染料木黄酮增强阿比特龙抑制去势抵抗前列腺癌细胞22RV1效应研究

目的 研究染料木黄酮增强阿比特龙对去势抵抗前列腺癌(CRPC)细胞的影响及其机制.方法 将CRPC细胞株22RV1作为体外细胞模型,染料木黄酮和阿比特龙单独或联合使用时,采用MTT比色法及免疫细胞化学法检测癌细胞的活力及抗原Ki-67表达,反映其增殖情况;通过West-ern blot检测前列腺癌特异性抗原(PSA)、兔抗人增殖细胞核抗原(PCNA)和酶AKR1C3、CYP17A1的表达水平;通过ELISA实验法检测染料木黄酮与阿比特龙联合作用对22RV1细胞裂解液中睾酮水平的影响.结果 MTT检测结果显示,染料木黄酮和阿比特龙单独或联合使用时,在体外对CRPC细胞株22RV1细胞活力具有抑制作用(P<0.05);与单独使用阿比特龙比较,染料木黄酮能增强阿比特龙对22RV1细胞的抑制作用(P＜0.05);免疫细胞化学法检测结果显示染料木黄酮能增强阿比特龙的抗肿瘤效果,减弱抗原Ki-67的表达.但Westenr blot结果显示CYP17A1的表达并未明显减弱,PSA、PCNA和AKR1C3的表达随染料木黄酮浓度的增加逐渐下调.ELISA法检测睾酮水平未明显下降.结论 染料木黄酮可增强阿比特龙在体外对去势抵抗前列腺癌细胞的抑制作用,降低PSA、PCNA和AKR1C3及抗原Ki-67的表达.     

雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选

目的:探讨雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞差异表达膜蛋白的筛选方法。方法:提取雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer, ADPC) 细胞株LNCaP 和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independentprostate cancer, AIPC) 细胞株PC-3 膜蛋白作为抗原,采用免疫共沉淀方法,与ADPC 和AIPC 患者的血清各3 例交叉孵育,行Western 印迹检测,比较、识别杂交后差异表达蛋白条带,串联质谱分析鉴定,细胞免疫荧光和组织免疫组织化学方法验证。结果:共获得11 个差异表达的膜蛋白(Neural-Cadherin precursor,ER60 precursor, Claudin-4 等);细胞免疫荧光结果显示Claudin-4 在LNCaP 和PC-3 细胞存在明显差异,在ADPC 组织中阳性表达率(34.3%) 低于AIPC 组织中阳性表达率(72.4%, P<0.05)。结论:本研究所采用的方法筛选前列腺癌差异表达膜蛋白具有可行性;Claudin-4 可能在雄激素非依赖性前列腺癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

雄激素受体信号通路改变导致前列腺癌非激素依赖性转化

大量事实均表明前列腺癌的发生、发展和雄激素有着密切依赖的关系。因此，以外科手术或者药物为手段的雄激素撤退治疗成为前列腺癌特别是晚期前列腺癌的标准治疗方法之一。尽管治疗的最初阶段有良好的反应，但超过80％的患者将最终转化为激素非依赖性（激素拮抗的前列腺癌），导致治疗的失败，威胁患者的生存。关于这种转化的机制，目前存在众多的学说，近期的研究发现在晚期前列腺癌尽管雄激素已撤退，但仍有80％以上的有雄激素AR受体的表达，目前发现雄激素撤退治疗过程中出现的肿瘤复发和激素拮抗（hormone refractory prostate cancer，HRPC）与雄激素受体信号通路的重新激活有明显的关系。雄激素受体信号通路的激活可能与下列因素有关：①雄激素受体基因多态性和突变。②雄激素受体表达上调。③辅助活化因子表达异常。④生长因子／细胞因子对AR信号通路的活化。     

IL-8在雄激素非依赖性前列腺癌中的研究进展

前列腺癌是泌尿、男性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,在西方国家是仅次于肺癌的男性癌症致死病因,在我国的发病率相对较低,但近年来呈显著上升趋势.     

胡桃醌通过PI3K/AKT途径促进前列腺癌LNCaP细胞氧化应激

目的 探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCaP细胞的杀伤活性与其诱导氧化应激反应的相关性及机制.方法 采用 0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L胡桃醌作用前列腺癌 LNCaP细胞,MTT法检测不同剂量胡桃醌对LNCaP细胞生长抑制影响;胡桃醌联合抗氧化剂NAC作用细胞后,DCFH-DA作为荧光探针,用荧光酶标法检测活性氧(ROS);胡桃醌联合PI3K/AKT通路抑制LY294002作用细胞后,Western blot法检测p-AKT、AKT和Nrf2蛋白表达变化.结果 与阴性对照组比较,胡桃醌浓度在12. 5 μmol/L或以上显著抑制前列腺癌细胞生长(P＜0. 05, P＜0. 01).胡桃醌能够促进细胞ROS含量(P＜0. 01);胡桃醌联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)导致ROS含量下降(P＜0. 05),细胞存活率升高(＜0. 01).胡桃醌抑制p-AKT的表达,NAC能够恢复胡桃醌抑制的p-AKT表达.胡桃醌能够抑制细胞核Nrf2的表达,与PI3K/AKT抑制剂LY294002联合使用进一步抑制了 Nrf2的表达.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,作用的机制可能与促进ROS产生从而抑制PI3K/ AKT途径,导致Nrf2表达下降有密切关系.     

染料木黄酮通过抑制EGFR/ERK通路抗肝癌SMMC7721细胞增殖

目的探讨染料木黄酮对肝癌细胞SMMC7721增殖的抑制作用及其作用机制。方法以染料木黄酮干预肝癌细胞SMMC7721。MTT法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测染料木黄酮对ERK及EGFR活化的影响;免疫共沉淀法检测染料木黄酮对SMMC7721细胞ERK及EGFR间相互作用的影响。结果染料木黄酮能显著抑制肝癌细胞增殖,其抗增殖活性具有浓度依赖性;染料木黄酮还可抑制ERK与EGFR的活化,并抑制ERK及EGFR间的相互作用。结论染料木黄酮可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与其抑制EGFR/ERK通路活化有关。     

肉豆蔻木脂素通过PI3K/AKT信号通路诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨肉豆蔻木脂素（myrislignan, MYR）对胃癌细胞凋亡的影响及与磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)信号通路的关系。方法 采用不同浓度的MYR（即0、25、50、100和200μmol/L）作用胃癌细胞（SGC-7901）48 h和72 h,CCK8法检测细胞活性。选择MYR(50、100和200μmol/L)作用胃癌细胞（SGC-7901）48 h,同时设置正常对照（Control）组和溶剂对照（0.1%DMSO）组,采用流式细胞仪检测凋亡率,蛋白质印迹法检测PI3K、AKT、Bcl2关联X蛋白（Bcl-2 associated X protein, BAX）、半胱天冬酶（cysteine-dependent aspartate-specifc protease, Caspase）-3和Caspase-9蛋白的表达水平。特异性PI3K激活剂（20μmol/mL）作用胃癌细胞（SGC-7901）48 h（分组为：Control组、0.1%DMSO组、MY...     

米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌LNCaPC_(4-2)和PC3细胞的作用机制

为探讨抗孕激素药米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 、PC3的促凋亡及生长抑制作用 ,将不同浓度的米非司酮加入到体外培养的 2株前列腺癌细胞中 ,分别在培养后 3d、5d、7d用SRB染色法检测细胞生长抑制率 ;用流式细胞仪检测加药后 2 4h、48hLNCaPC4 2 和PC3细胞凋亡情况。发现 :高浓度米非司酮 ( 2 0μmol/L)对雄激素非依赖性细胞株LNCaPC4 2 、PC3于 3d、5d、7d的细胞生长抑制率分别为 5 5 .79%、66.3 7%、71 .5 4%和 87.42 %、98.1 5 %、1 0 0 %。不同浓度米非司酮即 2 .5、5、1 0、1 5、2 0 μmol/L对LNCaPC4 2 、PC3细胞株 7d时的细胞生长抑制率分别为 1 7.0 7%、3 5 .77%、5 3 .66%、63 .41 %、71 .5 4%和 48.2 5 %、63 .42 %、82 .3 7%、95 .3 1 %、1 0 0 %。前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 受 1 5 μmol/L米非司酮作用 2 4h和 48h细胞凋亡率分别为 1 9.3 0 %、3 0 .0 4% ;PC3受米非司酮 1 5 μmol/L作用 2 4h细胞凋亡率为 44.5 2 %。提示 :米非司酮对LNCaPC4 2 、PC3细胞株有时间和剂量依赖的生长抑制作用 ,其生长抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的。     

