氯化锰对原代培养大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的:探讨氯化锰(MnCl2)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydig cells)睾酮合成的影响.方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型.MnCl2染毒剂量组分为对照(0 μmol/L)、1.0 μmol/L、2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、25.0 μmol/L、 50.0 μmol/L、100.0 μmol/L,培养24 h后,采用台盼蓝染色法测定细胞存活率.同法分组,采用放射免疫法检测加入人绒毛膜促性腺激素(HCG)与不加HCG条件下,上述剂量MnCl2对Leydig细胞合成睾酮的影响.结果:随着MnCl2染毒剂量的升高,Leydig细胞存活率逐渐下降.MnCl2剂量≥5.0 μmol/L时,细胞存活率均低于对照组(P<0.05).基础状态下(不加HCG)MnCl2剂量≥5.0 μmol/L时睾酮水平均低于对照组(P＜0.05);HCG刺激状态下MnCl2剂量≥10.0 μmol/L时睾酮水平低于对照组(P＜0.05).结论:锰可以直接影响原代培养Leydig细胞睾酮的合成.     

催乳素对原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 研究催乳素对睾丸间质细胞睾酮生成的调节作用. 方法 采用无血清培养方法 分析催乳素时原代培养恒河猴睾丸间质细胞睾酮合成的影响. 结果 催乳素可增强恒河猴睾丸间质细胞对猴绒毛膜促性腺激素(mCG)刺激的反应,睾酮分泌量显著高于mCG和催乳素单独作用时的总和.在mCG存在下,催乳素可调节不同的睾酮前身物孕烯醇酮、孕酮和17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮.低剂量的催乳素(10～100 ng·mL-1)可使一定剂量的睾酮前身物转化为睾酮的量明显增加,而高剂量的催扎素(300～1000 ng·mL-1)却明显地抑制睾酮前身物为睾酮,其中以17α-羟孕烯醇酮的作用最为显著. 结论 催乳素对睾丸间质细胞睾酮合成的作用,可能部分是通过其促进17α-羟孕烯醇酮转化为睾酮来实现的.     

甲状腺激素对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

目的：观察甲状腺激素对睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮分泌的影响。方法：以不同浓度(0μg/ml、0．1μg/ml、1和10μg/ml）三碘甲状腺原氨酸（T3）刺激培养大鼠睾丸间质细胞（Leydig细胞）,观察细胞基础和应激状态时睾酮分泌的变化;同时测定不同甲状腺功能大鼠体外睾酮分泌水平。结果：直接用T3刺激培养的睾丸Leydig 细胞,睾酮分泌水平无显著变化;而将高甲状腺激素血症大鼠和低甲状腺激素血症大鼠Leydig细胞进行培养显示,无论在 基础还是在负荷情况下睾酮分泌能力均显著下降（P＜0．01）。结论：体外培养的睾丸Leydig细胞对甲状腺激素的刺激无反应。高甲状腺激素和低甲状腺激素状态时睾丸Leydig细胞分泌睾酮的能力均降低。     

MEHP抑制小鼠睾丸间质细胞脂噬对睾酮合成的影响

目的 探讨邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对小鼠睾丸间质细胞(TM-3)脂噬水平以及对睾酮合成的影响。方法 将对数生长期的TM-3细胞分别暴露于0、200、400、800μmol·L^-1的MEHP中,分别为对照组、MEHP低剂量组、MEHP中剂量组、MEHP高剂量组。油红O染色及流式细胞术检测细胞脂滴水平,免疫荧光共定位检测细胞脂噬水平,游离胆固醇检测试剂盒检测细胞中游离胆固醇含量,ELISA检测上清液中的睾酮水平,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62、SIRT1、FOXO1、Rab7的蛋白表达水平。结果 与对照组相比,MEHP低剂量组脂滴含量、睾酮含量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及P62蛋白表达水平均无明显变化(P均>0.05);MEHP中、高剂量组脂滴含量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及P62均升高(P均<0.05),游离胆固醇含量和睾酮的含量均降低(P均<0.01)。与对照组相比,MEHP低、中、高剂量组TM-3细胞SIRT1、FOXO1、Rab7蛋白表达...     

