顺铂对鼻咽癌上皮样细胞株细胞周期进程影响的实验研究

本实验应用流式细胞光度术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）检测顺铂（０．５μｇ／ｍｌ）对鼻咽癌上皮样细胞株（ＣＮＥ）细胞周期进程的影响。结果发现用药后第３天和第４天，用药组的细胞数分别为对照组的８１．７１％和７２．１４％；ＣＮＥ细胞的ＤＮＡ指救为１．６５±０．０５，揭示ＣＮＥ细胞仍保持原代细胞的ＤＮＡ含量水平。顺铂导致细胞周期各时相时间延长，其中以Ｇ２阻滞较为明显。     

人鼻咽癌细胞潜在性倍增时间放射效应的相关分析

目的探讨放射前后人鼻咽癌细胞ＣＮＥ增殖动力学变化及其与再增殖有关的细胞生物学机制。方法以ＢｒｄＵｒｄ／ＤＮＡ双参数流式细胞术,检测放射处理后指数生长期和平台期人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ的增殖动力学参数,如细胞时相比例、标记指数、Ｓ期时间和潜在性倍增时间（Ｔｐｏｔ）等的变化,并作Ｔｐｏｔ与其他参数的相关性分析。结果（１）照射后指数生长期ＣＮＥ细胞Ｔｐｏｔ缩短,ＣＮＥ细胞中被ＢｒｄＵｒｄ标记的Ｓ期细胞比例增加（Ｐ＜０．０５）。这些改变与Ｇ０／Ｇ１、Ｓ、Ｇ２Ｍ各期总体比例无关。（２）照射后平台期ＣＮＥ细胞Ｔｐｏｔ的缩短与ＣＮＥ细胞中Ｇ０／Ｇ１期细胞比例的减少相关（Ｐ＜０．０５）,与Ｇ２Ｍ期比例增加密切相关（Ｐ＝０．００２）,而与其他各细胞时相比例无关。结论ＣＮＥ细胞的加速再增殖随放射剂量的增大而增大。平台期细胞的加速再增殖主要源于Ｇ０／Ｇ１期细胞比例的减少,包括可能的Ｇ０期细胞动员;指数生长期细胞的加速再增殖主要源于被ＢｒｄＵｒｄ标记的Ｓ期细胞比例增加,即ＤＮＡ合成的加强。     

VM26影响人肺腺癌细胞放射效应的机制探讨

目的：体外实验显示，ＶＭＤ６能提高人肺腺癌（ＳＰＣ）细胞放射效应。本文探讨其可能的作用机制。材料与方法：通过分段放射后克隆形成实验来研究ＶＭ２６对ＳＰＣ细胞放射损伤的修复；利用流式细胞技术（ＦＣＭ）观察不同作用时间及浓度下ＶＭ２６对ＳＰＣ细胞周期的影响。细胞存活曲线用单击多靶模式拟合。结果：ＶＭ２６（０．０６２５Ｍ）作用于细胞６小时，能使２Ｇｙ照射后，间隔６小时再组第二次剂量照射，得到的细胞存活曲线出现的“肩区”再现完全消失。当浓度升高到０．１２５Ｍ，放射引起的细胞杀灭明显增加。对ＳＰＣ细胞周期的影响，０．１２５Ｍ的ＶＭ２５作用２小时后，Ｇｏ／Ｇ１，期细胞比例升高，其阻滞率为４．２５％／小时。伴Ｇ２＋Ｍ期比例降低，ｓ期在作用１小时升高，然后恢复。在０．１２５－２．５Ｍ浓度范围内，ＶＭ２６作用于细胞１小时，细胞周期变化无明显差异。结论：ＶＭ２６能显著抑制ＳＰＣ细胞亚致死性损伤修复而对其细胞周期的影响未见５期和Ｇ２＋Ｍ期阻滞。     

