的差异.结果 4个剂量实验组FSHR mRNA和ABP mRNA表达明显高于CTX+ NS组及空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 巴戟天萃取物对CTX诱导生精障碍大鼠的睾丸支持细胞具有保护作用,进而修复睾丸的生精功能.     

五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白表达及生精功能的影响

目的观察五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸支持细胞骨架蛋白表达和生精功能的影响。方法正常SD雄性大鼠25只,随机分为5组,每组5只。分别为正常组,模型组,五子衍宗丸低、中、高剂量组。正常组早晚均予0.5%羧甲基纤维素钠(50 mg/kg)灌胃;模型组上午给予雷公藤多苷(20 mg/kg)灌胃,下午给予0.5%羧甲基纤维素钠(50 mg/kg)灌胃;低、中、高五子衍宗丸组大鼠上午予雷公藤多苷(20 mg/kg)灌胃,下午分别予0.5,1.0,2.0 g/kg五子衍宗丸灌胃。30 d后,取睾丸及附睾组织。检测大鼠精子总数、前向运动精子百分率,免疫组化法检测睾丸支持细胞中波形蛋白、α-微管蛋白的表达,TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果和正常组相比,模型组精子总数、前向运动精子百分率下降,睾丸支持细胞中波形蛋白、α-微管蛋白表达下降,生精细胞凋亡增加;与模型组相比,五子衍宗丸中、高剂量组精子总数、前向运动精子百分率均提高;五子衍宗丸低、中、高剂量组睾丸支持细胞波形蛋白、α-微管蛋白的表达均增加,生精细胞的凋亡率下降。结论五子衍宗丸可通过调控睾丸支持细胞骨架蛋白的表达,抑制生精细胞的凋亡,改善生精功能。     

益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡、caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠睾丸质量、生精细胞、caspase-3蛋白表达、睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)的影响。方法:取清洁级雄性SD大鼠40只随机均分为5组:假手术组、精索静脉曲张模型组、益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组。模型建立4周后,假手术组及模型组均按15 m L·(kg·d)~(-1)给予去离子水,益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组分别给予益肾通络方颗粒剂混悬液1.5g·(kg·d)~(-1)、3.0 g·(kg·d)~(-1)、6.0 g·(kg·d)~(-1),灌胃,1次·d-1,持续60 d。60 d后5组大鼠均脱臼处死并分别取双侧睾丸,电子天平称取睾丸质量,并检测caspase-3在睾丸组织中的表达,生精细胞的凋亡并计算AI。结果:(1)睾丸质量的变化:5组大鼠左右两侧睾丸质量:假手术组为[(1.88±0.19)、(1.95±0.20)g]、精索静脉曲张模型组为[(0.72±0.23)、(1.31±0.34)g]、益肾通络方低剂量组[(0.73±0.28)、(1.39±0.31)g]、益肾通络方中剂量组为[(0.78±0.25)、(1.42±0.22)g]、益肾通络方高剂量组为[(1.08±0.28)、(1.64±0.33)g],假手术组、精索静脉曲张模型组与益肾通络方高剂量组大鼠两侧睾丸质量比较,差异具有统计学意义(P0.05);益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组与精索静脉曲张模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)益肾通络方各剂量组大鼠的生精细胞caspase-3蛋白表达低于精索静脉曲张模型组,高于假手术组;益肾通络方低剂量组大鼠生精细胞caspase-3蛋白表达高于中剂量组,益肾通络方中剂量组生精细胞caspase-3蛋白表达高于高剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)假手术组AI评分最低,益肾通络方干预组AI评分低于精索静脉曲张模型组;益肾通络方干预组组内比较,高剂量组低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:精索静脉曲张模型大鼠睾丸质量减轻、生精细胞caspase-3蛋白表达升高、AI增加,这可能是影响生育力的机制之一。单侧精索静脉曲张引起睾丸损害是双侧的,但右侧比左侧损害轻。益肾通络方能够降低生精细胞caspase-3蛋白表达,减少精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,对睾丸生精功能具有保护作用,进而可提高睾丸的生殖能力。     

生精中药对精索静脉曲张大鼠生殖作用的影响

目的:观察生精中药对精索静脉曲张大鼠生殖作用的影响.方法:90只大鼠随机分为3组,假手术组只开腹不做肾静脉结扎,模型组和生精中药组均建立精索静脉曲张模型.造模完成后15 d,生精中药组给予灌喂生精中药4 g/(kg·d),其他2组给予正常饮食.30 d后测定各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T),观察大鼠睾丸及附睾组织结构.结果:生精中药组血清T水平明显高于模型组,FSH与LH水平明显低于模型组(P均<0.05);光镜下大鼠睾丸及附睾组织结构优于模型组.结论:生精中药可以保护及修复功能受损的睾丸及附睾组织.     

