肺癌K-ras基因突变的二步PCR检测及其临床应用

目的　探讨高敏感性Kras基因点突变检测方法在肺癌临床的应用价值。方法　应用二步(巢式)聚合酶链反应结合限制性片断多态性分析方法(PCRRFLP)检测临床肺癌标本Kras基因第12密码子点突变。结果　二步PCRRFLP法检测Kras点突变的敏感性较一步法提高约64倍。55例肺癌石蜡包埋标本中,Kras点突变检出率为47.3%;对另67例纤支镜标本进行基因检测,以Kras突变进行基因诊断的敏感性为70.9%,特异性为91.7%。结论　二步PCRRFLP法对临床肺癌标本Kras点突变检出率较高,对肺癌有一定的辅助诊断价值     

PCR—SSP快速检测胰腺癌石蜡切片中K—ras基因点突变

胰腺癌第１２位点Ｋ－ｒａｓ基因点突变检出率达７２％～１００％，检测其点突变方法有数种。我们采用针对Ｋ－ｒａｓ基因点突方式设计的引物，对胰腺癌石蜡包埋组织进行多聚酶链反应（ＰＣＲ），产物借助常规电泳即可判定有无Ｋ－ｒａｓ基因突变及突变方式，无需酶切，杂交，放射性及非放射性显影等技术，研究发现：３１例胰腺癌标本有２３例存在Ｋ－ｒａｓ基因点突变，方式分别为ＣＧＴ，ＧＡＴ，ＧＴＴ，而９例正常胰腺组织，１９     

PCR循环测序法检测K—ras和HCV5‘非编码区基因变异

建立一种简单，快速，可靠的ＤＮＡ序列分析方法，并利用此方法分析了Ｋ－ｒａｓ基因和ＨＣＶ５‘非编码区基因的变异情况。方法；ＰＣＲ循环测序法是将ＰＣＲ扩增与核酸序列分析相结合的一种研究方法。根据此技术原理，建立以ＰＣＲ扩增引物为测序引物，利用Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶，荧光标记的２’３‘－双脱氧核苷三磷酸直接进行ＰＣＲ扩增产物序列分析的方法。     

癌性胸腔积液K—ras基因突变检测及临床应用

目的 探讨Ｋ－ｒａｓ基因突变检测用于癌性胸腔积液的诊断价值。方法 采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对５８例生及３０例结核性胸积液进行Ｋ－ｒａｓ基因突变分析。结果：结核性胸液未发现突变，癌性胸液有１７例突变阳性，突变率２９．３％，其中腺癌所致胸腔积液突变率为３４．１％（１４／２１），鳞癌１６．７％（２／１２）。１７例Ｋ－ｒａｓ基因突变阳性的胸液中，１４例肉眼生，明显高于非血性胸液组，Ｐ〈０．０５。１８例未找     

痰细胞K—ras基因突变检测对肺癌诊断的意义

引言近年来，分子生物学技术的发展为肺癌的基因诊断提供了可能．我们应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术，对肺癌患者手术标本和痰细胞的Ｋ－ｒａｓ基因突变进行了检测，以探讨其对肺癌临床诊断的应用价值．１方法１．１病例选择选取我校唐都医院住院肺腺癌患者２４（男１５，女９...     

PCR—SSP检测人胰腺癌细胞株PC—2 K—ras基因点突变及其方式

目的 检测人胰腺癌细胞株PC－2 K－ras基因点突变及其突变方式，明确基因治疗靶点的碱基序列。方法 针对K－ras基因第12位密码子点突变方式（CGT，CAT，GTT）设计顺序特异性引物（SSP），对人胰腺癌细胞株PC－2进行聚合酶链反应（PCR），扩增产物借助聚丙烯酰胺凝胶电泳判定该细胞株有无K－ras基因点突变及其突变方式。结果 人胰腺癌细胞株PC－2存在K－ras基因点突变，突变方式为CGT。结论 PCR－SSP法简便快速，特异性高，本研究结果为胰腺癌的下一步基因治疗奠定了基础。     