睾丸间质细胞中的线粒体对雄激素合成的影响

睾丸间质细胞是合成及分泌雄激素的功能细胞,而线粒体是间质细胞合成雄激素的重要部位,睾丸间质细胞对雄性的生殖健康和生育能力是必需的.研究发现,线粒体的结构和功能与雄激素的合成以及雄性生殖密不可分.     

米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响

目的 :研究米非司酮对大鼠睾丸间质细胞 (Leydigcells)睾酮的基础分泌及促性腺激素刺激的睾酮分泌的影响。方法 :将雄性大鼠处死 ,取睾丸间质细胞加药进行体外培养 ,用放射免疫分析方法测定睾酮含量。结果 :10 μmol·L-1米非司酮对睾酮基础分泌和促性腺激素刺激的睾酮分泌的抑制率分别为 65 18% (P <0 0 0 1)、 72 78% (P <0 0 5 )。结论 :本研究表明米非司酮能直接影响睾丸甾体激素的合成     

UT-B基因敲除小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌水平变化及其对性成熟的影响

目的：利用尿素通道蛋白B（UT-B）基因敲除小鼠模型探讨UT-B基因对雄性小鼠睾丸间质Leydig细胞分泌睾酮能力的影响。方法：饲养、繁殖并鉴定UT-B基因敲除（UT-B－／－）小鼠;选取4周龄遗传背景相同的野生型（UT-B+/+）雄性小鼠和UT-B－／－雄性小鼠各5只,采用放射免疫法检测2种小鼠血清睾酮和黄体生成素（LH）水平;分离培养并鉴定Leydig细胞,测定培养液上清中睾酮的水平。结果：成功获得UT-B－/－雄性小鼠和UT-B+/+雄性小鼠;成功分离培养原代Leydig细胞并经3β-HSD染色方法鉴定纯度达80%以上;4周龄UTB－／－雄性小鼠血清睾酮水平［（7.29±1.27）×10-2 μg•L^-1］明显高于UT-B+/+雄性小鼠 ［（5.53±1.58）×10-2 μg•L^-1］（P<0.05）,2种小鼠血清LH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);UTB－／－雄性小鼠Leydig细胞培养上清中睾酮水平［(17.300±1.179) nmol•L^-1］明显高于UT-B+/+雄性小鼠［（12.300±0.916） nmol•L^-1］（P<0.01）。结论：4周龄UT-B－／－雄性小鼠Leydig细胞分泌睾酮的能力明显高于UT-B+/+小鼠,这可能是UT-B－／－雄性小鼠比UT-B+/+小鼠生殖育龄提前的原因之一。
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大鼠睾丸间质细胞体外培养方法及钒对间质细胞毒性的初步…

以大鼠睾丸间质细胞为受试对象，观察了五氧化二钒对该细胞汾泌睾酮的影响。结果表明：Ｖ２Ｏ５各浓度组与对照组细胞培养液的睾酮含量无显著性差异。结合有关的整体动物实验结果可以认为，睾丸间质细胞不是钒作用的靶细胞。     

大鼠睾丸间质细胞体外培养方法及钒对间质细胞毒性的初步研究

以大鼠睾丸间质细胞为受试对象，观察了五氧化二钒（Ｖ＿２Ｏ＿５）对该细胞分泌睾酮的影响。结果表明：Ｖ＿２Ｏ＿５各浓度组（０．１２５、０．２５、０５、２、３ｍｍｏｌ／Ｌ）与对照组细胞培养液的睾酮含量无显著性差异。结合有关的整体动物实验结果可以认为，睾丸间质细胞不是钒作用的靶细胞。     

氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响

目的:观察氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响,探讨氯化锰的抗雄激素样作用.方法:①Percoll梯度离心分离、纯化大鼠睾丸间质细胞,根据氯化锰染毒剂量分为对照(0 mol/L氯化锰)和1.0 × 10-6、2.5 × 10-6、5.0 × 10-6、1.0 × 10-5、2.5 × 10-5、5.0 × 10-5 及1.0 × 10-4 mol/L氯化锰组,培养24 h后,采用台盼蓝染色法测定大鼠睾丸间质细胞存活率.②同法分组,观察氯化锰对基础状态和人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激下睾丸间质细胞睾酮合成的影响.③将行睾丸摘除术的大鼠随机分为6组(n=10):溶剂对照组皮下注射玉米油0.2 mL,阴性对照组皮下注射丙酸睾酮(TP)1.0 μs,氯化锰低、中、高剂量组皮下注射1.0μg TP后分别注射氯化锰7.5、15.0和30.0 mg/kg,阳性对照组皮下注射1.0 μg TP后注射氟他胺(100.0 mg/kg),1次/d,连续7 d.7 d后,用放射免疫法测定各组去势大鼠血清睾酮水平和前列腺特异抗原(PSA)含量,分离雄激素依赖组织,称量,计算脏器系数.结果:①随氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸间质细胞存活率逐渐下降(F=15.297,P=0.023).②基础状态和HCG刺激下各组大鼠睾丸间质细胞睾酮水平差异均有统计学意义(F=32.639和25.187,P均<0.001);基础状态下氯化锰剂量≥5.0 × 10-6 mol/L时睾酮水平均低于对照组(P<0.05),HCG刺激状态下氯化锰剂量≥1.0×10-5 mol/L时睾酮水平低于对照组(P<0.05).③各组去势大鼠血清睾酮、PSA含量、腹侧前列腺及精囊腺脏器系数相比,差异均有统计学意义(F=39.920,25.403,15.562和9.476,P均<0.05),但氯化锰低、中和高剂量组去势大鼠血清睾酮和PSA水平与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).氯化锰高剂量组腹侧前列腺和精囊腺脏器系数均低于阴性对照组(P<0.05).结论:氯化锰可能有抗雄激素样作用.     

镉处理对小鼠睾丸间质细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞3-磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响.方法 TM3细胞经20μmol/L CdCl2处理,分别在加入CdCl24 h和8h后收集细胞;对照组给予相应体积的PBS,8h后收集细胞.利用实时定量RT-PCR法测定炎症相关细胞因子白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2、MIP-1和环氧合酶(COX)-2 mRNA的表达水平以及用Western blot法检测细胞COX-2、AKT和p-AKT蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,镉能够显著诱导TNF-α和IL-6 mRNA的表达(P＜0.01);镉处理4h组MCP-1 mRNA表达水平明显高于对照组(P＜0.01),而镉处理8h组MCP-1 mRNA表达水平与对照组相比差异无统计学意义;镉对TM3细胞MIP-1和MIP-2mRNA表达差异无统计学意义;镉能够明显诱导TM3细胞COX-2蛋白和mRNA的表达(P＜0.01).此外,镉处理组p-AKT蛋白表达水平也明显高于对照组(P＜0.01).结论 镉可能通过激活TM3细胞中PI3 K/AKT信号通路进而选择性调节部分炎症相关细胞因子的表达.     

氟伐他汀对糖尿病大鼠睾丸间质细胞和间质微血管超微结构的保护作用

目的 观察氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠睾丸间质细胞和间质微血管超微结构的影响.方法 腹腔注射STZ制备糖尿病模型,设对照组、糖尿病模型组、氟伐他汀治疗(6 mg/kg、18 mg/kg)组,60 d后,光镜和透射电镜下观察睾丸间质细胞和间质微血管的病理改变.结果 光镜下氟伐他汀治疗组与糖尿病模型组相比,间质细胞体积增大,胞质增多,核固缩、染色质浓集现象好转;间质微血管闭塞、瘀血现象减少.透射电镜下见氟伐他汀治疗组较糖尿病模型组间质细胞细胞器增多,线粒体嵴结构较清晰,内质网增多,脂滴减少,细胞核近圆形,染色质浓集、边集现象好转;间质微血管管腔通畅,内皮细胞增生、血管基底膜增厚现象减轻,且18 mg/kg组优于6 mg/kg组.结论 氟伐他汀对糖尿病性大鼠睾丸间质细胞和间质微血管组织具有一定的保护作用.     

