低密度脂蛋白受体基因敲除鼠极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分诱导J774巨噬细胞胆固醇酯蓄积

为探讨低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分致动脉粥样硬化的作用,采用密度梯度超速离心法从低密度脂蛋白受体基因除鼠血浆分离极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分,用日立７４５０自动分析仪测定其脂含量,琼类糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其电泳迁移率和载脂与鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,观察它与巨噬细胞的相互作用。结果发现,低密度脂蛋白受体基因扈除鼠血浆极低密度脂收白和中间密度脂收     

脂蛋白对巨噬细胞的作用研究进展

脂蛋白的种类、组成、氧化修饰以及基因突变等影响脂蛋白与巨噬细胞的相互作用.载脂蛋白E基因敲除鼠血浆极低密度和中间密度脂蛋白组分通过一种特异而不依赖载脂蛋白E途径诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积,是体内主要致动脉粥样硬化脂蛋白.低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度和中间密度脂蛋白组分也显著诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积.人载脂蛋白AⅠ第235位谷氨酸残基缺失明显降低其促巨噬细胞胆固醇外流能力.人极低密度、低密度、高密度脂蛋白以及脂蛋白(a)等氧化后,不仅诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积,也具有显著促巨噬细胞增殖效应.     

极低密度脂蛋白受体在泡沫细胞形成中的作用地位

为探讨极低密度脂蛋白受体在摄取富含甘油三酯的脂蛋白及泡沫细胞形成中的作用，在体外实验中，将极低密度脂蛋白、β极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白分别与小鼠腹腔巨噬细胞孵育24及48h后，检测细胞内甘油三酯及总胆固醇的含量，油红O染色观察泡沫细胞的形成，半定量逆转录聚合酶链反应检测极低密度脂蛋白受体、LRP及极低密度脂蛋白受体的mRNA表达变化。结果发现，三种脂蛋白与巨噬细胞均能升高细胞内甘油三酯、总胆固醇含量；极低密度脂蛋白受体受极低密度脂蛋白、β极低密度脂蛋白的刺激表达上调，低密度脂蛋白受体表达下调，LRP表达略有上调。在稳定表达极低密度脂蛋白受体细胞中的实验表明，极低密度脂蛋白受体介导对富含甘油三酯的脂蛋白的摄取在胞内脂质聚集及泡沫细胞形成过程中具有重要作用。     

低密度脂蛋白免疫复合物对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯蓄积和一氧化氮释放的影响

目的 探讨低密度脂蛋白免疫复合物对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯的蓄积和一氧化氮释放的影响。方法 密度梯度超速离心从新鲜人血浆分离天然低密度脂蛋白，与抗低密度脂蛋白抗血清IgG组分制备低密度脂蛋白免疫复合物，低密度脂蛋白免疫复合物与小鼠腹腔巨噬细胞孵育后采用酶荧光法检测细胞胆固醇酯含量，进行细胞形态学观察和组织化学分析．并用硝酸还原酶法测定细胞释放至培养基中的一氧化氮量。结果 低密度脂蛋白免疫复合物剂量依赖性地诱导巨噬细胞内胆固醇酯的大量堆积，其效应显著强于氧化型低密度脂蛋白（P〈0．01）。经低密度脂蛋白免疫复合物处理的巨噬细胞呈典型泡沫细胞状，与猩红强染色，而天然低密度脂蛋白、抗低密度脂蛋白IgG处理的巨噬细胞内未见胆固醇酯的蓄积。此外，低密度脂蛋白免疫复合物剂量依赖性地抑制巨噬细胞一氧化氮的分泌。结论 低密度脂蛋白免疫复合物不仅通过致小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化，也通过损伤巨噬细胞分泌一氧化氮的功能参与致动脉粥样硬化作用。     

脂质代谢相关基因多态性与动脉粥样硬化

脂质代谢异常是动脉粥样硬化发展的重要因素,受多个脂质代谢相关蛋白的调控.胆固醇酯转运蛋白（CETP）介导血浆脂蛋白之间胆固醇酯的转运,在胆固醇酯逆转运过程中发挥关键作用.氧化低密度脂蛋白受体-1 （OLR-1）和CD36参与脂质代谢、巨噬细胞泡沫化及动脉粥样硬化斑块形成.CETP、OLR-1和CD36基因多态性影响编码蛋白的生物活性和脂质代谢,与心血管疾病风险相关,被认为是动脉粥样硬化的易感基因.     

