益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞干预大鼠骨性关节炎实验研究

目的:探讨益气汤含药血清诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对骨性关节炎大鼠的干预作用。方法:取SD大鼠骨髓,筛选、纯化并鉴定BMSCs,分别给予生理盐水与益气汤干预后获取血清。将实验动物分为对照组、生理盐水组、益气汤组。含药血清干预后观察大鼠毛色、食欲及活动情况等,同时测量大鼠体质量,治疗6周后取膝关节病理检查。结果:益气汤血清干预BMSCs电镜下观察细胞形态均一,边界清楚。生理盐水组膝关节炎程度退变明显。骨性关节炎模型大鼠运用益气汤含药血清干预BMSCs治疗后,原发病变缓解,关节组织滑膜病理检查均未见明显异常。结论:益气汤含药血清诱导下BMSCs能有效修复骨性关节炎大鼠软骨的退变和损伤。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

透骨消痛颗粒对BMSCs向软骨细胞分化的影响

目的 探讨透骨消痛颗粒舍药血清诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的分子生物学机制. 方法 从5只4周龄SD大鼠骨髓中分离出BMSCs,体外传代培养,取第3代BMSCs分为空白对照组、软骨诱导剂组及透骨消痛颗粒组,进行培养1、2周后,通过透射电镜、RT-PCR等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响. 结果 透射电镜观察可见软骨表型化的BMSCs多数为近椭圆形,表面突起多,细胞核大,粗面内质网丰富,内质网池扩张明显,高尔基体丰富.在TGF-β3等诱导因子作用下,透骨消痛颗粒舍药血清可以促进Sox9 mRNA、Cbfa1mRNA在细胞分化过程中的表达,与软骨诱导剂组相比表达量有显著性差异(P<0.05). 结论 透骨消痛颗粒含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化.     

当归、阿魏酸钠对骨关节炎软骨退变与自由基的影响

目的:探讨当归、阿魏酸钠关节腔注射对大鼠骨性关节炎(OA)软骨退变与自由基的影响。方法:4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后48只大鼠分成6组:正常组,模型组,25%、5%当归治疗组,0.5%、0.1%阿魏酸钠治疗组,分组后即开始用不同浓度的当归、阿魏酸钠关节腔注射治疗,每3 d 1次,每次双膝各注射0.1 ml,对照组注射生理盐水。6周后处死动物,抽取血液、关节液检测SOD、MDA,切取关节,大体及组织学观察。结果:两药在高浓度可明显修复关节软骨的退变(均P<0.01),降低关节液、血浆的MDA水平(均P<0.01),增加SOD活性(均P<0.05);两药在低浓度时SOD升高不明显(均P>0.05),但阿魏酸钠仍可明显修复关节软骨的退变(均P<0.01),降低MDA的水平(P<0.01,P<0.05)。结论:当归、阿魏酸钠关节腔注射治疗大鼠OA可促进退变软骨的修复,阿魏酸是当归注射液治疗OA的有效的单体成份之一。     

骨髓间充质干细胞治疗早期骨性关节炎的实验研究

目的:用骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗兔早期骨性关节炎(OA),探讨其可行性及疗效评价。方法:将72只新西兰大白兔随机分成对照组、OA组和BMSCs治疗组,每组24只。治疗组在造模后第4周左膝关节腔内注射BMSCs。观察动物的一般情况,TNF-α和IL-1β水平,MRI扫描,取膝关节标本行大体及病理观察并进行Mankin’s评分。结果:与OA组相比,BMSCs治疗组术后步态逐渐好转;血清TNF-α和IL-1β水平降低;MRI示低信号区缩小,关节软骨厚度接近正常,无关节腔积液;大体标本见关节软骨表面趋于平坦完整,有软骨覆盖,但光泽欠佳;病理检查提示有透明样软骨形成,细胞排列整齐,厚薄基本一致,软骨相连。结论:BMSCs关节腔内可成软骨分化,为早期OA患者提供了一种新的有效疗法。     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞PERK/Bip通路关键调控蛋白的影响