术前化疗治疗成神经细胞瘤临床疗效和生物特性观察

目的研究术前化疗在治疗小儿成神经细胞瘤中的作用。方法对照研究应用术前化疗后切除的成神经细胞瘤２１例，观察尿香草扁桃酸（ＶＭＡ）、ＤＮＡ图象分析和ＭＹＣＮ基因变化。结果手术切除率为９５５％，平均生存时间为２８１±１０２ｍｏ，显著高于一期手术组的８８±６８ｍｏ（Ｐ＜００１）。化疗后尿ＶＭＡ较化疗前降低（Ｐ＜００１）。化疗后肿瘤细胞ＤＮＡ指数下降，Ｇ０＋Ｇ１时相比例升高，ＭＹＣＮ基因表达明显抑制。结论术前化疗具有诱导成神经细胞瘤细胞凋亡和促使肿瘤细胞增殖活性降低的作用。     

4—乙酰胺苯基维甲酸酯抑制肿瘤细胞侵袭重组基底膜及其作用机理

目的研究新维甲类化合物４－乙酰胺苯基维甲酸酯（４－ＡＰＲ）对Ｂ１６－Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞侵袭能力的抑制作用,探讨其作用机理。方法癌细胞侵袭能力用重组基底膜侵袭试验衡量;ＰＡＧＥ底物酶谱方法检测Ⅳ型胶原酶活性;斑点杂交检测ＣＮＥ－２Ｚ细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达;以细胞生长曲线评价药物对Ｂ１６－Ｆ１０细胞的生长抑制作用。结果在１０－５ｍｏｌ／Ｌ和１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,４－ＡＰＲ对Ｂ１６－Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞侵袭重组基底膜的抑制率分别为５４．２％和４１．９％,对ＣＮＥ－２Ｚ细胞培养上清中的Ⅳ型胶原酶活性有降低作用。此外,４－ＡＰＲ可抑制Ｂ１６－Ｆ１０细胞与ＬＮ、ＦＮ和Ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附,诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达。结论４－ＡＰＲ抑制Ｂ１６－Ｆ１０细胞侵袭重组基底膜。４－ＡＰＲ的抗侵袭活性与抑制肿瘤细胞的粘附,降低肿瘤细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶的活性和（或）诱导肿瘤细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达等有关。     

咖啡因促进受照肿瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤细胞受照后Ｇ２／Ｍ期阻滞和凋亡的关系及调控。方法：以Ｋ５６２细胞为对象，用流式细胞仪，形态学，ＤＮＡ电泳和凋亡蛋白２．７（ＡＰＯ２．７）等方法检测细胞周期和凋亡。结果：（１）２０Ｇｙγ射线照射Ｋ５６２细胞后引起Ｇ２／Ｍ期阻滞，４８ｈＧ２／Ｍ期比例为７１．２％，流式细胞仪，形态学和ＡＰＯ２．７检测凋亡比例分别为２．６％，２．０％±１．１Ａ％和２２．５％。（２）照前加入１０ｍｍｏｌ／Ｌ咖     

重组人血管抑素抑制人鼻咽癌生长的实验研究

目的：观察重组人血管抑素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ,ｒｈＡＧＮ）对鼻咽癌皮下移植瘤生长的抑制作用,探讨其应用价值。方法：应用ＭＴＴ法观察ｒｈＡＧＮ对ＣＮＥ－１鼻咽癌细胞和ＨＤＭＥＣ血管内皮细胞增殖的影响;建立ＣＮＥ－１鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤模型,皮下注射不同剂量ｒｈＡＧＮ,治疗期为３０天,观察肿瘤体积和重量变化。结果：（１）在０．５μｇ／ｍｌ、１．０μｇ／ｍｌ和２．     