胆固醇酯转运蛋白抑制剂的研究进展

正胆固醇酯转运蛋白(CETP)是一种血浆糖蛋白,能够把胆固醇酯从高密度脂蛋白转运到低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白和极低密度脂蛋白,并交换甘油三酯,从而调节血浆高密度脂蛋白水平和重构高密度脂蛋白颗粒组成。高活性的CETP可以降低高密度脂蛋白水平,而CETP抑制剂可以和他汀类药物联合应用,即可升高高密度脂蛋白水平,又可降低低密度脂蛋白水平,使血脂得到双向调节,因此,升高高密度脂蛋白的CETP抑制剂曾被认为是治疗动脉硬化非常有     

胆固醇酯转运蛋白在动脉粥样硬化中的作用

胆固醇酯转运蛋白介导血浆高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白之间胆固醇酯、磷脂和甘油三酯的转运,直接关联各种脂蛋白分子的组成、大小和浓度,在胆固醇的逆向转运中起关键作用,与动脉粥样硬化的发生发展密切相关。胆固醇酯转运蛋白基因有多种突变,基因突变者胆固醇酯转运蛋白浓度和活性发生改变,并伴有高密度脂蛋白胆固醇水平升高等显著的脂代谢异常。雌激素对胆固醇酯转运蛋白水平也有调节作用。胆固醇酯转运蛋白在小颗粒致密的B型低密度脂蛋白形成中起重要作用,大而轻的A型低密度脂蛋白在高甘油三酯的条件下,经胆固醇酯转运蛋白介导极低密度脂蛋白中甘油三酯与低密度脂蛋白中胆固醇酯交换,导致典型的A型低密度脂蛋白变成强致病性的B型低密度脂蛋白。     

含载脂蛋白B的脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞内脂质的影响

将小鼠腹腔巨噬细胞和含载脂蛋白Ｂ的两种脂蛋白、这两种脂蛋白与硫酸葡聚糖或相应抗体形成的复合物一起培养２４ｈ后，用薄层层析法测定巨噬细胞内胆固醇酯的含量。结果发现，天然脂蛋白（ａ）对巨噬细胞内胆固醇酯含量影响不大（增加８％，Ｐ〉０．０５）；天然低密度脂蛋白具有促进巨噬细胞内脂质蓄积作用（增加３５．４％，Ｐ〈０．０５）；上述两种脂蛋白与硫酸葡聚糖一起共同作用，促进巨噬细胞内胆醇酯蓄积作用明显加强（分别     

糖尿病大鼠糖基化终产物与主动脉细胞外基质成分的关系

为了观察富含胆固醇的脂蛋白对兔主动脉平滑肌细胞脂类堆积的影响及机制,用富含胆固醇的脂蛋白（β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白） 与兔主动脉平滑肌细胞温育４８ ｈ 后,发现β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白都能促进平滑肌细胞内总胆固醇和甘油三酯堆积,以β－ 极低密度脂蛋白的作用更显著。乳铁蛋白作为低密度脂蛋白受体相关蛋白的一种特异配体,当它与上述脂蛋白共同与平滑肌细胞温育后,发现乳铁蛋白对脂蛋白所致的平滑肌细胞内脂质堆积有抑制作用。乳铁蛋白与标记的β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白的竞争结合实验也进一步发现乳铁蛋白可明显竞争β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞的结合,且对β－ 极低密度脂蛋白的竞争抑制作用尤为明显。提示β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白可能主要通过低密度脂蛋白受体相关蛋白介导进入平滑肌细胞,导致平滑肌细胞内脂质堆积。     

