Nicotiflorin对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨Nicotiflorin（Kaempferol3-O-β-rutinoside,山奈酚-3-O-芸香糖苷）对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制,以及诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法采用MTS法检测细胞存活率,计算IC50值;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;Western-blot检测DNA损伤标记蛋白γ-H2AX及凋亡相关蛋白Bcl-2的变化。结果Nicotiflorin能剂量依赖性地抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,IC50值为28．2μmol/L。流式细胞仪检测结果显示,Nicotiflorin使MCF-7细胞周期阻滞于G2/M期,不同浓度的Nicotiflorin作用48h后细胞凋亡率均增加。Western-blot检测发现,Nicotiflorin处理后,磷酸化的H2AX（γ-H2AX）随时间依赖性地增加,提示Nicoti-florin诱导DNA双链断裂从而使细胞阻滞于G2/M期,同时Nicotiflorin可能通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导细胞凋亡。结论Nicotiflorin能抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。     

黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡的研究

目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的影响.方法 将不同浓度的TA(200、400、600、800 μg/ml)作用于NB4细胞,继续培养48 h,采用磷脂结合蛋白V(Annexin V)+碘化丙啶(PI)双染色法在流式细胞仪上检测细胞凋亡率.结果 TA作用于NB4细胞48 h后,各浓度组的凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).在200、400、600 μg/ml组凋亡率呈浓度依赖性增加,各组之间差异有统计学意义(P<0.05).在800 μg/ml组凋亡率增加不明显,与600 μg/ml组比较差异无统计学意义(P>0.05),但出现了大量的坏死细胞.结论 一定剂量范围内的TA可以诱导NB4细胞凋亡,具有体外抗白血病效应.     

丹红注射液促肝癌细胞凋亡及NDRG2表达的初步研究

目的 观察丹红注射液对肝癌细胞的凋亡及抑癌基因NDRG2表达的影响. 方法 将0 μl/ml、0.5 μl/ml、1μl/ml、2 μl/ml的丹红注射液作用人肝癌细胞系HepG2,24 h后光镜观察细胞形态改变;流式细胞仪检测细胞凋亡指数变化,选择2μl/ml作用后0 h、6 h、12 h、24 h后流式细胞仪检测细胞凋亡指数变化;Real time PCR检测细胞NDRG2基因mRNA表达水平.结果 丹红注射液作用HepG2细胞24 h后,2 μl/ml组较其他浓度组光镜下呈现较明显细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡指数增加,并且随作用时间的延长,细胞凋亡指数也增加.Real time PCR检测显示,2 μl/ml组随着作用时间的延长,细胞凋亡指数的增加;细胞的抑癌基因NDRG2 mRNA表达水平也随之增高. 结论 丹红注射液可诱导肝癌细胞系HepG2的抑癌基因NDRG2表达,促进细胞凋亡,且具有一定的剂量、时间依赖性.     

苦参碱通过P38通路调节H2AX磷酸化抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨苦参碱对宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其可能的分子机制。方法 不同浓度苦参碱作用于宫颈癌细胞,通过CCK8法,EdU法、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验检测细胞的增殖、凋亡、迁移能力。利用Western印迹法检测苦参碱对H2AX磷酸化蛋白（即γH2AX）、P38磷酸化蛋白（即pP38）水平的影响。通过干扰H2AX（Ser139）位点的磷酸化,检测苦参碱对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响。通过干扰P38磷酸化,检测苦参碱对H2AX磷酸化的影响。结果 苦参碱对宫颈癌细胞体外增殖具有显著抑制作用（P<0.05）,且呈药物浓度依赖性;苦参碱显著提高细胞凋亡率,而对迁移能力具有显著抑制作用（P<0.05）;苦参碱能够显著促进γH2AX及pP38蛋白的表达（P<0.05）,且呈浓度依赖性。H2AX（Ser139）位点的磷酸化是苦参碱发挥抑增殖和迁移的作用位点。苦参碱通过P38通路调控H2AX（Ser139）位点的磷酸化。结论 苦参碱抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,可能是通过调控P38通路使H2AX（Ser139）位点磷酸化发挥对宫颈癌的抑癌作用。     