生长抑素SMS201—995对小鼠结肠癌肝转移瘤的实验研究

本研究观察生长抑素衍生素ＳＭＳ２０１－９９５对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠结肠腺癌肝转移瘤细胞周期的影响，检测血清ＣＥＡ水平的变化，并观察小鼠生存期的改变。采用流式细胞术。与对照组相比，ＳＭＳ２０１－９９５治疗组的瘤细胞增殖指数和Ｓ期细胞百分比明显降低（Ｐ〈０．０１）而Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比则明显增加（Ｐ〈０．０１）。治疗组血清ＣＥＡ水平较对照组显著降低（Ｐ〈０．０５），生存期明显延长。治疗组细胞增殖指数，Ｓ     

尼妥珠单抗联合表阿霉素对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２体外生长的影响

目的　观察尼妥珠单抗（ｈ-Ｒ３）与表阿霉素（ＥＰＩ）联合对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２体外生长及凋亡的影响。方法　选用浓度递增的ｈ-Ｒ３和ＥＰＩ,单独和联合作用于ＨｅｐＧ２细胞,ＭＴＴ法观察不同时间点、不同药物剂量对ＨｅｐＧ２细胞生长的影响,计算两者联合的ｑ值;流式细胞仪检测两种药物对ＨｅｐＧ２细胞凋亡率及细胞周期分布情况的影响。结果　ｈ-Ｒ３和ＥＰＩ单药对ＨｅｐＧ２细胞生长均有抑制作用且呈时间和剂量依赖性,两药单独作用７２ｈ后对ＨｅｐＧ２细胞生长的最高抑制率分别为（４９.５６±８.９３）％和（９２.９７±１.１９）％,两药联合对ＨｅｐＧ２细胞生长的最高抑制率为（６.４４±１.０）％,联合用药可提高细胞增殖抑制率,呈相加作用;流式细胞仪检测发现,联合组细胞凋亡率高于单药组,随时间增加凋亡率呈升高趋势;细胞周期检测提示ｈ-Ｒ３使细胞阻滞在Ｇ０／Ｇ１期,ＥＰＩ阻滞细胞在Ｓ期,两药均能影响细胞周期分布。结论　ｈ- Ｒ３在体外与ＥＰＩ联合可以提高对ＨｅｐＧ２细胞增殖抑制及凋亡的作用,两药均可影响ＨｅｐＧ２细胞周期的分布。     

中晚期鼻咽癌的DNA含量的分析

目的 探讨利用ＤＮＡ图像分析仪观察３２例中晚期鼻咽癌的ＤＮＡ含量。采用ＤＮＡ图像分析仪检测鼻咽癌的ＤＮＡ含量。结果 ３２例中晚期鼻咽癌中ＤＮＡ含量，Ⅲ期鼻咽癌近二倍体２例（６．９０％），异保体肿瘤２７例（９３．１０％），Ⅳ期鼻咽癌异位体肿瘤３例（１００％）。Ｇ０／Ｇ１期占细胞周期大部分，而Ｇ２＋Ｍ期所占的细胞周期百分数很少。此组病例中得出随分期的上升，异倍体率高，预后差。细胞周期不同时相的细胞对放     

抑制ATM表达致鼻咽癌细胞CNE1辐射增敏的细胞周期阻滞研究

背景与目的:细胞周期调控是决定细胞辐射敏感性的决定性因素之一。共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant,ATM)功能与细胞DNA损伤修复、细胞周期检查点调控密切相关。我们前期研究通过反义RNA抑制ATM基因表达可增加鼻咽癌细胞系CNE1辐射敏感性,本研究拟探讨其辐射增敏的细胞周期阻滞调控机制。方法:ATM反义组细胞CNE1/pDOR-atm及对照组细胞CNE1/pDOR经2Gy、5GyX线照射后不同时间点(1h、4h、8h、24h、48h)收获,应用流式细胞仪(flowcytometer,FCM)检测各细胞周期百分比及凋亡率。结果:两组细胞X线照射后均未出现明显G1期阻滞和细胞凋亡,但分别在照射后1h、4h、8h出现明显S期阻滞,24h、48h出现明显G2期阻滞,其中反义组S期细胞百分率总均数水平低于对照组(P<0.05),而G2/M期细胞百分率总均数水平高于对照组(P<0.05)。结论:反义RNA抑制ATM表达致CNE1辐射增敏的细胞周期调控机制可能与减少S期细胞比例,增加G2/M期细胞比例有关,与G1期阻滞和细胞凋亡的调控无关。     

