GTPγS及GDPβS对SHRSP内脏阻力血管平滑肌钙通道的影响

目的 研究Ｇ蛋白激动剂ＧＴＰγＳ和抑制剂ＧＤＰβＳ对卒中易感型自发性高血压大鼠（ＳＨＲＳＰ）及常压大鼠肠系膜动脉Ａ４－Ａ５分支阻力血管平滑肌钙通道的影响。方法 应用膜片箝全细胞钡电流方式。结果 （１）ＧＴＰγＳ使ＳＨＲＳＰ和Ｗｉｓｔａｒ两种大鼠阻力血和平滑肌全细胞峰值钡电流明显增加,且ＳＨＲＳＰ大鼠显著大于Ｗｉｓｔａｒ大鼠。ＧＤＰβＳ则可报制两种大鼠的全细胞峰值钡电流,对于ＳＨＲＳＰ大鼠的帽程度显     

GTPγS及GDPβS对SHRsp内脏阻力血管平滑肌钙通道的影响△

目的研究G蛋白激动剂GTPγS和抑制剂GDPβS对卒中易感型自发性高血压大鼠(SHRsP)及常压大鼠(Wistar)肠系膜动脉A4～A5分支阻力血管平滑肌钙通道的影响.方法应用膜片箝全细胞钡电流方式.结果 (1)GTPγS使SHRsp和Wistar两种大鼠阻力血管平滑肌全细胞峰值钡电流(peak IBa2+)明显增加,且SHRsP大鼠显著大于Wistar大鼠.GDPβS则可抑制两种大鼠的全细胞峰值钡电流,对于SHRsP大鼠的抑制程度显著大于对照Wistar大鼠.(2)GTPγS使SHRsp和Wis tar两种大鼠阻力血管平滑肌钙通道稳态激活曲线右移,并且SHRsp大鼠右移量显著大于Wistar大鼠.GDPβS也可使两种大鼠钙通道稳态失活曲线右移,SHRsP的右移量在HP=-80mV时明显大于Wistar大鼠.结论G蛋白可激活自发性高血压大鼠内脏阻力血管平滑肌电压依赖性钙通道.其作用特点有利于外钙内流,这可能是高血压时外周阻力增高的原因之一.     

硬脂酸对血管平滑肌细胞L-型钙通道功能的影响

  目的  高脂影响心血管健康,但机制不明。本研究旨在探讨高脂诱导的硬脂酸对血管平滑肌细胞(VSMCs)L-型钙通道(LTCCs)功能的影响。  方法  将12只4周龄SD大鼠编号后采用抽签方法进行随机分组:对照组(6只)和高脂组(6只),分别予正常和高脂饲料喂养12周。采用游离脂肪酸试剂盒和股动脉插管分别检测大鼠血游离脂肪酸和血压;利用膜片钳技术检测大鼠肠系膜VSMCs钙电流。  结果  与对照组比较,高脂饮食可增加大鼠血游离脂肪酸[(0.667±0.027)mmol/L vs. (0.468±0.012)mmol/L, t=6.841, P < 0.001]、收缩压[(136.50±2.19)mmHg vs. (121.20±3.78)mmHg, t=3.507, P=0.006]及舒张压[(87.10±2.42)mmHg vs. (73.70±2.74)mmHg, t=3.660, P=0.004]。与对照组比较,高脂组大鼠肠系膜动脉VSMCs膜上的钙电流显著增加(膜电位在10 mV时pA/pF的比值,对照组为-16.86±2.58, 高脂组为-23.80±2.15, t=4.449, P < 0.001)。硬脂酸可显著增加VSMCs钙通道电流膜电位(10 mV的pA/pF,硬脂酸0 μmol/L: -12.93±2.58, 硬脂酸30 μmol/L: -18.10±2.15, t=4.097, P=0.001),但不影响其失活和激活。  结论  高脂饮食诱导产生的硬脂酸可影响肠系膜血管VSMCs膜上L-型钙通道功能。      

佛波酯慢性处理对大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C表达的影响

目的观察佛波酯（PMA）慢性处理大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C（PKCs）表达的影响。方法原代培养大鼠m管平滑肌细胞,①按照PMA处理浓度将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMAI、5、10μmol／L组,各组细胞均处理4h;②按照PMA处理时间将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMA1、4和24h组,PMA组的药物浓度均为10μmol／L。采用Western blotting技术榆测各亚型PKCs蛋白的表达。结果PMA浓度〈10μmol／L处理细胞时间〈4h不影响PKC—α的表达（P〉0．05）,10pmlol／LPMA处理24h能抑制PKC—α的表达（P〈0．05）;PMA浓度〉5μmol／L处理细胞时间〉4h可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）,PMA浓度〈5μmlol／L处理细胞时间〈4h对PKC-δ的表达无显著影响（P〉0．05）,10μmol／LPMA处理细胞1h即可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）;PMA浓度〉5pμmol／L处理细胞时间〉4h可以明显抑制PKC-θ的表达（P〈0．01）;10μmol／L的PMA处理细胞24h对PKC．∈的表达无明显影响（P〉0．05）。结论PMA慢性处理大鼠血管平滑肌细胞可抑制传统型PKC—α和新型PKC-δ、ε、θ的表达,对非典型PKC-ζ的表达没有影响。     