二烯丙基二硫化物诱导人肺癌细胞凋亡机制

目的研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)对此过程的影响,探讨DADS抗肿瘤的可能机制。方法用MTT法检测DADS处理24 h后H1299细胞活性;用蛋白质印迹法测定H1299细胞内磷酸化-p42/44 MAPK的表达。结果与对照组相比,DADS呈浓度依赖性诱导H1299细胞凋亡;蛋白质印迹法分析显示,DADS可激活p42/44 MAPK,且磷酸化-p42/44 MAPK的表达呈浓度依赖性增加。结论DADS能诱导H1299人非小细胞性肺癌细胞发生细胞凋亡,并呈浓度依赖性诱导磷酸化-p42/44 MAPK表达。     

H_2O_2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡

目的:探讨H2O2是否通过调节P38MAPK的活性而诱导PC12细胞凋亡。方法:碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达。结果:作用PC12细胞24h后,20～80μmol/L的H2O2可呈浓度依赖性地诱导PC12细胞凋亡并增加PC12细胞P38磷酸化的水平;P38特异性抑制剂SB203580(10或20μmol/L)预处理30min可显著减轻40μmol/LH2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用。结论:H2O2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的：了解H2O2对兔血管平滑肌细胞（VSMC）p38蛋白激酶（p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法：取兔主动脉血管平浮雕肌细胞培养，加或不加H2O2孵育，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTT）法检测平滑肌细胞活性。以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果：（1）随着H2O2浓度增加，VSMC活性呈剂量依赖性降低；（2）磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加，且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15min时达到峰值。（3）加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化，并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用。结论：H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加，这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的 :了解H2 O2 对兔血管平滑肌细胞 (VSMC)p38蛋白激酶 (p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :取兔主动脉血管平滑肌细胞培养 ,加或不加H2 O2 孵育 ,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测平滑肌细胞活性 ,以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果 :①随着H2 O2 浓度增加 ,VSMC活性呈剂量依赖性降低 ;②磷酸化p38MAPK的表达随H2 O2 浓度的增高而增加 ,且磷酸化的p38MAPK在H2 O2 作用后 15min时达到峰值。③加用特异性的p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80后可显著降低p38MAPK的活化 ,并能逆转H2 O2 诱导细胞凋亡的作用。结论 :H2 O2 通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加 ,这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一     

冬凌草甲素通过激活ATR通路诱导HEPG_2细胞凋亡实验研究

目的:探讨冬凌草甲素抑制HEGP_2肝癌细胞增殖及其机制研究方法:MTT法检测抑制率、结晶紫检测冬凌草甲素诱导HEPG_2肝癌细胞抑制增殖作用、Western blotting检测不同浓度冬凌草甲素作用HEPG_2肝癌细胞后ATR、H_2AX、γ-H_2AX、P53等蛋白的变化。结果:MTT法、结晶紫法显示冬凌草甲素对HEPG_2肝癌细胞能够明显抑制,且抑制作用在一定浓度范围内呈计量依赖性;Western blotting结果显示冬凌草甲素在诱导细胞凋亡过程中ATR、P-P53、γ-H_2AX表达水平及活性显著增强。结论:冬凌草甲素诱导HEPG_2肝癌细胞发生凋亡可能是通过引起H_2AX蛋白磷酸化进一步激活ATR信号通路引起细胞凋亡。     

黄芪总苷诱导NB4细胞凋亡的线粒体通路的研究

目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的线粒体传导通路的影响.方法 将不同浓度的TA(200、300、400 μg/ml)作用于NB4细胞,体外培养48 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;采用RT-PCR测定细胞内Bcl-2和Bax mRNA变化;使用分光光度法测定细胞内caspase-3的活性变化.结果 TA作用于NB4细胞48 h后,各浓度组的凋亡率与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),在TA(200、300、400 μg/ml)组凋亡率呈浓度依赖性增加,各组之间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各浓度组Bcl-2 mRNA及线粒体膜电位的表达明显下降,caspase-3的表达明显升高(P<0.05);Bax mRNA的表达无明显差异.结论 TA可以诱导NB4细胞凋亡,具有体外抗白血病效应,并且可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡.     