口虾蛄提取物对鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响及其机制研究

目的探讨口虾蛄提取物对人高分化鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响。方法采用台盼蓝染色法,测定该提取物对CNE1细胞的抑制作用;然后应用流式细胞术进一步检测该提取物对细胞周期的影响。结果生长曲线测定结果显示,口虾蛄提取物可抑制CNE1细胞的生长;流式细胞术检测结果显示,随着口虾蛄提取物浓度的增高,G1期和G2／M期细胞所占的百分比逐渐降低,S期细胞所占百分比逐渐增高（P〈0．01）。结论口虾蛄提取物能够抑制鼻咽癌CNE1细胞的生长,其作用机制可能与引起细胞周期阻滞于S期有关。     

节拍器化疗对鼻咽癌CNE-1细胞周期和凋亡的影响

目的探讨顺铂节拍器化疗对人鼻咽癌细胞CNE-1细胞周期和细胞凋亡的影响。方法采用MTT方法,检测顺铂对鼻咽癌细胞株CNE-1的半抑制浓度（IC50）,相当于临床中采用6 mg/m^2顺铂小剂量连续化疗的血浆浓度。以低于此浓度的0.10μg/ml作为顺铂节拍器体外化疗参考剂量,采用流式细胞术检测0.10μg/ml顺铂连续作用12 h和96 h细胞周期和细胞凋亡的变化情况。结果MTT法检测顺铂半抑制浓度IC50为0.19μg/ml,0.10μg/ml顺铂作用12 h后检测细胞周期变化,与对照组比较无显著变化;而作用96 h后与对照组相比进入G2/M期细胞比例显著增多,两者差异有统计学意义（P〈0.05）,但作用12 h和96 h后均未检测到明显细胞凋亡现象。结论采用小剂量顺铂作用足够长时间,可以诱导鼻咽癌CNE-1细胞周期发生变化,但是并不能诱导细胞凋亡。细胞周期同步化于G2/M期,为节拍器化疗与放疗的联用提供了可能。     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

顺铂诱导人鼻咽癌CNE2细胞衰老及其相关基因表达谱的研究

目的 探讨顺铂体外诱导人鼻咽癌CNE2细胞衰老的效应及其分子机制。方法 采用 MTT 比色法观察顺铂对CNE2细胞增殖的抑制作用,衰老相关-β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性评判细胞衰老,流式细胞术分析细胞周期分布,实时定量PCR法检测78个人类细胞衰老相关基因的表达。结 果 顺铂对CNE2细胞的增殖具有明显抑制作用;1.0 mg/L顺铂处理后第6和第8天检测SA-β-gal染色阳性细胞数分别达到67.63%和89.22%,细胞阻滞于G2 期;TP53、TP63、p16Ink4a,p27Kip1、PTEN、RB1、Cdc25C、TBX3、Gadd45a、IGF1R、PIK3CA、BMI-1、B2M、MORC3、MYC和SPARC等16个衰老相关基因的mRNA水平显著升高（P＜0.05或0.01）,Cyclin A2、Cyclin B1、Cyclin E1、CDK6、ATM、ETS2、MDM2、E2F1、ETS1、FN1、IGFBP3、RBL2、SERPINB2及SIRT1等14个基因表达水平下降（P＜0.05 或 0.01）。结论 顺铂能够在体外诱导CNE2细胞衰老,其机制涉及p16和p27介导的p53-pRB和PTEN衰老信号调控网络。     