慢性胰腺炎K—ras基因突变的临床病理学意义

目的：探讨慢性胰腺炎K－ras基因突变的临床病理学意义。方法：9例手术切除的慢性胰腺炎的石蜡标本,用微解剖法分离慢性胰腺炎的胰导管上皮粘液细胞增生灶,提取,扩增DNA,用ASO斑点杂交检测K－ras基因第12密码子的碱基序列。对9例接受手术治疗的病人进行长期随访,结果：9例慢性胰腺炎中4例有明显的胰导管上皮粘液细胞增生,其中2例被检出GAT型突变,分别占全组和有胰管上皮粘液细胞增生的22％和505,两个突变病例分别是接受了胰体尾切除和胰头十二指肠切除手术,术后分别随访17年和10年,没有发现任何恶变迹象,结构：慢性胰腺为可以检出K－ras基因突变,发生了K－ras基因突变的慢性胰腺炎上皮粘液细胞增生灶,未必一定发生为胰腺癌,胰液、粪便、末梢血液和尿液的检测,以及胰腺组织细针刺液检出K－ras基因突变,对胰腺癌的诊断有重要参考价值,但不应视为胰腺癌的确诊依据。     

痰标本检测P53和K—ras基因突变在非小细胞肺癌早期诊断中的价值

目的：研究P53和K-ras基因在非小细胞肺癌（NSCLC）患痰中突变率及其在NSCLC早期诊断中的意义。方法：研究组为经病理证实的非小细胞肺癌患45例，对照组为明确诊断的慢支、 肺 结核等良性病变患15例。两组患均留取痰标本，痰处理后行PCR扩增，扩增物变性后聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳，溴化锭中染色，紫外灯下观察。统计突变与未突变例数,x^2检验，分析结果。结果；研究组和对照组的 P53基因突变率分别为48．8％和20％（P＜0．05），K-ras基因突变率分别为55．6％和26．7％（P＜0．05），P53和K－ras基因同时突变率分别为5％和0（P＜0．05）。结论：研究组P53和K－ras 基因突变率明显高于对照组，研究组P53和K－ras基因同时突变率显高于对照组。P53和K-ras基因突变可以作为NSCLC的早期诊断指标，两联合检测意义更大。     

应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K ras基因突变

目的:应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌Kras基因突变,探讨其诊断价值。方法:结合特异性肽核酸(针对野生型序列)与实时定量PCR技术建立一步Kras基因检测法,与传统限制性片段长度多态性PCR法检测结果进行比较,评价新方法的诊断价值。结果:肽核酸钳制PCR法可同时对胰腺癌标本中Kras基因的第12、13密码子突变情况进行检测,操作简便;可在105倍的野生型Kras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测突变基因最低限为102拷贝;该方法可同时进行较大规模的样品检测,单次检测时间仅需1 h。而传统方法可检测的突变基因最低限为103拷贝,检测灵敏度为0.01%;需花费约2 d完成同样数量的样本检测。结论:肽核酸钳制实时定量PCR法较限制性片段长度多态性PCR法有明显优势,适用于胰腺癌大规模临床样本的Kras基因突变检测,可作为胰腺癌筛查的有效手段。     

P53、K—ras基因突变及HPV感染与肺癌的关系

运用PCR法及免疫组化技术,检测57例肺癌组织中HPV病毒感染及P53、K-ras突变情况。结果:HPV感染率为33％,K—ras突变率为22.8％,P53阳性表达为38.6％,显示HPV、P53、K-ras与肺癌发生、发展密切相关,P53突变绝大多数在HPV阴性病例中出现;肺组织癌变是一个多步化,多因子协同的过程。     

53例胃癌前病变粘膜组织K—ras基因突变情况分析

目的：探讨胃癌前病变组织K－ras基因突变情况,揭示K－ras基因突变与胃癌发生的关系。方法：应用聚合酶链反应（PCR）与单链构多态性分析（SSCP）对53例经病理切片诊断为胃癌前病变粘膜组织和10例正常胃粘膜组织进行K－ras基因突变分析。结果：53例胃癌前病变粘膜组织中,K－ras基因发生突变40例,占75．5％;男女间突变率比较差异无显著性（P＞0．05）;而10例正常胃粘膜组织无K－ras基因突变发生。结论：K－ras基因突变是胃癌前病变中常见的分子事件,用PCR－SSCP法检测胃粘膜组织K－ras基因的突变情况将有助于了解胃癌发生的生物学行为,对早期诊断有一定的帮助。     

