miRNA-210在人脑胶质瘤中表达的临床意义及其生物学效应的探究

目的:探究微小核糖核酸-210(miRNA-210)在脑胶质瘤患者组织中表达特征和其临床意义,以及其对胶质瘤细胞增殖侵袭能力的影响。方法:收集我院神经外科收治的42例脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤患者病变组织,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测患者组织中miRNA-210表达水平并采用Kaplan-Meier生存分析比较其与患者预后的关系。利用体外转染小干扰RNA(siRNA)技术干扰人脑胶质瘤细胞U251的miRNA-210表达,MTT法检测细胞增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果:miRNA-210在29例高级别脑胶质瘤中的表达高于13例低级别脑胶质瘤及20例良性脑膜瘤的表达(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线示高表达miRNA-210的患者预后较低表达的患者不良(P<0.05);成功转染siRNA至U251细胞中,干扰组U251细胞(U251simiR-210)miR-210表达相比对照细胞(U251control)显著下降,U251simiR-210细胞在72h时MTT溶液相对吸光度显著低于U251control细胞,U251simiR-210细胞穿透基质膜细胞数也显著少于U251control细胞。结论:miRNA-210的表达与脑胶质瘤恶性程度及患者预后密切相关,其可促进胶质瘤细胞的增殖侵袭能力,是脑胶质瘤中重要的促癌基因。     

miR-638通过靶向调控Notch 4促进神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的 研究微小RNA-638(miR-638)在恶性胶质瘤中的表达,探讨miR-638在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及可能机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测正常神经组织、胶质瘤组织、正常胶质细胞株、胶质瘤细胞株中miR-638的表达水平;Transwell实验检测分别转染miR-638模拟物和miR-638抑制物后U251细胞侵袭水平的改变;生物信息学预测和验证miR-638对Notch 4的靶向调控关系;构建Notch 4真核表达重组质粒(pCMV-Notch 4 cDNA)过表达U251细胞中的Notch 4表达水平,并检测U251细胞侵袭水平的改变.结果 miR-638在胶质瘤组织和细胞株中表达上调,而Notch 4在胶质瘤细胞中表达下调,两者表达呈负相关性;过表达miR-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制miR-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01);miR-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch 4的表达,提升Notch 4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01).结论 miR-638在胶质瘤中高表达,其可能通过靶向抑制Notch 4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力.     

干扰miR-21表达抑制胶质瘤U251细胞增殖迁移与侵袭

目的 探讨干扰miR-21表达对胶质瘤细胞U251增殖、迁移和侵袭的影响。方法使用脂质体将miR-21抑制物(人工合成干扰miR-21表达的核苷酸片段,miR-21处理组)以及对照组转染于U251细胞,利用qRT-PCR验证miR-21处理组转染的细胞中miR-21表达水平;通过MTT法、细胞划痕、transwell等实验观察miR-21处理组和对照组对U251细胞增殖迁移和侵袭的影响。结果miR-21 处理组中miR-21的表达量明显下调。即转染miR-21 抑制剂能有效降低U251细胞中miR-21的表达。miR-21 处理组的 U251细胞与对照细胞相比,增殖速度明显下降,差异具有显著性。细胞划痕实验显示干扰miR-21抑制U251细胞迁移能力。Transwell侵袭实验结果显示,miR-21 处理组的U251细胞的侵袭能力较对照组细胞明显下降。结论miR-21能促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,它可能在胶质瘤的发生和进展中发挥重要作用。     

胶质瘤中hsa-miR-20a的表达及对细胞增殖的影响

目的探讨hsa-miR-20在胶质瘤中的表达情况及对胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测正常脑组织和不同级别脑胶质瘤组织中miR-20a的表达情况;脂质体转染miR-20a模拟物后,通过MTT比色法及流式细胞术观察胶质瘤U251细胞增殖的变化。结果 (1)与正常脑组织相比,胶质瘤组织miR-20a的表达水平显著增高(P=0.035);(2)胶质瘤组织恶性程度越高,miR-20a表达越高(P<0.001);(3)u251细胞转染miR-20a模拟物后,增殖能力明显加快,S期细胞比例明显增多(P<0.001)。结论 miR-20a能促进胶质瘤细胞的增殖,其高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。     

