鼠疫组分疫苗诱导小鼠体液免疫应答研究

目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rv抗原IgG及IgA抗体。结果血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体。肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生。结论鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗。     

分光光度法测定鼠疫疫苗浓度方法的建立

目的研究鼠疫疫苗浓度与吸光度（A）值之间的相关性,建立通过测定A值来计算鼠疫疫苗浓度的方法。方法确定分光光度法测定鼠疫疫苗浓度的特异性、测定波长及线性范围。4个专业的实验室经对9批成品疫苗进行比浊,测定与细菌浊度标准管（相当于鼠疫浓度7．0亿／ml）浊度一致菌液的A值及标准管对应浓度±20％（即5．6亿／ml和8.4亿／ml）菌液的A值,根据该结果制备鼠疫疫苗浓度测定用参考品。4个实验室应用该参考品对鼠疫疫苗进行协作测定,确定分光光度法测定鼠疫疫苗浓度的可行性。结果确定600nm作为吸光度测定波长,鼠疫疫苗浓度在2．6—10．5亿／ml之间时A值与菌液浓度之间有很好的相关性（r=0．9998,df=3,P〈0．01）。成功制备了3种浓度（即5．6、7．0和8．4亿/ml）的鼠疫疫苗浓度测定用参考品,其A值分别为0．444、0．557和0．651。经4个实验室应用该参考品对鼠疫疫苗进行协作测定,测定误差小于5％。结论分光光度法具有良好的重现性,适用于鼠疫疫苗浓度的测定。     

口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究

目的 构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础.方法 将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达.以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平.结果 构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生.结论 构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础.     

鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究

目的 以重组霍乱毒素B亚单位（rCT-B）为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgG、IgA抗体比正常对照组显著升高（P〈0．01）,同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著（P〈0．01）。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgG、IgA和黏膜sIgA,其中1：2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5：1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。     

人工气管组分材料的毒理学评价

目的 对人工气管的相关组分材料进行毒理学评价实验.方法 本实验按照国际国内既定标准,对纳米碳纤维、胶原蛋白-纳米羟基磷灰石等组分材料进行体外毒理学实验研究,包括细胞毒性实验、遗传毒性实验、急性毒性实验.结果 本实验涉及的生物材料以及混合材料没有发现细胞毒性及遗传毒性作用.各组材料浸渍液与L-929细胞共培养7 d,细胞相对增殖率均>100%(纳米碳纤维:136.21%;胶原蛋白.纳米羟基磷灰石:135.10%;混合材料:112.05%),毒性分级均为0级.动物实验亦未见明显的全身毒性作用,均符合毒理学评价实验的安全标准.结论 利用纳米碳纤维、胶原蛋白-纳米羟基磷灰石设计制作的人工气管符合生物相容性毒理学评价实验的安全标准.     

人工气管组分材料胶原蛋白/羟基磷灰石体外细胞毒理学研究

细胞毒性和细胞相容性是生物材料应用于临床所遇到的首要问题。将胶原蛋白作为载体与羟基磷灰石混合制成人工气管的组分材料，通过体外实验研究其细咆毒性和细胞相容性，为临床应用作前期准备。采用体外细胞培养法、MTT比色法评价胶原蛋白和羟基磷灰石复合材料对培养细胞L-929的细胞形态、生长和增殖的影响，同时采用溶血试验评价该复合材料是否对红细咆的功能和代谢产生不良反应。结果显示，胶原蛋白和羟基磷灰石复合材料对体外培养的细胞形态不构成损害，对其生长和增殖无明显抑制作用，细胞毒性为0级；溶血率为1．85％，低于5％的国家标准，在体外不引起溶血反应。实验表明，胶原蛋白和羟基磷灰石复合材料具有良好的细胞相容性，属无毒级生物材料，其作为人工气管组分材料应用于临床具有可行性和安全性。     