雄蚕益肾方对肾阳虚大鼠睾丸抗氧化作用及睾丸Bcl-2、Cyt-c蛋白表达的影响

目的研究雄蚕益肾方对肾阳虚大鼠抗氧化作用及睾丸Bcl-2、Cyt-c蛋白表达的影响。方法取雄性SD大鼠40只,随机分成正常组10只、造模组30只。造模组予200 mg/kg腺嘌呤混悬液造肾阳虚模型成功后,随机分为模型组、左卡尼汀组、雄蚕益肾组,正常组与模型组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予相应药物连续灌胃,4 m L/d。4周后检测睾丸组织SOD、MDA、GSH-Px及血清性激素相关指标,免疫组化法测定睾丸Bcl-2、Cyt-c蛋白表达情况,取两侧睾丸做常规病理切片分析。结果与模型组相比,雄蚕益肾方组睾丸GSH-PX、SOD、血清T、E2浓度显著升高(P0.01),睾丸MDA浓度明显降低(P0.05),雄蚕益肾方组睾丸Bcl-2蛋白阳性表达率明显升高(P0.01),Cyt-c蛋白阳性表达率明显降低(P0.01);与模型组相比,雄蚕益肾方组睾丸生精上皮尚比较完整,组织内生精小管内可见精母细胞,生精小管内仍有大量精子生成,管腔可见大量精子。结论雄蚕益肾方能提高肾阳虚大鼠睾丸组织抗氧化作用,调节生精细胞凋亡,这可能是其调节生精功能的机制之一。     

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达影响

目的 通过检测大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达水平,探讨五子衍宗丸治疗少弱精子症的作用机制。方法 将体质量200～220 g的雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,生精胶囊组,五子衍宗丸低剂量、中剂量、高剂量组。采用连续灌服雷公藤多苷8周的方法复制少弱精子症模型,模型复制成功后连续给药4周。采用Western blot法测定Catsper1蛋白含量,采用荧光定量PCR法测定Catsper1 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测睾丸组织中cAMP含量。结果 生精胶囊和高剂量五子衍宗丸能明显提高模型大鼠睾丸组织中降低的cAMP含量以及升高睾丸组织中降低的Catsper1蛋白及其mRNA表达水平（P<0.05）。结论 促进Catsper1蛋白表达并参与cAMP-Ca2+正反馈可能是五子衍宗丸提高精子质量的机制之一。     

丝胶对2型糖尿病大鼠睾丸生精细胞PCNA表达的影响

目的:研究丝胶对2型糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA表达的影响.方法:40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组10只.糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型.待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理;丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天.采用ELISA方法检测各组大鼠血清睾酮水平、SP免疫组化法检测睾丸生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:糖尿病模型大鼠血清睾酮水平、睾丸生精细胞PCNA的表达均明显低于正常对照大鼠(P<0.01).丝胶可明显提高糖尿病大鼠血清睾酮水平和睾丸生精细胞PCNA的表达(丝胶治疗组与模型组比较:P<0.01);且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差别(P>0.05).结论:丝胶可显著提高2型糖尿病大鼠睾酮的合成及睾丸生精细胞PCNA的表达,明显改善2型糖尿病大鼠的生精功能,且作用与二甲双胍相当.     

绞股蓝、生山楂水提物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠脂质代谢相关因子的调控作用研究

目的:探讨绞股蓝、生山楂水提物预防大鼠非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic Steatohepatitis,NASH)及其对肝组织SREBP-1c、PPARγ和PPARαmRNA表达水平的影响。方法:40只雄性SD大鼠,随机分为4组,每组10只。除正常对照组外,高脂饲料喂养10周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。自造模即日起,正常对照组、模型组每天分别给予10mL/kg去离子水灌胃,中药组给予绞股蓝、生山楂水提物,西药组给予易善复混悬液灌胃。给药10周后,处死所有大鼠,观察各组大鼠肝指数,肝组织病理学改变及RT-PCR法检测肝组织SREBP-1c、PPARγ和PPARαmRNA表达水平。结果:与模型组比较,中药组体质量及肝指数明显降低(P<0.05),脂肪变、小叶内炎症病理评分明显下降(P<0.01),SREBP-1c mRNA的表达量显著降低(P<0.01),PPARαmRNA的表达量升高(P<0.05),PPARγmRNA表达量较模型组亦有所升高,但无显著统计学差异(P>0.05)。结论:绞股蓝、生山楂水提物可调控SREBP-1c、PPARγ和PPARα的基因表达,对非酒精性脂肪性肝炎有预防作用。     