阿托伐他汀抑制脑胶质瘤细胞的增殖和促进凋亡：基于上调miR-146a表达与抑制PI3K/Akt信号通路

目的 探究阿托伐他汀（AVT）对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其对miR-146a/PI3K/Akt信号通路的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为4组：对照组（Conrtrol）、AVT组、AVT+转染miR-146a无关片段组（AVT+miR-146a NC）、AVT+转染miR-146a干扰组（AVT+miR-146a inhibitor）。Control组不加任何药物,AVT组加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a NC组转染miR-146a NC后加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a inhibitor组转染miR-146a inhibitor后加入8.0 μmol/L 的AVT。RT-PCR检测miR-146a表达,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 药物干预48 h,与Control组相比,AVT组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均明显降低（P<0.01）。与AVT组相比,AVT+miR-146a inhibitor组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K 和p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,AVT+miR-146a NC组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 AVT能够抑制人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,其机制与上调miR-146a表达,抑制PI3K/Akt信号通路相关。     

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞，将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达；CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达；生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较，miR-34a mi...     

miR-34a通过靶向FOXM1对鼻咽癌细胞增殖和上皮间质转化的影响

  目的  研究miR-34a通过靶向FOXM1对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并从上皮间质转化方向研究侵袭和迁移的机制。  方法  体外培养人鼻咽癌细胞HNE-1、CNE-2Z,每株细胞分3组,即空白对照组(control组)、阴性对照组(miR-34a nc组)和过表达miR-34a组(miR-34a mimics组)。荧光定量PCR检测转染后各组细胞miR-34a表达水平。生物信息软件预测miR-34a和FOXM1的靶向关系,荧光定量PCR和Western blotting分析靶向关系。上调miR-34a后,CCK-8法测细胞增殖能力,Transwell、实验测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin相对表达水平。  结果  生物信息软件预测miR-34a和FOXM1可能存在靶向关系。在HNE-1、CNE-2Z细胞中,与control组和miR-34a nc组比较,miR-34a mimics组FOXM1的表达下调(HNE-1:0.570±0.041、1.127±0.129、1.125±0.145,F=23.672, P=0.001;CNE-2Z:0.689±0.114、1.966±0.164、1.924±0.087,F=99.599, P＜0.001),增殖、迁移和侵袭能力被显著抑制(P < 0.01),E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调(P < 0.01)。Control组和miR-34a nc组差异无统计学意义(P>0.05)。  结论  miR-34q通过靶向FOXM1抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与抑制上皮间质转化有关。      

MiR-586对胶质瘤细胞增殖及周期的影响

目的探讨miR-586对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-586在非肿瘤脑组织（NBT）及胶质母细胞瘤组织中的表达。同时检测miR-586在人正常星形胶质细胞（NHA）及4株胶质瘤细胞株（U87、U251、T98、LN229）中的表达。在胶质瘤细胞株中通过转染miR-586 inhibitor下调miR-586的表达后,采用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测胶质瘤细胞周期阶段。结果 miR-586在胶质母细胞瘤组织中表达显著比非肿瘤脑组织中高（P<0.001）;在胶质瘤细胞系中,U87中的表达显著升高（P<0.01）。CCK-8实验结果显示:U87细胞转染miR-586 inhibitor后细胞增殖能力显著下降（P<0.01）。此外,miR-586 inhibitor转染U87后诱导细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.01）。结论 miR-586在胶质瘤组织和细胞中高表达,抑制miR-586的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞。     

miR-671-3p靶向调控CKAP4对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-671-3p靶向调控细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响。 方法收集术后脑胶质瘤组织及配对癌旁正常组织标本,检测其miR-671-3p和CKAP4表达水平。将人脑胶质瘤U251细胞株分为miR-671-3p NC组、miR-671-3p mimic组和miR-671-3p inhibitor组,并转染相应质粒。采用实时荧光定量PCR测定miR-671-3p表达,CCK-8实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移能力。Western blotting测定CKAP4表达水平。 结果人脑胶质瘤组织中miR-671-3p、CKAP4表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05)。细胞增殖率、迁移率miR-671-3p mimic组高于miR-671-3p NC组,miR-671-3p inhibitor 组低于miR-671-3p NC组(P＜0.05)。miR-671-3p对CKAP4具有靶向调节作用。miR-671-3p mimic组CKAP4蛋白表达量低于miR-671-3p NC组,miR-671-3p mimic组低于miR-671-3p inhibitor组(P＜0.05)。 结论miR-671-3p可靶向调控CKAP4促进人脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力。     