准噶尔盆地大沙鼠鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌质粒谱的研究

目的 了解和掌握准噶尔瓮地大沙鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌质粒谱类型.方法 提取新疆地区不同鼠疫自然疫源地及青藏高原喜玛拉雅旱獭鼠疫自然疫源地、昆仑山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地和内蒙古长爪沙鼠鼠疫自然疫源地的39株鼠疫菌质粒DNA,采用琼脂糖凝胶电泳法对其进行质粒谱图型分析.结果 在检测的26株准噶尔盆地大沙鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌中,有23株质粒谱为6×106、45×106、65×106,3株为6×106、45×106和72×106.结论 准噶尔盆地大沙鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌质粒谱分为两个类型:一为6×106、45×106、65×106质粒谱型,是该疫源地的主要质粒谱型,与邻近的北天山灰旱獭.长尾黄鼠鼠疫自然疫源地及内蒙占长爪沙鼠鼠疫自然疫源地、昆仑山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地和青藏高原喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地的鼠疫菌主要质粒谱型一致;二为6×106、45×106和72×106质粒谱型,为少数型,在我国系首次发现.     

抗生育中药遗传毒理学研究概况

中药在我国中医临床应用中有着千百年的历史 ,随着现代医学科学技术的发展 ,各种中药的相关研究也随之进入了各个新的研究领域。当前研究高效、无毒、使用简便的避孕及抗生育天然药物已成为当今世界各国极为关注的课题 ,多年来我国学者通过大量研究工作 ,经筛选的中草药有 30 0多种 ,有肯定抗生育活性的有几十种[1] 。特别是随着遗传毒理学的深入研究 ,诸多学者应用这方面的技术对这一类中药的遗传毒性作了大量的实验研究 ,使人们对临床使用中药的安全性有了较为全面的认识。本文即对具有抗生育活性作用明显的一些中药所作的遗传毒理学研究…     

鼠疫耶尔森氏菌核酸疫苗的构建及其免疫学评价

目的获得鼠疫F1和V抗原的重组质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并比较其诱导的特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEMT连接测序,构建pVAX1/F1和pVAX1/V重组质粒,转染COS7细胞。用细胞免疫化学方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒加GMCSF免疫Balb/c小鼠,观察免疫效果。结果F1和V均在COS7细胞中表达;免疫鼠体内产生特异性抗体,pVAX1/V所诱导的抗体水平比pVAX1/F1高;通过抗体亚型分析、细胞因子和CD分子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pVAX1/F1和pVAX1/V,并且均具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。     

中国南方鼠疫及其防治

20世纪80年代以来,国内外人间鼠疫一度呈逐渐上升趋势,流行范围不断扩大。而在我国南方,鼠疫疫源地活性极强,动物鼠疫流行活跃,人间鼠疫时有发生,并出现局部暴发流行。本文主要从我国南方鼠疫流行历史、发展趋势与防控对策等方面作综述。     

鼠疫活菌苗0614F株遗传稳定性研究

经多年研究选育出一株具有较好的免疫原性，又有一定残余毒力的可作为鼠疫活菌疫苗的菌株０６１４Ｆ株。为进一步了解该菌苗株的遗传稳定性，对其通过人工培养基、动物各传２０代后的菌株之生物学性状，对实验动物的毒力和免疫力观察其菌体形态、培养特性、生化、毒力因子、Ｆ１抗原含量、质粒分子量等都与原珠无差异。０６１４Ｆ原株及动物传２０代的菌株分别以２５０亿、３００亿菌皮下感染体重２５０～３００ｇ豚鼠，连续观察３０天无一死亡，说明经过动物传代毒力无增强。人工培养基传２０代菌免疫豚鼠后Ｆ１抗体水平与原代无差异；免疫２０天后用１４１毒菌１０亿活菌攻击，０６１４Ｆ组使９１．７％豚鼠得到保护，而同样条件的ＥＶ对照组只能保护５０％，说明经多次人工培养基传代免疫原性无改变，具有稳定的遗传特性。     