TNFα及PDTC诱导雄激素非依赖性前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨雄激素非依赖性前列腺癌治疗的新途径。方法　以含 2 0 %小牛血清的RPMI - 16 4 0为培养基 ,在 37℃、5 %CO2 培养箱中孵育雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 (PC - 3) ,倍增至所需的细胞数后 ,行SCID鼠右腋皮下接种 ,建立雄激素非依赖性前列腺癌动物模型。待瘤体长至约 1.0cm3 大小时 ,随机分成 4组 :A组 (对照组 ) ,皮下注射生理盐水每只 0 .2ml;B组瘤体内注射TNFα(2 0 0 μg/kg体重 ) ;C组腹腔注射PDTC(2 0 0mg/kg体重 ) ;D组同时注射TNFα及PDTC(剂量同B、C组 )。隔日 1次 ,2 8d后取出瘤体 ,进行瘤体大小及细胞凋亡的检测。结果　各用药组瘤体大小及凋亡率与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B组抑瘤率为 70 .9% ,C组为4 5 .9% ,D组为 89.5 %。用药前后的瘤重相比 ,D组有显著性差异 (P <0 .0 1) ,B、C组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在治疗过程中 ,对照组死亡 1只 ,用药组无死亡。结论　TNFα、PDTC对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长均有抑制作用 ,TNFα联合PDTC可显著缩小瘤体大小 ,其作用机制可能为 :TNFα诱导PC - 3细胞的凋亡 ,PDTC对TNFα的诱导起增强作用。     

RGFP966通过PI3K/AKT通路抑制胃癌细胞增殖

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶3特异性抑制剂RGFP966对胃癌细胞增殖能力和细胞周期的影响及其作用机制。方法：采用CCK-8法检测RGFP966处理MKN-45和MGC-803细胞后各组细胞的活力;细胞克隆形成实验检测RGFP966对胃癌细胞集落形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot 实验检测细胞增殖和周期相关蛋白 Ki-67、c-Myc、Cyclin A2、Cyclin D1以及PI3K/AKT 信号通路相关蛋白的表达情况。结果：与对照组相比,RGFP966可显著抑制胃癌细胞MKN-45 和MGC-803的增殖能力、集落形成能力。与对照组相比,流式细胞术显示RGFP966诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期。与对照组相比,RGFP966处理后细胞增殖和周期相关蛋白Ki-67、c-Myc、Cyclin A2、Cyclin D1表达均下降,RGFP966可显著降低PI3K和 AKT的磷酸化水平。结论：RGFP966抑制胃癌细胞的增殖能力并诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与RGFP966 抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

芸香苷通过 PI3K/AKT 信号通路抑制 H2 O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的：探讨 PI3K/ AKT 信号通路是否参与芸香苷对过氧化氢(H2 O2)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的抑制作用。方法将培养的 HLEC 分为4组：空白对照组、H2 O2组、芸香苷组、LY294002组;采用 MTT 法测细胞存活率,Western blot 法检测 p-AKT 及 AKT 的表达,Annexin V-FITC/ PI 双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果H2 O2可诱导 HLEC 发生凋亡,与 H2 O2组相比,芸香苷组不仅使 AKT 的磷酸化水平显著升高,还降低了细胞凋亡率(P<0．01);在 LY294002干预组, PI3K/ AKT 信号通路的特异性阻断剂 LY294002明显抑制了芸香苷组中各项指标的变化,差异有统计学意义(P <0．01),但与 H2 O2组比较,差异无统计学意义。结论芸香苷抑制 H2 O2诱导的 HLEC 凋亡可能与 PI3K/ AKT 信号通路有关。     

血根碱基于PI3K/AKT通路抑制结肠癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 研究血根碱在结肠癌细胞增殖和迁移中的作用及其机制。方法 使用不同剂量(2、4、8μmol/L)血根碱对结肠癌细胞系(HCT-8、SW-620)进行处理,利用光学显微镜观察结肠癌细胞形态变化;细胞计数试剂CCK-8及细胞克隆试验观察血根碱对结肠癌细胞生长的影响;细胞划痕实验测定血根碱对结肠癌细胞迁移的影响;蛋白质印迹法测定相关蛋白E-钙黏蛋白(Ecad)、N-钙黏蛋白(N-cad)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。建立HCT-8皮下瘤体模型,分别采用生理盐水和10 mg/kg的血根碱液进行腹腔内灌注,以探讨其对结肠癌的抑制作用。结果 CCK-8实验表明,血根碱对结肠癌细胞有明显杀伤作用[HCT-8和SW-620的IC₅₀分别是(3.40±0.03)μmol/L和(5.32±0.12)μmol/L],而对正常结肠黏膜细胞具有较小的杀伤作用[IC₅₀为(14.98±1.34)μmol/L]。不同浓度(0、2、4、8μmol/L)的血根碱以剂...     