MiR-26b通过下调COX-2表达抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的：观察不同级别神经胶质瘤中miR-26b和环氧化酶(COX)-2的表达情况,研究miR-26b对于神经胶质瘤 细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：运用Western印迹和实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测不同级别神经胶质瘤中 miR-26b和COX-2的表达情况;使用miR-26b mimic转染人神经胶质瘤细胞U87,上调miR-26b的表达;qRT-PCR检测miR- 26b mimic转染后miR-26b和COX-2 mRNA的表达变化情况;双荧光素酶报告基因系统检测miR-26b对COX-2转录活性的 影响;使用Transwell侵袭实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-26b对人 神经胶质瘤细胞U87迁移能力的影响;使用CCK-8(cell counting kit-8)检测miR-26对人神经胶质瘤细胞U87增殖能力的影 响;裸鼠体内成瘤实验检测过表达miR-26b后胶质瘤细胞成瘤能力的变化。结果：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加, miR-26b表达明显降低(P<0.05),而COX-2明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);双荧光素酶实验证实miR-26b可以 直接靶向调控COX-2的蛋白表达水平;使用miR-26b mimic明显上调miR-26b的表达(P<0.05);上调miR-26b可以显著降 低COX-2的表达(P<0.05);上调miR-26b可以抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05)。实验组和对照组相 比肿瘤的质量和体积都变小。结论：随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达逐渐降低,而COX-2表达逐渐增 加。miR-26b可通过抑制COX-2表达从而抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移。     

miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响

目的: 初步探讨miR 136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法: 选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR 136 mimic(模拟物组)和miR 136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR 136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK 8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR 136下游靶基因;qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达。结果： 与对照组相比,模拟物组细胞miR 136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK 8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR 136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05)。 结论： miR 136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3在胶质瘤中的表达特性及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

  目的  探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响。  方法  采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞株U87、U251、SNB19、T98和LN229中TNFAIP3的表达,以U87和SNB19为实验对象。使用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导小干扰RNA(siRNA)转染U87和SNB19以下调TNFAIP3的表达;采用Transwell检测下调TNFAIP3对U87及SNB19侵袭的影响;运用划痕实验检测下调TNFAIP3对U87及SNB19迁移的影响。  结果  和NHA(0.144±0.008)相比,TNFAIP3在U87(1.380±0.066)、U251(0.663±0.062)、SNB19(1.405±0.032)、T98(1.002±0.068)、LN229(0.667±0.027)中的表达均升高(均P＜0.05)。si-TNFAIP3转染U87及SNB19可下调TNFAIP3的表达,继续培养24 h,U87及SNB19侵袭和迁移能力均下降(均P < 0.05)。  结论  TNFAIP3在胶质瘤中高表达,TNFAIP3可促进U87及SNB19的侵袭和迁移,si-TNFAIP3可抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移。      

CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U251体外增殖和侵袭能力的影响,为CXCR4 shRNA治疗胶质瘤提供实验依据. 方法 用脂质体LipofectimineTM2000将CXCR4-shRNA转染U251细胞,MTT实验检测转染细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力. 结果 与转染非特异的pGPU6/GFP/NC组和未转染组比较,转染CXCR4-shRNA载体pGPU6/GFP/Rac 1-421组的U251细胞CXCR4 mRNA显著降低(P＜0.05),并且细胞体外增殖能力减弱(P＜0.05),侵袭到滤膜底面的细胞数为36.67±9.76,分别低于对应的pGPU6/GFP/NC组和未转染组(P＜0.05). 结论 CXCR4 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-421可下调U251细胞CXCR4的表达,抑制U251细胞的增殖和迁移侵袭能力,提示CXCR4在胶质瘤发展过程中具有重要作用.     