重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白的药效学、药理学和毒理学研究

目的对重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白(rHSA/GCSF)开展药效学、药理学和毒理学动物评价研究,以确认其安全性和有效性。方法①对rHSA/GCSF开展的药效学研究内容主要有:以恒河猴骨髓细胞为研究系统,在体外条件下培养骨髓粒细胞-巨噬细胞集落(CFU-GM),计数不同浓度的rHSA/GCSF对CFU-GM数的影响的体外药效学评价;以小鼠~(60)Coγ照射、氟尿嘧啶注射液所致的鼠白细胞低下和对~(60)Coγ射线照射致食蟹猴白细胞低下的治疗作用。②药理学研究观察了rHSA/GCSF对小鼠中枢神经系统和狗呼吸及心血管系统功能的影响。③毒理学研究考察了rHSA/GCSF静脉和皮下给予小鼠、食蟹猴的急性毒性反应,以及长期和反复给药对大鼠和食蟹猴的安全性做出评价。④rHSA/GCSF的药代/毒代试验则是对~(125)I-rHSA/GCSF不同剂量单次皮下注射给予小鼠、大鼠后,rHSA/GCSF在各器官的分布、总放射性和TCA沉淀放射性的动力学参数测定,以及对不同剂量rHSA/GCSF连续给药食蟹猴后的血浆药物浓度及代谢动力学参数开展了考察。结果①rHSA/GCSF可以使骨髓的粒白细胞系(粒系)增生活跃,骨髓粒系造血细胞及成熟中性粒细胞均明显增多;对氟尿嘧啶所致小鼠白细胞减少症有明显的治疗作用,在使用化疗药早期,可以减缓白细胞的降低,特别是可以使粒白细胞提前恢复到正常水平;rHSA/GCSF可显著缩短食蟹猴白细胞减少症放疗模型产生的白细胞低下持续时间,使外周血白细胞加速恢复,尤其以中性粒细胞的增加为主,同时对红细胞和血小板的影响不大。②从获得的PD/PK数据t_(1/2)来看:rHSA/GCSF半衰期平均值约为38.6 h;单次皮下注射rHSA/GCSF,在500、1500、3000μg/kg剂量范围内对小鼠中枢神经系统无影响,与戊巴比妥钠无协同作用;单次皮下注射rHSA/GCSF在50、200μg/kg剂量范围内对狗呼吸和心血管系统无明显影响。实验表明rHSA/GCSF单次皮下和静脉注射给予小鼠的最大耐受量(MTD)≥37.5 mg/kg,单次皮下注射给予食蟹猴的最大耐受剂量为11.6 mg/kg:长期反复给药对大鼠的基本安全剂量为300μg/kg,对食蟹猴则是≥150μg/kg。结论 rHSA/GCSF融合蛋白每4天给药1次,对放、化疗所致的动物外周血白细胞减少症具有治疗作用,与市售常规rhGCsF每天注射1次相比具有长效作用。所获得的大量药效学、药代动力学、毒理学、毒代动力学的试验数据可供正在开展的临床试验研究参考,并具有很好的指导意义。     

Early Resistance to experimental plague in animals immunized with recombinant plague vaccine

The protective properties of recombinantSalmonella minnesota R595/pFS1 strain soon after immunization (1–3 days) are studied in a model of experimental mouse plague. Unlike the commercial EV strainYersinia pestis vaccine produced at the Saratov Anti-Plague Institute (Mikrob Research-Manufacturing Conglomerate), the experimental recombinant p preparation affords a high level of protection from the 1st day postvaccination, and surpasses the commercial preparation in such parameters as LD₅₀, mean survival time, and percentage of survivors. By the 21st day the protective indexes of both preparations are comparable. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny,Vol. 119, N ^o 1, pp. 54–57, January, 1995 Presented by A. A. Vorob'ev, Member of the Russian Academy of Medical Sciences     