五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠细胞色素C氧化酶7a2及细胞外信号调节激酶磷酸化水平表达的影响

目的观察五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸组织细胞色素C氧化酶7a2(Cox7a2)表达和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响。方法 SD雄性大鼠随机分为5组,即空白组,模型组,五子衍宗丸低、中、高剂量组,每组5只。空白组每天给予羧甲基纤维素钠灌胃,模型组和五子衍宗丸组每天给予雷公藤多甙(20 mg/kg)灌胃,五子衍宗丸组分别给予五子衍宗丸低、中、高剂量(0.5,1.0,2.0 g/kg)灌胃30 d,第31天取材。采用荧光定量PCR检测Cox7a2表达,Western Blot法检测ERK磷酸化水平表达,Johnsen’s评分评价睾丸组织病理学变化。结果雷公藤多甙可诱导Cox7a2 mRNA表达增加及ERK磷酸化,同时睾丸生精功能下降,Johnsen’s评分降低。与模型组相比,五子衍宗丸高剂量组ERK磷酸化水平下降,五子衍宗丸中、高剂量组Cox7a2 mRNA水平明显下调,并且五子衍宗丸中、高剂量组睾丸组织Johnsen’s评分显著上调,睾丸生精功能改善。结论五子衍宗丸可通过ERK信号传导途径调节线粒体能量代谢,从而改善生精功能。     

通精灵对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡及凋亡因子Cyt C、caspase-9的影响

[目的]探讨通精灵对精索静脉曲张模型大鼠睾丸组织的保护作用及与凋亡因子细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)、半胱氨酸蛋白酶-9(cysteine aspartic acid specific protease-9,caspase-9)表达的关系。[方法]72只SPF级Wistar大鼠,随机分成假手术组、模型组、通精灵低、中、高剂量组及左卡尼汀组。采用左肾静脉部分结扎法联合"夹尾激怒法"建立实验性精索静脉曲张合并中医肝气郁结证候复合大鼠模型。模型建立后,通精灵低、中、高剂量组分别给予浓度为1.6、3.2、6.4g·m L-1通精灵生药水煎液灌胃,假手术组和模型组予以0.9%氯化钠溶液灌胃,左卡尼汀组则予0.021g·mL-1左卡尼汀口服液灌胃,以上各组灌胃体积均为1mL/100g体质量,1次/d,持续8周。以HE染色观察睾丸组织结构;TUNEL染色和Annexin V-FITC法检测生精细胞凋亡情况;Western blot检测睾丸组织中Cyt C、caspase-9的表达。[结果]模型组中睾丸组织发生明显病理损伤,而通精灵各剂量组及左卡尼汀组中睾丸的病理损伤有不同程度改善。模型组中睾丸生精细胞凋亡率明显高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05),通精灵中、高剂量组及左卡尼汀剂量组中生精细胞凋亡率明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。Western blot提示,模型组大鼠睾丸组织中Cyt C、caspase-9蛋白表达显著高于假手术组(P0.01);通精灵中、高剂量组及左卡尼汀组中Cyt C、caspase-9表达低于模型组(P0.05或P0.01);高剂量组中Cyt C、caspase-9蛋白表达明显低于左卡尼汀组(P0.05,P0.01)。[结论]通精灵可以有效改善精索静脉曲张大鼠睾丸组织损伤,降低Cyt C和caspase-9的表达,从而调控生精细胞的凋亡。这可能是通精灵改善精索静脉曲张患者生育能力的机制之一。     