miRNA-30b对抑制胃癌细胞增殖及侵袭的作用研究

目的研究miRNA-30b在胃癌癌组织中的表达水平及对癌细胞增殖侵袭的影响,探讨miRNA-30b在胃癌中的临床意义及可能的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miRNA-30b在胃癌及癌旁组织中的表达情况;用miRNA-30b模拟物及抑制物转染人胃癌HGC-27细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,Transwell 小室法检测细胞侵袭情况,Western blot 检测RAB22A 和USP47 蛋白表达。结果miRNA-30b在胃癌组织中表达水平低于对应癌旁组织（P <0.05）,且miRNA-30b 低表达与胃癌分期及肿瘤大小有关（P <0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-30b模拟物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制（P <0.05）,RAB22A和USP47 蛋白表达水平降低（P <0.05）;而转染miRNA-30b 抑制物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力则增强（P <0.05）,RAB22A 和USP47 蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论miRNA-30b 在胃癌组织中表达下调,且miRNA-30b 可能通过调节RAB22A 和USP47 的表达从而影响胃癌细胞的增殖及侵袭。     

microRNA-34a在肺癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨microRNA-34a在肺癌细胞凋亡中的作用。 方法 将A549肺癌细胞株分为3组:microRNA-34a转染组、对照组和未转染组。分析microRNA-34a在A549肺癌细胞中的表达,microRNA-34a对A549肺癌细胞生长周期、细胞增殖、细胞凋亡的影响,microRNA-34a对A549肺癌细胞Bcl-2、P53和C-MYC蛋白以及mRNA表达的影响。 结果 miRNA-34a转染组microRNA-34a的表达明显高于对照组(P<0.05)。miRNA-34a转染组G₀/G₁细胞明显高于对照组和未转染组(P<0.05)。miRNA-34a转染组48 h和96 h的增殖率明显低于对照组和未转染组(P<0.05)。miRNA-34a转染组的细胞凋亡明显高于对照组和未转染组(P<0.05)。miRNA-34a转染组的Bcl-2蛋白和C-MYC蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05);miRNA-34a转染组的P53蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。miRNA-34a转染组的Bcl-2 mRNA和C-MYC mRNA表达水平明显低于对照组Bcl-2 mRNA和C-MYC mRNA表达水平(P<0.05);miRNA-34a转染组的P53 mRNA表达水平明显高于对照组P53 mRNA表达水平(P<0.05)。 结论 microRNA-34a抑制A549肺癌细胞增殖,促进A549肺癌细胞的凋亡,机制可能为下调Bcl-2和C-MYC基因,上调P53基因。      

miRNA-29c在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响

目的 观察miRNA-29c 在喉癌组织和喉癌Hep-2 细胞株中的表达情况,研究其与肿瘤临床分期、淋巴转移及预后等临床病理参数的关系,并探讨miRNA-29c 对喉癌Hep-2 细胞增殖、侵袭的影响。 方法 选取2006 年1 月～2016 年12 月在我院确诊的86 例喉癌患者的蜡块标本,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测喉癌组织和癌旁正常喉黏膜上皮组织中miRNA-29c 的表达,并分析其与临床病理学特征的关系;通过Q-RT-PCR 检测转染后每组细胞中miRNA-29c 的表达;CCK-8 检测细胞增殖能力变化情况;Transwell 实验检测跨膜细胞数量的变化。 结果miRNA-29c 在喉癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达量与不同临床分型、TNM分期、淋巴转移密切相关（P<0.05）;转染miRNA-29c 模拟物组细胞中的miRNA-29c 表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）,并可抑制喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭力（P<0.01）。 结论 在喉癌中,miRNA-29c 是一个抑制性miRNA,miRNA-29c 低表达可能是影响喉癌预后的重要因素;过表达miRNA-29c 可显著降低喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭能力,miRNA 表达水平的下调可能参与了喉癌的发生发展及侵袭转移过程。     

长链非编码RNA LINC01116靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤进程

目的 观察脑胶质瘤细胞中长链非编码RNA LINC01116表达变化及shRNA转染对其细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,同时探究LINC01116可能参与的调节方式。方法 取神经胶质瘤细胞系U251、U87MG、A172细胞及正常星形胶质细胞(NHA),采用Real TimePCR法检测LINC01116表达。随后胶质瘤细胞分别加入或不加入sh-RNA转染,CCK-8实验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。生物信息学预测LINC01116可能的调节方式,并采用双荧光素酶报告基因验证RNALINC01116与has-miR-4693-3P的调控作用。结果 LINC01116在胶质瘤细胞中高表达,其抑制细胞增殖、抑制细胞迁移和胶质瘤侵袭。CCK8实验显示,sh-LINC01116处理的胶质瘤细胞存活率显著低于未转染的(P＜0.05)。细胞划痕实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞迁移能力明显低于对照组(P＜0.01)。Transwell实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞穿膜细胞数明显低于对照组(P＜0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示LINC01116k可靶向调控has-miR-4693-3P。结论 胶质瘤多种细胞中LINC01116表达升高,shRNA转染能明显抑制其增殖、侵袭、迁移能力,同时LINC01116可靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤的进程。     