目的观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞PERK/Bip信号通路关键调控蛋白的影响。方法采用IL-1β诱导建立体外退变软骨细胞模型,分别采用空白血清和独活寄生汤含药血清干预24 h、48 h、72h后,收集软骨细胞,采用Western Blot法检测退变软骨细胞中PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达变化。结果随着干预时间的延长,空白血清组和含药血清组PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达均逐渐降低,含药血清组降低更明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,抑制软骨细胞凋亡,从而起到治疗膝骨关节炎的作用。     

同源异体间充质干细胞上清液干预大鼠佐剂性关节炎

目的:探讨同源异体骨髓来源的间充质干细胞上清液对大鼠佐剂性关节炎的预防作用.方法:培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞,收集培养间充质干细胞48h的上清液;将健康雄性SD大鼠右后足跖皮内一次性注射弗氏完全佐剂0.1 mL/只制作佐剂性关节炎模型,造模后行间充质干细胞上清液干预;造模前及造模后第7、14、21和28天测量大鼠体重和后足爪体积,同时观察大鼠生存状况;并于干预后第28天摄四肢关节X片并做病理检查.结果:间充质干细胞上清液干预组大鼠的原发性炎症和继发病变均不明显,关节X片检查和病理检查均未见明显异常;干预组与模型组大鼠相比,体重、足爪体积差异有统计学意义(P＜0.05).结论:间充质干细胞上清液可有效干预弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎的进展.     

柴胡疏肝散联合骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心肌的保护作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合柴胡疏肝散对心肌梗死大鼠心肌组织的保护作用。方法:采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。经结扎冠状动脉制备大鼠心肌梗死(AMI)模型。SD大鼠随机分为假手术组、AMI组(模型组)、BMSCs组、CHSG-L组(柴胡疏肝散小剂量+BMSCs移植)、CHSG-M组(柴胡疏肝散中剂量+BMSCs移植)、CHSG-H组(柴胡疏肝散大剂量+BMSCs移植)。BMSCs细胞悬液直接注入梗死区边缘心肌组织;中药或生理盐水经灌胃给予。各组干预7 d后,生化法测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测大鼠血清低氧诱导因子(HIF-1α)表达;免疫组化法观察心肌血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与模型组和BMSCs组比较,各联合治疗组SOD升高、MDA降低,血清HIF-1α水平和心肌细胞VEGF蛋白表达升高;且柴胡疏肝散剂量越大,作用越显著。结论:BMSCs移植联合柴胡疏肝散可一定程度上保护心肌梗死大鼠心肌组织。     

右归丸含药血清对骨髓间充质干细胞Hedgehog信号通路影响

目的:探究右归丸治疗骨质疏松症的疗效机制是否与激活Hedgehog信号通路,促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨分化有关,从而为右归丸预防治疗骨质疏松提供依据。方法:体外分离培养大鼠BMSCs,将SPF级大鼠随机分为4组,正常组、诱导液组、福善美组、右归丸组,对大鼠进行灌胃5 d。制备含药血清,并观察上述4组含药血清对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞中的音猬因子(Ssonic hedgehog,Shh)、12次跨膜蛋白(Ptched,Ptc)、Gli家族锌指蛋白-1(Gli family zinc finger-1,Gli-1)。结果:与正常组和阳性药物组及诱导液组相比,右归丸组的蛋白表达水平明显上升。结论:①Hedgehog信号通路的Shh、Ptc、Gli1的变化可能引起骨质疏松症;②右归丸可以诱导BMSCs内Shh、Ptc、Gli1蛋白的表达;③右归丸能够有效治疗骨质疏松,这种作用可能通过Hedgehog信号通路来实现。     