左归丸对卵巢早衰模型和初老大鼠下丘脑、垂体、卵巢组织中雌激素受体表达的影响

目的 研究左归丸对卵巢早衰( POF) 模型和初老大鼠下丘脑、垂体、卵巢组织中雌激素受体( ER)表达的影响,探讨左归丸促进卵巢功能恢复的作用机制。方法 将 60 只青年 SD 雌性大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、模型+补佳乐组、模型+左归丸低剂量组、模型+左归丸中剂量组、模型+左归丸高剂量组 6 组,每组 10 只。除空白组外,其余 5 组大鼠给予顺铂注射液每周 6 mg /kg 腹腔注射,共注射 2 次,建立POF 大鼠模型。另取 40 只初老 SD 雌性大鼠,采用随机数字表法分为初老组、初老+左归丸低剂量组、初老+左归丸中剂量组、初老+左归丸高剂量组 4 组,每组 10 只。各组给予相应药物或生理盐水灌胃,连续灌胃21 d。灌胃结束后,采用酶联免疫吸附测定( ELISA) 法检测各组大鼠血清卵泡刺激素( FSH) 、促黄体生成素( LH) 、雌二醇( E₂) 的水平,并通过免疫组化法和蛋白免疫印迹法检测各组大鼠下丘脑、垂体、卵巢组织中ER 的表达水平。结果 与空白组比较,模型组和初老组大鼠血清 FSH 水平明显升高,E₂水平明显...     

丹参酮ⅡA对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞的损害机制

目的探讨丹参酮ⅡA对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞的损害机制。方法 SPF级雄性SD大鼠40只。6月龄大鼠10只作为青年对照组,18月龄大鼠作为自然衰老组(n=10)及丹参酮ⅡA低剂量组(n=10)和高剂量组(n=10)。青年对照组和自然衰老组给予生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃6个月;丹参酮ⅡA低剂量和高剂量组分别给予10 mg/kg和30 mg/kg灌胃,每日1次,连续灌胃6个月。比较各组睾丸重量和睾丸指数、睾丸组织形态学、Bcl-2和Bax表达。结果与青年对照组比较,自然衰老组、丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸重量降低(P0.05);与自然衰老组比较,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸重量增加(P0.05);丹参酮ⅡA高剂量组大鼠睾丸重量高于低剂量组(P0.05)。与青年对照组比较,自然衰老组、丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸指数降低(P0.05);与自然衰老组比较,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸指数增加(P0.05);丹参酮ⅡA高剂量组大鼠睾丸指数高于低剂量组(P0.05)。青年对照组大鼠睾丸组织生精小管界膜完整,并且基膜内能够见排列整齐的各级生精细胞;自然衰老组大鼠睾丸组织生精小管形态结构出现显著变化,生精小管部分增厚,生精细胞层数减少,并且内细胞稀疏,间隙增大;丹参酮ⅡA低剂量和高剂量大鼠睾丸组织相比于自然衰老组,生精小管结构及生精细胞数目显著改善。与青年对照组比较,自然衰老组、丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠Bcl-2表达降低而Bax表达上升(P0.05);与自然衰老组比较,丹参酮ⅡA低剂量组和高剂量组大鼠睾丸Bcl-2表达升高而Bax表达下降(P0.05);丹参酮ⅡA高剂量组大鼠Bcl-2表达高于低剂量组而Bax表达低于低剂量组(P0.05)。结论丹参酮ⅡA对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞损害具有一定保护作用,可抑制衰老造成大鼠睾丸生殖细胞的凋亡,机制可能与上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白表达相关。     

丙烯酰胺对大鼠睾丸的毒性作用及其对增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的 观察丙烯酰胺(AA)对大鼠睾丸的毒性作用及其对增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为对照组(双蒸水)、4 mg/kg AA染毒组、12 mg/kg AA染毒组和36 mg/kg AA染毒组.连续灌胃30 d后,取睾丸行苏木精-伊红染色,观察睾丸组织形态学变化;TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况;化学发光法检测血清中睾酮和雌二醇含量;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测睾丸组织PCNA mRNA表达;免疫组织化学法和Western blotting技术检测睾丸组织PCNA蛋白表达.结果 12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠体质量明显低于对照组(P＜0.05).12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠睾丸组织生精细胞减少,生精上皮萎缩,管腔出现空泡,凋亡细胞显著增多.各染毒组大鼠血清睾酮水平均显著低于对照组(P＜0.05);12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠血清雌二醇水平显著低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠睾丸组织PCNA mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结论 AA染毒可引起雄性大鼠性激素分泌减少,睾丸组织发生病理学改变,凋亡细胞增多,PCNA蛋白表达减少,打乱生精细胞增殖与凋亡的动态平衡,导致生殖系统发生不同程度的功能障碍.     