EMP-1 promotes tumorigenesis of NSCLC through PI3K/AKT pathway

This study examined the role of EMP-1 in tumorigenesis of non-small cell lung carcinoma (NSCLC) and the possible mechanism. Specimens were collected from 28 patients with benign lung diseases and 28 with NSCLC, and immunohis to chemically detected to evaluate the correlation of EMP-1 expression to the clinical features of NSCLC. Recombinant adenovirus was constructed to over-express EMP-1 and then infect PC9 cells. Cell proliferation was measured by Ki67 staining. Western blotting was performed to examine the effect of EMP-1 on the PI3K/AKT signaling. Moreover, tumor xeno-grafts were established by subcutaneous injection of PC9 cell suspension (about 5×107/mL in 100 μL of PBS) into the right hind limbs of athymic nude mice. The results showed EMP-1 was significantly up-regulated in NSCLC patients as compared with those with benign lung diseases. Over-expression of EMP-1 promoted proliferation of PC9 cells, which coincided with the activation of the PI3K/AKT pathway. EMP-1 promoted the growth of xenografts of PC9 cells in athymic nude mice. It was concluded that EMP-1 expression may contribute to the development and progress of NSCLC by activating PI3K/AKT pathway.     

β细胞素下调对肝癌细胞增殖能力的影响及其机制探讨

目的:在肝癌细胞系中通过下调β细胞素(BTC)的表达研究其对肝癌细胞侵袭能力的影响并探究其影响机制。方法:通过siRNA转染下调BTC后,通过Transwell侵袭实验检测SMMC7721和MHCC97-H细胞的侵袭能力变化,并用RT-PCR和Western blot检测与肝癌侵袭能力相关的PI3K/AKT-XIAP信号通路的表达变化。结果:与阴性对照组相比,siRNA下调组中SMMC7721和MHCC97-H细胞的侵袭能力明显降低,PI3K/AKT-XIAP信号通路受到明显抑制。结论:下调BTC表达可能通过抑制PI3K/AKT-XIAP信号通路抑制肝癌细胞的侵袭能力。     

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

绿原酸通过PI3K/Akt信号通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大

目的 探讨绿原酸（CGA）通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路抑制异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌肥大的作用机制。方法 采用ISO诱导H9c2心肌细胞,建立心肌肥大模型。将细胞随机分为5组： 空白对照组（Control组）、异丙肾上腺素组（ISO组）、绿原酸处理组（ISO+CGA组）、抑制剂LY294002组（ISO+LY组）、绿原酸处理＋LY294002(ISO+CGA+LY组)。检测各实验组H9c2心肌细胞的心肌表面积及存活率;各组心肌细胞凋亡率和活性氧类（ROS）水平;各组细胞中Caspase、Akt、p-Akt、Gsk-3β、p-Gsk-3β蛋白的表达水平。结果 与Control组相比,ISO组心肌细胞严重受损,细胞存活率明显降低（P<0.05);比较ISO+CGA组和ISO组,ISO刺激显著增加心肌细胞表面积（50%）,而CGA预处理可防止ISO诱导的细胞肥大。与ISO组相比,ISO+CGA组p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,H9c2心肌细胞存活率明显提高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达降低（P<0.05）。与ISO+CGA组相比,ISO+LY组细胞存活率明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）;ISO+CGA+LY组的心肌细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,p-Akt、p-Gsk-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,Caspase蛋白表达升高（P<0.05）。结论 CGA可能是通过PI3K/Akt信号通路调控细胞凋亡,进而抑制ISO诱导的心肌细胞肥大。     

蛇床子素通过c-met/PI3K/AKT途径提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性

目的探讨蛇床子素是否能提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性并研究其机制。方法 A549非小细胞肺癌细胞按对照组、蛇床子素组、顺铂组、蛇床子素+顺铂组及蛇床子素+顺铂+c-met质粒组进行分组后,MTT法检测A549细胞活力,Western blot实验检测A549细胞蛋白酪氨酸激酶(cmet)表达水平,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及半胱天冬酶(caspases)活化水平的影响,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。结果顺铂+蛇床子素组A549的细胞活力抑制率[(59.8±3.5)%]显著高于顺铂单治疗组[(16.9±1.2)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(21.6±1.5)%,P0.05]。蛇床子素处理可诱导A549细胞c-met蛋白的下调并抑制A549细胞PI3K和AKT的磷酸化。顺铂+蛇床子素组对A549细胞的凋亡诱导率[(29.7±2.1)%]显著高于顺铂组[(7.8±0.9)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(10.1±1.5)%,P0.05]。顺铂+蛇床子素组A549细胞的Caspase-9、Caspase-3活化水平显著高于顺铂组和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组。结论蛇床子素通过下调c-met表达提高肺癌细胞对顺铂的敏感性。