右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞中TGF-β、BMP-7、BGP表达影响实验研究

目的:通过对大鼠骨髓间充质干细胞中TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达的分析,探究右归丸含药血清通过TGF-β信号通路诱导BMSCs向成骨细胞分化的机制,从而为"肾主骨"这一理论提供实验依据。方法:42只SPF级SD雌性大鼠,体质量(210±20)g,随机分为:正常组、诱导液组、右归丸组、福善美组、骨疏康组各8只,对大鼠灌胃5 d,制备含药血清,并分离和培养大鼠BMSCs,观察不同实验组含药血清对成骨细胞中TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达的影响。结果:与正常组相比,其余各实验组均不同程度上调了TGF-β、BMP-7、BGP的表达水平,并且右归丸组与其余各组相比,结果有统计学差异(P0.01)。结论:(1)正常大鼠BMSCs中存在TGF-β、BMP-7、BGP蛋白表达;(2)右归丸含药血清能够通过调控TGF-β、BMP-7、BGP的蛋白浓度促进BMSCs向成骨细胞分化,以起到对骨质疏松症的防治作用。     

Effects of Eupolyphaga Containing Serum on Adipogenic and Ossific Differentiation of BMSCs

目的 探讨(庶)虫干预骨髓间充质干细胞( BMSCs)成脂和成骨分化的作用机制.方法 传3代BMSCs分为空白对照组、激素组、(庶)虫组,3组干预6d后对碱性磷酸酶(ALp)、甘油三酯(TG)进行检测,用光镜和电镜观察3组BMSCs细胞的超微结构.结果 (庶)虫含药血清干预BMSCs后,(庶)虫组甘油三酯含量较激素组明显降低,细胞ALP含量较激素组明显增加,激素可以促使BMSCs脂肪分化,抑制细胞代谢和分裂增殖能力.结论 (庶)虫含药血清可以抑制BMSCs成脂分化,促使BMSCs成骨分化.     

骨髓间充质干细胞透明质酸钠溶液修复大鼠早期退变椎间盘的作用

目的研究无外源性生长因子及细胞支架的作用下,应用体外培养传代的骨髓间充质干细胞（bonemesenchymal stem cells,BMSCs）与透明质酸钠混合溶液修复大鼠早期退变椎间盘的作用。方法取同种基因大鼠的BMSCs,通过贴壁法培养传代,与医用透明质酸钠混合配制。10只SD大鼠,尾椎上取相邻3个椎间盘,由近端至远端设为细胞植入组、椎间盘退变组、正常对照组。分别于细胞植入组、椎间盘退变组建立退变模型。1周后,细胞植入组注射BMSCs与透明质酸钠溶液。3周后,X线片比较椎间盘高度指数（discheightin-dex,DHI）,组织病理学方法行病理观测并评分,RT-PCR测定Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的mRNA表达。结果细胞植入组的DHI值与椎间盘退变组相比无明显改善且远低于对照组。病理切片结果提示植入组髓核纤维环的形态得到保留,髓核纤维环边界清晰,细胞产生增殖分裂,其病理学评分明显高于椎间盘退变组。RT-PCR结果提示细胞植入组Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的mRNA表达水平较椎间盘退变组明显提高。结论在椎间盘退变早期植入BMSCs与透明质酸溶液可以延缓椎间盘的退变,而不需要外源性细胞因子和三维支架的作用。     

骨髓基质干细胞对急性脊髓损伤大鼠模型神经功能修复的影响

目的探索骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）体外定向诱导分化为神经细胞后移植治疗急性脊髓损伤动物模型的疗效。方法对BMSCs进行体外诱导,并鉴定。将模型大鼠分为3组,将诱导及未诱导的BMSCs和生理盐水分别注入模型鼠脊髓半切点附近,在3个月内用BBB评分法对治疗情况进行评价。结果BMSCs体外诱导后的细胞经免疫组化检测可证实为神经细胞;进行细胞移植的两组动物死亡率明显下降,神经功能有明显恢复（P〈0.05）;并且BMSCs诱导后移植组神经功能恢复较未诱导组明显（P〈0.05）;而生理盐水组移植前后评分变化不明显。结论BMSCs诱导组治疗脊髓损伤模型的疗效总体好于未诱导的BMSCs组,前两组的疗效均好于生理盐水组。     