硝普钠对SHRsp阻力血管平滑肌钙激活钾通道的影响

目的 观察硝基类扩血管药硝普钠（ｓｏｄｉｎｍ ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅｍ,ＳＮＰ）对卒中易感型自发高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）及其正常血压对照ＷＫＹ大鼠肠系膜动脉Ａ４－Ａ５分支阻力血管平滑肌钙激活钾通道（ＫＣａ）的作用。方法 用细胞贴附式膜片箝（ｏａｔｃｈ ｃｌａｍｐ）技术。结果 发现ＳＮＰ可激活ＳＨＲｓｐ与ＷＫＹ阻力血管平滑肌ＫＣａ。在同等剂量（１ ｎｍｏｌ／Ｌ）ＳＮＰ作用下,被激活的ＳＨＲｓｐ     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞T型钙通道及其信号转导通路的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制.方法 酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、AngⅡ+氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、AngⅡ+PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)预刺激1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)培养1h]、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组[先加入氯沙坦钾(1μmol/L),PD98059(10 μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养4h].RT-PCR、Western blot方法测定各组T型钙通道的表达.结果 PCR结果显示:与对照组(1.000±0.315)比较,AngⅡ组Cav3.1表达量(17.930±0.954)明显增加(P＜0.01);PD98059组、氯沙坦钾组Cav3.1表达量为0.928±0.262、0.978±0.292,与对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组的Cav3.1表达量分别为0.125±0.007、0.066±0.015、0.109±0.018,明显低于AngⅡ组(P＜0.01).Western blot结果显示:与对照组比较,AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组及AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组Cav3.1蛋白表达明显降低(P＜0.05);而PD98059组及氯沙坦钾组Cav3.1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过Ras/PKCξ/MEK/ERK 1/2路径增加血管平滑肌细胞Cav3.1的表达.     

佛波酯对人外周血DNT细胞表面抗原检测的影响及检测方法的探讨

目的探讨佛波酯(PMA)对人外周血淋巴细胞中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(DNT细胞)表面抗原检测的影响及检测方法的探讨。方法分离人外周血单个核细胞,分别在激活前后对细胞进行TCRαβ、CD4和CD8荧光单抗标记,流式细胞术计数DNT细胞。结果 A方法(先激活,再标记),淋巴细胞表面抗原CD4分子显著下调,DNT细胞与TCRαβ+CD4+CD8+T细胞、TCRαβ-CD4-CD8-T细胞和TCRαβ-CD4+CD8+T细胞间无法设门,与正常对照比较,DNT细胞计数显著增加;B方法(先标记,再激活),DNT细胞与其他细胞群设门清晰,与正常对照比较,对DNT细胞计数无明显影响;C方法(先标记,再联合激活),DNT细胞检测结果与B方法相同。结论采用A方法(常规方法),不能对活化后的DNT细胞进行准确计数;采用B和C方法(改进方法),可以对活化后的DNT细胞进行准确计数,避免了磁珠或(和)流式分选,为其计数和表面抗原检测提供了一种新的简便方法。     

二氢吡啶钙通道阻滞剂对细胞凋亡的影响

目的通过观察用药前后原发性轻中度高血压患者血清细胞凋亡抑制因子Fas／APO-1的水平来评价二氢吡啶钙通道阻滞剂（calcium channel blockers，CCB）对细胞凋亡可能的影响。方法采取随机双盲法对照观察原发性轻中度高血压的患者，随机分为盐酸贝尼地平组和氨氯地平组。治疗前后分别用ELISA的方法检测血清中细胞凋亡抑制因子Fas／APO-1的水平。结果治疗后，两组Fas／APO-1的水平均显著低于治疗前（P=0．001）。两组间治疗前后Fas／APO-1水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论长效二氢吡啶钙通道阻滞剂具有一定抑制细胞凋亡的功能，可改善细胞凋亡与增生之间的失衡。     