左归丸和右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统IL-10、TGF-β蛋白表达的研究

目的观察大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型脑、脊髓组织白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)与组织生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)免疫组化的表达,探讨滋阴补肾法(左归丸)与温阳补肾法(右归丸)治疗EAE的作用机制。方法用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,120只大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组,正常对照组(n=24)和模型组(n=24)每天给予3mL0.9%氯化钠注射液灌胃;激素组(n=24)免疫后每天给予3mL0.9%氯化钠注射液灌胃,发病后改为醋酸泼尼松混悬液5mg/(kg.d-1)灌胃;左归丸组(n=24)免疫后给予左归丸混悬液2g/(kg.d-1);右归丸组(n=24)免疫后给予右归丸混悬液3g/(kg.d-1),直至处死。分别于免疫后15d(急性期发病)和免疫后27d(缓解期)选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行IL-10、TGF-β免疫组化染色。结果造模后15d,模型动物的脑和脊髓组织IL-10、TGF-β表达(指表达染色IOD值,下同)明显减少,第27天,模型动物脊髓组织IL-10表达明显减少。第15天,左归丸组与右归丸组大鼠脑组织IL-10表达较模型组明显升高(P<0.01);左归丸组大鼠脊髓组织IL-10表达也较模型组明显升高(P<0.05);右归丸组与激素组大鼠脑TGF-β表达较模型组升高,右归丸组大鼠脊髓TGF-β表达较模型组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。造模后27d,左归丸组、右归丸组、激素组脊髓组织IL-10表达均较模型组显著增高(P<0.01);左归丸组大鼠脊髓组织TGF-β表达较模型组与激素组升高(P<0.05)。模型组、激素组、左归丸组与右归丸组脊髓IL-10表达均较免疫后15d明显升高(P<0.05);左归丸组大鼠脊髓TGF-β表达较免疫后15d明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论左归丸和右归丸可上调EAE大鼠中枢神经系统IL-10、TGF-β表达,作用优于激素。两者整个病程中均对IL-10表达有促进作用,不同点为右归丸促进急性期脑组织TGF-β的表达,而左归丸则促进缓解期脊髓TGF-β的表达。     

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的影响

目的 观察补肾生精丸对腺嘌呤所致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡的影响及凋亡相关基因的调控情况.方法 SD大鼠40只随机分为4组:正常组、模型组、中药治疗组(补肾生精丸组)、中药对照组(五子衍宗丸组).以腺嘌呤灌胃诱发生精细胞损伤肾阳虚模型,用TUNEL法检测各组大鼠睾丸组织生精细胞的凋亡情况;用免疫组化的方法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL的表达.结果 补肾生精丸能够抑制大鼠睾丸曲细精管生精细胞的凋亡,上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促凋亡基因Bax、Fas、FasL的表达,与模型组比较有统计学意义(P<0.01).结论 补肾生精丸对腺嘌呤致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞的凋亡有一定的抑制作用,其作用可能与该药调控Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达有关.     

补肾生精调和气血法调控Bcl-2相关线粒体凋亡信号通路改善大鼠卵巢储备功能的研究

【目的】探讨补肾生精调和气血法对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠的干预机制。【方法】将60只性成熟雌性SD大鼠随机分为正常组，模型组，西药组，中药低、中、高剂量组，每组10只。除正常组，其余各组大鼠给予单次腹腔注射环磷酰胺构建DOR模型。于造模次日开始，西药组给予戊酸雌二醇0.105 mg·kg-1·d-1灌胃，中药低、中、高剂量组分别对应给予补肾生精调和气血法中药复方8.075、16.15、32.3 g·kg^-1·d^-1灌胃，正常组、模型组给予等体积去离子水灌胃，每日1次，连续21 d。给药结束后，采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平，采用电化学发光法检测血清雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)水平，采用Western Blot法检测卵巢组织血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase-9)的蛋白表达水平，采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR...     

生精冲剂对环磷酰胺致生精障碍小鼠的治疗作用

目的:观察生精冲剂对环磷酰胺致生精障碍小鼠的治疗作用.方法:随机将30只昆明小鼠等分成3组:正常组、模型组、中药组.用腹腔注射环磷酰胺法建立生精障碍模型.造模完成后,中药组灌胃中药生精冲剂16 g/(kg·d),模型组和正常组经口灌胃等量生理盐水,连续15 d.测量各组小鼠睾丸质量,放射免疫法测定小鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)的水平,对睾丸组织进行组织形态学观察,比较各组小鼠精子计数.结果:与正常组比较,中药组小鼠血清FSH、LH、T水平、睾丸质量、精子计数差异均无统计学意义(P均>0.05);与模型组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).组织学观察中药组小鼠睾丸曲细精管生精细胞层数及管腔内精子数高于模型组.结论:生精冲剂可有效治疗生精障碍.