补肾行气活血法对骨髓基质干细胞诱导成软骨细胞作用的影响

[目的]观察补肾行气活血法对诱导骨髓基质干细胞(BMSCs)成软骨细胞作用的影响.[方法]将传至第3代的BMSCs分为阴性对照组和治疗组,分别采用软骨细胞诱导培养基加体积分数为10%的空白对照血清和诱导培养基加体积分数10%的骨炎定含药血清培养诱导成软骨细胞,观察软骨细胞的生长状况及细胞表型特征.[结果]治疗组在细胞贴壁、生长形态及成软骨特性方面明显优于对照组,细胞表型的免疫组化染色均为阳性.[结论]以补肾行气活血法为组方依据的骨炎定含药血清既可促进BMSCs的增殖,又可促进诱导的软骨细胞分化.     

三种补肾方含药血清对衰老骨髓间充质干细胞中COLⅠ和ALP的影响

目的 研究健骨二仙丸、金匮肾气丸和六味地黄丸含药血清对衰老骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）成骨分化过程中Ⅰ型胶原蛋白（collagen typeⅠ, COLⅠ）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）表达的影响,探讨3种补肾方治疗骨质疏松症的机制。方法 将40只SD大鼠分为健骨二仙丸组、金匮肾气丸组、六味地黄丸组、空白对照组,每组10只。分别灌胃75.9 g/kg健骨二仙丸、89.1 g/kg金匮肾气丸、85.8 g/kg六味地黄丸和等体积生理盐水,每天定时灌胃2次,连续7 d,制备含药血清。用H2O2将P3代BMSCs处理成衰老细胞,采用β-半乳糖苷酶染色进行观察。衰老BMSCs分为6组：模型组、诱导组、健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组、空白血清组,于诱导第4、8、12、16天采用Real-time PCR法和Western blot法检测COLⅠmRNA及蛋白表达水平,并在第4、8天时收集细胞上清液检测ALP活性。结果 衰老BMSCs被β-半乳糖苷酶染色成...     

补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察补中益气汤含药血清对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响,探讨补中益气汤治疗肿瘤的机制。方法：以补中益气汤给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。MTT法检测含药血清对肺癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定肺癌细胞细胞凋亡。结果：补中益气汤不同浓度含药血清组与空白对照组比较均可明显抑制肺癌细胞体外增殖,差异有统计学意义（ P<0.05）;补中益气汤不同浓度含药血清组Lewis肺癌细胞凋亡率与空白对照组比较,明显升高,且随着含药血清浓度的增加,细胞凋亡率明显上升,具有浓度依赖性。结论：补中益气汤含药血清对肺癌细胞体外增殖有明显的抑制作用,且可促进肿瘤细胞凋亡。     

miR-122在骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性肝损伤中的作用

目的:探讨miR-122在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠急性肝损伤中的作用,阐明相关作用机制。方法:密度梯度离心法分离收集雄性大鼠的BMSCs,分为转染组和对照组,其中转染组BMSCs采用脂质体介导转染miR-122 mimics,对照组BMSCs未接受转染。将60只四氯化碳(CCl₄) 诱导的急性肝损伤大鼠随机分为肝损伤对照组(静脉注射生理盐水)、普通治疗组(静脉移植普通BMSCs)和实验治疗组(静脉移植转染miR-122的BMSCs)(n=20)。移植细胞后1、7和14 d检测大鼠肝功能,肝组织行HE染色观察其病理学改变。结果:转染miR-122 mimics后7 d,BMSCs中白蛋白(ALB)表达水平明显上调,而甲胎蛋白(AFP)的表达水平则明显下调。移植细胞后1d,与普通治疗组比较,实验治疗组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性差异无统计学意义(P>0.05);移植细胞后7和14 d时,实验治疗组大鼠血清ALT和AST活性均低于普通治疗组(P<0.05);HE染色,实验治疗组大鼠肝脏充血、细胞质内空泡变性及肝细胞坏死情况明显好于普通治疗组。结论:上调BMSCs中miR-122表达水平能够促进其分化为肝样细胞,并可明显改善CCl₄所致大鼠肝脏损伤。