结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白诱导THP-1细胞凋亡的研究

目的：观察结核分枝杆菌19 kDa脂蛋白（Mtb P19）对THP-1细胞凋亡的影响。方法：从培养的结核杆菌H37Ra制备Mtb P19,以5、10、20μg/ml Mtb P19作用于佛波醇酯（PMA）分化的THP-1细胞,37℃、5%CO2孵箱孵育4 h。Wright-Giemsa染色观察细胞形态变化;AnnexinV-FITC染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：终浓度为5μg/ml的Mtb P19即可诱导THP-1细胞凋亡,且凋亡率随Mtb P19作用浓度的升高而增加（P〈0.01）;Wright-Giemsa染色镜下可见部分细胞体积变小、圆缩,核固缩,核断裂。结论：结核分枝杆菌P19以剂量依赖方式诱导THP-1细胞凋亡。     

AMPK/STAT1通路参与土木香内酯改善H2O2引起的神经细胞PC12凋亡

目的：研究土木香内酯（ALA）对H2O2诱导神经细胞PC12凋亡的影响。方法：用不同浓度（1、5、10、20、50和100 μmol/L）的ALA处理细胞后进行MTT检测细胞增殖;用不同浓度（1和5 μmol/L）的ALA预先处理细胞后加入H2O2刺激细胞,进行流式和MTT检测细胞增殖情况;设立对照组、H2O2（100 μmol/L）组、ALA（1和5 μmol/L）组,ALA干预H2O2处理的细胞进行细胞流式检测细胞凋亡情况,MTT检测细胞增殖情况,Western blot检测AMPK和STAT1的磷酸化;利用siRNA沉默AMPK表达后再用ALA处理,Western blot检测STAT1的磷酸化的表达。结果：高浓度ALA抑制PC12细胞增殖;与对照组比,经H2O2刺激后PC12细胞凋亡增高;与H2O2组比较,ALA组细胞凋亡明显降低,并呈剂量依赖性;沉默AMPK表达不影响H2O2诱导PC12细胞STAT1的磷酸化表达;在沉默AMPK后再用ALA处理,与单沉默AMPK比较,STAT1的磷酸化的表达差异无统计学意义。结论：ALA可通过AMPK的激活调控H2O2诱导PC12细胞的STAT1的磷酸化表达,从而影响细胞凋亡。     

DNA damage response in resting and proliferating peripheral blood lymphocytes treated by camptothecin or X-ray

DNA damage response (DDR) in different cell cycle status of human peripheral blood lymphocytes (PBLs) and the role of H2AX in DDR were investigated. The PBLs were stimulated into cell cycle with phytohemagglutinin (PHA). The apoptotic ratio and the phosphorylation H2AX (S139) were flow cytometrically measured in resting and proliferating PBLs after treatment with camptothecin (CPT) or X-ray. The expressions of γH2AX, Bcl-2, caspase-3 and caspase-9 were detected by Western blotting. DDR in 293T cells was detected after H2AX was silenced by RNAi method. Our results showed that DNA double strand breaks (DSBs) were both induced in quiescent and proliferating PBLs after CPT or X-ray treatment. The phosphorylation of H2AX and apoptosis were more sensitive in proliferating PBLs compared with quiescent lymphocytes (P<0.05). The expression levels of anti-apoptotic proteins Bcl-2 were reduced and cleaved caspase-3 and caspase-9 were increased. No significant changes were observed in CPT-induced apoptosis in 293T cells between H2AX knocking down group and controls. It was concluded that proliferating PBLs were more vulnerable to DNA damage compared to non-stimulated lymphocytes and had higher apoptosis rates. γH2AX may only serve as a marker of DNA damage but exert no effect on apoptosis regulation.     