Safety and immunogenicity of a recombinant hepatitis B vaccine

A hepatitis B vaccine produced in yeast by recombinant DNA technology was evaluated using 5-micrograms and 10-micrograms doses in a randomized trial lasting 7 months in 110 male armed forces recruits aged 17-19 years. Results were compared to those of an identical trial of a plasma-derived vaccine. No allergic reactions were observed, and the rate of mild side effects was similar to the plasma-derived vaccine. Seroconversion rates in the first month were 60% (33/55) and 67% (37/55) with the 5-micrograms and 10-micrograms doses of the recombinant vaccine, respectively. All participants seroconverted by 3 months, and none lost antibody. These results are very similar to those for plasma-derived vaccine. Comparison of titres of antibody to hepatitis B surface antigen (anti-HBs) showed a slightly higher level with the 10-micrograms than with the 5-micrograms dose of the recombinant vaccine. Geometric mean titres of anti-HBs after the booster dose were similar in the 5-micrograms and 10-micrograms dose recombinant vaccine groups (2,620 and 2,748 IU/l, respectively) and in the 5-micrograms plasma-derived vaccine group (3,591 IU/l) but significantly higher (9,227 IU/l) with the 10-micrograms dose of the plasma-derived vaccine. These results confirm the safety and immunogenicity of the recombinant vaccine, although further study is needed on the duration of immunity.     

Immunogenicity of the rF1+rV vaccine for plague with identification of potential immune correlates

The rF1+rV candidate sub-unit vaccine for plague, formulated by adsorption to alhydrogel, has been demonstrated to be immunogenic in the cynomolgus macaque in a clinically relevant dose-range (5-40 microg of each sub-unit) and regimen. Following two doses of vaccine, a specific IgG titre developed in a dose-related manner with predominance of the IgG1/IgG2 isotypes. Groups of macaques receiving only a single dose of vaccine at the 40 microg dose-level had a significantly reduced peak IgG response and faster decline to baseline. Serum collected at week 5 from 19 immunised animals competed with and displaced murine Mab7.3 from binding to the V antigen in vitro. By week 53 of the schedule, although absolute IgG titres had declined, 17/19 macaque sera tested contained competing antibody, indicating the durability of a functional immune response to rF1+rV in this species. Thirteen of these week 53 sera were passively transferred into groups of naive mice, and all conferred full or partial protection against subsequent challenge of the mice with plague. Generally, those sera which were most competitive with Mab 7.3 for binding to V antigen were fully protective by passive transfer, although one week-53 serum sample was fully protective by passive transfer but not active by competitive ELISA. The early development of protective immunity in macaques was also indicated from the protection conferred on naive mice by the passive transfer of immune macaque serum collected at 2-10 weeks of the immunisation schedule. Serum samples from representative macaques within this time period also inhibited the Yersinia-mediated cytotoxicity of J774 macrophages in a qualitative in vitro assay of type three secretion.     

重组酵母乙肝疫苗免疫效果研究

目的研究重组酵母乙肝疫苗对青少年学生的免疫效果。方法同时对３６５名乙肝病毒血清学指标（ＨＢＶ－Ｍ）不同感染状况的学生进行免疫监测。随机分为两组，Ａ组：１８３人，接种剂量１０－５－５（μｇ），Ｂ组：１８２人，接种剂量５－５－５（μｇ），用ＥＬＩＳＡ法，在全自动酶标分析仪上测定。结果１．重组酵母乙肝疫苗对青少年免疫效果良好，抗－ＨＢｓ阳性率达９７％以上；２．对ＨＢＶ－Ｍ不同感染状况的学生，免疫后均无不良反应。结论ＨＢＶ易感者和感染者接种疫苗后免疫效果均好。在青少年中普种乙肝疫苗可不筛查ＨＢＶ－Ｍ。