动脉粥样硬化敏感小鼠C_（57）BL／6J腹膜巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立

泡沫细胞的出现是动脉粥样硬化斑块中有特征性的病理形态改变。本实验选择对动脉粥样硬化形成较敏感的纯系小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ，取其腹膜巨噬细胞与１０ｍｇ·Ｌ－１氧化低密度脂蛋白共同孵育９６ｈ，建立了典型的巨噬细胞源性泡沫细胞模型。实验结果显示，培养的泡沫样细胞与在无脂蛋白培养基中培养的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠巨噬细胞和在氧化低密度脂蛋白中培养的昆明种小鼠巨噬细胞比较，脂质成分大量增多，出现脂质颗粒，细胞内总胆固醇增加，其中胆固醇酯含量大于游离胆固醇，符合泡沫细胞的定义。本实验从离休细胞培养方面探寻建立小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞的可能性，为动脉粥样硬化的形成机理分析和防治研究提供了一种可靠的病理细胞模型。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对25例内源性高甘油三酯血症患者与25例年龄性别相匹配的正常人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白的电泳迁移率、234nm光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变进行了测定。结果表明，内源性高甘油三酯血症患者血浆甘油三酯、脂过氧化物和载脂蛋白B100、CⅢ、CⅢ及E显著升高（P＜0．01），高密度脂蛋白和载脂蛋白AⅠ显著降低（P＜0．01），低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白电泳迁移率均较正常人相应脂蛋白的迁移率增加，234nm光吸收及硫代巴比妥酸反应物质含量均显著增加（P＜0．01）。说明内源性高甘油三酯血症患者不仅血浆低密度脂蛋白、而且极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均发生了氧化修饰。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对２５例内源性高甘油三酯血症患者与２５例年龄性别相匹配的下沉人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极代旨蛋白及高密度脂蛋白的电泳移率、２３４ｎｍ光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变     

低密度脂蛋白受体抑制剂对低密度脂蛋白和脂蛋白(a)代谢的影响

应用低密度脂蛋白受体抑制剂乳酸杆褐质和受体结构蛋白经刺猬腋下静脉注入，２ｍｉｎ后注射＾１２５Ｉ－低密度脂蛋白或＾１２５Ｉ－脂蛋白（ａ），６ｈ后处死，测定血，肝，肾，脾，胆汁和肾上腺的放射活性，实验发现，乳酸肝褐质和受体结合蛋白均能抑制低密度脂蛋白受体活性，使各组织摄取低密度脂蛋白分别降低１５％～８６％以上，但乳酸肝褐质和受体结构蛋白脂蛋白（ａ）的组织摄取不但无抑制作用，反而能使脂蛋白（ａ）进入组织     

低密度脂蛋白受体抑制剂对低密度脂蛋白和脂蛋白(a)代谢的影响

应用低密度脂蛋白受体抑制剂乳酸肝褐质和受体结合蛋白经刺猬腋下静脉注入，２ｍｉｎ后注射１２５Ⅰ－低密度脂蛋白或１２５Ⅰ－脂蛋白（３），６ｈ后处死，测定血、肝、肾、脾、胆汁和肾上腺的放射活性。实验发现：乳酸肝褐质和受体结合蛋白均能抑制低密度脂蛋白受体活性，使各组织摄取低密度脂蛋白分别降低１５％～８６％以上，但乳酸肝褐质和全体结合蛋白对脂蛋白（ａ）的组织摄取不但无抑制作用，反而能使脂蛋白（ａ）进入组织量增加，激活率分别达４０％～１２６％。实验结果说明：脂蛋白（ａ）虽然与低密度脂蛋白结构相似，含有７０％载脂蛋白Ｂ１００，但由于与载脂蛋白（ａ）以二硫键的形式连接，改变了空间结构，失去了与低密度脂蛋白受体结合的能力，并且推测乳酸肝褐质和受体结合蛋白在抑制低密度脂蛋白受体的同时，可能激活了细胞膜的其它机制，从而利于脂蛋白（ａ）进入细胞内。     

血浆氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物的相关性

为探讨血浆氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物间关系.分别建立了以抗人IgG为包被抗体、酶标抗载脂蛋白B为检测抗体的低密度脂蛋白循环免疫复合物酶联免疫吸附试验;以抗氧化型低密度脂蛋白为包被抗体、酶标抗载脂蛋白B为检测抗体的氧化型低密度脂蛋白酶联免疫吸附试验.同时测定60例冠心病患者及50例对照人群低密度脂蛋白循环免疫复合物、氧化型低密度脂蛋白水平并进行相关性分析.结果发现,冠心病患者甘油三酯、脂蛋白(a)和载脂蛋白B水平均显著升高;高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白AⅠ水平降低;且低密度脂蛋白循环免疫复合物(2.74±0.73比1.38±0.78,P＜0.001)、氧化型低密度脂蛋白水平(595.5±194.8比440.3±175.0μg/L,P＜0.001)均显著升高.低密度脂蛋白循环免疫复合物水平分别同血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)及载脂蛋白B正相关;同载脂蛋白AⅠ负相关.氧化型低密度脂蛋白水平亦分别同血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)及载脂蛋白B正相关.氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物亦呈正相关(r=0.313,P＜0.005).结果提示,氧化型低密度脂蛋白及循环免疫复合物升高是动脉粥样硬化发生的危险因素.     