H2O2预处理对骨髓间质干细胞凋亡适应性保护作用的研究

 【目的】 探讨低浓度H2O2预处理对高浓度H2O2引起骨髓间质干细胞凋亡的影响.【方法】 大鼠骨髓间质干细胞(BMSC)经体外培养扩增、纯化、鉴定.BMSC分别被暴露于0,50,100,200,300,400,500 μmol/L H2O2,流式细胞仪(FCM)检测不同浓度H2O2处理对BMSC细胞凋亡的影响.然后分别用20 μmol/L ,50 μmol/L,100 μmol/L H2O2预处理24 h,用FCM和Hoechst33324染色观察低浓度H2O2预处理对高浓度H2O2引起骨髓间质干细胞凋亡的影响, RT-PCR检测不同浓度H2O2预处理组BMSC Caspase-3和Bcl-2基因的表达.【结果】 BMSC经体外培养扩增、流式细胞仪鉴定,符合其表面标志,FCM检测凋亡显示:H2O2呈浓度依赖性诱导BMSC凋亡,且50 μmol/L H2O2预处理可降低500 μmol/L H2O2诱导的BMSC凋亡率;Hoechst33324染色结果显示:对照组BMSC染色质分布均匀,为弥散均匀的低强度荧光;500 μmol/L H2O2组BMSC胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;50 μmol/L H2O2预处理组所致的凋亡细胞数明显少于500 μmol/L H2O2处理组所引起的细胞凋亡数,100 μmol/L H2O2预处理组所致的凋亡细胞数与500 μmol/L H2O2处理组比较无明显差异、RT-PCR结果显示50 μmol/L H2O2预处理组与单独使用500 μmol/L H2O2处理组比较,其BMSC的Bcl-2表达增加和Caspase-3基因表达降低(P < 0.05),100 μmol/L H2O2预处理组与单独使用500 μmol/L H2O2处理组比较,其BMSC的Bcl-2、Caspase-3表达无明显差异(P > 0.05)。 【结论】 低浓度H2O2预处理对BMSC凋亡具有适应性保护作用,其机制可能与H2O2预处理使BMSC Bcl-2基因表达增加和Caspase-3基因表达降低有关。     

多沙唑嗪通过转录因子激活蛋白-2α诱导HeLa细胞凋亡

目的 研究α1-肾上腺素受体拮抗剂多沙唑嗪对HeLa细胞凋亡的影响以及转录因子激活蛋白-2α(activator protein-2α,AP-2α)在多沙唑嗪诱导HeLa细胞凋亡中发挥的作用.方法 HeLa细胞经过多沙唑嗪处理、过表达AP-2α或反义寡核苷酸干扰AP-2α表达后,通过流式分析检测凋亡;以相对定量PCR和Western blot分析检测AP-2α和caspase-3的表达.结果 多沙唑嗪以剂量依赖性方式增加HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率,上凋AP-2α和caspase-3的表达.AP-2α的过表达导敛多沙唑嗪诱导的HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率增加,增强caspase-3的表达;而反义AP-2α却导致多沙唑嗪诱导的HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率降低,部分地阻断了多沙唑嗪对caspase-3表达的增强效应.结论 多沙唑嗪以剂量依赖性方式诱导HeLa细胞凋亡,转录因子AP-2α在多沙唑嗪诱导的HeLa细胞捌亡中发挥了作用.     