镉对雄性大鼠颌下腺的影响及丙酸睾酮的保护作用

目的：探讨氯化镉对雄性大鼠颌下腺的影响及丙酸睾酮的保护作用。方法：35只雄性Wistar大鼠分为3组：对照（C）组、镉（Cd）组和镉加丙酸睾酮（Cd＋T）组。利用原子吸收火焰法、免疫组化法、透射电镜等作颌下腺组织镉含量测定,雄激素受体（AR）表达和定量分析以及颗粒曲管（GCT）细胞的超微结构观察。结果：镉注射后24h,GCT细胞内出现不同程度的线粒体肿胀和（或）空泡化,胞质和线粒体内可见髓样结构,GCT周围毛细血管内皮细胞线粒体肿胀。7～15天后上述改变明显加重,部分GCT细胞见胞质广泛肿胀和轻度核溶解,30天后细胞形态仍未恢复正常。Cd＋T组的超微结构损伤较相应Cd组轻。Cd组和Cd＋T组的镉含量均明显高于C组,Cd＋T组的镉含量虽低于相应Cd组,但差异无显著性。各实验组AR表达均少于C组,但Cd＋T组的AR表达高于相应Cd组,且在3、7、15天组两者比较差异有显著性。结论：镉对GCT细胞的超微结构有早期直接损伤作用,后期雄激素及其受体减少加重此损伤,补充雄激素对上述损伤有一定的保护效果。     

睾酮对体外培养小鼠卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 探讨睾酮对体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞抗苗勒管激素（anti-Mullerian hormone,AMH） 分泌的影响。方法 小鼠卵巢颗粒细胞原代培养,添加不同浓度睾酮,ELISA 法检测颗粒细胞AMH 的表达。结果 ELISA 法证实颗粒细胞中有AMH 表达,不同浓度（10-8 mmol/L、10-7 mmol/L、10-6 mmol/L） 睾酮作用24 h 可促进颗粒细胞分泌AMH,且随睾酮浓度的增加、作用时间延长,AMH 分泌明显增加（P ＜ 0.01）。结论 睾酮促进小鼠卵巢颗粒细胞分泌AMH,高浓度比低浓度作用更强。     

睾酮对喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶活性的影响

目的研究睾酮对人喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对Hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48 h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性。结果10-8mol/L睾酮作用48 h,人喉癌细胞Hep-2细胞OD值由作用前的0.150±0.008增至0.281±0.010,其他实验浓度组均不能明显促进Hep-2细胞的分裂增殖。睾酮作用前后Hep-2细胞均强表达雄激素受体,表达率分别为95.73%和93.84%,差别无统计学意义。端粒酶表达率由睾酮作用前的52.35%增至89.21%,端粒酶强阳性细胞爬片由2张增至8张,差异有统计学意义。结论HEP-2细胞株为雄激素敏感型细胞,睾酮可能通过上调端粒酶的表达促进喉癌Hep-2细胞的分裂增殖,这对研究喉癌的激素疗法及开发端粒酶抑制剂有重要的意义。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响

目的:通过体内体外实验探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对胚胎及新生小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响. 方法:DEHP 50,100,200 mg/L分别作用于原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DEHP对Leydig细胞INSL3 mRNA表达的影响;DEHP分别以低、中、高三组剂量(100,200和500 mg/kg·d)灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT-PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度. 结果:DEHP改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构;各实验组包括原代Leydig细胞及不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达水平、表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.05,或P＜0.01). 结论:DEHP下调小鼠睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达,可能是影响引带发育导致隐睾的机制之一.