佛波酯对促进人绒毛膜癌AJR细胞侵入机制的研究

目的探讨佛波酯(PMA)是否通过改变细胞因子的生成而影响滋养细胞的侵袭性。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人绒毛膜癌JAR细胞与侵袭力调节有关的多种细胞因子基因表达的变化。结果JAR细胞表达肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素1β(IL-1β)和血管内皮生长因子(VEGF),且VEGF的表达以VEGF121和VEGF165为主,而不表达IGF-Ⅰ。100 nmol/L PMA处理细胞24 h可显著上调IL-1β、HGF、IGF-II mRNA的表达,同时抑制TGF-β2、TGF-β3 mRNA的表达,而对TGF-β1、VEGF mRNA的表达未见有明显变化。结论HGF、IL-1β、IGF-Ⅱ对滋养细胞的侵入起促进作用,而TGF-β2、TGF-β3具有抑制效应。说明丝裂原PMA可能通过调节这几种细胞因子的自分泌机制,从而增强JAR细胞的侵袭能力。     

佛波酯对促进人绒毛膜癌AJR细胞侵入机制的研究

目的：探讨佛波酯（PMA）是否通过改变细胞因子的生成而影响滋养细胞的侵袭性。方法：用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测人绒毛膜癌JAR细胞与侵袭力调节有关的多种细胞因子基因表达的变化。结果：JAR细胞表达肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）、转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素1β（IL－1β）和血管内皮生长因子（VEGF），且VEGF的表达以VEGF121和VEGF165为主，而不表达IGF－I。100nmol/L PMA处理细胞24h可显著上调IL－1β、HGF、IGFⅡ mRNA的表达，同时抑制TGF－β2、TGF－β3 mRNA的表达，而对TGF－β1、VEGF mRNA的表达未见有明显变化。结论：HGF、IL－1β、IGF－Ⅱ对滋养细胞的侵入起促进作用，而TGF－β2、TGF－β3具有抑制效应。说明丝裂原PMA可能通过调节这几种细胞因子的自分泌机制，从而增强JAR细胞的侵袭能力。     

血管紧张素-(1-7)和佛波醇酯拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠系膜细胞增殖及分泌

目的：探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]及佛波醇酯(PMA)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖和分泌反应中的作用。方法：在AngⅡ诱导培养的大鼠系膜细胞中，应用Ang-(1-7)及PMA，通过测定大鼠GMCDNA、蛋白质合成、细胞数目及Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和透明质酸(HA)等指标，观察大鼠GMC增殖和分泌情况。结果：Ang-(1-7)及PMA均能抑制AngⅡ诱导培养的大鼠GMC的DNA及蛋白质合成，细胞数目的增多及PcⅢ和HA的分泌，Ang-(1-7)的抑制作用更明显。结论：Ang-(1-7)及PMA都能抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC增殖和分泌，Ang-(1-7)的拮抗作用更明显。     

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法 用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化;用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果 100 nmol/L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100 nmol/L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加,能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论 ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。     

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的 探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法 用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化；用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果 100nmol／L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100nmol／L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加，能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论 ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。     

白细胞介素12促血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 观察白细胞介素12/信号传导子及转录激活子4(IL-12/STAT4)信号途径激活对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖的影响.方法 不同浓度(2.5、5、10和20ng/mL)IL-12刺激后,用MTT法、Hoechst 33258染色法观察VSMC增殖和凋亡情况,RT-PCR、Westernblot分别检测STAT4的mRNA表达和STAT4、磷酸化STAT4(P-STAT4)的蛋白表达变化.结果 IL-12呈剂量和时间依赖促VSMC增殖,同时抑制VSMC凋亡.RT-PCR 检测发现STAT4的mRNA表达随IL-12浓度增高而增加、Western blot检测发现STAT4、P-STAT4的蛋白表达随IL-12浓度增高而增加.结论 IL-12可促进VSMC增殖,该作用可能与激活IL-12/STAT4途径有关.     

硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 观察硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响.方法 培养兔血管平滑肌细胞（VSMCs）3～8代,分为对照组、硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及硫化氢联合阿托伐他汀钙组（简称联合干预组）,共4组,分别给予相应干预,TUNEL法检测VSMCs的凋亡情况.结果 VSMCs凋亡率：与对照组相比,硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及联合干预组VSMCs的凋亡率均增加（P＜0.01）;与硫化氢组相比,联合干预组VSMCs凋亡率增加（P＜0.01）,阿托伐他汀钙组VSMCs凋亡率减少（P＜0.01）.结论 硫化氢、阿托伐他汀钙以及两者联合均可促进VSMCs的凋亡,其中以两者联合效果最为明显,硫化氢的作用强于阿托伐他汀钙.