P53,K—ras基因突变及HPV感染与肺癌关系

运和ＰＣＲ法及免疫组化技术，检测５７例肺癌组织中ＨＰＶ病毒感染及Ｐ５３Ｍ、Ｋ－ｒａ突变情况。结果：ＨＰＶ感染率为３３％，Ｋ－ｒａｓ突变率为２２．８％，Ｐ５３阳性表达为３８．６％，显示ＨＰＶ、Ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ与肺癌发生，发展密切相关，Ｐ５３突变绝大多数在ＨＰＶ阴性病例中出现：肺组织癌变是一个多步化，多因子协同的过程。     

单链构象多态性分析K—ras和p16基因突变

目的：研究大鼠癌组织－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变情况。方法;运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术分析肺癌组织Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变。结果：未发现正常大鼠组织中Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变,在肿瘤组织中Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６均２例突变发生。结论：Ｋ－ｒａｓ和Ｐ１６基因突变与肺癌发生存在一定的相关性。     

43例大肠癌K—ras基因突变与体外化疗敏感性的关系

目的 验证Ｋ－ｒａｓ基因突变与化疗敏感性之间关系。方法 用ＭＴＴ法测定了１７种抗癌药对４３例大肠癌的抑制率，并用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析法检测大肠癌中Ｋ－ｒａｓ基因突变情况，将其分成Ｋ－ｒａｓ突变组与正常组，分别统计１７种抗癌药在两组中抑制率大小，并进行比较。结果 除线裂霉素、平阳霉素、顺铂外，抗部药在正常组中的抑制率大于在突变组中的抑制率，其中更生霉素，甲氨喋呤、长春新碱、鬼臼乙叉     

N－ras癌基因突变体分离方法的建立

采用能区分单个碱基变化的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术扩增Ｎ－ｒａｓ癌基因第１、２外显子，有效地鉴别了１２／１３、６１位点突变。结果表明：在５例ＡＭＬ患者中有３例发生了Ｎ－ｒａｓ癌基因点突变，其中１２／１３位２例，６１位１例。本文使用的方法无需同位素标记，电泳结果也直接经溴化乙锭染色后在紫外检测仪中观察，可以节省试剂和缩短实验时间，是一种检测癌基因突变体的好方法。     

非同位素PCR－SSCP分析检测结肠腺瘤与腺癌中K－ras基因改变

运用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析检测结肠腺瘤与腺癌中Ｋ－ｒａｓ基因的改变，探讨该基因改变与结肠腺瘤不典型增生、结肠腺癌分期及分化程度之间的关系。结果显示，与自身正常及癌旁粘膜比较，２４例结肠腺场中，５例出现单链带的泳动变位，阳性率为２１％；１８例腺瘤中检出２例有单链带泳动变位，均为伴局部场变的腺瘤组织，提示当腺瘤发生ｒａｓ基因改变时，其恶性倾向增大。但结肠癌的分期及分化程度与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析阳性率无明显相关性。增生性及幼年性息肉均未检出有改变。该法简便快速，不用同位素，可适用于临床标本检测。     

肺癌组织中P^53和ras—P621癌基因蛋白的免疫组织化学研究

目的：为探讨肺癌组织中Ｐ＾５３和Ｐ６２１癌基因蛋白的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化方法检测６９例肺癌组织标本中Ｐ＾５３和Ｐ＾２１癌基因蛋表达，结果采用卡方检验。结果：Ｐ＾５３和Ｐ＾２１在肺癌组织中的阳性表达率分别为４９．３％，６８．１％；肺癌癌旁支气管粘膜和腺体中的生表达率分别为０和１７．６％，与肿瘤区相比比较差异均非常显著。     

PCR－SSP快速检测胰腺癌石蜡切片中K－ras基因点突变

胰腺癌第１２位点Ｋ－ｒａｓ基因点突变检出率达７２％～１００％，检测其点突变方法有数种。我们采用针对Ｋ－ｒａｓ基因点突变方式设计的引物，对胰腺癌石蜡包埋组织进行多聚酶链反应（ＰＣＲ），产物借助常规电泳即可判定有无Ｋ－ｒａｓ基因突变及突变方式，无需酶切、杂交、放射性及非放射性显影等技术。研究发现：３１例胰腺癌标本有２３例存在Ｋ－ｒａｓ基因点突变，方式分别为ＣＧＴ、ＧＡＴ、ＧＴＴ，而９例正常胰腺组织、１９例胰腺良性疾病、７例胆管癌及４例十二指肠乳头癌均未见Ｋ－ｒａｓ基因突变。该法简便、快速、特异、灵敏，易临床推广应用，可以作为胰腺病变良恶性鉴别的一种新方法。