血浆氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物的相关性

为探讨血浆氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物间关系。分别建立了以抗人IgG为包被抗体、酶标抗载脂蛋白B为检测抗体的低密度脂蛋白循环免疫复合物酶联免疫吸附试验;以抗氧化型低密度脂蛋白为包被抗体、酶标抗载脂蛋白B为检测抗体的氧化型低密度脂蛋白酶联免疫吸附试验。同时测定60例冠心病患者及50例对照人群低密度脂蛋白循环免疫复合物、氧化型低密度脂蛋白水平并进行相关性分析。结果发现,冠心病患者甘油三酯、脂蛋白(a)和载脂蛋白B水平均显著升高;高密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白AI水平降低;且低密度脂蛋白循环免疫复合物(2.74±0.73比1.38±0.78,p<0.001)、氧化型低密度脂蛋白水平(595.5±194.8比440.3±175.0μg/L,p<0.001)均显著升高。低密度脂蛋白循环免疫复合物水平分别同血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)及载脂蛋白B正相关;同载脂蛋白A_Ⅰ负相关。氧化型低密度脂蛋白水平亦分别同血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白(a)及载脂蛋白B正相关。氧化型低密度脂蛋白水平与低密度脂蛋白循环免疫复合物亦呈正相关(r=0.313,p<0.005)。结果提示,氧化型低密度脂蛋白及循环免疫复合物升高是动脉粥样硬化发生的危险因素。     

内源性高甘油三酯血症患者血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白对血凝及纤维蛋白溶解的影响

研究内源性高甘油三酯血症患者血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生了氧化修饰及其对凝血及纤维蛋白溶解活性的影响。对 2 1例内源性高甘油三酯血症患者与 2 1例年龄性别相近的正常人的血脂、脂质过氧化物进行了分析。用一次性密度梯度超速离心法分离血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白。测定这 3种脂蛋白的 2 34nm吸光度、相对电泳迁移率和硫代巴比妥酸反应物质含量。分别将这 3种脂蛋白加入由正常人新鲜混合血浆构成的反应系统中 ,按试剂盒分别测定凝血酶原时间、活化部分凝血酶原时间、组织型纤溶酶原激活物活性及纤溶酶原激活物抑制剂 1活性。内源性高甘油三酯血症患者血浆甘油三酯含量平均升高 2 .73倍 ,高密度脂蛋白胆固醇下降 1.71倍 ,同时硫代巴比妥酸反应物质含量升高 1.2 2倍 ;内源性高甘油三酯血症组极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白的 2 34nm吸光度、相对电泳迁移率和硫代巴比妥酸反应物质含量均较对照组显著增加 (P <0 .0 1) ,表明内源性高甘油三酯血症患者血浆极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白均发生了氧化修饰 ,生成了氧化极低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋白及氧化高密度脂蛋白。凝血酶原时间及活化部分凝血酶原时间在分别加入内     

低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核细胞ABC1 mRNA表达的影响

为探讨低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核巨噬细胞ABCl表达的影响，用40μg/L佛波酯作用48h，将单核细胞诱导成巨噬细胞，再分别与20mg/L、120mg/L的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白作用24h，提取细胞中总RNA，用逆转录聚合酶链反应法检测其ABCl mRNA的表达。结果发现，小剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可引起THP-1细胞ABClmRNA不同程度的表达增高，小剂量的高密度脂蛋白对ABCl表达无明显影响；而大剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可使THP-1细胞ABClmRNA的表达不同程度降低，其中高密度脂蛋白组轻微降低。结果提示，不同浓度脂蛋白和氧化型脂蛋白对血中单核细胞ABCl表达水平的影响可能在动脉粥样硬化的发生发展过程起重要作用。     

氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤

探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用 ,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的途径探讨损伤作用的机制。用1 2 5I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,2 ,4 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性 ,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率。结果发现 ,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点 ,Scatchard分析Kd为 38.4± 18.8mg L、Bmax为 181.5± 5 5 .5ng 10 6 cells。氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用 2 4h ,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加 ,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量 ,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用。结果提示 ,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的受体途径。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1与动脉粥样硬化

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)是氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的特异性受体,结构上属C型血凝素家族,通过介导ox-LDL对血管内皮细胞的损伤参与动脉粥样硬化的形成和发展过程.本文就LOX-1的生物学特性、表达和调节因素及其与动脉粥样硬化的关系进行综述.