白杨素通过调控MAPKs信号通路促进SMMC-7721细胞凋亡

目的探究白杨素诱导肝癌细胞系SMMC-7721细胞凋亡的效应及分子机制。方法将SMMC-7721细胞分为空白对照 组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组（5,10,20,40,60,80,100,150,200 μg/mL）,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制作用;将 SMMC-7721细胞分为空白对照组,DMSO溶剂对照组和白杨素处理组（5,10,20 μg/mL）,在倒置显微镜下观察细胞形态学变 化;DAPI染色后,在荧光倒置显微镜下观察细胞核形态变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;将SMMC-7721细胞 分别用白杨素,P38特异性抑制剂SB203580（0,5,10 μmol/L）、ERK特异性抑制剂U0126（0,5,10 μmol/L）和JNK特异性抑制剂 SP600125（0,5,10 μmol/L）处理后,Western blotting技术检测凋亡相关蛋白PARP、caspase-3和凋亡相关信号通路和MAPKs的 磷酸化变化情况。结果白杨素显著抑制SMMC-7721细胞增殖,和对照组相比,DMSO组,5,10,20 μg/mL白杨素处理组细胞 抑制率分别为96%,76%,71.75%和64.29%,具有剂量依赖性。超过60 μg/mL细胞抑制率达到饱和。另外,白杨素促进细胞凋 亡,20 μg/mL 白杨素处理组细胞凋亡率为68.7%,比空白对照组增加了59.4%,PARP 和caspase-3 显著切割。白杨素激活 MAPKs信号通路,具有剂量和时间依赖性。分别用SB203580、U0126、SP600125预处理细胞,白杨素诱导的P38、ERK和JNK 的磷酸化和PARP切割被抑制。结论白杨素通过调控MAPKs信号分子的活化,抑制SMMC-7721细胞的增殖并且促进细胞凋 亡的发生。     

5-氟尿嘧啶和奥沙利铂诱导结肠癌SW620细胞死亡的比较

【目的】研究5-氟尿嘧啶和奥沙利铂分别诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡的作用效果。【方法】用80μg／ml 5-氟尿嘧啶和25μg/ml奥沙利铂分别作用SW620细胞8h,并应用AnnexinV—FITX／PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。【结果】80μg／ml 5-氟尿嘧啶处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约11．9％（P〈0．01）;25μg／ml奥沙利铂处理8小时组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21．4％（P〈0．01）。【结论】在特定条件下,5-氟尿嘧啶和奥沙利铂均能明显诱导结肠癌细胞株SW620的细胞凋亡;奥沙利铂对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-氟尿嘧啶。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

Expression of histone H2AX phosphorylation and its potential to modulate adriamycin resistance in K562/A02 cell line

DNA repair processes play a role in the development of drug resistance which represents a huge obstacle to leukemia chemotherapy. Histone H2AX phosphorylation (ser139) (γH2AX) occurs rapidly at the onset of DNA double strand break (DSB) and is critical to the regulation of DSB repair. If DNA repair is successful, cells exposed to anti-neoplastic drugs will keep entering the cycle and develop resistance to the drugs. In this study, we investigated whether γH2AX can be used as an indicator of tumor chemosensitivity and a potential target for enhancing chemotherapy. K562 and multi-drug resistant cell line K562/A02 were exposed to adriamycin (ADR) and γH2AX formed. Flow cytometry revealed that percentage of cells expressing γH2AX was increased in a dose-dependent manner and the percentage of K562/A02 cells was lower than that of K562 cells when treated with the same concentration of ADR. In order to test the potential of γH2AX to reverse drug resistance, K562/A02 cells were treated with PI3K inhibitor LY294002. It was found that LY249002 decreased ADR-induced γH2AX expression and increased the sensitivity of K562/A02 cells to ADR. Additionally, the single-cell gel electrophoresis assay and the Western blotting showed that LY249002 enhanced DSBs and decreased the expression of repair factor BRCA1. These results illustrate chemosensitivity can partly be measured by detecting γH2AX and drug resistance can be reversed by inhibiting γH2AX.