羽扇豆醇对鼻咽癌细胞生物学功能和放、化疗敏感性的影响及凋亡机制研究

目的:探讨羽扇豆醇对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、周期及对放、化疗敏感性的影响,同时探讨其凋亡机制。方法:CCK-8法检测羽扇豆醇对CNE2细胞增殖的影响以及联合顺铂对CNE2细胞的增殖抑制作用有无增强;细胞划痕、Transwell实验、流式细胞术分别用于检测羽扇豆醇对CNE2细胞迁移、侵袭、凋亡及周期的影响;平板细胞克隆形成实验检测羽扇豆醇联合X线放射处理对CNE2细胞克隆形成能力的影响;Western blot法检测羽扇豆醇对CNE2细胞凋亡信号通路中关键蛋白Bcl-2、Bax及Cleaved caspase-3的影响,探究羽扇豆醇的抗肿瘤机制。结果:羽扇豆醇呈药物浓度和时间依赖性地抑制CNE2细胞的增殖,选取羽扇豆醇40、60、80 μmol/L用于后续实验。羽扇豆醇显著降低了CNE2细胞的迁移、侵袭能力,出现典型的凋亡特征,G1期延长,S期、G2期缩短,提高了顺铂或X线放射对CNE2细胞增殖及克隆形成的抑制能力,同时引起CNE2细胞中Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下调（所有结果均P＜0.001或P＜0.000 1）。结论:羽扇豆醇抑制CNE2细胞的增殖、迁移、侵袭,诱导CNE2细胞的凋亡,引起细胞周期阻滞在G1期,同时可提高顺铂及X射线对CNE2细胞的敏感性。证实了羽扇豆醇诱导CNE2细胞凋亡可能与调控凋亡信号通路中凋亡蛋白Bax、凋亡启动因子Cleaved caspase-3升高及抗凋亡蛋白Bcl-2降低有关。     

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂ZD1839对鼻咽癌细胞系的作用

ZDl839是一种喹唑啉类化合物,它是一种口服的选择性的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,已被美国食品药品管理局批准用于治疗晚期非小细胞肺癌。鼻咽癌是一种存在表皮生长因子受体表达的上皮源性的恶性肿瘤,ZDl839对其作用如何还未见有报道。本实验通过体外研究初步探讨ZDl839在鼻咽癌治疗中的可能价值。     

塞来昔布对人肝癌细胞增殖抑制及放疗增敏作用

目的探讨塞来昔布对肝癌细胞huh-7增殖抑制及放疗增敏作用。方法以人肝癌细胞株huh-7为研究对象,以塞来昔布和高能射线作为干预手段,采用四唑氮蓝还原法(MTT),检测不同浓度塞来昔布和作用不同时间对huh-7细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞技术,检测塞来昔布联合放疗对huh-7细胞凋亡和周期的影响。结果 MTT显示塞来昔布对人肝癌细胞huh-7生长有显著抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;塞来昔布对肝癌放疗具有明显增敏作用。与对照组比较,药物组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,G2/M变化无明显意义;照射组G2/M期细胞比例升高,联合组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论塞来昔布能提高人肝癌细胞株huh-7放疗敏感性作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布来实现的。     

阿司匹林对胃癌细胞株SGC—7901的细胞毒作用

目的：探讨阿司芬林对胃癌细胞SGC－7901的细胞毒作用。方法：采用MTT法检测阿司匹林对胃癌细胞的抑制率,采用流式细胞仪测定细胞周期,采用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果：阿匹林对SGC－7901细胞株的抑制作用具有量效和时效依赖关系。可使SGC－7901细胞的S3期细胞比例和G2／M期细胞比例升高。G0／G1期细胞比例下降,并呈一定的剂量效应关系;未见典型的阶梯凋亡条带。结论：阿司匹林对SGC－7901细胞株有细胞毒作用,其细胞毒作用可能与阻止细胞周期有关。关系：未见典型的阶梯状凋亡条带。结论：阿司芬林对SGC－7901细胞株有细胞毒作用,其细胞毒作用可能与阻止细胞周期有关。