抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

microRNA-10b与胰腺癌吉西他滨耐药的相关性及机制研究

目的：探讨microRNA-10b(miR-10b)与胰腺癌细胞吉西他滨（gemcitabine,GEM）化疗耐药的相关性及可能机制。方法：RT-qPCR检测吉西他滨相对耐药的胰腺癌细胞株PANC-1及吉西他滨相对敏感的CFPAC-1中miR-10b的表达情况;用不同浓度的吉西他滨作用于上述细胞,RT-qPCR检测二者miR-10b的表达变化;CFPAC-1细胞转染miR-10b mimics上调miR-10b表达量,CCK-8法及流式细胞仪检测细胞对吉西他滨药物敏感性的变化,Western blot检测抗凋亡相关蛋白（如PI3K、p-Akt、Bcl-2、Survivin）的表达,RT-qPCR检测PTEN基因的表达变化。结果：PANC-1细胞中miR-10b的表达显著高于CFPAC-1细胞,且上述两种细胞中miR-10b的表达量与吉西他滨呈浓度梯度依赖;高表达miR-10b后CFPAC-1细胞对吉西他滨的敏感性下降,PI3K、p-Akt、Bcl-2、Survivin蛋白的表达升高,PTEN mRNA的表达水平降低。结论：miR-10b可能通过负性调控PTEN的表达水平,从而增加PI3K、p-Akt、Bcl-2、Survivin蛋白的表达,减少凋亡来降低CFPAC-1对吉西他滨的敏感性,最终导致胰腺癌细胞对吉西他滨化疗耐受。     

血红素加氧酶-1对食管癌细胞株Eca109增殖及凋亡作用的影响

目的 研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)对食管癌细胞株Eca109增殖活性及凋亡作用的影响.方法 利用体外设计合成的靶向抑制HO-1的低分子RNA(siRNA)沉默食管鳞癌Eca109细胞HO-1基因的表达,应用RT-PCR、Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白表达水平,分别以MTS法、流式细胞术检测干扰HO-1后食管鳞癌Eca109细胞增殖和凋亡水平.结果 RT-PCR、Western blot检测结果显示转染HO-1 siRNA可以成功抑制食管鳞癌Eca109细胞HO-1的表达;与空白组、阴性对照组比较,HO-1 siRNA干扰组Eca109细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率显著增加.结论 HO-1siRNA可有效沉默食管癌细胞HO-1的表达,抑制细胞的增殖活性,促进细胞的凋亡.     

Survivin特异性siRNA增强人胰癌细胞株Panc-1对顺铂的敏感性

目的 探讨Survivin 特异性siRNA对人胰癌细胞株Panc-1顺铂敏感性的影响.方法 体外将Survivin特异性siRNA表达载体pSurvivin-siRNA转染人胰癌细胞株Panc-1,应用RT-PCR、蛋白印迹法(Western blot) 检测转染siRNA后Panc-1细胞Survivin基因和蛋白的表达变化,应用MTT法检测干扰Survivin后Panc-1细胞对顺铂敏感性的变化.结果 转染Survivin特异性siRNA后,Panc-1细胞Survivin基因和蛋白的表达水平明显下降;顺铂对Panc-1细胞的半数抑制量从(11.992 7±1.147 0)μg/ml下降到(1.238 2±0.085 7)μg/ml,Panc-1细胞对顺铂的敏感性增加了9.69倍.结论 Survivin特异性siRNA抑制Survivin表达,能增加人胰癌细胞株Panc-1对顺铂的敏感性.     

miR-195在食管癌中的表达及其对食管癌细胞株增殖的影响

目的:探讨microRNA-195 (miR-195) 在食管癌中的表达及其对食管鳞癌细胞Eca109增殖的影响?方法: 采用Taqman 探针实时定量PCR方法检测10对外科手术食管鳞癌标本miR-195的表达,用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-195类似物转染入Eca109细胞,Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测蛋白表达水平?结果:与正常食管上皮相比,食管鳞癌组织miR-195表达明显降低(P < 0.05)?在48?72?96 h,miR-195转染组细胞吸光值明显低于对照组(P < 0.05),且miR-195转染组处于G0/G1期细胞的百分数明显高于对照组(P < 0.05)?Western blot结果显示miR-195转染组Cdc42蛋白水平明显低于对照组(P < 0.05)?结论:miR-195可阻滞Eca109细胞从G1期进入S期,抑制其增殖?     

不同放化疗敏感性的食管癌细胞株中MGMT和Survivin的表达

目的 比较3株食管鳞癌细胞株对放化疗的敏感性,并检测O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和生存蛋白(Survivin)在其中的表达情况.方法 MTT实验检测3株细胞系在不同浓度顺铂和氟尿嘧啶药物中的存活分数,并利用半数抑制浓度(IC50)值评估细胞株对化疗药物的耐受性;克隆形成实验检测3株细胞系在不同剂量照射后的存活分数, 并利用单击多靶模型拟合剂量存活曲线计算放射生物学参数D0、Dq、N、SF2以评价3株细胞系对放射线的敏感性;Western blot和qRT-PCR检测3株细胞系中MGMT和Survivin的表达.结果 TE-1在顺铂和氟尿嘧啶中的IC50值高于KYSE-70;TE-1 较KYSE-70对放射线耐受(P<0.05).Western blot和qRT-PCR显示MGMT和Survivin的表达在TE-1中均高于KYSE-70,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MGMT和Survivin在对化疗和放疗耐受的细胞株中表达水平较高,在对化疗和放疗敏感的细胞株中表达较低,这为更好地研究食管鳞癌放化疗耐受机制提供了实验依据.     

高表达Mcl-1对衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨Bcl-2蛋白家族中Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激性凋亡中的作用.方法 采用流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Mcl-1、Bcl-XL在衣霉素诱导胃腺癌细胞内质网应激状态下的表达;脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.0/Mcl-1质粒;Western blot分别检测转染前后Mcl-1蛋白的表达水平变化.结果 衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,但两株细胞对衣霉素诱导的凋亡都不敏感,其中SGC-7901较BGC-823对衣霉素的耐受表现更明显.由于衣霉素诱导SGC-7901和BGC-823的凋亡与线粒体凋亡途径有关,检测Bcl-2蛋白家族Mcl-1在SGC-7901中有明显上调.通过转染质粒高表达Mcl-1蛋白,衣霉素诱导的凋亡有明显下降.结论 Mcl-1在衣霉素诱导胃腺癌细胞凋亡中发挥重要的抑制作用.     

TACSTD2调控食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性

目的: 观察干扰肿瘤关联钙信号转导因子2(tumor associated calcium signal transducer 2,TACSTD2)表达对食管鳞癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法: 通过组织芯片检测食管鳞癌及癌旁组织中TACSTD2表达;选用人食管鳞癌细胞ECA 109、KYSE 30及其分别对应的顺铂(cisplatin,DDP)耐药株ECA 109/DDP、KYSE 30/DDP细胞,结合TACSTD2干扰技术,通过荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TACSTD2 mRNA和蛋白表达;CCK8实验和流式细胞术检测顺铂半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)以及细胞凋亡变化;蛋白质印迹法分析4种细胞中TACSTD2、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)及p MAPK蛋白表达。结果： 食管鳞癌中TACSTD2表达强度高于癌旁组织(P<0.01);食管鳞癌顺铂耐药株中TACSTD2表达水平高于对应的食管鳞癌细胞表达(P均<0.01);干扰TACSTD2后可以显著下调4种细胞中TACSTD2表达及IC50值(P均<0.01);结合1 μg/mL顺铂处理,TACSTD2干扰后4种细胞凋亡率明显增加(P均<0.01);靶向下调TACSTD2后可见4种细胞中MAPK信号通路的活化抑制及MDR1表达显著降低。结论： 靶向干预TACSTD2可提高食管鳞癌的顺铂敏感性,其作用机制可能与MAPK信号活化以及MDR1表达抑制有关。     

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响?方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP 细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡?结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡?     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对食管癌细胞生长的影响

  目的  探讨同源异形盒A1(HOXA1)基因反义寡核苷酸（ASODN）对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。  方法  采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测正常食管上皮细胞Het-1A和人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白的表达,筛选高表达的食管鳞癌细胞进行后续实验;设计合成HOXA1 ASODN链、正义寡核苷酸(SODN)链及无义寡核苷酸（N-ODN）链;将筛选出的高表达的食管鳞癌细胞分为HOXA1 ASODN组（5、10、15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞）、对照组（细胞常规培养,不进行细胞转染）、SODN组（细胞转染15 μmol/L的SODN）和N-ODN组（细胞转染15 μmol/L的N-ODN）。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室分别检测细胞活力、凋亡率及侵袭迁移能力;Western blot检测HOXA1、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）、细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。  结果  与正常食管上皮细胞Het-1A比较,人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）。HOXA1蛋白在Eca109细胞表达最高,因此选用Eca109细胞进行后续实验。转染HOXA1 ASODN的Eca109细胞HOXA1蛋白表达降低（P<0.05）。随着Eca109细胞转染HOXA1 ASODN浓度及时间增加,Eca109细胞活力降低,与对照、SODN、N-ODN组比较差异有统计学意义（P<0.05）。15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞后,与对照组比较,细胞侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT、PCNA和MMP-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）。  结论  HOXA1基因反义寡核苷酸可抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导凋亡,机制与抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/AKT信号通路可能有关。     

RNA干扰HO-1的表达增强食管鳞癌Eca109细胞对氟尿嘧啶化疗的敏感度

目的 探讨小干扰RNA沉默HO-1基因表达后食管鳞癌Eca109细胞对氟尿嘧啶化疗敏感度的影响.方法 利用HO-1小干扰RNA（siRNA）及氯化高铁血红素分别沉默和诱导食管鳞癌Eca109细胞HO-1基因的表达,RT-PCR检测HO-1 mRNA水平,Western blot法检测HO-1蛋白表达水平,分别应用MTS法、流式细胞仪检测干预后Eca109细胞对氟尿嘧啶敏感度的变化.结果 RT-PCR、Western blot法检测结果显示,HO-1 siRNA能够有效抑制食管鳞癌Eca109细胞HO-1的表达.HO-1基因干扰后,氟尿嘧啶对Eca109细胞增殖抑制作用增强、凋亡细胞比例增加.结论 干扰HO-1的表达可以显著增强食管鳞癌Eca109细胞对氟尿嘧啶化疗的敏感度.     

Effects of Oxymatrine on the Apoptosis of Human Esophageal Carcinoma Eca109 Cell Line and Its Mechanism

The effects of Oxymatrine （Oxy） on the proliferation and apoptosis of human esophageal carcinoma Ecal09 cell line and the mechanism were investigated. The human esophageal carcinoma Eca 109 celis were cultured in vitro. The Oxy-induced apoptosis of Eca 109 cells was assayed by using flow cytometry. The expressions of p-ERKII2, Cyclin D1, p21^waf/cipl, Bax and Bcl-2 were detected by Western blot. Flow cytometry revealed that Oxy could induce the apoptosis of Eca l09 cells. Western blot showed that Oxy of different concentrations suppressed the expressions of p-ERK1/2, Cyclin D1 and Bcl-2, but up-regulated the expression of p21waf/cip1 and Bax, and the ratio of Bax/Bcl-2 was increased. It was suggested the Oxy could induce the apoptosis of Eca l09 cells, which might be related to the upregulation of p21waf/cip1 and the downregulation of p-ERK1/2, Cyclin D1 and p21^waf/cip1. The possible pathway may be related to Bcl-2/Bax.     

微小RNA分子miR-214对食管鳞癌细胞Eca109侵袭能力的影响

目的 探讨微小RNA分子miR-214对食管鳞癌细胞Eca109侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法 根据人源miR-214序列合成双链模拟物.通过脂质体转染将miR-214模拟物分子导入食管鳞癌Eca109细胞中,转染无关miRNA模拟物作为对照.采用定量PCR法检测细胞中成熟miR-214分子水平,以Matrigel包被的Transwell实验测定侵袭细胞率,通过蛋白质印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,利用流式细胞术检测E-cadherin阳性细胞率.结果 Eca109细胞转染miR-214模拟物48 h后,其成熟miR-214水平较对照组明显上升(P＜0.01);细胞侵袭能力较对照组降低(P＜0.05).同时,miR-214转染组的E-cadherin表达水平及E-cadherin阳性细胞率较对照组下降(P＜0.05).结论 miR-214可能通过抑制细胞上皮间质转化(EMT)的方式抑制食管鳞癌细胞的侵袭能力.     

MiR-503靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性

目的：探讨miR-503是否能通过调控bcl-2的表达增强BEL-7402细胞对顺铂的敏感性。方法：采用实时荧光 定量PCR检测肝癌细胞中miR-503和bcl-2 mRNA的表达水平;Western印迹观察肝癌细胞中Bcl-2蛋白的表达水平;脂质 体转染法将miR-503模拟物瞬时转染至BEL-7402细胞;生物信息学软件预测miR-503潜在靶基因;双荧光素酶活性验证 miR-503潜在的靶位点;MTT法检测细胞药物敏感性的改变。结果：相比于HL-7702细胞,miR-503在BEL-7402细胞中 表达水平下调,Bcl-2蛋白的表达水平上调;miR-503能够与bcl-2靶向结合,下调bcl-2的表达;miR-503转染组的细胞活 力较miRNA阴性对照组显著降低。结论：MiR-503可能通过靶向bcl-2增强BEL-7402细胞对顺铂的药物敏感性,抑制肝 癌细胞增殖。     

肿瘤特异性Caspase-8表达载体对食管癌细胞Eca109体外增殖和凋亡作用的研究

目的研究肿瘤特异性Caspase-8表达载体对食管癌细胞Eca109体外增殖和凋亡作用。方法用脂质体法将人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控的肿瘤特异性表达载体hTERT-Caspase-8,瞬时转染端粒酶阳性的食管癌细胞株Eca109及端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞株MRC-5。结果转染hTERT-Caspase-8对细胞Eca109的生长具有显著抑制作用,细胞凋亡水平显著升高;转染hTERT-Caspase-8对MRC-5的生长和凋亡均无明显影响。结论上述发现提示hTERT启动子可以调控Caspase-8基因在食管癌细胞中靶向性表达,选择性抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,可能是肿瘤靶向性基因治疗中比较理想的转录调控元件。     

顺铂下调铜离子转运蛋白1诱导人食管鳞癌细胞EC109耐药

摘要：目的研究人食管鳞癌细胞顺铂耐药性产生的机制。方法MTT法检测顺铂对耐药细胞EC109/CDDP及其亲代细
胞EC109的细胞毒作用。电感耦合等离子体质谱检测细胞内顺铂的蓄积和Pt-DNA加合物的形成。Western blotting检
测人多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly-ADP-ribose polymerase, PARP）的剪切和铜离子转运蛋白1（copper transporter 1,
CTR1）的蛋白表达。结果顺铂耐药细胞株EC109/CDDP较其亲代细胞EC109对顺铂引起的细胞毒作用和凋亡敏感性
下降,细胞内顺铂蓄积和Pt-DNA加合物的形成减少,并且CTR1蛋白表达水平降低。结论顺铂通过降低细胞CTR1蛋白
表达抑制顺铂进入细胞,导致细胞耐药性的产生。