MiRNA-19a靶向SMO基因调控Hedgehog信号通路影响骨髓瘤细胞生物学特性的机制研究

  目的  探索miRNA-19a对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和转移的影响,及对SMO蛋白和Hedgehog信号通路的影响。  方法  人骨髓瘤细胞系U266B1、LP-1、RPMI 8226和NCI-H929为研究模型,首先检测4种细胞中SMO蛋白的背景表达,然后使用U266B1细胞作为模型,设计了miRNA-19a inhibitor,以此建立miRNA-19a敲低组、对照质粒组和空载组。探究miRNA-19a敲减后细胞中SMO蛋白含量以及细胞增殖、凋亡和转移的变化。采用MTT法检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell试验检测细胞侵袭能力。  结果  SMO蛋白在U266B1、LP-1、RPMI 8226和NCI-H929细胞系中表达量分别为0.925±0.057、0.889±0.067、0.904±0.075、0.507±0.048,其中以NCI-H929细胞系中表达量较低(P < 0.05)。MiRNA-19a敲低组、对照质粒组和空载组miRNA-19a含量分别为0.325±0.058、1.158±0.128、1.172±0.131,miRNA-19a敲低组miRNA-19a含量显著降低(P < 0.05)。对照质粒组、miRNA-19a敲低组和空载组SMO蛋白表达量分别为0.787±0.104、0.354±0.068、0.807±0.106,miRNA-19a敲低组SMO蛋白含量明显降低(P < 0.05)。MTT实验显示,miRNA-19a敲低组细胞增殖OD值在24~72 h内明显低于空载组和对照质粒组(均P < 0.05)。凋亡实验显示,miRNA-19a敲低组细胞凋亡率明显高于空载组和对照质粒组(均P < 0.05)。Transwell实验显示,miRNA-19a敲低组侵袭细胞数明显低于其他2组(均P < 0.05)。  结论  miRNA-19a/SMO蛋白可能是骨髓瘤细胞系U266B1中控制细胞恶性增长的关键信号,可以作为多发性骨髓瘤治疗的潜在靶点。      

lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA TUG1调控miRNA-145促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。方法选择人结肠癌细胞HCT116,并将细胞分为6组,培养48 h后进行后续实验;采用qRT-PCR法检测各组细胞TUG1与miRNA-145的表达水平;采用MTT检测各组细胞的增殖情况;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力;采用双荧光素酶报告基因实验验证TUG1与miRNA-145的靶向关系。结果与人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460相比,结肠癌细胞株HCT116中TUG1相对表达水平明显升高,miRNA-145相对表达水平明显降低（P < 0.01）;miRNA-145与TUG1 3'-UTR存在结合位点。与TUG1 siRNA阴性对照组相比,TUG1 siRNA组HCT116细胞中TUG1表达水平明显降低（P < 0.01）,HCT116细胞增殖活性降低（P < 0.05）,细胞划痕相对宽度明显增加,细胞侵袭数目明显减少（P < 0.05）;与miRNA NC组相比,miRNA-145 mimic组HCT116细胞中miRNA-145表达水平明显升高,HCT116细胞增殖活性降低（P < 0.05）,细胞划痕相对宽度明显增加,细胞侵袭数目明显减少（P < 0.01）;与TUG1 siRNA阴性对照组相比,TUG1 siRNA组HCT116细胞中miRNA-145表达水平升高（P < 0.05）;与si-TUG1+miRNA NC组相比,TUG1 siRNA+miRNA-145 inhibitor组HCT116细胞中miRNA-145表达水平降低（P < 0.05）,HCT116细胞增殖活性增强,细胞划痕相对宽度减小,细胞侵袭数目增加（P < 0.05）。结论结肠癌HCT116细胞中TUG1表达上调,miRNA-145表达下调,干扰TUG1表达可通过靶向上调miRNA-145的表达,抑制结肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭。